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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BILOGICAS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRACTICA. Separacin de fosfolpidos por cromatografa en capa fina

OBJETIVOS
Aplicar la tcnica de cromatografa en capa fina para la separacin de los fosfolpidos de la yema de huevo.
Discutir las ventajas de la tcnica de separacin respecto a la cromatografa en papel.
RESULTADOS

Imagen 1; Resultado de la cormatografa.

Imagen 2; Resultados tericos.


TABLA 1. Resultados de los Rfs obtenidos en las placas
NINHIDRINA MOLIBDATO BISMUTO YODO
PATA CODORNIZ PATA CODORNIZ PATA CODORNIZ PATA CODORNIZ
Lisofosfatidil - - - - - - 0.7384 -
Colina
Esfingomielina - 0.5076 - - - - - 0.6153
Fosfatidil - 0.2307 0.3384 - - 0.3076 0.1692 0.3076
serina
Fosfatidil
colina
Fosfatidil 0.0923 - 0.1846 0.1538 0.1846 0.1076 0.1076 0.1076
Etanol-Amina
Lipidos 0.0307 0.0307 0.1076 0.0615 - - - -
Neutros

CALCULOS DEL LOS Rfs


Rf= Distancia de la muestra desde el origen
Distancia del solvente muestra desde el origen (6.5cm)

DISCUSION
Logramos identificar los tipos de fosfolpidos presentes la yema de huevo de diversas aves tales como codorniz, pata,
guajolota y gallina; para lograr obtenerlos se realiz una cromatografa en capa fina, esta es una tcnica que utiliza una
placa de slica (fase estacionaria polar, comnmente se utiliza slica gel adherida a una superficie slida) inmersa
verticalmente en una fase mvil. Este proceso nos permiti diferenciar los tipos de fosfolpidos de acuerdo con la polaridad
de cada uno de estos; Relativamente los lpidos no polares (como lpidos neutros, cidos grasos y colesterol) migran a
posiciones nicas en la mitad superior del cromatograma, mientras que los lpidos relativamente polares como los
fosfolpidos y esfingolpidos estn separados en la mitad inferior del cromatograma.
Realizamos 4 cromatografas de la misma muestra de huevo porque solo de esta forma identificamos mayor variedad de
fosfolpidos presentes en la yema dndose a conocer mediante la aplicacin de diferentes tipos de reveladores. La prueba
de molibdato presenta el mayor nmero de interpretaciones debido a que es una prueba general para fosfolpidos y se
visualiza con manchas de color azul; podramos decir que solo para este experimento nos bastara aplicar solamente el
revelador molibdato porque cubre todas las expectativas; sin embargo, la fosfatidil serina y la fosfatidil colina no se llegan
a separar por completo, por lo que se tendran que realizar otras pruebas para evitar confusiones. Otro punto importante
a aclarar es que la mancha que representa a lpidos neutros como el colesterol no presenta el color azul caracterstico de
la prueba sino se expresa una tonalidad plida y amarillenta. La prueba de ninhidrina es especfica para fosfolpidos que
presenten grupos amino y es positivo con manchas de color violeta solo para fosfatidil-serina y fosfatidil-etanol-amina. En
cuanto a la prueba de Yodo, nos permiti visualizar de color caf los lpidos con dobles enlaces dando positivo para lpidos
neutros ( en este caso el colesterol), fosfatidiletanolamina y lecitina. La esfingomielina posee solamente un doble enlace
en la primera cadena hidrocarbonada pero dio negativo para el huevo de pata, probablemente sera por la cantidad de
muestra que no es suficiente para ponerlo de manifiesto, adems de que sus cadenas con ms largas con respecto a los
dems. Finalmente, se trabaj con el revelador Bismuto, que nos permite observar fosfolpidos que presenten colina en
su estructura con machas anaranjadas, y encontramos a la isolecitina y lecitina como lo esperbamos.
CONCLUSIN
Se compar la estructura de algunos fosfolpidos presentes en la yema de huevo y se diferenciaron entre s por medio de
diferentes reveladores.
La separacin de los fosfolpidos por cromatografa en capa fina y la posterior adicin de los diferentes reactivos
(molibdato, bismuto, yodo y ninhidrina) demuestran la composicin de cada uno de los fosfolpidos que integran la yema
de un huevo de guajolota, pata, gallina y codorniz (en nuestro caso solo pata y codornz).
La tcnica de cromatografa en capa fina es eficiente para separar fosfolpidos, solo que los resultados no se mantienen
coloridos por tanto tiempo pues se comienzan a despintar al pasar el tiempo, por lo que se debe trabajar con rapidez y
para las aplicaciones se debe de tener una suma precaucin de no maltratar la slica y no hacer la aplicacin extendida,
pero los resultados se obtienen mucho ms rpido y tienen un contraste ms fuerte a diferencia de una cromatografa en
papel, la cual requiere cuidados pero sus resultados son ms un poco tenues y requiere de bastante tiempo para que
puedan observarse.

BIBLIOGRAFA:
Graham Solomons, T.W. Qumica Orgnica. Limusa Wiley, pp 1260 a 1271. (2007) Recuperado el 9 de noviembre de
2017.
Herrera C.H. Qumica de Alimentos: Manual de Laboratorio, Ed. Universidad de Costa Rica, Costa Rica pp.23-24 (2003)
Recuperado el 9 de noviembre de 2017.

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