Sunteți pe pagina 1din 37

hg

Imunologia studiaz funcia de aprare a organismului uman i animal, o funcie de relaie, esenial
pentru supravieuire.
Termenul de imunitate are o provenien social: n Roma antic, persoanele scutite de impozite
ctre stat, erau considerate imune. Sensul termenului s-a extins, ulterior desemnnd persoanele scutite
de a suferi efectele infeciei cu ageni patogeni.
Aa cum aparatul genetic asigur stabilitatea i integritatea unei specii ca sistem biologic, funcia
imunitar are un rol determinant pentru pstrarea homeostaziei mediului intern i a individualitii
chimice a fiecrui organism, pentru c, prin intermediul SI organismele difereniaz prompt i cu mare
sensibilitate, componentele self pe care le tolereaz de substanele nonself sau antigene fa de care se
activeaz i le ndeprteaz din organism.
Sistemul imunitar este tolerant fa de substanele proprii, deoarece a nvat s le recunoasc
n timpul vieii embrionare.
Funcia imunitar este mediat de molecule cu rol de receptori de pe suprafaa celulelor SI i de
molecule solubile n umorile organismelor.
Funcia imunitar este esenial pentru supravieuirea organismelor multicelulare, datorit
agresiunii permanente a agenilor infecioi (microorganisme i virusuri). Omul adult poart pe
suprafaa mucoaselor i a tegumentului, un numr uria de celule bacteriene (circa 10 14), cu un ordin de
mrime mai multe dect propriile celule (1013), unele avnd potenialul de a iniia procese infecioase.
Disfuncia sever congenital sau dobndit a funciei imunitare este incompatibil cu viaa.
Exemplul tragic al imunodeficienei severe, determinat genetic sau dobndit (SIDA), ilustreaz rolul
central al rspunsului imun n protecia organismului fa de infecia cu ageni patogeni.
Imunologia studiaz reactivitatea organismului animal i uman, consecutiv contactului cu agenii
patogeni, mecanismele celulare i moleculare ale elaborrii rspunsului imun, precum i particularitile
structurale i funcionale ale esuturilor, celulelor i moleculelor care condiioneaz starea de imunitate.
S-a demonstrat c activarea funciei imunitare nu este totdeauna benefic pentru organism, ci
uneori, stimularea ei are efecte opuse, pentru c determin leziuni tisulare severe, chiar ireversibile.
Anomaliile funcionale ale SI genereaz dou categorii de manifestri patologice: strile de
hipersensibilitate i maladiile autoimune.
Strile de hipersensibilitate definesc o stare de reactivitate imunitar crescut i se caracterizeaz prin
aceea c, la primul contact cu o substan nonself, nu se produce un rspuns imun detectabil, ci
organismul dobndete o stare special de sensibilizare imunitar fa de un antigen. La contactul
secundar ulterior, chiar cu cantiti foarte mici ale antigenului sensibilizant, organismul rspunde cu
manifestri patologice de intensiti variabile, al cror rezultat final poate fi fatal. Aa se ntmpl n
strile de hipersensibilitate (alergii) la polen, la diferite medicamente (de exemplu, penicilina), la
veninul insectelor sau la diferite substane alimentare. Modificrile patologice consecutive strilor de
hipersensibilitate pot fi locale sau generalizate.
Maladiile autoimune semnific ntreruperea strii de toleran perfect pe care sistemul imunitar o
manifest fa de componentele self modificate chimic datorit unor stri fiziologice determinate de
procese de mbtrnire, de procese infecioase, de procese patologice degenerative sau ca urmare a
utilizrii substanelor medicamentoase, fata de care apare un rspuns imun. Astfel se iniiaz un conflict
autoimun, n cursul cruia sistemul imunitar genereaz efectorii si celule activate i molecule care
recunosc specific moleculele self modificate.
Respingerea grefelor de esuturi i organe este de asemenea, consecina activrii funciei imunitare.
Antigenele esutului grefat, solubile sau fixate pe suprafaa celulelor din gref, activeaz limfocitele
(celulele efectoare ale rspunsului imun). Autogrefele sunt totdeauna tolerate. In condiiile unei
reactiviti imunitare normale, alogrefele i xenogrefele sfresc prin a fi respinse. Cu ct diferenele
genetice i implicit biochimice ntre organismul donor i cel receptor de gref sunt mai accentuate, cu
att grefa este respins mai repede.
1
Etapele dezvoltrii Imunologiei ca tiin
Imunologia este o tiin relativ tnr, care a aprut iniial ca un domeniu a Microbiologiei, cu
rdcini n tiinele biologice teoretice i aplicate, fiind fundamentat de descoperirile lui Pasteur i
Metchnikoff.
Apariia Imunologiei ca tiin a fost precedat cu milenii, de observaii empirice referitoare la faptul
c vindecarea unor maladii infecioase era urmat de o stare de rezisten permanent la reinfecie sau
cel mult de forme uoare de mbolnvire. Cu 2-3 secole .C., n China i India s-a observat c unele
maladii foarte grave (variola, pesta, ciuma), las n urm o stare de rezisten permanent la reinfecie
sau cel mult, persoanele fceau forme foarte uoare de mbolnvire.
In infecia variolic, apar leziuni caracteristice mai ales pe tegumentul feei. Mai nti apar vezicule
mici, pline cu lichid clar, al cror coninut se tulbur datorit infiltratului celular i fac crust. S-a trecut
la infectarea artificial a persoanelor sntoase n scopul declanrii unei mbolnviri uoare, care s
instaleze starea de imunitate. Practica variolizrii prin inhalarea mojaratului de cruste uscate, recoltate
de la cei trecui prin boal, era insa nsoit de infecii grave, datorit cantitii mari de virus inhalat.
In 1418, procedeul variolizrii a fost introdus n Anglia de Lady Mary Wortley Montagu i s-a
practicat o perioad, cu toate riscurile mbolnvirii cu severitate necontrolat.
Vaccinarea antivariolic a fost introdus de Edward Jenner (1796). Ca vaccin, a utilizat un virus de la
bovine (cowpox). Metoda s-a bazat pe observaia empiric a rezistenei n cursul marilor epidemii de
variol, a mulgtorilor care fuseser infectai n mod natural cu virusul cowpox. Acesta produce o
infecie pustular i fiind nrudit antigenic cu virusul variolei, confer protecie antivariolic. Vaccinarea
persoanelor sntoase s-a fcut cu lichidul recoltat din pustulele de pe ugerul vacilor.
Perioada tiinific a Imunologiei a fost inaugurat de L. Pasteur, prin descoperirea unor vaccinuri cu
o larg aplicaie practic. Denumirea de vaccin a fost dat de Pasteur, n amintirea produsului recoltat
de Jenner din leziunile de pe ugerul vacii. Denumirea s-a pstrat pentru toate produsele folosite n
practic, pentru a crea o stare de rezisten preventiv fa de eventualul contact cu agentul patogen.
Pasteur a fundamentat tiinific practica producerii i utilizrii vaccinurilor. El a demonstrat c
proprietile biologice (patogenitatea i virulena) bacteriilor i virusurilor patogene nu sunt fixe. In
anumite condiii, aceste proprieti se pot diminua prin anumite artificii de tehnic, aa nct un agent
virulent care de regul determin o infecie mortal, poate fi transformat ntr-un agent care produce o
infecie uoar, fr semne clinice, dar creeaz o rezisten foarte solid. Vaccinurile atenuate
ndeplinesc aceste deziderate. Pasteur a atenuat virulena agenilor patogeni prin dou metode: prin
nvechirea culturilor i prin cultivarea la temperaturi ridicate. Pasteur a descoperit trei vaccinuri: al
holerei ginilor (Pasteureloza- cultura imbatrinita), al antraxului la ovine (Imunizare treptata cu inocul
atenuat prin incubare la 42 oC, cind cultura devine asporogena) i al rabiei (esut nervos medular sau
creier de la iepurele infectat experimental, pe care l-a modificat
prin uscare n prezena potasei caustice).
Cercetrile lui Pasteur au pus bazele Imunologiei medicale i ale obinerii i utilizrii pe baze
tiinifice a vaccinurilor L. Pasteur i R. Koch au fost promotorii ideii relaiei de specificitate ntre
procesul patologic i agentul infecios, dar formele modificate ale agenilor infecioi pot induce
imunitate specific. S-a nscut astfel prima paradigm* a Imunologiei.
A urmat o perioad n cursul creia s-au nregistrat progrese importante n obinerea i
administrarea vaccinurilor.
Bazele conceptului imunitii humorale au fost puse de Emil von Behring i Kitasato Shibasabur
(1890), care au evideniat anticorpii serici, dup imunizarea animalelor de laborator. Serurile imune pot
fi folosite n scop terapeutic pentru a stopa sau a atenua evoluia unei boli infecioase, cu condiia ca
administrarea acestor seruri s fie foarte precoce. In 1923, Behring a organizat producia de seruri
imune, preluat de Institutul Pasteur din Paris (nfiinat n 1894) i apoi de Institutul Babe i de
Institutul Cantacuzino.
2
In 1894, Richard Pfeiffer a descris fenomenul de bacterioliz, demonstrnd c serul sanguin al
animalelor imunizate are proprietatea de a provoca liza celulelor bacteriene de Vibrio cholerae. El a
demonstrat c bacterioliza necesit dou componente: serul sanguin al animalului imunizat i o pictur
de ser proaspt de cobai. Procesul este foarte specific: serul produce numai liza celulelor bacteriene care
au specificitate fa de anticorpii serici.
Jules Bordet a evideniat c fenomenul lizei se produce i n cazul hematiilor, dac sunt puse n
contact cu serul sanguin de la iepurele imunizat cu hematii, la care se adaug ser proaspt de cobai, n
care se gsete complementul (alexina).
Conceptul imunitii mediate celular a fost formulat de Ilia Metchnikoff (1891), care a evideniat c n
organism exist o serie de celule specializate, cu capacitatea de a recunoate celulele strine i de a le
ngloba prin procesul de fagocitoz, care sunt digerate i eliminate din celula fagocitar. Metchnikoff a
fcut observaii pe crustaceul Daphnia magna, ale crui celule fagocitare nglobeaz i diger sporii
fungici (Monospora bicuspidata). Cnd infecia cu spori este masiv, capacitatea de aprare a
organismului este depit i gazda moare.
Cele dou doctrine ale fenomenului imunitar, care s-au confruntat prin reprezentanii lor, au fost
unificate de Almroth Wright (1903). El a demonstrat existena n ser a unor anticorpi naturali denumii
opsonine, care acioneaz n cooperare cu fagocitele.
In 1930, Karl Landsteiner a evideniat o structur antigenic pe suprafaa hematiilor umane i a
stabilit existena sistemului antigenic ABO, precum i a normelor ce trebuie respectate n practica
transfuziei de snge.
Gaston Ramon (1925) a demonstrat c unii ageni patogeni (ca de exemplu, al difteriei, al
tetanosului) produc toxine foarte puternice, cantiti foarte mici ale acestora fiind suficiente pentru a
provoca moartea animalelor de experien. Tratarea preparatului de toxin cu formol 4% o i meninerea
amestecului la 39o C pentru o perioad de timp, este urmat de pierderea complet a proprietilor
toxice. Preparatul atoxic este inofensiv i poate fi administrat n cantiti relativ mari, fr s determine
efecte patologice. Preparatul atoxic i pstreaz proprietile imunogene i induce o stare de rezisten a
organismelor imunizate. Sub aciunea combinat a formolului i temperaturii, toxinele difteric i
tetanic au fost transformate n anatoxine.
Cercetrile de biochimie (1930-1950) au permis elucidarea structurii moleculare a antigenelor, a
imunoglobulinelor i a haptenelor.
Studiul mecanismelor celulare ale proceselor imunitare (1950-80) este marcat de progresele
biologiei moleculare i de interferena cu Virologia, Microbiologia, Biologia celular, Biofizica,
Biochimia, Genetica. S-a evideniat rolul esenial al limfocitului n fenomenele imunitare, precum i
rolul plasmocitelor n sinteza i secreia anticorpilor.
Mc Farlane Burnet (1959) a elaborat teoria seleciei clonale* a rspunsului imun, iar Jacques F. A.
P. Miller (1960) a stabilit rolul esenial al timusului n dobndirea competenei funcionale a limfocitelor
T.
*
Teoria seleciei clonale este cea de a II-a paradigm a Imunologiei i a fcut posibil studiul
mecanismelor imunitii. Esena paradigmei afirm c limfocitele sunt preprogramate prin receptorii
membranari s rspund la un determinant antigenic specific. Interacia antigenului cu receptorul
membranar al limfocitului induce proliferarea (expansiunea clonal) i diferenierea n celule
productoare de anticorpi.

Max Cooper si Robert Good (1960) a evideniat rolul bursei lui Fabricius n geneza sistemului
imunitar la psri.
Jean Dausset (1954) a demonstrat c pe suprafaa celulelor oricrui organism se gsesc molecule
(antigene), care confer fiecrui organism o individualitate antigenic unic. Datorit antigenelor
celulare, reaciile determinate de o gref de esut sau de organ, pot evolua n mod diferit: ntre
3
organismele foarte nrudite, grefa este tolerat foarte bine, iar o gref ntre organisme cu diferene
majore de ordin genetic, induce o reacie de respingere cu att mai rapid, cu ct diferenele antigenice
sunt mai mari. Antigenele suprafeei celulare care confer individualitate biochimic unic fiecrui
organism, se numesc antigene de histocompatibilitate. Evaluarea diferenelor celor doi parteneri (donor
i receptor) n ceea ce privete moleculele de histocompatibilitate este esenial nainte de grefarea
organului.
Dup 1970, studiul sistemului imunitar corespunde unei abordri integratoare. Dup opinia lui Niels
Kay Jerne (1985), imunologia i-a pierdut statutul de disciplin izolat, fiind pe cale de a fi absorbit
de biologia clasic.
Dup 1980, Imunologia s-a diversificat i s-a aprofundat, dar n acelai timp este mai unificat ca
oricnd, sub imperativul numitorului comun al nelegerii funciei imunitare la nivel molecular.
Abordrile prezente i viitoare cu privire la efectorii sau la factorii reglatori ai rspunsului imun,
precum i modalitatea de organizare a genelor codificatoare vor purta amprenta cercetrii la nivel
celular i molecular.
In perspectiv, orizontul de evoluie a Imunologiei se extinde asupra nelegerii genelor codificatoare
ale moleculelor efectoare i reglatoare ale rspunsului imun i ale mecanismelor aciunii lor. Astfel vom
nelege diferenierea limfocitelor, activarea lor, mecanismele sintezei si secreiei moleculelor efectoare,
ale recirculrii limfocitelor i mecanismele aciunii efectorilor imunitari. Ar urma utilizarea
cunotinelor imunologice pentru prevenirea maladiilor cu substrat imunitar (alergii, maladii
autoimune), pentru prevenirea respingerii grefelor de esuturi i organe i pentru imunoterapia
neoplaziilor. Va fi o perioad a rentoarcerii aplicrii Imunologiei moleculare, la nivelul ntregului
organism.

Diviziunile Imunologiei

Imunobiologia studiaz :
- substratul biologic al rspunsului imun (celulele imunitare, originea i factorii celulari i humorali
care asigur diferenierea lor) ;
- mecanismele celulare i moleculare ale biosintezei anticorpilor ;
- mecanismele reactivitii imunitare n filogenie i ontogenie ;
- explic implantarea celulelor tumorale i geneza cancerului clinic n condiiile aciunii efectorilor
sistemului imunitar;
- mecanismele imunitare ale respingerii grefelor de esuturi i organe;
- bazele celulare i moleculare ale strilor de hipersensibilitate i ale maladiilor autoimune.
Imunochimia este o disciplin de grani ce aparine Imunologiei i Biochimiei, care studiaz funcia
imunitar sub aspect biochimic. Fondatorul Imunochimiei este Paul Ehrlich, iar termenul de
Imunochimie a fost introdus de chimistul suedez Svante Arrhenius (1907). Preocuparea clasic a
domeniului a constat n studiul chimiei antigenelor i anticorpilor i al mecanismului lor de interaciune
n reacia antigen-anticorp.
Ehrlich a introdus metode cantitative n studiul reaciilor Ag-Ac i a elaborat o teorie general asupra
recunoaterii imune (teoria catenelor laterale sau a receptorilor). Domeniul s-a numit analiz
imunochimic i utilizeaz metode care deriv din mbinarea tehnicilor fizico-chimice cu cele
imunologice. Imunochimia este deservit de metoda imunodifuziei, imunofluorescenei, RIA, ELISA,
dializa la echilibru etc. Efectul utilizrii acestor metode de investigare a fost cunoaterea mecanismelor
moleculare care stau la baza rspunsului imun, ndeosebi humoral i aplicarea n laboratorul clinic, a
unor noi metode de diagnostic.
Ulterior, domeniul i-a lrgit sfera de activitate i studiaz urmtoarele aspecte:
- factorii moleculari ai rspunsului imun i n special ai imunitii mediate celular;
- moleculele de histocompatibilitate;
4
- markerii antigenici specifici diferitelor populaii de celule limfoide;
- moleculele cu funcie de receptor de antigen, pe suprafaa celulelor limfoide;
- factorii de cooperare celular n cursul elaborrii rspunsului imun (interleuchine);
- componentele complementului etc.
In clinic, studiile de Imunochimie au propus noi metode de tratament, bazate pe interaciunea unor
molecule cu rol de vehicul pentru anticorpi, cu receptorii unor celule int (imunotoxine).
Imunogenetica studiaz determinismul genetic al rspunsului imun: mecanismele genetice care
asigur diversitatea anticorpilor i a antigenelor de histocompatibilitate.
Imunohematologia s-a nscut odat cu stabilirea diferenelor antigenice ale eritrocitelor umane i cu
precizarea grupelor sanguine (K. Landsteiner, 1901) i s-a dezvoltat dup ce s-a stabilit existena unor
diferene fine ntre diferite tipuri de eritrocite i, n special, dup descoperirea factorului Rh i a rolului
su n patologia sarcinii.
Imunologia medical uman i veterinar s-a dezvoltat n trei direcii:
- direcia profilactic, orientat spre descoperirea i producerea unor noi vaccinuri, capabile s creeze
o stare de rezisten. Ea se preocup, de asemenea, de schemele de vaccinare, de posibilitatea asocierii
diferitelor vaccinuri i de posibilitatea stimulrii rspunsului imun cu ajutorul adjuvanilor;
- direcia terapeutic studiaz posibilitatea obinerii serurilor imune. Ele conin anticorpi i se
administreaz organismelor care prezint riscul mbolnvirii prin infecii;
- direcia diagnosticului studiaz posibilitatea identificrii agenilor etiologici ai diverselor maladii
infecioase, cu ajutorul reactanilor imunologici (seruri imune i antigene).
Imunopatologia studiaz fenomenele imunitare cu efecte defavorabile, prejudiciante asupra
organismului. Rspunsul imun se instituie drept cauz, dar n special ca mecanism, pentru producerea
unor manifestri patologice. Afeciunile generate de activarea sistemului imunitar (imunopatii) se
grupeaz n dou categorii:
- strile de hipersensibilitate (alergiile);
- maladiile autoimune.
Imunopatologia studiaz, de asemenea, imunodeficienele (nscute i dobndite), imunitatea de
transplant i imunitatea antitumoral, rspunsul imun n maladiile infecioase virale,bacteriene, fungce,
precum i n maladiile parazitare.
Serologia (Imunoserologia) s-a dezvoltat ca o ramur practic, dedicat studiului tehnicilor de
explorare a reaciilor imune in vitro.

Caracterizarea general a antigenelor

Jean Francois Bach (1976) definete antigenele ca fiind molecule care, consecutiv introducerii n
organism pe o cale adecvat, induc un rspuns imun materializat prin proliferarea celulelor limfoide i
sinteza moleculelor de recunoatere (anticorpi i receptori celulari), cu care se combin in vivo i in
vitro.

Modelul general de structur a unui antigen

O molecul antigenic este alctuit din dou componente:


- componenta purttor (carrier), care corespunde celei mai mari pri a moleculei:
- gruprile determinante de specificitate sau epitopi, localizate pe suprafaa componentei purttor i
formate din secvene specifice de monomeri. Epitopul este cea mai mic secven de aminoacizi
sau de glucide care pstreaz capacitatea de a stimula rspunsul imun. Epitopii, prin secvena
proprie a monomerilor (aminoacizi, glucide) i prin conformaia spaial specific, confer
individualitate chimic i specificitate antigenic moleculei nonself.
5
Gruprile determinante de specificitate se gsesc n numr variabil pe suprafaa purttorului i pot fi
identice att n ceea ce privete compoziia chimic, ct i conformaia spaial (ca n cazul antigenelor
polizaharidice cu epitopi repetitivi) sau sunt diferite, att ca secven a monomerilor ct i n privina
conformaiei spaiale.

Fig. 1. Modelul general de structur a unui antigen. Cea mai mare parte a oricrei molecule
antigenice este reprezentat de gruparea carrier (purttor), pe care sunt localizai epitopii cu diferite
configuraii spaiale, stimulatori ai reactivitii imunitare. Unii epitopi pot fi unici, iar alii sunt multipli.
Uneori, epitopii stimuleaz sinteza anticorpilor cu afiniti diferite.

Proprietile definitorii ale antigenelor

In studiile experimentale asupra imunogenitii unor molecule sintetice, Michael Sela (1969) a
descris dou proprieti eseniale ale antigenelor:
1.Imunogenitatea sau antigenitatea este proprietatea unui antigen complet, format din gruparea
carrier i epitopi, de a stimula un rspuns imun, humoral sau celular, ori de cte ori ptrunde n
organism pe o cale adecvat. Cei doi termeni sunt folosii, n mod curent, cu acelai sens, dar
antigenitatea este o proprietate pur chimic, iar imunogenitatea este o proprietate biologic ce are
semnificaie numai n contextul unei gazde imunocompetente. Proprietatea de imunogenitate este
asociat cu gruparea carrier a moleculei de antigen, grupare care ntr-o oarecare msur influeneaz i
specificitatea anticorpilor.
2. Specificitatea definete capacitatea antigenului ntreg sau numai a epitopilor si de a se combina
specific cu anticorpii sau cu receptorii celulari a cror sintez a fost indus. Proprietatea de specificitate
este dependent, n primul rnd de epitopi, dar este influenat ntr-o msur mai mare sau mai mic i
de gruparea carrier.

Determinanii antigenici

Epitopul (grupri determinante de specificitate (gds), situsuri antigenice, determinani antigenici)


este regiunea limitat a antigenului care induce un rspuns imun specific, humoral sau celular i se
combin specific cu receptorii de Ag ai limfocitelor. Epitopii determin specificitatea reaciei antigen-
anticorp.
Antigenele proteice prezint cea mai mare diversitate de epitopi, att n privina compoziiei chimice,
ct i a configuraiei spaiale. Cristalografia cu raze x permite determinarea cu relativ precizie a
atomilor individuali ai unei molecule i structura tridimensional a proteinei, prin analiza modului n
care razele x interacioneaz cu cristalul, precum i determinarea mobilitii atomilor, exprimat n

6
factori de temperatur atomic. Factorii de temperatur ridicat corespund regiunilor moleculare cu
mobilitate nalt (regiuni calde). In molecula proteic, zonele cu o mobilitate nalt a atomilor
corespund epitopilor. La temperatura biologic, secvenele din zonele cu factori de temperatur crescut
necesit cantiti mici de energie, pentru a trece dintr-o conformaie n alta. Invers, regiunile moleculare
cu mobilitate atomic redus au factori termici cu valoare sczut (regiuni reci) i necesit o cantitate
mai mare de energie pentru schimbarea conformaiei.
Capacitatea unei regiuni a moleculei de antigen de a funciona ca epitop (adic de a stimula rspunsul
imun) se numete imunopoten.
Mrimea gruprii determinante de specificitate s-a apreciat indirect (Elvin A. Kabat, 1962) prin
determinarea mrimii haptenei capabil s umple complet situsul de combinare al anticorpului. In
acest scop s-a utilizat sistemul dextran-antidextran, ntr-o reacie de precipitare. Dextranul cu gr. mol.
de 50 kDa este imunogen i prin injectare repetat la iepure, se obine serul imun * anti-dextran.
Artificial se prepar oligozaharide cu dimensiuni controlabile. Reacia de precipitare dextran-anticorpi
specifici este inhibat progresiv de oligozaharidul de glucoz i este complet n prezena
hexazaharidului. Oligomerul cu 6 resturi de glucoz corespunde celui mai bun ligand care se cupleaz
cu anticorpii anti-dextran (ligandul este orice molecul capabil s formeze un complex cu o alt
molecul) (fig 2). Heptazaharidul, ca i oligozaharidele cu mai puin de 6 resturi de glucoz inhib mai
puin eficient reacia de precipitare a sistemului dextran-antidextran.
*
Serul imun se obine de la animalele stimulate anterior cu an antigen i conine anticorpii specifici
fa de antigenul administrat.

Fig. 2. Oligozaharidul format din 4-6 resturi de glucoz blocheaz, cu cea mai mare eficien,
reacia de precipitare dintre dextran i anticorpii specifici antidextran. Oligozaharidele mai mari sau mai
mici nu se combin eficient cu anticorpii i inhib, ntr-o msur progresiv mai mic, reacia de
precipitare cu dextranul.

Cercetrile moderne cu AMC (anticorpi monoclonali) i cu epitopi glucidici bine definii au artat c
determinanii antigenici ai polizaharidelor pot fi alctuii din 2-4 resturi glucidice. Epitopii pot fi
localizai n interiorul catenei sau la capetele polizaharidului. Anticorpii anti-dextran se leag pe toat
lungimea catenei polizaharidice.
Cercetri asemntoare s-au fcut cu homopolimeri de aminoacizi (poli-Lys, poli-Ala), legai de
proteine purttor. Serul imun obinut pe iepure, fa de aceste conjugate, conine predominant anticorpi
specifici fa de haptena homopolimeric. Reacia de precipitare dintre serul specific i conjugatul
hapten-protein, este inhibat de pentamerul de alanin, ceea ce denot c acesta se leag cu cea mai
mare afinitate de situsul de combinare al anticorpului. Pentamerul corespunde mrimii epitopului
antigenic al conjugatului i reflect, indirect, mrimea situsului de combinare al anticorpilor specifici.
In concluzie, mrimea unui epitop polizaharidic corespunde la 6-8 uniti monomerice, iar pentru
antigenele proteice, epitopul este format din 4-6 aminoacizi.

Tipuri de determinani antigenici

Studiile cu privire la imunogenitatea antigenelor sintetice, l-au condus pe M. Sela (1970) la


concluzia existenei a dou tipuri de determinani antigenici:
- determinani secveniali, a cror specificitate este dat de secvena subunitilor componente
(aminoacizi, monozaharide), indiferent de conformaia moleculei. Epitopii secveniali sunt comuni
7
pentru toate polipeptidele care au secvene de aminoacizi identice sau asemntoare i existena lor
este o surs a reaciilor imune ncruciate;
- determinani antigenici conformaionali, a cror specificitate deriv din conformaia spaial a
moleculei i sunt rezultatul plierii spaiale a moleculei. Epitopii conformaionali sunt de dou
feluri: continui i discontinui (fig. 3).
Cei discontinui sunt formai din regiuni distincte ale moleculei, care se juxtapun cnd molecula se
pliaz n conformaia sa nativ.

Fig. 3. Modelul ipotetic al tipurilor de determinani antigenici ai unei molecule proteice


globulare.

Existena i imunogenitatea determinanilor conformaionali discontinui este condiionat de


integritatea legturilor S-S. Dup fragmentarea enzimatic a moleculei, ei i pierd totdeauna
integritatea i semnificaia funcional, iar cei continui i pierd sau i pstreaz identitatea n funcie de
gradul fragmentrii enzimatice a moleculei.
Importana epitopilor conformaionali a fost evideniat pentru molecula de lizozim din albuul de
ou de gin. Bucla format de aminoacizii 64-80 (fig. 4) este nchis de o legtur S-S ntre dou resturi
de cistein.

Fig. 4. Epitopul conformaional al moleculei de lizozim format de bucla secvenei aminoacizilor 64-
80 este imunodominant.

Secvena buclei a fost sintetizat artificial i legat de polimerul Ala-Lys, cu rol de purttor.
Complexul format induce sinteza anticorpilor la iepure, specifici fa de aceast secven, dar dau
reacie de precipitare i cu molecula nativ de lizozim.
In general, anticorpii care se sintetizeaz fa de antigenele proteice au specificitate, n primul rnd,
fa de epitopii conformaionali i mai rar fa de cei secveniali, ceea ce denot c sistemul imunitar
recunoate molecula nativ sau regiuni ale ei, cu conformaia spaial iniial.
Valena antigenului s-a definit convenional prin numrul de epitopi ai unui antigen. Numrul de
epitopi ai unei molecule antigenice variaz n raport cu mrimea i complexitatea sa structural.
8
Valena se evalueaz prin numrul moleculelor de anticorp care reacioneaz cu o molecul de
antigen. Pentru evaluarea numrului de epitopi ai unui antigen, trebuie avut n vedere c molecula de
anticorp este bivalent (leag doi epitopi), dar i de faptul c un antiser nu conine anticorpi fa de toi
epitopii unui antigen.
Studiile privind reacia antigen-anticorp in vitro, au condus la concluzia existenei a trei tipuri de
valene antigenice (epitopi) (fig. 5):
- epitopi funcionali ai suprafeei moleculei antigenice (conformaionali i secveniali) accesibili
sistemelor imunitare de recunoatere. Numrul lor este proporional cu gr. mol. a antigenului i este
dependent de complexitatea conformaional a moleculei. Moleculele proteice globulare au un
numr mai mare de epitopi. Un situs antigenic, teoretic, s-ar gsi la fiecare cteva mii de daltoni;
- epitopi funcionali interni, care, n molecula nativ sunt inaccesibili sistemului imunitar. Ei devin
funcionali in vivo, dup degradarea parial, controlat a moleculei, n celulele care prelucreaz
antigenul sau dup clivarea enzimatic a moleculei in vitro;
- epitopi nefuncionali, reprezentai de epitopi criptici care, dup prelucrarea antigenului in vivo i
pierd configuraia i implicit funcionalitatea, dar se pot releva dup clivarea enzimatic in vitro a
moleculei. Fragmentele rezultate prin clivajul enzimatic al proteinelor in vitro, induc sinteza unor
fracii specifice de anticorpi care lipsesc n serul imun fa de molecula nativ.

Fig. 5. Epitopii imunodominani sunt localizai la suprafaa moleculei globulare. Epitopii


subdominani devin accesibili dup clivarea moleculei n celula care prelucreaz i prezint antigenul,
iar eptopii criptici, inaccesibili recunoaterii imunitare n molecula nativ, dar devin accesibili dup
clivarea enzimatic a proteinei in vitro .

Numrul total al epitopilor unui antigen nu se cunoate, dar se poate evalua cu aproximaie, dup
degradarea parial a moleculei de antigen. De exemplu, albumina seric bovin nativ are 6 situsuri
funcionale conformaionale. Dup scindarea enzimatic menajat in vitro, rezult 9 fragmente
peptidice, fiecare dintre ele dnd reacie de precipitare cu serul anti-albumin nativ. Pentru ca reacia
de precipitare s aib loc, sunt necesari cel puin doi epitopi, ceea ce nseamn c molecula de albumin
seric bovin are cel puin 18 epitopi, care, in vivo, devin funcionali dup scindarea enzimatic a
moleculei i induc sinteza anticorpilor specifici.

Haptene

Haptenele (haptein, lb. greac = a apuca) sunt substane chimice naturale sau de sintez, cu molecul
mic, a cror imunogenitate este condiionat de cuplarea cu o molecul purttor, dar i pstreaz
proprietatea de specificitate, adic reacioneaz cu anticorpii specifici a cror sintez a fost indus de
haptena conjugat cu o molecul cu rol de purttor.
Denumirea de hapten a fost introdus de Landsteiner pentru a caracteriza din punct de vedere
funcional un extract alcoolic de rinichi de cal, neimunogen ca atare pentru iepure, dar capabil s se
9
combine cu anticorpii sintetizai dup imunizarea iepurelui cu extractul alcoolic de rinichi de cal, cuplat
cu o molecul purttor. El a propus ca n categoria haptenelor s fie cuprins orice substan natural
sau sintetic, cu gr. mol. mic sau mare, care n form nativ nu poate s induc un rspuns imun
detectabil, dar dobndete capacitatea imunogen dup cuplarea sa in vivo sau in vitro, cu o molecul
purttor cu gr. mol. mare. Conjugatul este imunogen nu numai n raport cu epitopii moleculei purttor,
ci i cu epitopul haptenei.
Din punct de vedere funcional, haptenele s-au numit jumti de antigene, deoarece au numai una
dintre cele dou proprieti eseniale ale antigenelor: nu sunt imunogene, dar i pstreaz proprietatea
de specificitate. De aceea, termenul antigen nu este sinonim cu cel de imunogen. Haptena este un
antigen, dar n forma sa nativ, nu este imunogen.
In general, haptenele sunt molecule mici, dei uneori, macromoleculele pot funciona ca haptene.
Extractul alcoolic de rinichi de cal este o hapten complex. Haptenele simple sunt reprezentate de
polinucleotide, alcooli, formaldehida, unele medicamente etc.
Utiliznd haptenele simple, prin reacii de cuplare cu o molecul purttor s-au obinut antigene
artificiale. Haptena din complexul molecular are rolul gruprii determinante de specificitate. Studiul
imunogenitii conjugatelor hapten-molecul purttor a permis determinarea mrimii gruprilor
determinante de specificitate ale antigenelor i indirect, determinarea situsului de combinare a
anticorpilor. Pe aceeai cale s-a evaluat specificitatea, afinitatea i heterogenitatea anticorpilor.
Haptenele au fost folosite pentru studiile de cristalografie cu raze x ale unui complex antigen-anticorp.
Haptenele autocuplante sunt molecule cu gr. mol. mic, a cror particularitate const n aceea c,
dup injectare, n organism se combin spontan cu proteinele tisulare i formeaz conjugate hapten-
protein, in vivo. Conjugatele hapten-protein induc sinteza anticorpilor i determin procese de
hipersensibilitate sau iniiaz maladii autoimune. Astfel se comport derivaii dinitrofenolului substituii
cu clor sau fluor, unii produi de degradare a penicilinei.

Clasificarea i imunogenitatea antigenelor

Dup originea lor, antigenele sunt exogene i endogene.


Antigenele exogene sunt cele mai numeroase i pot fi mprite n trei categorii: 1)naturale;
2)artificiale; 3)sintetice.

Antigene naturale

Antigenele naturale formeaz categoria cea mai cuprinztoare i include toate macromoleculele
naturale din virusuri, microorganisme, fungi, plante i animale.
Dup dimensiuni se disting antigene moleculare (solubile) i antigene corpusculare.
Antigenele moleculare (solubile) constituie gruparea cea mai numeroas, care include toate tipurile de
macromolecule: proteine, polizaharide, lipide, acizi nucleici.
Antigenele corpusculare (insolubile) sunt reprezentate de virusuri i de celule (procariote i
eucariote).

Antigene moleculare

Cele mai studiate antigene sunt proteinele i polizaharidele, la care se adaug conjugatele:
glicoproteine, nucleoproteine, lipoproteine, peptidoglicani, glicolipide.
Proteinele sunt cele mai numeroase i mai importante antigene moleculare. Diversitatea lor
chimic, generat de variaia secvenei de aminoacizi este uria. Practic, fiecare tip de molecul
proteic nonself din lumea vie este un antigen pentru organismul animal i uman, deoarece are o

10
secven unic de aminoacizi, care determin o structur secundar i tridimensional proprie i
implicit, existena unor epitopi proprii ca secven a aminoacizilor i conformaie spaial.
Imunogenitatea este o proprietate general a proteinelor, a celor cu rol structural (colagenul,
cheratina, elastina, fibroina viermelui de mtase, proteinele capsidei virale), a celor cu rol funcional
(miozin, actin, albumin, hemoglobin, mioglobin, enzime, hormoni, imunoglobuline), a celor cu rol
de depozit de aminoacizi (ovalbumina, cazeina, gliadina din seminele de gru). Toate proteinele i
polipeptidele cu o gr. mol. mai mare de 1000 Da sunt imunogene, ntr-o msur mai mare sau mai mic.
Proteinele fibrilare sunt insolubile n ap, proprietate conferit de proporia mare de aminoacizi
hidrofobi, att n interiorul ct i la suprafaa proteinei
Antigenitatea moleculelor globulare este determinat de epitopii conformaionali, rezultai din
plierea tridimensional*.
*
Structura primar se refer la secvena aminoacizilor. Structura secundar este -helix sau -pliere.
Structura teriar semnific plierea tridimensional ce confer conformaia moleculei, iar cea
quaternar, asamblarea ctorva catene polipeptidice (4 catene n Hbg i n molecula de Ig). Proteinele
fibrilare (colagenul) adopt o structur teriar (tridimensional) cu secvene repetitive ordonate i au un
singur tip de structur secundar. Cele mai multe proteine sunt globulare, conin cteva tipuri de
structur secundar i se structureaz n uniti globulare compacte, stabile, denumite domenii.

Proteinele globulare sunt compacte, aproape sferice sau ovoide i au un raport axial de maxim 3
(raportul dintre cea mai mare i cea mai mic dimensiune). Determinanii antigenici ai proteinelor
constau din resturi de aminoacizi expui pe suprafaa proteinei cu o anumit conformaie
tridimensional. Proteinele complexe conin epitopi multipli, parial suprapui, adic sunt un continuum
de determinani antigenici. Pe suprafaa unei molecule globulare, nu se poate identifica sensul
spiralizrii catenei i este greu de determinat dac resturile de aminoacizi, alturate pe suprafaa
moleculei, sunt adiacente pe caten sau provin din secvene ndeprtate ce sunt alturate prin plierea
moleculei. Cea mai mare parte a suprafeei unei proteine globulare are potenial antigenic.
*
Conformaia se refer la raportul spaial al atomilor n molecul. Conversia ntre variantele
conformaionale se face fr ruperea legturilor covalente. Configuraia moleculei se refer la raportul
geometric ntre un set de atomi (de exemplu, cei care deosebesc acizii L de acizii D). Conversia ntre
variantele configuraiei necesit ruperea legturilor covalente.

Pentru cele mai multe proteine globulare (mioglobina, hemoglobina, lizozimul, RN-aza etc.), aproape
toi determinanii antigenici sunt conformaionali, adic sunt rezultatul plierii spaiale a moleculei, iar o
mic parte sunt secveniali, adic sunt reprezentai de o secven particular de aminoacizi. De obicei,
regiunile care proemin pe suprafaa proteinei sunt recunoscute ca epitopi i sunt hidrofile.
Epitopii conformaionali sunt localizai n regiunile flexibile (mobile) ale proteinelor i sunt
recunoscui de limfocitele B.
Moleculele proteice fibrilare (cheratina, colagenul, fibroina) au raporturi axiale de 10 sau mai mult,
au conformaii mai simple dect cele globulare, catenele lor fiind aranjate sau spiralizate pe o singur
dimensiune. Determinanii antigenici ai acestor proteine sunt secveniali, formai din 3-6 aminoacizi.
Din multitudinea de epitopi, un set specific, restrns, al fiecrei proteine este recunoscut de sistemul
imunitar al organismului. Setul de epitopi ai unei molecule proteice, inductori ai rspunsului imun,
variaz de la o specie la alta de organisme imunizate i se numesc imunodominani. Exist chiar variaii
individuale ntr-o populaie de organisme ale aceleiai specii.
Epitopii interni ai moleculelor globulare, cel mai adesea, sunt neimunogeni, nefiind accesibili
sistemului imunitar al organismului, dar se pot exprima ntr-un anumit set de condiii de imunizare
(gazd, adjuvant etc.). Un determinant intern poate fi neimunogen n molecula nativ, dar devine
11
imunostimulator dup clivarea enzimatic a moleculei in vivo sau in vitro. De aceea, M. Sela a
recomandat utilizarea termenului de grupare imunodominant, pentru epitopul sau epitopii care se
exprim n anumite condiii (gazd, adjuvant, cale de administrare) i determin specificitatea
rspunsului imun.
Imunogenitatea antigenelor proteice se modific n diferite condiii. Astfel, epitopii secveniali i
conformaionali se comport diferit dup denaturarea i fragmentarea proteinei.
Proprietile funcionale i antigenice ale proteinelor sunt conferite de dispoziia unic a tuturor
grupelor funcionale n structura sa nativ tridimensional. Denaturarea modific imunogenitatea
moleculelor proteice.
Denaturarea semnific deplierea structurii spiralate a moleculelor proteice i are loc sub aciunea
factorilor chimici care reduc legturile S-S (ureea, -mercaptoetanolul, acidul performic, clorura de
guanidin), fr schimbarea legturilor covalente, prin modificarea pH, prin nclzire, prin rcire, sau
sub aciunea temperaturii. Prin denaturare, proteina i modific conformaia, i pierde nu numai
funcia biologic, dar i modific specificitatea antigenic. Anticorpii specifici fa de proteina nativ
precipit slab sau de loc proteina denaturat termic sau chimic*.
*
De exemplu, cele 4 puni S-S ale RN-azei ntre resturile de cistin, sunt reduse de -mercaptoetanol
i transformate n 8 resturi de cistein, cu pierderea total a activitii enzimatice. Anticorpii fa de RN-
aza pancreatic bovin nativ nu precipit moleculele de RN-az denaturat prin reducerea legturilor
S-S. Invers, anticorpii fa de RN-aza denaturat, nu precipit RN-aza nativ. Lizozimul din albuul de
ou de gin are 4 legturi S-S intracatenare. Ac specifici fa de lizozimul nativ recunosc 8 determinani
conformaionali diferii. Dup reducerea legturilor S-S cu mercaptoetanol, epitopii conformaionali se
pierd i Ac anti-lizozim nativ nu precipit lizozimul denaturat.

Modificarea specificitii anticorpilor sugereaz c denaturarea proteinelor prin reducerea legturilor


S-S determin pierderea epitopilor conformaionali.
Denaturarea este un proces reversibil. Dup ndeprtarea factorului denaturant, proteinele reverseaz
greu la forma nativ, chiar dup restabilirea condiiilor de mediu.
Denaturarea proteinelor sub aciunea formaldehidei i glutaraldehidei are importan practic. Cei
doi ageni chimici leag ncruciat moleculele proteice, constituind reele multimoleculare stabile,
modificnd funciile proteinelor cu activitate biologic (toxine, enzime). Astfel, exotoxinele tratate cu
formaldehid i pierd proprietile toxice, dar rmn imunogene. Formaldehida i glutaraldehida se
folosesc pentru conservarea antigenelor cu gr. mol. mic (peptide), dar sunt mai puin utilizate pentru
conservarea proprietilor antigenice ale moleculelor mari. Agenii chimici de legare ncruciat
modific imunogenitatea moleculelor proteice prin schimbarea conformaiei moleculei i mascarea
epitopilor sau prin modificarea chimic a aminoacizilor epitopului.
Fragmentarea enzimatic modific conformaia spaial a moleculelor proteice native i diminueaz
imunogenitatea. Epitopii secveniali i pstreaz identitatea i imunogenitatea, iar anticorpii anti-
protein nativ precipit fragmentele rezultate prin clivare. Epitopii conformaionali dispar i se relev
epitopi care n molecula nativ au statutul de epitopi criptici. Hidroliza enzimatic modific cu att mai
mult imunogenitatea, cu ct fragmentele rezultate au dimensiuni mai mici. Prin clivare enzimatic se
anuleaz imunogenitatea epitopilor conformaionali i se relev epitopi care n molecula nativ au
statutul de epitopi criptici.
O atenie special s-a acordat studiului imunogenitii unor proteine ale cror proprieti biologic-
active sunt uor de evaluat: enzime, inhibitori enzimatici, hormoni proteici, toxine, imunoglobuline (n
calitatea lor de antigene), proteine ale capsidei sau ale nveliului viral.
Enzimele sunt proteine globulare si sunt antigenice, indiferent de originea lor. Volumul lor mare
ofer spaiul n care se formeaz cavitile specifice pentru legarea substratului. Reacia moleculelor de
enzim cu anticorpii specifici i consecinele ei au constituit o modalitate de determinare a poziiei
12
epitopilor. Anticorpii fa de diferii epitopi ai moleculei de enzim modific n grade foarte diferite
activitatea ei catalitic. Dac anticorpii sunt specifici fa de epitopi localizai la nivelul situsului activ
al enzimei, molecula i pierde activitatea fa de substrat, deoarece legarea anticorpilor la situsul activ
inhib competitiv legarea moleculelor de substrat. Efectul inhibitor al anticorpilor nu se produce dac
enzima a legat deja substratul specific. Dac gruprile determinante de specificitate ale moleculei de
enzim sunt situate n afara situsului catalitic, activitatea enzimei este parial inhibat, datorit
modificrilor conformaionale care survin dup reacia antigen-anticorp, sau rmne intact. Foarte rar,
complexul enzim-anticorp are un efect catalitic superior, comparativ cu enzima nativ.
Gradul de inhibiie a activitii enzimatice este cu att mai accentuat, cu ct molecula este mai mare.
Hormonii sunt molecule slab imunogene, datorit uniformitii relative a structurii lor chimice n
regnul animal. Anticorpii specifici fa de majoritatea hormonilor proteici se obin prin asocierea lor
prealabil cu adjuvantul Freund. Imunogenitatea hormonilor* este ntr-o relaie direct cu gradul
deosebirilor chimice existente ntre hormonul exogen i hormonul produs de organismul receptor.
Consecina este sinteza anticorpilor antihormon.
*
Proprietile antigenice ale insulinei sunt bine cunoscute, datorit utilizrii clinice a hormonului
pentru tratamentul diabetului zaharat insulino-dependent. Molecula de insulin este alctuit din dou
catene polipeptidice, cu un numr total de 51 de aminoacizi: 21 ai catenei A i 30 ai catenei B. Cele
dou catene sunt reunite prin puni S-S. Structura moleculelor de insulin de la diferite specii este foarte
asemntoare, 47 din cei 51 de aminoacizi fiind identici. Deosebirile se gsesc n catena A pentru
aminoacizii 8, 9 i 10 (la bovine Ala, Ser, Val, la om sunt Thr, Ser, Ile, iar la ovine Ala, Gly, Val). In
catena B, diferena este limitat la aminoacidul C-terminal. Diferenele secvenei de aminoacizi nu
modific funcia hormonului. De aceea, insulina, indiferent de provenien, este la fel de eficient
pentru tratamentul diabetului uman. Micile diferene de secven, n general, nu sunt sesizate de
organismul receptor. Totui, dup administrare prelungit, organismele receptoare cu reactivitate
imunitar mai nalt, sintetizeaz anticorpi anti-insulin.

Polizaharidele au complexitate structural* relativ mare, condiionat de multitudinea posibilitilor


de legare a atomilor de C. Comparativ cu proteinele, sunt molecule mai puin imunogene n stare nativ.
Antigenitatea lor este conferit de succesiunea unitilor componente, de configuraia spaial a
moleculei i de gr. mol.
*
Glucidele care conin n atomi de C asimetrici, pot s existe n 2n forme stereoizomerice. O hexoz
(D-glucoza, L-glucoza, D-manoza, L-manoza) are 4 atomi de C asimetrici (C2, 3, 4, 5) i poate s existe
n 16 forme stereoizomerice. Fiecare dintre cei 16 izomeri poate s apar sub forma inelului cu 6 atomi
(ciclu piranozic) sau cu 5 atomi (ciclu furanozic). In forma ciclic a hexozei, funcia aldehidic C1
devine asimetric i grupul OH poate s aib configuraie sau , dublnd numrul izomerilor
posibili. In total, o hexoz poate s apar ntr-un oligo- sau polizaharid, n 64 de variante. Aceast
enorm diversitate face ca glucidele s fie foarte versatile din punct de vedere imunologic.

Polizaharidele nu au gr. mol. definit. Legturile dintre monomeri n lanul polizaharidic sunt
legturi acetal, ce implic un atom de C cu doi atomi de oxigen (O din inel i O interzaharidic). Acetalii
sunt sensibili la clivajul hidrolitic, catalizat de acid i la clivajul enzimatic, pentru c ambele acioneaz
prin acelai mecanism (C. Glaudemans, 1999).
Resturile glucidice n lanul oligo- sau polizaharidic, adeseori poart grupri de substituie (amino,
carboxil, piruvil, fosforil-colina) sau sunt esterificate cu acizi grai cu lan lung. Gruprile suplimentare
pot s influeneze profund proprietile imunogene, deoarece au rolul de epitopi, dar i activitatea
biologic a moleculei.
Din punct de vedere antigenic, glucidele sunt de dou categorii:
13
- polizaharidele simple din capsula bacterian, polizaharidele plantelor (celuloza), polizaharidele de
depozit (glicogenul);
- glucidele conjugate cu alte molecule: glicoproteine, glicolipide (mucopolizaharidele mureinei, LPS
bacterian).
Polizaharidele sunt antigene cu epitopi secveniali repetitivi i cel puin uneori, n funcie de originea
polizaharidului i de specia imunizat, sunt imunogene. Moleculele mai mici de 50 kDa nu sunt
imunogene.
Din punctul de vedere al structurii moleculare, se disting dou tipuri de polizaharide: a)cele care au o
caten central pe care se inser ramificaiile laterale; b)polizaharide lipsite de o caten central, iar
ramificaiile sunt dispuse aleatoriu, fr nici o simetrie. Rolul catenelor centrale n conferirea
imunogenitii este controversat, dar ramificaiile laterale au o importan deosebit pentru determinarea
specificitii antigenice a polizaharidelor.
In funcie de compoziia chimic, pot fi homo- sau heteropolizaharide, iar n ceea ce privete
sarcina pot fi neutre sau ncrcate.
Oligo- i polizaharidele pot dobndi o structur teriar (globular). Uneori, conformaia spaial a
polimerului glucidic este determinant pentru specificitatea sa antigenic. Schimbrile conformaionale
ale polizaharidelor se produc mai uor dect ale proteinelor, pentru c au bariere energetice sczute.
Polizaharidele sunt molecule stabile, dei pentru cele acide se poate produce autohidroliza.
Denaturarea polizaharidelor este practic necunoscut.
Polizaharidele native au o imunogenitate slab. Majoritatea lor nu stimuleaz rspunsul imun, i
induc o stare de toleran. Adeseori polizaharidele se comport ca haptene, adic devin antigenice dup
cuplarea cu un purttor proteic, rezultnd lectine, cu o foarte larg distribuie n lumea vie. In calitate de
haptene, polizaharidele au proprietatea de specificitate, adic se combin cu anticorpii complementari
fa de complexul glicoproteic.
Din motive de ordin practic, cele mai studiate polizaharide din punct de vedere antigenic sunt cele de
origine bacterian: dextranul i polizaharidele capsulare.
Dextranii sunt polimeri ramificai de glucoz, resturile glucozil fiind unite mai ales prin legturi de tip
1-6, dar n funcie de specia productoare, punctele de ramificaie ale catenelor polimere pot fi 1-2, 1-
3 sau 1-4.
Dextranii sunt sintetizai n special de unele bacterii lactice, din zaharoz, dup reacia:

Dextranaz
N(zaharoz) (Glucoz)n + (Fructoz)n.

Fructoza este folosit ca surs de C i energie, iar glucoza este polimerizat.


Dextranii au gr. mol. foarte diferite (pn la 106 Da), n funcie de gradul de polimerizare. Nu sunt
imunogeni i de aceea se folosesc ca nlocuitori ai plasmei. Prin transfuzii repetate cu soluii de dextran
la om i prin injectare repetat la oarece, s-au sintetizat Ac antidextran, a cror specificitate fa de
epitopii conformaionali este foarte nalt: o fracie a Ac este specific fa de resturile de glucozil
legate 1-2 iar alta este specific fa de resturile de glucozil legate 1-3. Cele 2 fracii de Ac nu dau
reacii ncruciate, dei deosebirea dintre cele dou categorii de molecule de dextran const numai n
modul diferit de legare a resturilor de glucozil ntre ele.
Polizaharidele capsulare se pot gsi fie sub forma moleculelor libere (solubile), fie sub form
corpuscular (ataate celulelor bacteriene capsulate).
Variaiile biochimice ale polizaharidelor capsulare confer tulpinilor bacteriene, specificitate
antigenic de tip. La Streptococcus pneumoniae s-au identificat peste 80 de tipuri antigenice ale
polizaharidelor capsulare. In compoziia lor intr hexoze, pentoze, derivaii lor aminai, metilai etc.
Specificitatea antigenic a polizaharidelor capsulare depinde att de compoziia chimic, ct i de
succesiunea monomerilor n catena polizaharidic. Ca vaccinuri, polizaharidele induc starea de
14
toleran. La copii, care necesit imunizare fa de Haemophilus influenzae i Str. pneumoniae cu
numeroase serotipuri, rspunsul imun fa de polizaharidele capsulare este de tip timo-independent,
slab, indiferent de lungimea catenei. Pentru imunizarea copiilor, polizaharidele s-au cuplat cu o protein
cu rol de purttor, pentru a crea un antigen timo-dependent.
Acizii nucleici n stare purificat sunt molecule neimunogene, datorit uniformitii lor structurale n
lumea vie. Injectarea lor la animale nu induce sinteza Ac. Acizii nucleici nativi sunt conjugate
nucleoproteice, n care acizii nucleici au rolul de hapten. Majoritatea epitopilor conjugatului sunt
conformaionali. O fracie a Ac anti-conjugat se combin cu acizii nucleici. Anticorpii anti-acizi nucleici
se combin cu acizii nucleici n stare pur, indiferent de provenien. Proteinele asociate acizilor
nucleici confer o nou specificitate antigenic i determin sinteza anticorpilor care se combin cu
proteina purttor.
Experimental, anticorpii anti-acizi nucleici se obin pe una din urmtoarele ci:
1. Imunizarea cu bacteriofagi din seria T par (T2, T4, T6), supui ocului osmotic pentru spargerea
capsidei. ADN al acestor fagi se deosebete de ADN din celulele eucariote, prin prezena 5-hidroxi-
metilcitozinei glicozilate, n locul citozinei. Anticorpii au specificitate fa de bazele glicozilate, ceea ce
explic lipsa reaciilor ncruciate cu ali acizi nucleici.
2. Imunizarea cu ribosomi din celulele vegetale sau animale. Anticorpii sintetizai reacioneaz cu
ARN de origine bacterian, vegetal sau animal, precum i cu polinucleotidele sintetice (poli-A, poli-
C, poli-U), dar nu reacioneaz cu ADN nativ i nici cu ADN denaturat.
3. Imunizarea cu conjugate hapten-protein, n care haptena este reprezentat de baze azotate,
ribonucleozide, dezoxiribonucleozide, nucleotide, dinucleotide i trinucleotide. Anticorpii sintetizai
reacioneaz att cu haptena ct i cu ADN nativ sau denaturat.
4. Imunizarea cu complexe formate din acizi nucleici i albumin metilat. Cele dou molecule
formeaz un complex necovalent, datorit interaciei dintre gruprile negative ale acizilor nucleici i
cele pozitive ale proteinei. Anticorpii sintetizai reacioneaz cu complexul molecular, cu proteina, cu
acidul nucleic nativ i denaturat de diferite origini.
5. Anticorpii anti-acizi nucleici se gsesc n sngele pacienilor cu lupus eritematos diseminat.
Anticorpii sintetizai fa de acizii nucleici cu rol de haptene n conjugatele cu proteine nu au
specificitate, deoarece precipit cu ADN monocatenar, cu ARN de diferite origini, cu poliribonucleotide
i cu acizii nucleici dublu catenari.
Lipidele sunt molecule neimunogene n stare nativ, dar se pot cupla cu proteinele i n conjugatul
format au rolul de haptene. Din punct de vedere imunologic, cele mai importante lipide sunt fosfatidele
(sfingomielina i cefalina) i glicosfingolipidele (galactocerebrozida).
O hapten lipidic cu o importan practic deosebit este cardiolipina*, din cordul mamiferelor. In
sngele indivizilor infectai cu T. pallidum se sintetizeaz Ac care reacioneaz cu diferite extracte
lipidice tisulare, aa cum este cardiolipina nalt purificat extras din cordul bovin. Aceasta a condus la
testul serologic standard pentru sifilis reacia Bordet Wasserman (RBW).
*
Cardiolipina (difosfatidil-glicerol) este ubicvitar la eucariote. Catena principala este format din 3
molecule de glicerol, legate prin 2 puni fosfodiesterice. Celelalte 2 grupri OH ale celor 2 molecule de
glicerol externe sunt esterificate cu acizi grai. Cardiolipina se gsete predominant n membrana
mitocondrial intern i este un marker optim pentru biosinteza mitocondrial. A fost extras din cordul
bovin, foarte bogat n mitocondrii.
Un alt antigen lipidic este antigenul Forssman din membrana hematiilor, inductor al sintezei Ac
hemaglutinani i n prezena complementului, hemolitici.
Studiul imunogenitii lipidelor a fost ngreunat de insolubilitatea lor n ap. Problema reactivitii
anticorpilor cu antigenele lipidice a fost depit parial, prin utilizarea lipidelor auxiliare (lecitina i
colesterolul) n suspensia antigenic. Disponibilitatea liposomilor a permis studiul imunogenitii
lipidelor asociate cu membranele.
15
Antigene corpusculare

Antigenele corpusculare sunt, n esen, antigene moleculare asociate virusurilor i celulelor.


Proteinele capsidale i glicoproteinele nveliului viral sau proteinele prezentate pe suprafaa celulelor
infectate cu virusuri, sunt foarte imunogene i stimuleaz rspunsul imun al gazdei. De aceea,
imunitatea consecutiv infeciei virale este, de obicei, de lung durat.
Antigenele bacteriene sunt fie solubile (secretate n mediul extracelular), fie corpusculare (legate de
celul). Din prima categorie fac parte exotoxinele i polizaharidele capsulare libere, iar din cea de a II-a,
antigenul somatic O (endotoxina bacteriilor Gram negative), antigenele polizaharidice din glicocalix,
flagelina, pilina, acizii teichoici, mureina etc.
Antigenele eritrocitare sunt glicolipide ale suprafeei eritrocitare, cu determinism biochimic
cunoscut, n sistemul A, B, 0. Glicolipidele eritrocitare de grup sanguin se gsesc i pe suprafaa
celulelor tisulare, dar i n secreiile exocrine (saliv, suc gastric etc.), la circa 75% dintre indivizi,
denumii secretori. Glicolipidele din secreii sunt hidrosolubile i studiul lor a fost mai uor dect al
moleculelor eritrocitare.
Gruprile glucidice ale glicolipidelor membranei eritrocitare au rol dominant n determinarea
specificitii de grup sanguin, aa cum au evideniat studiile de digestie enzimatic controlat (fig. 6).
Eritrocitele tuturor grupelor sanguine au un precursor antigenic comun antigenul H (codificat de gena
H), bine exprimat pe suprafaa eritrocitelor de grup 0 i n cantiti progresiv descrescnde pe hematiile
de grup A, B i AB.
Antigenul H este format din glucoz, galactoz, N-acetilglucozamin, galactoz i fucoz.
Indivizii de grup A au gena A ce codific o glicozil-transferaz (N-acetilgalactozaminil-transferaz),
enzim ce adaug N-acetil-D-galactozamina, la galactoza preterminal a moleculei H. De aceea,
specificitatea antigenic a eritrocitelor de grup A este conferit de trizaharidul N-acetil-galactozamin,
galactoz i L-fucoz:

Indivizii de grup B au gena B ce codific galactozil-transferaza, enzim ce adaug D-galactoza (n


loc de N-acetil galactozamin) la galactoza preterminal a moleculei H, avnd un determinant antigenic
format din dou resturi terminale de D-galactoza i L-fucoza.
La indivizii de grup AB sunt active ambele gene, iar la cei de grup O, gena O este silenioas i nu
modific antigenul H.
Prezena restului de fucoz (antigenul H)este esenial pentru expresia epitopilor A i B. Gena H i
antigenul su lipsesc la fenotipul Bombay. De aceea, transferazele A i B nu pot aduga glucidele
specifice la restul Gal al polizaharidului i antigenele de grup A i B nu sunt exprimate*.
*
Exprimarea antigenelor ABO pe hematii poate fi modificat prin tratamentul in vitro cu glicozidaze:
o -glicozidaz (extras din bobul de cafea verde) poate cliva restul de Gal de pe hematiile de grup B i
le convertete n hematii de grup 0, ce pot rmne funcionale dup transfuzia la subiecii de grup 0.

16
Fig. 6. Oligozaharidele cu rol de epitopi determinani ai grupelor sanguine ABO. Oligozaharidul
este ancorat n membrana eritrocitului prin intermediul sfingomielinei, denumit ceramid. 85% dintre
indivizii umani secret substanele de grup sanguin n saliv. La indivizii secretori oligozaharidele
sunt prezente sub forma conjugatelor cu polipeptidele codificate de genele secretoare (dup Roitt,
1997).

Indivizii de grup A au genotip AA sau AO (42%), cei de grup B au genotip BB sau BO (14%), cei
de grup AB au genotip AB (6%), iar cei de grup O au genotip OO (38%).
Antigenele de histocompatibilitate (CMH, descrise de J. Dausset, 1958) sunt molecule de suprafa
ale majoritii esuturilor. Din punct de vedere biochimic, ele sunt strict specifice fiecrui organism
uman i animal i confer individualitate biochimic proprie fiecrui organism. Se numesc i antigene
de transplantare, deoarece, dup grefarea unui esut sau a unui organ, moleculele CMH se comport ca
antigene i declaneaz rspunsul imun al organismului receptor, care determin respingerea grefei.
Antigenele individuale CMH se evideniaz prin reacia de respingere a grefei. In funcie de raportul
genetic dintre donor i receptor, antigenele CMH aparin urmtoarelor categorii:
1)autoantigenele includ antigenele proprii CMH, care, n condiii normale sunt tolerate de sistemul
imunitar. Sub aciunea unor factori fizici, chimici sau biologici, antigenele CMH se modific devenind
autoantigene, generatoare ale conflictelor autoimune;
2)izoantigenele (izos, lb. greac = acelai) cuprind antigenele de transplantare comune organismelor
identice din punct de vedere genetic, care aparin unei linii genetic pure (inbred). Verificarea puritii
genetice a unei populaii de organisme se face prin transplantul de piele. Dac grefa este acceptat,
organismele respective aparin aceleiai linii inbred. Termenii izoantigen i inbred nu au
coresponden pentru populaia uman;
3)aloantigenele (alos, lb. greac = altul) includ molecule care, dup injectare declaneaz rspunsul
imun la organisme ale aceleiai specii, dar diferite genetic, de organismul donor. Aloantigenele sunt
inegal rspndite la indivizii unei specii i induc rspunsul imun la organismele care nu posed
antigenul respectiv. Aloantigenele se evideniaz dup imunizarea unui organism, cu o suspensie
celular provenit de la organisme ale aceleiai specii, dar aparinnd unui alotip diferit;
4)heteroantigenele (xenoantigene, xenos, lb.greac = strin) includ molecule care se gsesc n/pe
celulele tuturor indivizilor unei specii i care se comport ca antigene fa de organismele altei specii.
Heteroantigenele se evideniaz prin sinteza anticorpilor fa de antigenele celulelor provenite de la un
organism al unei specii diferite.
Celulele unei specii diferite aduc n organismul receptor nu numai heteroantigene, ci i aloantigene i
chiar autoantigene. De aceea, injectarea unui heteroantigen este una dintre cele mai utilizate metode
pentru a induce sinteza autoanticorpilor.
Antigenele de organ sunt molecule specifice care confer particularitile biochimice i funcionale ale
celulelor unui organ. De exemplu, proteinele hepatice sau ale glandei mamare difer de proteinele
esutului renal al aceluiai organism.

17
Antigene artificiale

La origine, antigenele artificiale sunt antigene naturale, modificate chimic prin cuplarea, cel mai
adesea covalent, cu una sau mai multe molecule mici, care le confer o nou individualitate antigenic
i o nou specificitate de combinare cu anticorpii, n raport cu molecula de origine.
Antigenele artificiale s-au obinut, n principal, pornind de la moleculele proteice. Prin legarea
moleculelor proteice cu diferite haptene s-au obinut trei tipuri de antigene artificiale:
a)conjugate hapten-protein, prin reacia de diazotare, iodurare i respectiv substituie nucleofil;
b)conjugate protein-protein, prin intermediul unor ageni bifuncionali de legare (diizocianaii i
carbodiimidele);
c)proteine legate de suporturi insolubile, prin reacia de diazotare sau prin intermediul
carbodiimidelor.
a)Conjugatele hapten-protein au fost utilizate de Landsteiner, n studiile cu privire la mecanismele
rspunsului imun. In conjugate, haptenele ndeplinesc rolul de epitopi (gds), iar moleculele proteice au
rolul de purttor. Rspunsul imun nu este orientat strict fa de epitopii haptenici, ci i fa de
determinani antigenici ai gruprii purttor.
Cuplarea hapten-purttor necesit existena unei grupri reactive a haptenei, care s se lege covalent
cu gruprile funcionale ale purttorului, cu condiia pstrrii integritii funcionale a celor doi
reactani. Haptenele se pot cupla cu purttori foarte diveri, dar proteinele naturale (albumina,
globulinele) furnizeaz conjugate foarte imunogene.
Landsteiner a cuplat amino-benzen-sulfonatul cu molecule proteice, prin reacia de diazotare i a
obinut azoproteine:

Dup cuplarea haptenei cu Tir, His sau Lys din structura unei proteine, rezult un antigen artificial
care induce formarea a dou populaii de anticorpi cu specificiti diferite, dup cum reacioneaz cu
haptena, sau cu molecula purttor.
Conjugatele haptenei amino-benzen-sulfonat cu proteinele au permis studiul influenei conformaiei
spaiale a haptenei, asupra specificitii antigenice. Gruparea sulfonat a fost legat n poziia orto, meta
sau para a haptenei aminobenzen. Antiserurile obinute au specificitate fa de fiecare izomer. Izomerul
meta al aminobenzen-sulfonatului, cuplat cu proteina, pstreaz capacitatea de a precipita cu anticorpii
specifici fa de proteina nativ, n timp ce conjugatele cu izomerii orto- i para- dau reacie foarte
slab de precipitare. Concluzia este c izomerii de poziie induc modificri sterice (conformaionale) ale
haptenei.

18
Conjugatele hapten-protein se pot obine prin reacia de iodurare. Proteinele puternic iodurate i
modific specificitatea antigenic. Ele induc sinteza anticorpilor care dau reacii ncruciate de
precipitare cu proteinele iodurate heterologe. Semnificaia este c prin iodurare, proteinele i pierd
specificitatea antigenic. Toate proteinele iodurate induc sinteza anticorpilor fa de o grupare iodurat,
n special fa de tirozina iodurat, indiferent de specificitatea gruprii purttor.
O alt reacie de obinere a conjugatului hapten-protein este cea de substituie nucleofil. Cele mai
folosite haptene sunt 2,4-dinitrofenolul(DNP) i 2,4,6-trinitrofenolul(TNP).
Mecanismul molecular al cuplrii este urmtorul: un atom de H din gruparea OH - , NH2+ sau S-SH a
proteinei, este nlocuit de gruparea haptenic prin eliminarea apei. Proteina pierde electroni, iar nucleul
benzenic i accept. Gruprile donoare de electroni sunt OH- , NH2+, S-SH. Gruprile DNP i TNP sunt
cuplate cu proteina purttor sub forma 2,4-dinitrobenzen-sulfonatului de Na, a 2,4,6-trinitrobenzen-
sulfonatului de Na sau sub forma derivailor halogenai.
Reacia dintre o protein i 2,4-dinitrobenzen-sulfonatul de sodiu ilustreaz mecanismul atacului
nucleofilic, reacie n care proteina cedeaz electroni, iar nucleul benzenic i accept.

b) Conjugatele protein-protein se obin prin intermediul agenilor bifuncionali de legare:


diizocianaii i carbodiimidele. Deoarece gruprile ciano au reactivitate diferit, reacia de cuplare se
realizeaz n trepte. De exemplu, gruparea din poziia 4 a toluilen-diizocianatului este mai reactiv dect
gruparea ciano din poziia 2. Aceasta permite ca una dintre proteine s se cupleze n poziia 4, iar
ulterior, ntr-o nou etap a reaciei, cea de a II-a protein se va cupla la gruparea ciano din poziia 2:

19
Carbodiimidele, utilizate ca ageni bifuncionali pentru cuplarea proteinelor, sunt considerate
anhidride simetrice ale ureii:

Carbodiimidele pot fi substituite simetric sau asimetric cu molecule proteice:


R1N = C = NR1 sau R1N = C = NR2.

Agenii bifuncionali de cuplare permit obinerea conjugatelor proteice (conjugate anticorpi-feritin,


insulin-albumin), dar se folosesc i ca mediatori ai legrii diferitelor molecule proteice pe suprafaa
eritrocitelor.
Marcajul cu feritin este deosebit de important din punct de vedere practic, deoarece se folosete
pentru evidenierea electrono-optic, la nivelul membranei, a diferitelor molecule proteice.
c)Conjugatele protein-suport insolubil se obin prin cuplarea proteinelor cu un suport insolubil, prin
reacia de diazotare, prin intermediul carbodiimidelor sau al BrCN. Ca suporturi insolubile se folosesc
derivai celulozici: sephadex, sepharoza, agaroza etc. Legarea proteinei de suport, prin reacia de
diazotare, se face prin intermediul tirozinei, lizinei, histidinei, triptofanului sau argininei.
Conjugatele anticorpi-suport insolubil se numesc imunosorbeni i sunt folosii cu o eficien
deosebit pentru purificarea proteinelor dintr-un amestec, datorit specificitii lor de combinare cu
anticorpii corespunztori, fixai ntr-o coloan de material inert (fig.7). Antigenul complementar
specificitii de legare a anticorpului fixat n coloan, se leag necovalent de imunosorbent, dup care
poate fi eluat cu un agent chimic. Metoda se numete cromatografie de afinitate i, n general, se
bazeaz pe afinitatea de legare dintre o macromolecul (M) i un ligand fiziologic (L). Ligandul
acioneaz ca o momeal i fixeaz macromolecula dintr-un amestec. Celelalte molecule ale
amestecului au afinitate mic pentru ligand.
Anticorpii pot fi imobilizai pe un suport insolubil, prin tratamentul cu un agent de legare ncruciat
(glutaraldehid), dar multe situsuri reactive pot fi denaturate sau rmn ascunse.

Fig. 7. Principiul funcional al imunosorbenilor utilizai n cromatografia de afinitate. Coloana


conine bile de sefaroz, pe care sunt fixate moleculele de anticorp. Amestecul de antigene este trecut
prin coloana, unde va fi reinut numai antigenul care recunoate specific anticorpul fixat.

Cel mai bun suport de imobilizare este agaroza, un polizaharid obinut prin fracionarea agarului.
Agaroza este rezistent la aciunea degradativ a enzimelor bacteriene i a agenilor chimici i poate fi
regenerat. Este disponibil sub forma sferelor poroase hidratate, cu diametrul de 40-300 um i conine
2-8% agaroz n soluie apoas.

20
In coloana de imunosorbent se pot fixa nu numai anticorpii, ci i antigenele sau chiar celule intacte.
Imunosorbenii se folosesc n activitatea de cercetare i n clinic, pentru prepararea unor produse
biologice i a medicamentelor.

Antigene sintetice

Antigenele sintetice sunt polimeri de aminoacizi, cu secven cunoscut, obinui in vitro.


Proprietile imunogenice ale homopolimerilor (poli-Lys, poli-Glu, poli-Pro) i ale heteropolimerilor au
fost studiate de M. Sela. Studiul imunogenitii heteropolimerilor are avantajul c ofer posibilitatea
studiului influenei compoziiei chimice, a greutii i a conformaiei moleculare, uurnd studiul
imunochimic al gruprilor determinante de specificitate antigenic.
Catenele polipeptidice sintetice pot fi lineare sau ramificate. Cele ramificate rezult prin ataarea
polimerilor lineari, la o caten polifuncional. Ramificarea se obine mai uor cu aminoacizi aromatici.
Homopolimerii nu sunt imunogeni, cu excepia poli-L-Pro, poli-L-Glu, poli-L-Arg, poli-L-Lys.
Copolimerii formai din doi aminoacizi nu sunt totdeauna imunogeni, dar cei rezultai prin
polimerizarea a trei aminoacizi diferii sunt totdeauna imunogeni. Cu ct compoziia lor este mai
heterogen, imunogenitatea este mai accentuat. Prezena aminoacizilor aromatici confer o anumit
rigiditate a epitopilor i implicit, o imunogenitate superioar.
Pentru a fi imunogeni, copolimerii trebuie s fie catabolizai de aparatul enzimatic al celulelor care
prelucreaz i prezint antigenul. Polipeptidele formate din D-aminoacizi sunt slab imunogene, datorit
incapacitii organismului de a cataboliza polimerul. Polipeptidele sintetice s-au dovedit a fi foarte utile
n studiile de imunochimie, cu privire la:
- determinarea mrimii gruprii determinante de specificitate i indirect, a situsului de combinare a
anticorpilor specifici;
- rolul dimensiunilor moleculei asupra proprietilor de imunogenitate;
- rolul configuraiei spaiale a moleculei n conferirea proprietii de imunogenitate;
- identificarea epitopilor secveniali i conformaionali.

Antigene endogene

Antigenele endogene sunt componente celulare i tisulare proprii (self), fa de care, n condiii
normale, sistemul imunitar nu manifest reactivitate, deoarece sunt separate prin bariere impermeabile
pentru recunoaterea imun. Totui, unele componente tisulare, n anumite condiii, pot s stimuleze
reactivitatea imunitar. Se disting dou categorii de antigene endogene: 1)antigene sechestrate
(mascate) i 2)antigene alterate.
Antigenele sechestrate sunt substane cu localizare intracelular i de aceea nu sunt accesibile
sistemului imunitar pentru a fi recunoscute n cursul dezvoltrii ontogenetice i de aceea nu induc starea
de toleran. Sub aciunea unor factori (fizici, chimici, biologici), inductori ai unor procese de liz
celular (ca de exemplu, virusurile hepatitice), moleculele cu localizare intracelular se pot elibera i
sunt recunoscute ca nonself de sistemul imunitar. De exemplu, anticorpii anti-mitocondriali care
caracterizeaz ciroza biliar primitiv, se sintetizeaz dup liza unor celule i eliberarea acestor
organite.
Alteori, unele componente tisulare sunt separate de sistemul imunitar, prin bariere anatomice:
- proteinele cristalinului, delimitate de cristaloid, se elibereaz n cursul interveniilor chirurgicale,
dup traumatisme care sparg capsula sau dup afeciuni care permeabilizeaz cristaloida. Ele sunt
recunoscute ca molecule nonself i stimuleaz rspunsul imun anti-cristalin, ce poate implica irisul,
procesele ciliare i coroida;

21
- proteinele spermatice, n strile de spermostaz, induc sinteza local a autoanticorpilor n
structurile epididimului. Anticorpii recunosc specific un antigen al spermatozoizilor i rezultatul
este imobilizarea sau chiar aglutinarea, cu consecina sa, sterilitatea imunitar;
- cazeina din lapte poate stimula reactivitatea autoimunitar;
- mielina produs de oligodendrocitele SNC este greu accesibil recunoaterii imunitare, datorit
barierei hematoencefalice.
Antigenele alterate sunt molecule normale ale suprafeei celulare, legate de membran, care, din
diferite cauze (uzur fiziologic sau sub aciunea diferiilor factori fizici, chimici, biologici) i
modific structura chimic i sunt recunoscute ca molecule nonself. De exemplu, unele medicamente,
dup legarea cu diferite molecule din plasm sau de pe suprafaa eritrocitelor, le modific conformaia
nativ i acestea sunt recunoscute ca nonself. Virusurile induc sinteza n celula infectat, a antigenelor
proprii, dar adeseori moleculele specific virale determin modificarea unor molecule self, care sunt
recunoscute ca molecule strine i iniiaz conflictul autoimun*.
*
In condiii normale, antigenele sechestrate i alterate sunt neutralizate i eliminate, fr consecine
patologice. In 1900, Ehrlich a formulat conceptul horror autotoxicus, care semnific preponderena
aciunii mecanismelor homeostatice. In condiiile unei reactiviti imunitare crescute, activarea
rspunsului imun fa de aceste componente chimice are drept consecine, declanarea maladiilor
autoimune, considerate ca fiind expresia patologic a funciei imunitare.

Antigene heterofile

Antigenele heterofile sunt substane neidentice, dar nrudite chimic, prezente la numeroase specii de
organisme: om, animale, plante, microorganisme. Particularitatea dominant const n faptul c ele
induc sinteza anticorpilor care dau reacii ncruciate: anticorpii specifici fa de un antigen al grupului
heterofil, reacioneaz (ntr-o reacie de precipitare sau de aglutinare) cu oricare dintre antigenele
grupului. Prototipul antigenelor heterofile este antigenul de tip Forssman, descoperit n 1911 n
esuturile de cobai. J. Forssman a descoperit c serul imun obinut prin imunizarea iepurelui cu
omogenat tisular de cobai, aglutineaz eritrocitele de berbec. Este o reacie ncruciat, pe care autorul a
denumit-o reacie heterolog. Termenul heterolog s-a pstrat pentru reaciile ncruciate
previzibile, pe care le manifest diferite antigene nrudite (de exemplu, albumina seric de om i
de primate), iar denumirea heterofil s-a atribuit reaciilor ncruciate pe care le produc
antigene nenrudite cu antiserul obinut fa de unul dintre antigenele grupului.
Regnul animal poate fi mprit n specii Forssman pozitive (cobai, hamster, oarece, oaie, capr,
cal, pisic, cine, pui de gin etc.) i specii Forssman negative (om, iepure, obolan, maimue,
bou, gsc). Nici unele nici altele nu au vreun grad de nrudire genetic.
Absena antigenului Forssman pe suprafaa celulelor tisulare la iepure, este foarte important din
punct de vedere practic. Serul imun anti-antigen Forssman se obine prin imunizarea iepurelui cu o
suspensie de hematii de berbec. In contact cu hematiile de berbec, serul imun obinut pe iepure, produce
aglutinarea lor, iar n prezena complementului se produce liza. Anticorpii specifici fa de antigenele
hematiei de berbec dau reacie ncruciat cu antigenele tisulare ale grupului Forssman, dar i cu
antigene de origine bacterian. Antigene de tip Forssman s-au identificat ulterior, prin reacii serologice,
n celulele unor bacterii patogene (Str. pneumoniae, Shigella, Salmonella) i chiar n celulele
microbiotei din tractul digestiv, ceea ce explic prezena anticorpilor naturali anti-hematie de berbec, n
serul uman.
Reaciile imune ncruciate pe care antigenele de tip Forssman le dau cu serul imun obinut fa de
unul dintre antigenele grupului se explic prin asemnarea structurii chimice a acestor molecule. Cele
mai multe antigene heterofile sunt glicoproteine sau glicolipide, n care gruprile glucidice au rolul de
haptene. Componentele glucidice ale antigenelor heterofile sunt foarte asemntoare din punct de
22
vedere chimic, chiar dac aparin unor organisme cu poziie sistematic foarte diferit. Antigenul
Forssman este un glico-sfingolipid*, la care determinantul antigenic este format din dou resturi de N-
acetil-galactozamin.
*
Sfingolipidele sunt lipide n a cror molecul, locul glicerolului este luat de un aminoalcool cu 18
atomi de C sfingozina (sfingol). Acidul gras este legat de gruparea NH 2 a sfingozinei. Sfingolipidele
sunt derivai ai ceramidei (amida sfingozinei) cu un acid gras.

Sfingozina

Polizaharidele antigenelor de tip Forssman, n stare purificat, nu sunt imunogene, sunt rezistente la
fierbere i chiar la autoclavare.
Cele mai importante sisteme heterofile sunt cele cu semnificaie biologic sau importan medical:
sistemul Forssman, sistemul Paul-Bunnell(P-B)* i sistemul Hanganutziu-Deicher(H-D).

Anticorpii caracteristici mononucleozei infecioase (Paul i Bunnell, 1932) apar la 90% dintre
pacienii infectai cu virusul Epstein-Barr i sunt IgM care se evideniaz ntr-o reacie de aglutinare cu
eritrocite de ovine sau bovine. Anticorpii serici recunosc dou antigene distincte: un antigen al
eritrocitelor bovine (B) i un al II-lea antigen, comun al eritrocitelor bovine i ovine (BS). Majoritatea
pacienilor cu mononucleoz infecioas sintetizeaz anticorpi anti-B i anti-BS, dar o mic proporie
conin numai anticorpi anti-B. Anticorpii P-B se sintetizeaz fa de un antigen, ce pare a fi o
glicoprotein codificat de virus.
Anticorpii H-D, descrii de Hanganutziu (1924) i Deicher (1926) sunt declanatori ai maladiei
serului, la pacienii care au primit injecii de ser heterolog. Sinteza lor este indus de antigenul H-D,
care se gsete n esuturile mamiferelor, dar lipsete din esuturile normale umane, ns reapare n unele
esuturi umane patologice (limfoame i mieloame). Din punct de vedere chimic, antigenul H-D este acid
N-glicolil-neuraminic. Aceti Ac reacioneaz cu hematiile de cal, berbec, bovine.

Alte antigene heterofile. Antigenele grupului Rh se gsesc pe eritrocitele maimuei Macaccus rhesus
i pe eritrocitele a circa 85% dintre indivizii umani.

Antigenul H al eritrocitelor umane de grup 0 este foarte asemntor cu un polizaharid al celulelor de


Yersinia pestis (agentul ciumei), iar antigenul eritrocitar uman de grup A este asemntor cu un antigen
al virusului variolei (smallpox). Dezavantajul asemnrii chimice dintre antigenele unor ageni patogeni
i antigenele de grup sanguin este evident: indivizii umani de grup sanguin 0 i A reacioneaz mai slab
la contactul cu antigenele asemntoare, iar procesul infecios se instaleaz mai rapid.
O importan practic deosebit au antigenele heterofile de Rickettsia i cele de Treponema pallidum,
Proteus. Fracia major a anticorpilor specifici fa de Rickettsia aglutineaz o suspensie de celule
bacteriene de Proteus Ox19. Fracia major a anticorpilor anti-T. pallidum se combin cu cardiolipina,
ceea ce permite ca n reacia de fixare a complementului pentru determinarea infeciei cu T. pallidum s
se utilizeze antigenul cardiolipinic, mult mai uor de obinut dect Ag de T. pallidum.

23
Factorii care condiioneaz imunogenitatea

Condiiile imunogenitii au fost deduse prin studii experimentale, utiliznd antigene artificiale i
sintetice.
1. Caracterul strin al moleculei este condiia major a imunogenitii. O molecul nonself este cu att
mai imunogen, cu ct este mai diferit de moleculele organismului receptor. In esen, caracterul
nonself al unei molecule nu este strict dependent de raporturile taxonomice ale organismului donor cu
cel receptor de antigen, ci este consecina deosebirilor de structur molecular.
Cele mai multe proteine ale unei specii sunt nonself pentru alte specii, dar uneori, proteinele
omologe ale unor specii sunt lipsite reciproc de imunogenitate.
2. Mrimea moleculei influeneaz imunogenitatea moleculelor nonself. Pentru a fi imunogen, o
molecul trebuie s aib dimensiuni care s depeasc un prag limit. Moleculele cu o bun
imunogenitate sunt mai mari de 10 kDa. Cu ct o molecul este mai mare, cu att numrul epitopilor si
este mai mare. Secvenele de aminoacizi cu rol de epitopi au ansa repetrii de mai multe ori ntr-o
molecul mai mare. Proteinele mari (ovalbumina 40 kDa, albumina seric - 70 kDa, hemocianina
6000 kDa) sunt foarte imunogene, iar cele cu molecul mic (insulina 5,7 kDa, histonele 6 kDa,
glucagonul 3,5 kDa) sunt puin imunogene. Glucagonul este cea mai mic molecul natural fa de
care s-au obinut anticorpi, iar cea mai mic molecul sintetic imunogen este un polipeptid de 1,4
kDa.
Pentru polizaharide, limitele minime pentru imunogenitate sunt mai mari. Dextranii sunt antigenici
dac au peste 50 kDa, cu variaii mari de rspuns imun de la o specie la alta (omul i oarecele rspund
bine, cobaiul foarte puin).
Moleculele mici neimunogene sau slab imunogene pot dobndi o imunogenitate optim, dup
adsorbia pe particule inerte de colodiu, caolin sau de crbune. Acestea au rol de purttori i asigur
creterea taliei moleculare.
3. Complexitatea molecular. Dimensiunile mari ale unei molecule nonself nu sunt totdeauna
suficiente pentru a-i conferi imunogenitate. De exemplu, moleculele de polimeri sintetici (poli-
acrilamida, nylonul) sunt foarte mari, fiind formate dintr-un numr mare de monomeri repetitivi, dar nu
sunt imunogene pentru c nu au complexitatea molecular minim necesar.
Moleculele naturale, n special proteinele au un grad nalt de complexitate, datorit diversitii
monomerilor componeni. Fiecare tip de molecul proteic are o configuraie tridimensional unic,
determinat de secvena specific de aminoacizi.
Proteinele globulare au cea mai mare complexitate antigenic, derivat din configuraia lor teriar.
Ele posed epitopi exprimai pe suprafaa moleculei native, accesibili fenomenului de recunoatere de
ctre celulele sistemului imunitar i epitopi interni, care pot stimula rspunsul imun, dup clivarea
enzimatic a moleculei de ctre celulele specializate pentru prelucrarea antigenelor. Complexitatea unei
molecule nu depinde numai de diversitatea monomerilor, ci i de secvena lor i de efectul secvenei
asupra structurii secundare, teriare i eventual quaternare a moleculei. Conformaia spaial a
moleculei este un factor decisiv pentru imunogenez. Studiile privind imunogenitatea antigenelor
sintetice, au evideniat c cel mai adesea, anticorpii se sintetizeaz fa de o anumit secven de
aminoacizi, cu rol de epitop. Dar, anticorpii sunt specifici fa de conformaia spaial a unui
determinant antigenic. Concluzia a reieit din specificitatea distinct a anticorpilor fa de dou
polipeptide sintetice cu aceiai compoziie chimic, dar cu conformaii spaiale diferite. In primul caz,
determinantul antigenic este tripeptidul Tir-Ala-Glu, legat de un polimer sintetic, cu rol de purttor. La
iepure, se sintetizeaz anticorpi specifici fa de tripeptidul Tir-Ala-Glu.

24
4. Accesibilitatea determinanilor antigenici. Pentru ca un epitop s fie imunogen, trebuie s fie expus
la suprafaa moleculei, pentru a fi accesibil mecanismelor de recunoatere imunitar. De exemplu, un
polimer de L-Lys, cu rol de purttor pentru tripeptidul Tir-Ala-Glu este imunogen. Dup mascarea
epitopilor tripeptidici cu catene de poli-Ala, molecula i pierde imunogenitatea (fig. 8).

Fig. 8. Accesibilitatea determinanilor antigenici este esenial pentru imunogenitate.


Copolimerul multicatenar format din acidul L-glutamic (G) i tirozin (T) legat prin intermediul poli L-
alaninei de purttorul polilizin este imunogen. Acelai copolimer legat direct de purttorul polilizin,
dar mascat de polialanina, este neimunogen.

In al II-lea caz, prin polimerizarea tripeptidului se obine o molecul cu structura periodic a


secvenei Tir-Ala-Glu, care dobndete conformaie -helical. Dup imunizarea iepurelui, se
sintetizeaz anticorpi care precipit moleculele cu structur spaial -helical, dar nu precipit
tripeptidul simplu.
5. Starea fizic a antigenului. Imunogenitatea unei molecule este condiionat de o anumit rigiditate a
epitopilor si. Lipsa rigiditii ar explica imunogenitatea redus a gelatinei, o protein denaturat,
derivat din hidroliza colagenului, foarte bogat n glicocol (21-35%).
Gelatina are o proporie foarte mic de aminoacizi aromatici (Tir, His), iar cisteina i triptofanul
lipsesc. Legarea L-Tir, n proporie de 2% mrete gradul de imunogenitate a gelatinei.
6. Solubilitatea. Condiia solubilitii unui antigen pentru a fi imunogen este sugerat de urmtarele
observaii:
- polimerii macromoleculari sintetici care nu sunt hidrolizai, sunt lipsii de imunogenitate;
- organismele cu echipamente enzimatice hidrolitice mai active (oarece) elaboreaz un rspuns
imun mai amplu fa de un antigen greu solubil (de exemplu, polizaharidul de pneumococ), n
raport cu organismele care hidrolizeaz mai greu (de exemplu, iepurele);
- antigenele corpusculare (celule, virioni) devin imunogene dup solubilizarea i eliberarea
componentelor imunogene n macrofag, unde are loc degradarea menajat a antigenelor.
Hidroliza enzimatic a antigenului nu este totdeauna o condiie prealabil obligatorie a
imunogenitii. Studiile cu antigene sintetice au artat c, n momentul recunoaterii de ctre celulele
sistemului imunitar, o parte a epitopilor sunt intaci, identici cu aceia ai moleculei native.
In concluzie, un antigen ideal trebuie s fie greu degradabil (pentru o persisten ct mai
lung n organism), s fie timodependent (sa stimuleze imunitaea mediata celular) i s aib un
numr ct mai mare de semnale imunogene (epitopi), conectate ntr-un ansamblu funcional,
denumit imunon.

Efectul de carrier (purttor)

25
Antigenele prezint o dualitate funcional evident, conferit de faptul c specificitatea rspunsului
imun este orientat predominant, dar nu exclusiv, fa de gruprile determinante de specificitate. La
rndul su, suportul macromolecular (purttorul) are proprietatea de imunogenitate, dar confer i un
grad de specificitate a rspunsului imun. Rezultatele experimentale cu conjugate hapten-protein
(dinitrofenol-albumin seric) au evideniat c n cazul n care suportul purttor este nonself, rspunsul
imun este mai intens. Antigenul artificial s-a obinut prin cuplarea DNP cu albumina de oarece.
Injectarea conjugatului la oarece induce un rspuns imun slab, cu un titru sczut al anticorpilor anti-
DNP (anti-hapten). Conjugatul DNP-albumin seric bovin, injectat la oarece, stimuleaz intens
rspunsul imun primar anti-hapten, ceea ce demonstreaz c gruparea purttor are rol modulator asupra
rspunsului imun.
Rolul gruprii puttor n reactivitatea imunitar a fost evideniat prin evaluarea titrului anticorpilor
dup stimularea secundar. Animalele stimulate repetat cu haptena A, cuplat cu purttorul B, produc un
rspuns imun secundar intens, cu anticorpi anti-hapten i anti-purttor. Ins, n rspunsul imun
secundar, dac stimularea s-a fcut cu haptena A, cuplat cu un purttor diferit (C) titrul anticorpilor
anti-hapten nu crete. Acest fenomen s-a denumit efect de carrier i reflect faptul c rspunsul imun
este influenat ntr-o msur important de gruparea purttor.
Un purttor eficient pentru stimularea rspunsului imun trebuie s fie imunogenic, adic s
stimuleze rspunsul celulelor T. Moleculele neimunogene nu au caliti de carrier pentru haptene.
Efectul de carrier denot c haptena i epitopii purttorului sunt recunoscui separat, de limfocitele B
i respectiv T. Cele dou subpopulaii de celule coopereaz pentru a induce sinteza anticorpilor cu
specificitate de hapten.

Imunitatea dobndit artificial activ. Vaccinuri

Imunitatea dobndit artificial activ este consecutiv administrrii vaccinurilor. Denumirea de


vaccin vine vine de la cuvntul latin vaca i semnific originea primului preparat pe care E. Jenner
(1798) l-a utilizat pentru controlul variolei.
Vaccinurile sunt produse biologice care conin antigene exogene care, introduse pe o cale
adecvat n organismul uman sau animal, stimuleaz reactivitatea imunitar, genernd o stare de
protecie temporar fa de agentul infecios din care au fost preparate.
Preparatul vaccinal trebuie s fie eficient, adic s induc un rspuns imun protector, a crui
memorie s se pstreze n timp i, pe de alt parte, s prezinte un grad nalt de siguran, adic s nu
determine efecte secundare defavorabile.
Administrarea unui vaccin se face pe baza unei strategii bine definit. Scopul vaccinrii poate fi
eradicarea, eliminarea sau limitarea unui proces infecios.
Eradicarea semnific dispariia agentului patogen, consecutiv aciunii de vaccinare.
Eliminarea corespunde dispariiei manifestrilor patologice, dei agentul patogen se pstreaz n
populaia uman sau animal.
Limitarea semnific posibilitatea controlului unei maladii infecioase pn la un nivel la care nu
mai reprezint o problem de sntate public.
In general, vaccinurile se administreaz nainte de a se produce infecia cu tulpina slbatic a
agentului patogen. Face excepie vaccinul rabic, care se administreaz dup ce s-a produs o presupus
infecie. Faptul este posibil, deoarece infecia rabic are o perioad lung de incubaie i permite ca
preparatul vaccinal s induc un rspuns imun eficient, care modific evoluia infeciei cu o tulpin de
virus "de strad".
Dup coninutul lor, vaccinurile pot fi monovalente, adic includ antigenele unei singure tulpini
bacteriene sau virale (de exemplu, vaccinul stafilococic), bi-, tri- sau polivalente, care conin antigene
provenind de la dou, trei sau mai multe specii de microorganisme sau tulpini virale (de exemplu,
vaccinul diftero-tetano-pertusis).
26
Dup proveniena agenilor patogeni utilizai la prepararea unui vaccin, se disting autovaccinuri i
stocvaccinuri. Autovaccinul este vaccinul preparat cu o tulpin a unui microorganism sau a unui virus,
izolat de la un bolnav i destinat a fi folosit numai pentru vaccinarea pacientului de la care s-a fcut
izolarea. Stocvaccinurile se obin din amestecul mai multor tulpini de ageni infecioi i sunt destinate
imunizrii ntregii populaii susceptibile.
Vaccinurile sunt de trei categorii:
l) Vaccinuri cu ageni infecioi atenuai;
2) Vaccinuri cu ageni inactivai (neinfecioi).
Ambele categorii sunt vaccinuri unitare.
3) Vaccinuri subunitare.

Vaccinuri de origine bacterian

Medicul viitorului va fi imunizator (Sir Almroth Wright, 1902).


Vaccinurile vii constau din suspensii de bacterii vii, dar cu virulen atenuat, astfel nct s nu
determine o infecie aparent, dar s rmn capabile s iniieze un proces infecios inaparent, cu efect
imunizant. Dup administrare, induc o imunitate solid, comparabil celei consecutive trecerii prin
boal, dar produc cel mult semne minime de mbolnvire. Indiferent de locul inoculrii, agentul
infecios din vaccinul viu nu rmne localizat, ci se rspndete n organism, ptrunznd i
multiplicndu-se n aceleai esuturi n care se localizeaz i n cazul infeciei naturale, dar infectnd un
numr mic de celule sensibile i multiplicndu-se lent, agentul infecios din vaccin nu declaneaz
manifestri clinice, ci numai o form atenuat a infeciei, nsoit de modificri umorale i de
reactivitate imunitar.
Pentru prepararea vaccinurilor vii se utilizeaz mutante bacteriene cu virulen atenuat, selecionate
prin cultivarea unor tulpini slbatice n condiii speciale: de exemplu, cultivarea la o temperatur
superioar celei optime n cazul bacilului crbunos Bacillus anthracis, sau prin aciunea unor
substane chimice i utilizarea unor medii de cultivare care ofer condiii nefavorabile. Vaccinul BCG
(Albert Calmette i Camille Guerin) s-a obinut prin cultivarea M. bovis pe mediu cu cartof fiert,
suplimentat cu glicerol i concentraie crescut de bil de bou. Dup 231 de pasaje succesive, de-a
lungul a 13 ani, tulpina i-a pierdut virulena pentru animale, dar i-a pstrat proprietile antigenice,
adic stimuleaz imunitatea protectoare fa de infecia cu tulpinile naturale virulente.
Vaccinurile omorte constau din suspensii bacteriene supuse aciunii temperaturilor ridicate (60o) sau
aciunii formolului ori fenolului i care conin una dintre aceste substane ca prezervant. Din aceast
categorie fac parte vaccinul tifo-paratific A i B (TAB), vaccinul pertusis (din Bordetella pertusis),
vaccinul stafilococic. Proprietile imunogene ale vaccinurilor bacteriene omorte se menin intacte.
Anatoxinele (toxoizii) sunt preparate biologice cu proprieti imunogene, derivate din toxine. Uneori,
toxinele se transform spontan n derivai lipsii de toxicitate, dar pstreaz proprietile de
imunogenitate i specificitate ale toxinei native. Mecanismul molecular al inactivrii toxinelor nu este
cunoscut. Inactivarea este un proces lent i progresiv, dependent de pH, temperatur, prezena ionilor
sau a proteinelor contaminante, de procesul nvechirii preparatului. Un factor major al inactivrii pare a
fi proteoliza parial a moleculelor de toxin sub aciunea proteazelor contaminante, dar i schimbarea
conformaiei moleculei, polimerizarea sau clivarea unui fragment molecular pot aciona n acelai sens.
Inactivarea toxinelor i transformarea lor n produse atoxice are loc n condiii dirijate, sub aciunea
formolului 4%o, la 37o i rezult anatoxine.
Anatoxinele bacteriene, ca i exotoxinele sunt foarte imunogene pentru om, cal, capr, iepure, cobai,
n special dup asocierea cu adjuvani (fosfat de Ca). Ele se pot administra ca vaccinuri pentru
imunizarea activ sau se folosesc pentru imunizarea animalelor n vederea obinerii serurilor imune
utilizabile n seroterapie.

27
Obinerea unor cantiti suficiente de toxin a fost parial rezolvat. Pentru toxinele tetanic i
difteric s-au clonat genele codificatoare n celule care cresc uor. Exotoxinele se sintetizeaz n
cantitate mare, sunt purificate i inactivate.
Vaccinuri subunitare. Virulena unor bacterii patogene este condiionat n primul rnd de
proprietile antifagocitare ale capsulei polizaharidice (PZ) hidrofile. Anticorpii specifici au proprieti
opsonizante i cresc mult capacitatea fagocitelor de a ingera aceti patogeni.Vaccinul pentru Str.
pneumoniae const din 23 polizaharide capsulare antigenic diferite (Pneumovax Merck). Vaccinurile
pentru H. influenzae, N. meningitidis sunt PZ capsulare obinute n culturi in vitro.
Polizaharidele activeaz limfocitele B i stimuleaz sinteza IgM, nu se produce maturarea de
afinitate a Ac, iar comutarea izotipului i memoria sunt slabe. Pentru stimularea celulelor Th, antigenele
PZ se conjug cu un purttor proteic.

Vaccinuri virale

Vaccinuri unitare. Vaccinurile cu virus atenuat se obin din tulpinile virale lipsite complet sau
aproape complet de patogenitate. Atenuarea este rezultatul unui proces complex de modificri genetice
care duc la pierderea virulenei agenilor infecioi, dar acetia i pstreaz capacitatea de a induce un
rspuns imun protector de durat la gazdele sensibile. Atenuarea este parte a evoluiei naturale a
agenilor infecioi, dar este utilizat pentru a crea vaccinuri infecioase. Fiind infecioase, ele se
multiplic n organismul vaccinat i produc o stimulare antigenic continu, ntr-un interval de timp.
Vaccinarea cu virusuri atenuate confer o imunitate de durat, dup administrarea unei singure doze.
Atenuarea virusurilor se obine pe mai multe ci.
l) Utilizarea pentru vaccinare, a unui virus nrudit atenuat n mod natural, de la o alt gazd. Cel
mai vechi vaccin viral (Jenner, l798), utilizat n controlul variolei, este virusul vaccinal, recoltat din
leziunile pustulare de pe ugerul vacii. Virusul vaccinal imunizeaz ncruciat cu virusul variolei
(smallpox) i este protector fa de infecia variolic.
Virusul rujeolei imunizeaz cinele fa de virusul bolii Carre. Anticorpii fa de virusul rujeolei
neutralizeaz virusul bolii Carre, dar nu i invers.
Calea de abordare a lui Jenner pentru obinerea preparatelor virale utilizabile ca vaccinuri umane
este folosit i astzi. Ea implic izolarea unor virusuri de la mamifere sau de la psri, nrudite
antigenic cu diferite virusuri umane. Pasajul lor n celulele diploide umane (CDU) in vitro, echivaleaz
cu procesul atenurii. Celulele diploide umane reprezint un substrat semipermisiv pentru virusurile
umane i mamaliene i adeseori, multiplicarea lor este lipsit de eficien.
Genele virusurilor mamaliene i aviare, care determin spectrul de gazd au o mare diversitate a
secvenelor de nucleotide, fa de genele corespunztoare ale virusurilor umane. Efortul de a realiza noi
vaccinuri, pe calea clasic a lui Jenner, trebuie s se sprijine pe tehnicile de genetic viral, biologie
molecular i imunologie.
2) Inocularea virusului patogen sau parial atenuat, pe o cale nenatural, adic alta dect cea prin
care virusul ptrunde n mod obinuit n organism. Metoda este folosit pentru vaccinarea animalelor
(de exemplu, virusul laringotraheitei psrilor, se administreaz prin instilare n ochi). Pentru om,
metoda nu se folosete, deoarece riscul infeciei este mare.
3) Pasajul virusului de origine uman ntr-un substrat nenatural, in vivo sau in vitro. Cele mai
importante vaccinuri pentru om i animale s-au obinut pe aceast cale. Virusul se cultiv n mod
repetat, prin inoculare la organisme sntoase sau n culturi primare de celule: virusul febrei galbene s-a
inoculat la oarece i apoi n embrionul de gin; poliovirusul s-a inoculat n celulele de rinichi de
maimu; virusul rujeolei n fibroblaste de embrion de gin. Pasajul ntr-un substrat celular
nenatural, selecioneaz mutante printr-un cumul de evenimente mutaionale ntmpltoare. In
practica vaccinrii, se utilizeaz cele cu proprieti adecvate de atenuare i imunogenitate. Mutantele
28
care dup administrare rmn localizate la poarta de intrare, sunt cele mai utile. Unul dintre marile
succese ale acestei metode de atenuare este vaccinul polio. Prin pasaje succesive n culturile celulare de
rinichi de maimu, s-a selectat o linie lipsit de neurovirulen, dup inocularea intracerebral sau
intraspinal la maimu. Vaccinul rubeolic s-a obinut prin cultivarea virusului pe acelai substrat, iar
liniile folosite ca vaccin rujeolic i al febrei galbene s-au cultivat pe fibroblaste de embrion de gin.
O alt cale de producere a vaccinurilor virale atenuate, genetic stabile, implic obinerea
mutantelor de deleie. Acestea au o capacitate diminuat de multiplicare, ceea ce echivaleaz cu
atenuarea. Mutantele prin deleie trebuie s-i pstreze infeciozitatea i imunogenitatea i s fie stabile
genetic.
Vaccinurile vii sau atenuate administrate pe cale oral induc un rspuns seric i un rspuns imun
generalizat al mucoaselor, asigurnd o protecie superioar fa de reinfecie i persistena memoriei.
Vaccinarea cu un preparat viral atenuat echivaleaz cu o infecie uoar, asimptomatic.
Vaccinurile virale atenuate au avantajul important al stimulrii ambelor compartimente ale
rspunsului imun: celular i humoral, att sistemic ct i local. Acest fapt este deosebit de important
pentru infeciile virale n care imunitatea mediat celular are un rol esenial n eliminarea virusului, ct
i pentru infeciile mucoaselor, n care att imunitatea local ct i cea sistemic, sunt necesare pentru
rezistena optim.
Vaccinurile virale atenuate stimuleaz rspunsul imun fa de fiecare dintre antigenele protectoare
ale unui virus. Imunitatea indus de aceste vaccinuri este mai durabil, mai eficient i are un spectru
mai larg de reactivitate ncruciat, dect cea indus de virusurile inactivate. Reactivitatea ncruciat
este foarte important pentru virusurile care sufer variaie antigenic progresiv.
Virusurile atenuate din vaccinuri, pstrndu-i capacitatea de multiplicare n organismul vaccinat,
stimuleaz ndelung SI i adeseori necesit o singur inoculare. Ele se rspndesc n populaie i
imunizeaz chiar indivizi nevaccinai.
Vaccinurile atenuate se produc cu un pre de cost mai sczut i se administreaz mai uor. Spre
deosebire de alte vaccinuri atenuate, vaccinul polio Sabin necesit reimunizri, pentru c cele 3 tulpini
interfer una cu alta n ciclul de multiplicare n celulele intestinale. Dup prima imunizare se va
multiplica predominant una dintre tulpini i va stimula imunitatea specific. Dup a II-a imunizare,
imunitatea generat de prima inoculare va limita tulpina care a dominat anterior i va favoriza
multiplicarea uneia din celelalte dou tulpini. A III-a inoculare asigur imunizarea fa de cea de a III-a
tulpin.
Dezavantajele vaccinurilor virale atenuate sunt legate de riscul ridicat al contaminrii cu ageni
infecioi supraadugai. De exemplu, loturile iniiale de vaccin polio, au fost contaminate cu SV 4o,
din celulele de rinichi de maimu, dar nu s-a constatat creterea incidenei tumorilor la copiii vaccinai.
Vaccinul atenuat al virusului febrei galbene, multiplicat n fibroblastele de embrion de gin, a fost
contaminat iniial cu virusul leucozei aviare.
Unele virusuri atenuate (rujeolic, rubeolic, al febrei galbene) pstreaz un nivel sczut de virulen
rezidual, care determin infecii la copiii cu imunodeficiene.
O problem important, legat de infeciozitatea vaccinurilor atenuate, este aceea a restaurrii unui
grad variabil de virulen dup vaccinare, care determin infecii cu manifestri clinice la copiii
imunodeficieni. Procesul infecios nu este consecina alterrii genetice a virusului din vaccin. Din
aceast cauz, vaccinul nu se administreaz gravidelor.
Vaccinurile atenuate ridic problema instabilitii genetice. Virusul rujeolic atenuat este labil, n
special la variaiile termice i de aceea necesit un regim termic constant (+4o), pe toat durata
depozitrii.
Un alt dezavantaj const n faptul c virusul atenuat poate s produc o infecie persistent.
De asemenea, administrarea vaccinului atenuat poate s interfere cu virusul de tip slbatic care
infecteaz natural i s domine pn la anulare eficiena vaccinrii. De exemplu, virusul polio
atenuat, se administreaz pe cale oral, dar poate s interfere cu o larg varietate de enterovirusuri.
29
Vaccinurile inactivate conin virioni care, dup tratamentul cu agentul chimic inactivant nu pot s
iniieze ciclul de multiplicare n substratul permisiv.
Preparatul viral brut se obine prin cultivarea virusului ntr-un substrat permisiv: n oul embrionat
de gin (virusul influenza), n culturi celulare de rinichi de maimu (virusul polio), sau n fibroblastele
embrionare umane i de embrion de gin (polio, rujeolic, rabic). Preparatul brut se inactiveaz cu
formol, acetil-etilenimina sau cu -propiolactona.
H2C CH2

O C O
-propiolactona

Preparatele virale inactivate, utilizabile ca vaccin au avantajul riscului minim al infeciei. Rareori,
preparatele inactivate conin virus infecios rezidual, care a rezistat tratamentului de inactivare, sau care
provine din contaminarea cu un alt virus.
Vaccinurile virale inactivate au cteva dezavantaje. Uneori, tratamentul cu un agent chimic
anuleaz imunogenitatea unor proteine virale, astfel nct rspunsul imun fa de virusul inactivat nu
este protector. De exemplu, inactivarea cu formol a virusului rujeolic anuleaz imunogenitatea proteinei
de fuziune (F), iar vaccinul i pierde proprietatea protectoare.
Vaccinurile inactivate nu stimuleaz imunitatea mediat celular (mediat de limfocitele Tc), care au
rol decisiv n eliminarea celulelor infectate cu virus i n rezistena la infeciile cu o gam larg de
virusuri.
Preul de cost al vaccinurilor inactivate este mai mare.
Preparatele virale inactivate, folosite ca vaccinuri, se obin din virusul rabic cultivat n CDU i n
embrionul de ra, din virusul oreionului i din virusul influenza, cultivate n embrionul de gin, din
virusul polio, cultivat n celulele de rinichi de maimu. Toate sunt inactivate cu -propiolacton sau cu
formol.
Preparatul inactivat al virusului hepatitei B este o realizare recent, dar este foarte costisitor pentru
c virusul nu se cultiv n sisteme celulare in vitro, iar tehnicile de purificare a virusului din serul
pacienilor infectai cronic sunt foarte laborioase.
Unele virusuri, rujeolic, oreionului, rubeolei, variolei polio sunt stabile din punct de vedere antigenic
i sunt adecvate preparrii i administrrii vaccinului. Nu totdeauna virusurile stabile antigenic sunt
adecvate pentru vaccinare cu succes, deoarece au numeroase modaliti de evaziune a RI.
Variaia antigenic este obstacolul major n calea obinerii vaccinului pentru numeroi ageni
infecioi. Vaccinul ar trebui s conin toate grupele antigenice majore, iar doza prea mare de preparat
prezint riscul inducerii efectelor adverse. Vaccinul Papiloma liceniat recent conine 3 genotipuri
considerate ca avnd potenial oncogen, dar dificultile de cultivare au eliminat posibilitatea adugrii
celorlalte genotipuri n preparatul vaccinal.

Vaccinuri subunitare

Iniial, vaccinurile s-au obinut din preparatele brute de virus, dup multiplicarea lor ntr-un esut
(in vivo) sau n culturi celulare. Pe msur ce a fost posibil obinerea unor titruri nalte de virus, n
scopul diminurii toxicitii vaccinului, s-a trecut la purificarea virusului i a unor componente virale.
Vaccinurile subunitare conin proteine virale n care se gsesc epitopii antigenici majori i care se
pot substitui virionilor n practica vaccinrii. De exemplu, pentru virusul influenza, vaccinul subunitar
conine antigenele de suprafa HA i NA. Preparatul este mai puin toxic dect virusul integral

30
inactivat, dar este mai puin eficient n stimularea rspunsului imun. Proteinele F i G ale VRS (virusul
respirator sinciial) s-au purificat din virusul cultivat in vitro.
Celulele mamaliene reprezint un sistem optim pentru producerea proteinelor virale, utilizabile ca
vaccinuri subunitare. Celulele n cultur se infecteaz cu virus i din lizatele celulare se purific
antigene proteice. In lizate se gsete o cantitate mare de proteine virale n exces, nencorporate n
virioni.
Obinerea vaccinurilor subunitare proteinice virale, n culturile de celule animale ridic probleme
dificile de purificare a proteinelor virale, din amestecul cu proteinele celulare. Dac se folosesc linii
celulare continue, trebuie ndeprtat ADN celular, potenial oncogen.

Tehnici moderne de obinere a vaccinurilor subunitare

Dezvoltarea biologiei moleculare i cunoaterea mecanismelor RI, a stimulat preocuprile privind


obinerea unor vaccinuri noi. Genele codificatoare ale antigenelor au fost clonate prin tehnicile de
inginerie genic (tehnologia ADN recombinant).
Genele codificatoare ale antigenelor suprafeei virale, bacteriene i ale protozoarelor, se pot izola
dup fragmentarea genomului sub aciunea catalitic a enzimelor de restrictive, apoi se inser n celula
procariot (E. coli, B. subtilis), sau n celule eucariote (levuri, cellule de insecte, celule mamaliene).
Tehnicile de clonare genic se folosesc pentru sinteza proteinelor unor virusuri, care nu se
multiplic in vitro, n sistemele celulare uzuale. Fragmentarea genomului cu endonucleaze de restricie
este posibil numai pentru dezoxiribovirusuri. Genomul ARN trebuie mai nti transcris n ADNc i
ulterior poate fi utilizat n tehnicile de ADN recombinant. Genomul ARN de polaritate pozitiv este
adecvat scopului clonrii, dar nu a fost clonat ADNc al unei catene de ARN de polaritate negativ.
Gena pentru sinteza antigenului HBs a fost inserat ntr-o plasmid i clonat la levuri. Proteina
viral este neglicozilat, dar este imunogen pentru om i induce sinteza anticorpilor protectori fa
infecia natural. S-au clonat genele codificatoare ale glicoproteinelor de HSV, VEB, HIV, VRS (virusul
respirator sinciial). ADN viral este funcional chiar n celula procariot, dup transferul prin
intermediul unui vector (plasmid sau fag). Astfel s-au sintetizat antigene de poliovirus, antigenul HBs,
antigenul virusului hepatitei A, HA i NA ale virusului gripal.
Cu toate acestea, celulele de mamifere reprezint substratul optim pentru clonarea genelor i
pentru producerea proteinelor virale, deoarece plierea, transportul celular i prelucrarea proteinelor sunt
asemntoare celor ce au loc n celula infectat de virusul natural. Celulele produc cantiti mari de
antigen viral, codificate de gena clonat.
Pentru purificarea glicoproteinelor virale din celulele infectate n care a fost clonat gena, s-a
folosit tehnica cromatografiei de afinitate cu anticorpi monoclonali sau alte tehnici de separare
(cromatografia cu lectine, tehnici de separare fizic).
O variant a tehnicilor de ADN recombinant este aceea de obinere a vaccinurilor cu virusul
vaccinal hibrid. Genomul poxvirusurilor conine circa 200 de gene. Unele sunt eseniale pentru
multiplicarea viral, dar un interes deosebit prezint genele neeseniale pentru ciclul de multiplicare.
Cele neeseniale reprezint circa 30% din genom i sunt grupate la extremitile genomului ADN dublu
catenar linear. In plus, genomul este mpachetat lax n virion. Aceste particulariti au permis obinerea,
prin tehnicile de inginerie genic, a poxvirusurilor recombinate, infecioase, capabile s exprime genele
strine inserate n genomul lor. ADN viral este inserat n genomul virusului vaccinal in zola genelor
neesentiale prin recombinare la situsuri omologe. Virusul vaccinal hibrid se multiplic n celulele
permisive i genele inserate n genomul su codific antigenul HBs, antigenul rabic, antigenul HSV etc.
Vaccinurile virale hibride sunt stabile i stimuleaz ambele compartimente ale rspunsului imun.

Antigene peptidice sintetice. Producerea i utilizarea antigenelor sintetice s-a impus dup
demonstrarea bazelor moleculare ale imunogenitii i dup studiile privind proprietile imunogene ale
31
antigenelor artificiale. Pe de alt parte, s-a demonstrat ca macromoleculele proteice sau glicoproteice
din structura virusurilor i a microorganismelor infecioase, au un numr mare de determinani
antigenici, dar numai un numr limitat dintre acetia au semnificaie imunogen i un numr foarte mic
sunt inductori ai rspunsului imun protector. Utilizarea anticorpilor monoclonali a fcut posibil
identificarea epitopilor cu rol esenial n stimularea rspunsului imun.
Sinteza artificial a peptidelor a devenit posibil dup introducerea metodelor de secveniere a
ADN. Cunoaterea secvenei bazelor a permis dirijarea secvenei de aminoacizi a proteinelor cu
activitate biologic.
Vaccinurile sintetice conin secvene polipeptidice sintetizate pe cale chimic. Ele includ
determinani antigenici eseniali pentru inducerea unui rspuns imun protector fa de agenii
patogeni corespunztori.
Condiia esenial pentru obinerea vaccinurilor sintetice este cunoaterea structurii chimice a
determinanilor antigenici nativi ai virusului (sau ai microorganismelor patogene) i identificarea
regiunilor imunodominante ale molecule, prin tehnici de cristalografie cu raze x, cromatografia n
faza lichid etc.
Marea majoritate a peptidelor sintetice sunt secvene scurte, lineare de aminoacizi, care reproduc un
fragment din structura primar a moleculei proteice. Dezavantajul major este c secvenele sintetice nu
reproduc conformaia spaial a determinanilor antigenici naturali, n special a celor discontinui.
Acetia sunt alctuii din resturi de aminoacizi neadiaceni n structura primar a moleculei, dar pot fi
juxtapui n structura tridimensional a proteinei pliate. Astfel se explic slaba imunogenitate a
peptidelor sintetice. Dimensiunile mici ale peptidelor sintetice impun cuplarea lor cu o molecul
purttor, pentru amplificarea gradului de imunogenitate. S-a folosit hemocianina de Megathura (KHL),
cuplat prin intermediul glutaraldehidei sau a unei grupri tiol a unui rest de cistein, adugat la o
extremitate a secvenei sintetice.
S-au sintetizat peptide care reproduc secvene de aminoacizi ale unor polipeptide ale virusului
hepatitei B, cu diferite eficiene imunoprotectoare, precum i peptide care reproduc unele
secvene ale hemaglutininei virusului gripal.
Polipeptidele sintetice utilizate ca vaccinuri, au avantajul c nu conin alte componente care ar putea
produce efecte secundare i stimuleaz rspunsul imun strict specific fa de epitopii antigenici critici ai
agentului infecios. Sunt stabile indefinit i se produc la un pre de cost sczut. Au ns dezavantajul
major de a nu stimula rspunsul imun mediat celular.

Vaccinul ADN const dintr-o gen ADNc codificatoare a antigenului proteic, cu o secven
terminal poli-A, un promotor viral i o secven CpG bacterian, clonat ntr-o plasmid bacterian.
Plasmida necesit o origine a replicrii (ce permite multiplicarea n celula bacterian, E. coli); o gen
de rezisten la antibiotice (ampicilin), care permite selecia celulelor bacteriene purttoare de
plasmid pe mediul cu antibiotic; un promotor viral (din CMV sau SV40) pentru expresia optim n
celulele mamiferelor.
Plasmida este aceeai pentru toate vaccinurile ADN. Singura diferen const n gena care se inser
n vectorul plasmidial.
ADN este prelucrat in vitro pentru expresia optim n celulele eucariote. Metoda const n injectarea
direct a acidului nucleic (ARN sau ADN) codificator al proteinelor antigenice de interes clinic, n
muchiul scheletic, unde codific ndelung proteina. Celulele dendritice pot ncorpora ADN plasmidial.
Administrarea id este mai eficient dect cea im, deoarece n tegument CPA sunt mult mai
numeroase, iar celulele musculare nu expun epitopii antigenici pentru stimularea RI.
Injectarea preparatului nencorportat n liposomi are o rat mai nalt de nglobare a ADN i
expresia proteinei codificate. Astfel s-a nscut tehnologia vaccinrii cu ADN nud.

32
Cantitatea de Ag produs in vivo, dup inocularea ADN este foarte mic (ntre ng i pg), dar este
prezentat SI i stimuleaz IMH i IMC. Vaccinul ADN se aseamn, funcional, cu vaccinul atenuat,
pentru c stimuleaz IMH i IMC. ADN este eliberat n celul, transcris i celula secret Ag codificat.

Exemple- plasmida codificatoare a nucleoproteinei de virus gripal a indus rspunsul imun protector
fa de infecia letal cu virusul influenza. Tehnologia se extinde pentru obinerea vaccinului fa de ali
ageni patogeni: vaccinul pentru virusul West Nile la cal.
Vaccinurile ADN pot fi utile n infeciile virale la care stimularea IMC cu activarea limfocitelor Tc
este esenial pentru protecie, dar administrarea vaccinului atenuat este contraindicat (persoanelor
imunodeficitare sau imunosupresate). Vaccinarea cu ADN pare s fie sigur, prepararea este rapid i
vaccinul nu este influenat de factorul termic.

Vaccinuri obinute n plante. Plantele au fost folosite cu succes pentru a exprima gene strine i
produse genice specifice. Utilitatea plantelor recombinate pentru producerea antigenelor vaccinale s-a
demonstrat pentru tutun i tuberculii de cartof. In tuberculii de cartof s-au exprimat cteva Ag proteice:
subunitatea B a toxinei TL de E. coli, Ag HBs, de rotavirus.
Nivelul expresiei proteinei la planta recombinat este adeseori sczut, dar abordarea ofer o nou
strategie: vaccinarea este transferat funciei biologice de hrnire, care poate induce rspunsul imun al
mucoaselor sau rspunsul sistemic.
Administrare.Vaccinurile care conin virioni inactivai i anatoxinele se administreaz, n general, pe
cale parenteral (subcutan, intradermic, intramuscular), n mod obinuit n trei injecii separate la
intervale de 5, 7 i respectiv 21 de zile.
Vaccinurile bacteriene vii i cele virale atenuate se administreaz ntr-o singur doz, n general, pe
cale parenteral. Vaccinul vaccinul polio infecios atenuat, la nou nscui se administreaz pe cale oral.
Imunitatea consecutiv vaccinrii se instaleaz relativ lent, la circa 15-20 de zile de la ultima
injecie i are o durat variabil de la un vaccin la altul (n general, ntre 1 i 7 ani), scznd treptat
pn la dispariia complet. Vaccinarea primar, ca i infecia, confer organismului o stare special de
reactivitate imunitar - memoria imunitar - graie creia, orice contact ulterior cu agentul patogen
respectiv, realizat pe cale natural (infecie i boal) sau pe cale artificial (prin vaccinare) declaneaz
o redeteptare rapid a imunitii, care se manifest cu o intensitate mai mare dect aceea a
rspunsului imun postvaccinal. Cea de a II-a administrare a vaccinului declaneaz o reacie
anamnestic (de memorie), cu o cretere brusc i masiv a titrului anticorpilor.
Dei n general este solid, imunitatea postvaccinal este relativ, n sensul c unele persoane
vaccinate pot totui s fac boala ntr-o form mai uoar, mai ales consecutiv unei infecii masive cu
un agent patogen deosebit de virulent.
Factorii care condiioneaz intensitatea rspunsului imun

Titrul Ac sintetizai n cursul rspunsului imun este dependent de mai muli factori: de calea de
administrare a Ag, de doz, de ritmul i modul de administrare (cu sau fr adjuvant) i de factorii
genetici ai organismului imunizat.
Pentru producerea contactului rapid dintre Ag i celulele imunocompetente din ganglionii limfatici
este avantajoas calea parenteral de administrare: intradermic, subcutan, intraperitoneal,
intramuscular. Injectarea intravenoas favorizeaz contactul Ag cu limfocitele din splin, dar RI are o
intensitate mic, datorit eliminrii rapide a Ag. Alte ci de imunizare: ingestia oral a Ag, inhalarea,
aplicarea local pe tegument, injectarea direct n splin.
Cea mai eficient cale de administrare a Ag este cea intradermic, pentru c persistena sa este de
lung durat i la situsul injectrii se acumuleaz celule implicate n elaborarea RI. Exist chiar
posibilitatea sintezei locale, in situ, a Ac.

33
Doza de Ag influeneaz nivelul afinitii Ac. Dozele foarte mari i foarte mici pot induce starea de
toleran. Dozele mari de Ag, induc o maturare insuficient a afinitii Ac, deoarece stimuleaz clonele
de limfocite de nalt i de mic afinitate i produc chiar stimularea nespecific a limfocitelor. Dozele
mici de Ag stimuleaz numai clonele de limfocite care au receptori de mare afinitate pentru Ag.
Intensitatea RI este dependent de legea dozelor repetate i a intervalelor. Administrarea aceleiai
doze de Ag, n mod fracionat i la intervale adecvate, este mai eficient dect doza unic, deoarece
fiecare doz mic pregtete organismul, fcndu-l mai reactiv fa de doza urmtoare.
Uneori, a II-a injectare, foarte apropiat n timp de prima, poate fi inoperant, deoarece Ag este
eliminat de Ac sintetizai dup stimularea primar. Cel mai bun protocol pentru a obine un RIHS optim,
const n injectarea unei doze mici de Ag, urmat de doze progresiv crescnde.
O cantitate prea mare de Ag, produce inundarea organismului cu substane nonself i rspunsul
este paradoxal. In loc de stimularea RI se obine efectul invers, denumit paralizie imunologic.
Paralizia imunologic este o reacie de protecie a organismului fa de dozele mari de Ag.
Organismul i blocheaz toate mecanismele de RI. Fenomenul areactivitii imunitare poate surveni
att dup injectarea unei cantiti prea mari de Ag uor metabolizabil, ct i dup injectarea unei
cantiti moderate a unui Ag care se metabolizeaz greu. La fiecare specie de organisme, pentru fiecare
Ag, pare s existe un echilibru controlat genetic, ntre doza stimulatoare a RI i cea care produce
paralizia imunologic.
Antigenele bune sunt hidrolizate parial i stimuleaz declanarea RI, iar Ag slabe, fie sunt
degradate rapid, fie sunt rezistente la degradare i induc starea de paralizie imunitar. De aceea, doza
optim necesar inducerii unui RI optim este diferit de la un Ag la altul i se determin experimental
pentru fiecare caz. De asemenea, pentru fiecare Ag se stabilete numrul de fracii ale dozei, intervalul
i calea administrrii fraciilor, adjuvantul. Pentru Ag corpusculare, injectrile se fac, n general, la 7
zile, iar pentru cele macromoleculare, la 14-21 de zile.
Raportul dintre cantitatea de Ag intact i cel parial degradat, care se gsete n organism la un
moment dat dup administrare, este o reflectare direct a ratei cu care Ag este metabolizat.
Imunogenitatea unui Ag este influenat de modul de administrare. Asocierea cu adjuvanii mrete
gradul de imunogenitate a multor Ag, iar pentru altele, asocierea cu un adjuvant este o condiie
obligatorie a imunogenitii. Asocierea cu un adjuvant este foarte important pentru imunogenitatea
proteinelor uor degradabile i a celor slab imunogene (Ig, hormoni). Cele uor degradabile, n asociaie
cu un adjuvant persist i sunt eliberate treptat, stimulnd organismul o perioad mai lung de timp.
Injectarea intravenoas anuleaz efectul favorabil al adjuvantului.

Adjuvanii

Substanele sau amestecurile de substane, care n asociaie cu un antigen sau injectate simultan cu
acesta, intensific rspunsul imun specific fa de antigenul respectiv sunt denumite adjuvani
(adjuvere, lb. latin = a ajuta).
Punctul de plecare al introducerii adjuvanilor n practica imunologic a fost un fapt de observaie:
dup asocierea unui vaccin bacterian celular, cu un vaccin macromolecular (anatoxin), rspunsul imun
antitoxin este mult mai intens dect n cazul n care cele dou vaccinuri se administreaz separat. Dup
injectarea vaccinului celular anti-tifoparatific A i B, mpreun cu anatoxina tetanic (TAB), titrul
anticorpilor fa de anatoxina tetanic este de 20-30 de ori mai mare dect n cazul injectrii separate a
anatoxinei tetanice. Explicaia acestui fenomen a fost dat ulterior: la locul injectrii vaccinului, corpii
celulari bacterieni determin un proces inflamator, adic un aflux local de celule efectoare ale
rspunsului imun (limfocite, macrofage). Macrofagele capteaz i fixeaz anatoxina ntr-un stoc, de
unde este eliberat treptat i astfel se prelungete durata de stimulare a sistemului imunitar.
Cel mai cunoscut i folosit pentru studiul experimental al imunogenitii antigenelor este adjuvantul
Freund, o emulsie* de ap n ulei mineral de parafin. Antigenul se suspend n ap. Emulsia de ap n
34
ulei se realizeaz cu un emulgator care conine grupri lipofile i hidrofile (lanolina, arlacel A). Acesta
este adjuvantul Freund incomplet. Dup adugarea celulelor omorte de M. tuberculosis, rezult
adjuvantul Freund complet (fig. 9). Principiul imunostimulator al celulelor de M. tuberculosis este
reprezentat de glicolipidele i glicolipopeptidele (denumite ceruri) din structura peretelui celular.
Glicolipopeptidele sunt formate din acizi micolici esterificai cu un polizaharid (arabinogalactan) ce
conine arabinoz, galactoz, manoz, la care se leag un fragment peptidic ce conine D i L-alanin,
acid D-glutamic, acid diaminopimelic.
*
Emulsia este o suspensie de picturi mici ale unui lichid n alt lichid, cu care nu este miscibil.

Fig. 9. Reprezentarea schematic a interaciunii moleculelor componente ale adjuvantului Freund.

Adjuvantul Freund determin urmtoarele efecte: a)persistena antigenului n depozitul format la


situsul injectrii n organism prin ntrzierea degradrii sale i eliberarea treptat n circulaie;
b)picturile de emulsie vehiculeaz antigenul pe cale limfatic, n tot organismul, inclusiv spre
ganglionii limfatici, unde se va declana rspunsul imun;
c) adjuvantul Freund complet i incomplet fac imunogene doze mici de antigene, care altfel nu ar fi
imunogene i mresc semnificativ titrul anticorpilor fa de oricare antigen.
Efectul stimulator al adjuvantului Freund este foarte intens pentru dozele mici de antigen. Este foarte
eficient n asociaie cu antigenele proteice, stimulnd sinteza IgG. Utilizarea sa la om este limitat de
efectele secundare pe care le produce (artrita de adjuvant).

Muramil dipeptidul (N-acetil-muramil-L-alanil-D-izoglutamina = MDP) are proprieti de adjuvant, dar


este toxic pentru om.

ISCOM (immuno-stimulating-complex) este un amestec alctuit din colesterol i Quil A, o glicozid


extras din scoara de Quillaja saponaria, ce conine 5 componente principale cu structuri triterpenoide.
Amestecul are rolul de matrice care se organizeaz spontan n prezena antigenului proteic. Complexul
confer imunogenitate superioar i se asociaz cu vaccinurile pentru animale.
Amestecul de adjuvant i antigen se administreaz subcutan sau intradermic. Administrarea
intravenoas anuleaz efectul adjuvantului. Este posibil administrarea decalat la interval de cteva
zile (mai nti a adjuvantului), dac cele dou injectri se fac n acelai loc.

Endotoxinele bacteriilor Gram negative (Salmonella, Brucella, Bordetella etc.) au efect adjuvant. Ele
sunt n acelai timp adjuvani, antigene, toxine i factori pirogeni. Efectul maxim se obine numai dac
endotoxina se administreaz simultan sau la mai puin de 6 ore dup injectarea antigenului. Nu se
adaug vaccinurilor umane pentru c produce febr. Efectul de adjuvant rezid n efectul
imunostimulator general.
35
Exotoxinele - Toxina holeric i enterotoxina termolabil (TL) de E. coli sunt cei mai puternici
adjuvani pentru inducerea imunitii mucoaselor, dar nu pot fi folosii datorit toxicitii. Enterotoxina
holeric creste titrul anticorpilor serici dup administrare oral. Enterotoxina TL are o structur
asemntoare cu a toxinei holerice, ambele fiind formate din dou subuniti : A (activity) i B
(binding). Efectele toxice asupra esutului gazdei se produc prin acelai mecanism (ADP-ribozilarea),
dar diferenele receptorului celular specific fac ca enterotoxina TL s fie mult mai puin toxic dect
cea holeric. Un derivat netoxic al TL i pstreaz proprietile de adjuvant.Srurile de aluminiu
(Al(OH)3, Al(SO4)2. 12 H2O), fosfatul de aluminiu) i cele de calciu au efect adjuvant, deoarece se
combin cu imunogenul i formeaz un complex insolubil la situsul subcutan sau intramuscular al
injectrii, mrind intervalul de timp n care celulele imunitare pot fi activate. Se stimuleaz afluxul de
fagocite i funcia de fagocitoz.
Compuii aluminiului sunt singurii adjuvani acceptai n clinica uman i veterinar, dei prezint
unele dezavantaje: stimuleaz rspunsul imun mediat humoral, dar nu i imunitatea mediat celular;
vaccinurile care conin compui ai Al nu pot fi conservate prin nghe i nici liofilizate i de aceea
necesit transport refrigerat.

Ali adjuvani acioneaz prin stimularea activitii enzimelor lizosomale. Vitamina A i srurile de
beriliu, de siliciu, srurile quaternare de amoniu mobilizeaz macrofagele la locul injectrii i
stimuleaz activitatea lor fagocitar i degradativ.

Maturitatea SI (imunocompetena) influeneaz intensitatea RI. Administrarea unui Ag la un


organism al crui SI este imatur, nu activeaz RI, ci induce o stare de toleran.
Rspunsul imun al indivizilor umani, la cei doi poli ai vrstelor, este slab. La copii, SI este imatur, iar
la vrstnici, treptat, funcia imunitar diminu, ceea ce se reflect n reducerea activitii limfocitelor T,
creterea proporiei limfocitelor Ts, scderea activitii celulelor NK, toate avnd un efect
imunodepresiv, asociat cu creterea incidenei neoplaziilor i cu scderea capacitii de aprare fa de
agenii infecioi.
Factorii genetici sunt eseniali pentru capacitatea de RI a organismului. O substan nonself poate fi
un bun Ag pentru unele specii, dar neantigenic pentru altele. De exemplu, albumina seric bovin este
imunogen pentru iepure, dar slab imunogen pentru om, iar polizaharidul capsular de Str. pneumoniae
este imunogen pentru om i oarece, dar neimunogen pentru iepure i cobai.

Uneori se nregistreaz diferene semnificative ale reactivitii imunitare, chiar ntre organisme ale
aceleiai specii, corelate cu starea fiziologic, cu starea nutritiv, cu sexul, cu vrsta.
Bibliografie
1. Anatole Lubenko - ABO Blood Group System n vol. Encyclopedia of Immunology, 1998, sec.
ed., ed. by Peter J. Delves, Ivan M. Roitt, AP.
2. David Catty Valency of Antigens and Antibodies, n vol. Encyclopedia of Immunology, sec.
ed., 1998, ed. by Peter J. Delves, Ivan M. Roitt, AP.
3. George L Mayers, Carel van Oss - Affinity Chromatography - n vol. Encyclopedia of
Immunology, sec. ed., 1998, ed. by Peter J. Delves, Ivan M. Roitt, AP.
4. H Shaw Warren, Claude LeClerc Adjuvants, n vol. Encyclopedia of Immunology, sec. ed.,
1998, ed. by Peter J. Delves, Ivan M. Roitt, AP.
5. Lydia Mesrobeanu, Victor Gheie, Cecilia Toma Imunochimie, Academia de Stiine medicale,
Bucureti, 1978.
6. Male D., Champion B., Anne Cook Advanced Immunology, J. B. Lippincot Company, 1987.
7. Michael Sella Antigens, n vol. Encyclopedia of Immunology, sec. ed., 1998, ed. by Peter J.
Delves, Ivan M. Roitt, AP
36
8. Michael Sella Immunogen, n vol. Encyclopedia of Immunology, sec. ed., 1998, ed. by Peter J.
Delves, Ivan M. Roitt, AP.
9. Mihescu Gr. Imunologie i Imunochimie, Ed. Univ. Bucureti, 2001.
10. Mihescu Gr., Ioni A., Cecilia Galatiuc, Elena Mihescu - Imunologie practic, Ed. Univ.
Buc., 2003.
11. Peter Muhlradt Forssman Antigen, n vol. Encyclopedia of Immunology, sec. ed., 1998, ed. by
Peter J. Delves, Ivan M. Roitt, AP.
12. Weir D. M., Stewart J. Immunology, seventh edition, Longman Group, UK, 1993.
13. Zarnea G. Tratat de Microbiologie, vol. IV Imunobiologie, Ed. Academiei Romne, 1990..
14. Zarnea G., Mihescu Gr. Imunologie, Ed. Universitii Bucureti, 1995.

37