Sunteți pe pagina 1din 131

Biologie celulara si moleculara

CAPITOLUL 12
SEMNALIZAREA CELULAR
Mecanisme de comunicare intercelular
Moleculele semnal i receptorii membranari
Receptorii, mesageri secunzi i mecanismele transduciei
intracelulare
Mecanisme de comunicare intercelular
n toate organismele multicelulare, creterea, diferenierea i
metabolismul sunt coordonate de o reea foarte elaborat de comunicaii
intercelulare.
Celulele pot comunica ntre ele pe distane foarte mari. Semnalele
dintre celule sunt foarte variate i pot include att semnale electrice ct i
chimice. De asemenea, celulele i n special cele senzoriale pot s recioneze
la stimuli cum ar fi: deformarea mecanic (la atingere, sunete), temperatura,
lumin i oxigen.
Comunicarea prin semnale electrice este foarte rapid i depinde de
jonciunile de tip gap dintre celule, prin care se face trecerea informaiilor de
la o celul la alta. Este ntlnit la sistemele excitabile de tipul creier, inim.
Odat cu modificrile electrice se face pasajul i a moleculelor mici cum ar fi
metaboliii sau moleculele cu rol de mesageri secundari care difuzeaz astfel,
de la o celul la alta, cu uurin.
Comunicarea prin semnale chimice este principalul mod de transfer
a informaiei, la distan mare, ntre celule. n acest caz, produii
extracelulari acioneaz ca adevrate semnale.
Moleculele care au rol de semnale extracelulare controleaz creterea
tuturor esuturilor, guverneaz sinteza i secreia proteinelor i regleaz
compoziia fluidelor extra i intracelulare.
Aceste semnale extracelulare pot fi clasificate, dup distana la care
trebuie s acioneaze, n:
1. semnale endocrine
2. semnale paracrine
3. semnale autocrine

1
Biologie celulara si moleculara

n semnalizarea endocrin, celulele organelor endocrine elibereaz


hormoni, substane semnal, care acioneaz asupra celulelor int aflate la
distan. La animale, hormonii sunt transportai de la locul eliberrii lor, la
celulele int, de obicei, prin snge (figura 12.1).
n semnalizarea paracrin, celula int se afl n apropierea celulei
semnalizatoare, iar moleculele semnal afecteaz doar celulele int adiacente
ei. Exemplele de mai jos permit nelegerea importanei acestui mecanism de
comunicare.
Neurotransmitorii i neurohormonii sunt exemple de semnale
paracrine. Neutrotransmitorii transfer informaiile prin complexul
sinaptic. Acetilcolina, eliberat de neuronii motori, declaneaz cuplarea
dintre excitaie i contracie la nivelul musculaturii scheletice.
Neutrofilele elibereaz chemokine, semnale moleculare care permit
chemotaxia acestor celule n rspunsurile inflamatorii i n migrarea celulelor
stem hematopoietice la nivelul mduvei osoase.
n semnalizarea autocrin, celulele rspund la substane pe care ele
nsele le elibereaz (Figura 12.1). Astfel, celulele din culturi rspund la
factorii de cretere pe care i secret. De asemenea, trombocitele i menin
un reglaj al activrii prin feed-back-ul realizat de compuii sintetizai de tipul
eicosanoizilor.
Unele celule tumorale produc i elibereaz factori de cretere care
stimuleaz creterea necontrolat a celulelor tumorale, precum i a celulelor
netumorale adiacente.
Semnalele juxtacrine sunt implicate n comunicarea legat de
creterea tisular sau pentru migrarea n timpul rspunsului imun. n acest
caz, receptorul i stimulul sunt molecule ancorate n membranele unor celule
nvecinate.
Acelai compus poate aciona prin dou sau mai multe tipuri de
semnalizare intercelular. Unele peptide mici funcioneaz att ca
neurotransmitori (semnale paracrine), ct i ca hormoni sistemici
(semnalizare endocrin).

2
Biologie celulara si moleculara

Figura 12.1 Tipuri de comunicare intercelular prin semnale chimice


Comunicarea prin semnale extracelulare, n mod obinuit, implic ase
etape:
1. Sinteza moleculei semnal
2. Eliberarea moleculei semnal de ctre celul
3. Transportul ctre celula int
4. Detecia semnalului de ctre un receptor specific
5. Modificarea metabolismului celular, declanat de complexul
receptor molecul semnal
6. ndeprtarea, inactivarea semnalului, urmat de ncetarea
rspunsului celular.

Moleculele semnal i receptorii membranari


Semnalelele moleculare acioneaz asupra celulelor int inducnd n
acestea modificri care difer funcie de tipul celulei int, respectiv de tipul
de receptori pe care i posed aceste celule.
Unele semnale induc modificri n activitatea uneia sau mai multor
enzime prezente n celula int. Astfel, celula rspunde rapid, ntr-un interval
de minute sau secunde. La animale, majoritatea semnalelor care induc
asemenea rspunsuri rapide sunt molecule hidrosolubile care se leag
specific la receptori membranari.

3
Biologie celulara si moleculara

Alte molecule semnal sunt capabile s i exercite aciunea prin


modificarea expresiei genelor. n general, aceste molecule sunt puin solubile
n soluii apoase, fiind ns liposolubile. Ele produc n celulele int un
rspuns lent i de durat. Asemenea efecte sunt cruciale pentru influenarea
creterii celulare i a diferenierii.
Cea mai cunoscut clas din aceast categorie de molecule semnal
este reprezentat de hormonii sterolici. Ei interacioneaz cu receptori
intracelulari producnd inducia genelor specifice prin legarea la ADN, n
diferite regiuni de control.

Tabel 12.1. Exemple de molecule semnal hidrofobe cu implicaii


majore n funcionarea organismului

Hormonii steroizi
Testosteronul
Estrogenul
Progesteronul
Corticosteroizii
glucocorticoizii (stimuleaz
formarea glucozei)
mineralocorticoizii
Molecule (acioneaz la nivelul rinichiului
hidrofobe de pentru a regla echilibrul
semnalizare hidromineral)
ecdizon (hormon ce
(ptrund prin declaneaz metamorfoza la insecte)
difuziune n celul
strbtnd
membrana Hormonii tiroidieni - Sintetizat de tiroid i
plasmatic) are rol n creterea, dezvoltarea i reglarea
metabolismului
Vitamina D3 - Regleaz metabolismul ionului
de calciu
Acidul retinoic - Sintetizat din vitamina A are
rol important n dezvoltarea vertebratelor

Proteinele receptor de pe suprafaa celulelor int din citosol sau din


nucleul acestora, posed un situs de legare cu mare afinitate pentru o
substan semnal particular (neurotransmitor sau hormon).

4
Biologie celulara si moleculara

Substana semnal este denumit ligand. Cand ligandul se leag de


receptor, complexul ligand-receptor format iniiaz o secven de reacii care
schimb o funcie a celulei.
Rspunsul unei celule la un ligand specific este determinat de doi
factori:
1. de tipul de receptor pentru un ligand particular, pe care l posed
celula int
2. de reaciile intracelulare care sunt iniiate prin legarea unui singur
ligand la receptorul su.

Aceeai celul poate avea dou sau mai multe tipuri de receptori, la fel
cum, diferite tipuri celulare pot avea diferite seturi de receptori pentru acelai
ligand, fiecare inducnd un rspuns diferit. De asemenea, acelai receptor
poate exista la tipuri de celule diferite i legarea aceluiai ligand poate
declana variate rspunsuri n fiecare tip de celul.
Este evident c, diferite celule rspund n modaliti diferite la acelai
ligand sau pot exista complexe receptor-ligand diferite, care induc acelai
rspuns celular.

n celulele hepatice att legarea glucagonului


la receptorii si, ct i legarea adrenalinei
(epinefrinei) la receptorii specifici, poate induce
degradarea glicogenului i eliberarea glucozei n
snge.

Pentru majoritatea sistemelor ligand-receptor, ligandul nu are nici o


alt funcie dect aceea de a se lega de receptor. Ligandul nu este metabolizat
ntr-un produs util, nu constituie un intermediar n nici o activitate celular i
nu are proprieti enzimatice.
Singura funcie a ligandului este aceea de a modifica proprietile
receptorului, fapt ce semnalizeaz celulei c, n mediu, este prezent un
produs specific.
Celulele int pot modifica ligandul sau l pot degrada, dac acest lucru
se produce, celulele pot modifica sau finaliza rspunsul lor sau al celulelor
vecine la molecula semnal.
Hormonii care sunt folosii n semnalizarea endocrin sunt clasificai
dup mecanismul de aciune i dup compoziia chimic n dou categorii:

Hormonii liposolubili

Sunt molecule mici, liposolubile, care difuzeaz prin membrana


plasmatic i interacioneaz cu receptori nucleari sau citosolici (Figura

5
Biologie celulara si moleculara

12.2). Astfel, hormonii sterolici, tiroxina i acidul retinoic, fiind foarte


hidrofobi, sunt transportai prin snge de ctre proteine carrier, apoi intr
n celule i legndu-se de receptori specifici din citosol sau chiar din nucleu,
acioneaz asupra ADN nuclear modificnd transcripia genelor.

Figura 12.2 Ptrunderea moleculelor hidrofobe prin membrana plasmatic


ctre receptori intracelulari (MSH=molecul semnal hidrofob, PT=protein
transportoare, MC=membrana citoplasmatic, N=nucleu)

Unele molecule de hormoni pot fi transportate de ctre globuline


nespecifice sau albumine din snge. De exemplu, cei mai muli din hormonii
tiroidieni sunt transportai de globuline (TBG=thyroxine binding globulin) i
de albumina (TBA=thyroxine binding albumina). Din faptul c numai
hormonii tiroidieni liberi sunt activi, rezult c disponibilitatea lor este n
funcie de concentraia plasmatic a proteinelor de care se leag, care poate fi
modificat n diferite circumstane.

Hormonii hidrosolubili

Sunt molecule hidrofile care se leag de receptori aflai la suprafaa


celular (Figura 12.3). Astfel, peptidele, hormonii proteici, prostaglandinele,
unii aminoacizi, adrenalina (epinefrina) i ali compui, se leag la receptorii
membranari de suprafa, declannd creterea sau descreterea concentraiei
intracelulare a unor unor molecule cum ar fi AMP ciclic, a 1,2
diacilglicerolului sau ionii de Ca2+, care sunt mesagerii secundari.

6
Biologie celulara si moleculara

Figura 12.3 Fixarea semnalului molecular, molecula hidrofil (MSHfil) la


receptorul membranar (RM), N=nucleu

Receptorii membranari sunt proteine sau complexe proteice


transmembranare care prezint un situs de legare a ligandului orientat spre
faa extern a celulei (Figura 12.2). Liganzii specifici pentru aceti receptori
sunt reprezentai de o mare varietate de hormoni a cror molecul este
hidrofil i nu poate traversa membrana celular pentru a avea acces la
receptorii citoplasmatici.
Receptori membranari reacioneaz la creterea cantitii de ligand
(hormon) prin reducerea numrului receptorilor activi. Aceast inactivare, se
pare c se produce prin scufundarea n straturile membranare sau prin
schimbarea formei att a receptorilor ct i a poriunilor de membran unde
se afl localizai receptorii respectivi (Creager, 2001).
Excesul de hormoni tiroidieni cresc receptorii
de adrenalin pentru celulele cardiace, ceea ce duce
la creterea ritmicitii cardiace.
Anumii hormoni pot afecta sincron att receptorii proprii ct i ai altor
hormoni, sau pot declana o amplificare, prin creterea n cascad (Figura
12.4), a concentraiei unor molecule int (de obicei enzime), care poart
numele de amplificare enzimatic (Creager, 2001).
Tabel 12.2 Tipuri de receptori

Sunt localizai la nivelul jonciunilor


Receptorii canale sinaptice i funcioneaz dup principiul canalelor
ionice cu poart, comandate de ligand. Legarea
ligandului de aceti receptori, induce modificri
conformaionale n molecula lor, ceea ce determin

7
Biologie celulara si moleculara

deschiderea canalului.

Funcioneaz direct ca enzime, dac sunt


activai de ligand. Aceti receptori sunt proteine
Receptorii catalitici transmembranare al cror domeniu molecular
citoplasmatic conine un situs enzimatic activ n
condiiile n care are loc interaciunea cu ligandul
prezent pe faa extern a membranei.

Rolul proteinelor G este de a asigura


comunicarea dintre receptorii de pe suprafaa
celular i enzimele membranare care genereaz n
citoplasm mesageri secunzi.
Dup ce se combin cu ligandul, receptorul
membranar activeaz o protein membranar
numit protein G i, prin acest intermediar,
activeaz o a treia protein membranar care are o
activitate catalitic. Aceasta din urm sintetizeaz
mesageri intracelulari secunzi. Din aceast
Receptorii categorie, foarte cunoscui sunt receptorii
dependeni de adrenalinei i serotoninei.
proteina G
Sistemele de semnalizare care utilizeaz
proteina G sunt extrem de diverse. n general exist
mai multe tipuri de proteine G, care pot fi cuprinse
n mai multe sisteme de clasificare:
Proteina G care cupleaz receptorii cu
adenilat ciclaza
Proteine G care cupleaz receptorii cu
fosfolipaza C
Proteina G care cupleaz receptorii cu
canale ionice.

O molecul de hormon ataat pe un singur


receptor declaneaz activarea mai multor enzime
de adenilat ciclaz. Fiecare molecul de adenilat
ciclaz, la rndul ei, produce mai multe molecule de
AMPc, fiecare din aceste molecule activeaz mai
multe molecule de protein kinaze, care la rndul lor

8
Biologie celulara si moleculara

activeaz alte enzime specifice (hormon sensitive


lipase).
n mod similar pot aciona hormonii steroizii i
asupra unei molecule de ARN pentru amplificarea
sintezei mai multor molecule de proteine-enzime.
Spre deosebire de receptorii intracelulari, receptorii membranari nu
pot interveni direct n reglarea expresiei genelor.
Conform mecanismului de transmitere transmembranar a semnalului
extracelular spre interiorul celulei, receptorii membranari pot fi clasificai n
3 categorii ( Figura 12.5, Tabel 12.2):
1. Receptori canale
2. Receptori catalitici
3. Receptori dependeni de proteinele G

Receptorii, mesageri secunzi i mecanismele transduciei


intracelulare
Transmiterea semnalului de la complexul ligand-receptor se face prin
amplificare, n citosol formndu-se molecule cu rol de mesager secund.
Receptorii care, activai de ligand, genereaz n mediul intracelular mesageri
secunzi de tipul AMP ciclic, diacilglicerol sau inozitolfosfat, utilizeaz ca
translocator, proteinele G.

9
Biologie celulara si moleculara

Figura 12.4 Schema modului n care se produce amplificarea semnalului


intracelular prin fenomenul amplificrii enzimatice, dup Albert, 2002.

10
Biologie celulara si moleculara

Adenilat ciclaza (AC) este o enzim membranar care are un situs de


legare a ATP pe faa citoplasmatic a membranei. Activat de receptor,
enzima sintetizeaz din ATP, pe faa citoplasmatic, molecule de AMPc.
Activarea nu se face direct de ctre ligand-receptor, ci prin intermediul unei
a treia proteine membranare, numit protein reglatoare ce leag GTP sau
proteina G.

Figura 12.5 Tipuri de receptori: (A)-receptor canal, (B) receptor dependent de


proteina G modul de activare a substratului enzimatic prin intermediul proteinei G,
de asemenea activat, (C)- receptor catalitic, dup Alberts, 2002.

Pentru c este implicat n activarea enzimatic, este numit protein


G stimulatoare (Gs). Proteina Gs este format din trei lanuri polipeptidice
( leag i hidrolizeaz GTP, lanurile i ). n forma inactiv proteina
este un heterotrimer cu o molecul de GDP legat la lanul . Proteina este
activat prin legarea la complexul receptor-ligand.
n aceast stare lanul pierde GDP, legnd n locul su o molecul de
GTP. Legarea GTP face ca lanul s se disocieze de pe lanurile i , ceea
ce i permite interaciunea cu adenilat-ciclaza, care astfel, este activat pentru
a produce AMPc.
AMPc intracelular acioneaz ca un transductor de semnal sau de
mesager secund, n cazul rspusurilor intracelulare, la adrenalin sau

11
Biologie celulara si moleculara

noradrenalin. Aceste rspunsuri implic legarea acestor hormoni la


receptorii adrenergici i activarea proteinei G.
Adrenalina i noradrenalina sunt hormoni din categoria
catecolaminelor. n condiii de efort fizic, frig, stress fiziologic, celulele au
nevoie de glucoz i acizi grai. Aceste surse de energie sunt eliberate rapid
n snge prin degradarea glicogenului din ficat (glicogenoliz) i a
trigligeridelor din celulele adipoase (lipoliza).
La mamifere eliberarea glucozei i a acizilor grai poate fi declanat
de legarea hormonilor catecolaminici la receptorii -adrenalinici de pe
celulele hepatice i adipoase.
Receptorii -adrenalinici exist pe celulele cardiace, determinnd
creterea activitii muchiului cardiac i respectiv amplificarea fluxului
sanguin, ct i pe celulele musculare netede ale intestinului determinnd
relaxarea.
O alt categorie de receptori adrenergici sunt cei -adrenergici,
prezeni pe celulele musculare netede din pereii vaselor sanguine situate n
tractul intestinal, n piele i n rinichi. Legarea adrenalinei la aceti receptori
cauzeaz constricia arteriolelor din aceste organe.
O molecul semnal poate determina de pild att creterea ct i
descreterea concentraiei intracelulare a AMPc, n funcie de tipul de
receptor la care se leag. De exemplu dac receptorii - adrenergici
activeaz adenilat-ciclaza, receptorii - adrenergici o inhib. Diferena
const n proteinele G care cupleaz aceti receptori la adenilat-ciclaz.
Receptorii sunt cuplai la enzima printr-o protein G inhibitoare.
Aceasta conine un lan -inhibitor. Receptorii - adrenergici activai,
se leag de proteina Gi, determinnd legarea GTP la lanul , n locul GDP.
Aceasta cauzeaz disocierea lanului de lanurile i i ambele poriuni
moleculare contribuie la inhibarea adenila-ciclazei.
AMPc care se creeaz ca i mesager secund pentru mai muli hormoni
are efecte diferite, funcie de tipul celulei. Totui toate efectele AMPc se
exercit prin declanarea unor mecanisme celulare similare: AMPc modific
activitatea unei clase specifice de enzime ca urmare a activrii unei enzime
numit protein-kinaz dependent de AMPc ( A-kinaza).
Activarea protein-kinazei este realizat de cuplarea cu AMPc. Aceast
activare induce n celule diferite efecte cum ar fi stimularea eliberrii de
glucoz din glicogenul celulelor hepatice i musculare. De asemenea, n

12
Biologie celulara si moleculara

adipocite o astfel de cascad de reacii declanat de adrenalin, regleaz


sinteza i degradarea trigliceridelor, forma de depozit a acizilor grai.
Activarea receptorilor -adrenergici de pe celulele adipoase determin
creterea concentraiei AMPc n citoplasm i activarea unei kinaze (lipaza),
care hidrolizeaz trigliceridele la acizi grai i glicerol.
Acizii grai eliberai sunt transferai n snge unde se leag de
albumin, o protein seric major. n aceast form acizii grai sunt
transportai la alte esuturi, n particular, la cord, muchi i rinichi, unde sunt
utilizai ca surs de ATP.
La unele celule animale AMPc activeaz transcripia unor gene. n
celulele neuro-endocrine ale hipotalamusului, AMPc activeaz gena care
codific hormonul somatostatina. Promotorul acestei gene este recunoscut de
ctre o protein reglatoare a genei, care activeaz transcripia dac este
fosforilat de o kinaz.
Alturi de AMPc, ionii de Ca2+ reprezint cel mai rspndit tip de
mesager secund implicat n semnalizarea celular. Concentraia ionilor de
calciu aflai n citosol este meninut la valori extrem de sczute
(aproximativ 10-7M), pe cnd concentraia n lichidele extracelulare este mai
mic 10-3 M.
ATP-azele pompeaz ionii de calciu, pentru ai menine concentraia
sczut, din citosol la exteriorul celulei sau n lumenul reticulului
endoplasmatic sa a altor vezicule intracelulare care depoziteaz Ca2+.
Creterea extrem de mic, cu doar 1mM, induce o mare varietate de
rspunsuri celulare.
n celulele secretoare, cum sunt celulele ale insulelor Langerhans
care secret insulin, creterea concentraiei intracelulare a ionului respectiv
declaneaz exocitoza veziculelor secretorii i eliberarea insulinei.
n celule musculare netede, creterea ionului de calciu declaneaz
contracia, n celulele musculare striate i n celulele hepatice determin
activarea degradrii glicogenului.
Cnd un semnal deschide tranzitoriu canalele de calciu din aceste
membrane, ionii de calciu ptrund n citosol determinnd o cretere brusc a
concentraiei locale, ceea ce activeaz o serie de mecanisme celulare
sensibile la ionii de calciu. Pentru ca aceste mecanisme s funcioneze,
concentraia calciului din citosol trebuie meninut tot timpul la valori foarte
sczute.

13
Biologie celulara si moleculara

Toate celulele eucariote conin n membrana lor o pomp de calciu


2+
(Ca ATPaz) care, folosind energia obinut din hidroliza ATP, pompeaz
ionii de calciu n afara celulei. Celulele nervoase i musculare conin o
pomp suplimentar de calciu n membrana plasmatic, pomp care cupleaz
efluxul de calciu cu influxul de sodiu (sistem antiport).
n compartimentul de sechestrare a calciului este, de asemenea,
prezent o pomp de calciu care pompeaz ionii din citosol n lumenul
acestor vezicule. O parte a calciului este depozitat n acest compartiment
prin legarea sa la o protein numit calsequestrina. Se poate considera c
din acest compartiment fac parte i mitocondriile deoarece i ele posed o
pomp de calciu care, dei este mai puin specific, are o mare capacitate de
pompare datorit energiei obinute mai direct, din gradientul de protoni de la
nivelul membranei interne.
Acest pomp mitocondrial intervine mai ales atunci cnd, celula este
lezat i pomparea n mediile extracelulare este ineficient.
Calmodulina este o protein citoplasmatic care mediaz unele efecte
celulare ale ionului de calciu.
Calmodulina formeaz cu ionul de calciu un
complex care activeaz o serie de enzime cum ar fi
de pild AMPc-fosfodiesteraza care intervine n
degradarea AMPc, blocnd astfel efectele acestuia.
Legarea complexului Ca2+ -calmodulin la enzim produce activarea
acesteia, acesta este doar un exemplu n care se vede cum pentru reglarea
funciilor celulei, rolul calciului interfer cu implicaiile celulare ale AMPc.
Unii hormoni, dac se leag la receptorii de suprafaa celular,
determin creterea concentraiei calciului din citosol chiar i atunci cand
aceti ioni sunt abseni n mediul extracelular. n stadiul iniial al stimulrii
hormonale a celulelor hepatice, adipoase sau alte tipuri, calciu este eliberat n
citosol din compartimentul de sechestrare a calciului i nu din mediul
extracelular.
Pe faa citoplasmatic a bistratului lipidic membranar exist un
fosfolipid numit fosfatidil 4,5 bifosfat (PIP-2). Hidroliza acestui fosfolipid
de ctre enzima membranar fosfolipaza C, d natere la doi compui cu rol
de mesageri secunzi.

14
Biologie celulara si moleculara

n mod obinuit, fosfolipaza C (PLC) este inactiv. Activarea se va


face n momentul cuplrii hormonului la receptor prin intermediul unei
proteine G.
Produii de hidroliz sub aciunea fosfolipazei C ai PIP-2 sunt
inozitol-trifosfatul (Ins -P3) i respectiv diacil-glicerol (DAG). Ins-P3
difuzeaz n citosol i, ajungnd la nivelul membranelor compartimentului de
sechestrare a calciului, se leag la receptorii specifici. Aceasta induce
deschiderea canalelor de calciu de aici, determinnd ieirea ionilor n citosol
(Figura 12.6) .
Secvena de reacii care se desfoar n acest mecanism este
urmtoarea:
1. legarea hormonului la receptorul de pe suprafaa celulei
2. activarea proteinei Gp
3. activare fosfolipaza C
4. formarea inozitol-trifosfatului n citoplasm
5. deschiderea canalelor de calciu din membranele
compartimentului de sechestrare a calciului
Hidroliza PIP 2 de ctre fosfolipaza C genereaz un alt important
mesager secund: diacil-glicerolul. Funcia sa este de a activa o clas aparte
de protein kinaze membranare, protein kinaza C. n mod normal, n forma
inactiv, este o protein solubil n citosol. Ionii de calciu cauzeaz legarea
sa pe faa citoplasmatic a membranei celulare, unde ea este activat de
diacil-glicerol.
Proprietile protein kinazei C sugereaz c ea are rol n anumite
mecanisme majore ale creterii i metabolismului celular. Activarea protein
kinazei C, din diferite celule, are ca rezultat o mare varietate de rspunsuri
celulare.
Este de remarcat faptul c, hidroliza PIP2 este activat, att de
receptorii cuplai cu proteina G, ct i de kinazele tirozin specifice.
Explicaia este urmtoarea, o form a fosfolipazei C (PLC ) este stimulat
de proteina G, n timp ce o alta, PLC , conine domenii SH2, care mediaz
asocierea ei cu receptorul tirozin kinazic activat. Aceast interaciune PLC
este ancorat de membrana plasmatic i prin fosforilarea pe tirozin va avea
o activitate catalitic crescut.

15
Biologie celulara si moleculara

Figura 12.6 Modul de implicare a semnalelor, de tipul hormonilor


steroizi, n funcionarea genomului

Activat de Ca2+ i de diacilglicerol, protein kinaza C transfer un


radical fosfat de pe ATP pe serina sau treonina unor proteine celulare.
De exemplu:
n unele celule animale, protein kinaza C fosforileaz un
canal antiport membranar de Na+ i H+ care controleaz ph
ul intracelular. Creterea acestui ph intracelular
iniiaz proliferarea celulelor.
O cantitate mare de protein kinaz a fost gsit n creier,
unde fosforileaz canalele ionice din celulele nervoase,
ceea ce duce la modificarea proprietilor i alterarea
exitabilitii acestor celule.
Protein kinaza stimuleaz transcripia unor gene
specifice. Promotorii acestor gene conin o secven care
este recunoscut de o protein reglatoare ce este stimulat
de protein- kinaz C.

O serie de receptori membranari nu funcioneaz, pentru conversia


unui semnal extracelular n unul intracelular, prin intermediul proteinelor G,
ci fr a fi necesar un intermediar.

16
Biologie celulara si moleculara

Aceti receptori sunt proteine membranare al cror domeniu


citoplasmatic conine un situs enzimatic care este activat n momentul n care
se asociaz cu ligandul pe faa extracelular a plasmalemei.

AMP nu este singurul nucleotid ciclic care particip la semnalizarea


celular. Unele celule animale conin un alt nucleotid ciclic GMP (kinaze
G) care fosforileaz anumite proteine celulare.

Enzima care catalizeaz producerea GMP ciclic, guanilat ciclaza,


spre deosebire de adenilat ciclaza, este o enzima solubil n citoplasm, ea
produce creterea cantitii de GMP ciclic sub influena reaciilor n care
sunt implicai inozitol fosfaii.
Rolul GMP ciclic n semnalizarea celular este cel mai bine descris n
cazul implicrii sale n excitarea celulelor retiniene cu bastonae, de ctre
lumin. GMP ciclic acioneaz direct asupra canalelor de Na+ aflate n
membrana celulelor retiniene.

In absena unui semnal luminos GMP ciclic este legat la canalele de


sodiu meninndu-le deschise. Lumina determin activarea rodopsinei care
la rndul ei determin activarea unei alte proteine transducina. Transducina
activeaz GMP ciclic fosfodiesteraza care hidrolizeaz GMP ciclic, ceea ce
elibereaz canalele de sodiu, care se nchid producndu-se hiperpolarizarea
membranei. n acest fel, semnalul luminos este transformat n semnal
electric.

Printre cei mai cunoscui receptori catalitici sunt reprezentai de


protein kinazele tirozin-specifice, ele sunt o clas aparte de proteine
transmembranare care traverseaz o dat bistratul membranar.
Funcional sunt fosforilaze activate de ligand deoarece domeniul
moleculei de pe suprafaa celulei funcioneaz ca receptor, iar domeniul de
pe faa citoplasmatic are funcie catalitic, transfernd un radical fosfat de
pe ATP, pe tirozina unor proteine specifice din citoplasm.
n aceast clas de receptori intr:
Receptorii pentru insulin
Receptorii pentru factorul plachetar de cretere PDGF
(platelet derived growth factor)
PDGF- este de natur proteic, fiind produs i
depozitat n plachetele, n urma coagulrii sngelui,
plachetele sanguine i elibereaz coninutul (factorii
coagulrii precum i PDGF) n serul sanguin.
Efectele PDGF constau n stimularea diviziunii

17
Biologie celulara si moleculara

celulelor conjunctive i musculare netede n situsul


unui esut lezat, contribuind la refacerea leziunii.

Receptorii pentru factorul de cretere epidermal EGF


(epidermal growth factor)
Trebuie precizat c spre deosebire de protein kinazele tirozin
specifice, care fosforileaz tirozina de pe proteinele substrat, celelalte protein
kinaze fosforileaz serina sau treonina.
O alt caracteristic const n faptul c protein kinazele tirozin
specifice se fosforileaz pe ele nsele n momentul n care sunt activate.
Aceast autofosforilare care crete activitatea kinazei, cum este cazul
receptorilor pentru insulin, este un exemplu de reglare prin feed-back
pozitiv.
n alte cazuri cum este receptorul pentru factorul de cretere
epidermal, fosforilarea este realizat de protein kinaza C activat de diacil-
glicerol.
Datorit implicaiilor fiziologice i patologice cu totul deosebite,
protein kinaza tirozin specific este reprezentat de receptorul pentru
insulin.
Receptorul pentru insulin este o protein membranar tetrameric
ce are activitate protein kinaz tirozin specific. Subunitile expuse la
suprafaa celulei constituie receptorul pentru insulin (unitile ), iar
unitile reprezint poriunea dinspre citoplasm cu activitate fosforilazic
tirozin specific.
Receptorul are i capacitate de autofosforilare, ceea ce i crete mult
activitatea. Se presupune c receptorii pentru insulin fosforileaz n celul
mai multe proteine int la nivelul aminoacidului tirozin din structura lor,
dar aceast etap de reglare nu a fost suficient elucidat.
Insulina determin scderea concentraiei de glucoz din snge prin
dou mecanisme diferite, n funcie de tipul de celule asupra crora
acioneaz. Efectul asupra hepatocitelor se traduce prin stimularea
glicogenogenezei ca urmare a activrii glicogen-sintetazei, efectul asupra
celulelor musculare i adipocitelor se traduce prin accelerarea importului
de glucoz ca urmare a exprimrii la suprafaa celular a transportorilor de
glucoz.

18
Biologie celulara si moleculara

Efectul insulinei este acela de a crete rata captrii de glucoz din


snge de ctre celulele musculare i adipoase, prin creterea numrului
transportorilor de glucoz din membrana plasmatic a acestor celule.
Efectul insulinei asupra captrii glucozei i a catabolismului, apare
dup cteva minute i nu necesit sinteza de proteine noi. n schimb,
expunerea ndelungat la insulin, produce efecte de lung durat,
determinnd creterea activitii enzimelor hepatice care sintetizeaz
glicogen i a enzimelor din adipocite care sintetizeaz trigliceride. n acest
context, aciunile insulinei i ale adrenalinei sunt opuse.
Dup aproximativ 15 minute de expunere a celulelor adipoase la
insulin, transportul glucozei n acestea crete de 10-20 de ori, mai ales
datorit creterii numrului de transportori de glucoz la suprafaa
membranei. Celulele musculare i adipocitele posed n citoplasm, imediat
sub membrana plasmatic, un mare numr de vezicule ale cror membrane
conin transportori de glucoz specifici doar pentru aceste celule.
Legarea insulinei la receptorii si induce rapid, fuziunea acestor
vezicule cu membrana, crescnd de 10 ori numrul transportorilor. Exocitoza
veziculelor cu transportori i activarea acestora, se traduce printr-o cretere
semnificativ a transportului de glucoz.
Insulina are i rol de factor de cretere pentru unele celule cum ar fi
fibroblastele. Aciunea de stimulare a creterii (induce sinteza ADN)
necesit ca expunerea celulelor la insulin s fie continu. O serie de efecte
privind stimularea creterii celulare de ctre insulin sunt mediate i de
receptorii pentru factorul de cretere asemntor insulinei IGF-1 (insulin like
growth factor), un hormon cu structur similar insulinei.
IGF-1 este reglatorul primar al creterii unui organism, este produs
n special de ctre ficat ca rspuns la aciunea hormonului de cretere
hipofizar (STH). Receptorii pentru insulin i pentru IGF-1 au greutatea
molecular asemntoare ct i activitatea protein kinazic tirozin specific.

Funcionarea anormal a receptorilor pentru insulin


Reglarea sau funcionarea anormal a
receptorilor insulinici este prezent la persoanele
care sufer de diabet. Unii indivizi cu diabet juvenil,
care apare nc din copilrie datorit sintezei
deficitare a insulinei de ctre celulele insulare,
produc anticorpi mpotriva celulelor proprii, care
astfel sunt distruse prin reacii autoimune. n

19
Biologie celulara si moleculara

majoritatea acestor cazuri injectarea cu insulin


rezolv deficienele. Diabetul juvenil mai poate fi
determinat de sinteza de insulin anormal, ca
urmare a unui deficit genetic.
La aduli, diabetul este determinat la unele
persoane, de rspunsul defectuos al celulelor
musculare i adipoase la insulin. Acesta se
datoreaz fie defectelor structurale ale receptorilor
insulinici, fie produciei de autoanticorpi la
receptorii insulinici. Tratamentul cu insulin nu d
rezultate deoarece celulele, avnd receptorii
anormali, nu pot rspunde la hormon.
Marea majoritate a indivizilor diabetici au
dou defecte: celulele pancreatice nu secret
insulin ca rspuns la creterea glicemiei i
respectiv, celulele int nu pot rspunde la creterea
concentraiei de insulin prin accelerarea
transportului de glucoz.
Receptorii insulinici precum i cea mai mare
parte a lanului de reacii implicate, apar normale la
aceti indivizi pentru c, celelalte rspunsuri la
insulin, cum sunt creterea captrii de aminoacizi i
stimularea sintezei de ADN, sunt neafectate. La
aceti diabetici s-a constatat c transportorii de
glucoz, caracteristici celulelor musculare i
adipocitelor, sunt n numr mai redus. Se presupune
c, una din cauzele care determin diabetul la
aduli, const din reglarea defectuoas a expresiei
transportorilor de glucoz.

Semnalizarea paracrina i autocrina


Semnalizarea paracrin i autocrin implic intervenia mediatorilor
chimici locali a prostaglandinelor (n cazul celei paracrine) i a unor factori
de cretere.
Mediatorii chimici locali care intervin n semnalizarea paracrin,
acioneaz doar asupra celulelor aflate n vecintatea celulei secretoare.
Aceasta se datoreaz n primul rnd faptului c, dup ce au fost secretai, ei
sunt rapid distrui sau sunt imobilizai n spaiile intercelulare de ctre

20
Biologie celulara si moleculara

elementele matricei extracelulare. Exist celule care sunt specializate pentru


acest tip de semnalizare.

Monoxidul de azot (NO) i monoxidul de carbon (CO)


Monoxidul de azot (NO) este o molecul de semnalizare paracrin
important pentru sistemul nervos, imun i circulator. Asemntor
hormonilor steroizi, NO este capabil s difuzeze direct prin membrana
plasmatic a celulelor int. Dar, spre deosebire de hormonii steroizi, care
acioneaz pe receptorii ce regleaz transcripia, NO acioneaz pe enzime
int intracelulare.
Monoxidul de azot este sintetizat din arginin (Figura 12.7) de ctre
enzima numit sintetaza monoxidului de azot (NOS). Odat sintetizat, NO
difuzeaz n afara celulei influennd activitatea celulelor vecine. Monoxidul
de azot determin numeroase efecte locale deoarece NO este extrem de
instabil, avnd o perioad de njumtire de numai cteva secunde i induce
vasodilataie prin urmtorul mecanism:
Afinitatea foarte ridicat pentru fier a NO ct i a CO, face ca aceste
molecule s influeneze i s moduleze activitatea unor enzime ce conin fier.

Eliberarea acetilcolinei la nivelul terminaiilor


nervoase din endoteliul vaselor de snge, induce
sinteza de NO care difuzeaz la celulele musculare
netede vecine, unde NO reacioneaz cu fierul legat
la situsul activ al enzimei guanilat ciclaza.
Ca urmare a creterii activitii enzimatice are
loc sinteza mesagerului secundar GMPc, care va
induce relaxarea celulelor musculare netede i
vasodilataia.

Figura 12.7 Formarea NO din arginin

21
Biologie celulara si moleculara

Monoxidul de azot (NO) este cel care induce vasodilataia i


determin erecia penian.
De asemenea, utilizarea n medicin a nitroglicerinei, n tratamentul
bolilor de inim, se bazeaz pe transformarea ei n NO, care relaxeaz
vasele coronare i crete aportul de snge la nivelul muchiului cardiac.

Efectele biologice ale oxidului de azot au fost


descoperite in ultimii 20 de ani. n acest timp au fost
acumulate o serie de informaii care scot n eviden
implicarea n semnalizarea intracelular i
intercelular de la formele foarte simple de
nevertebrate marine, spongieri, celenterate, molute
( dintre cele mai primitive mecanisme de semnalizare
celular) pn la formele evoluate de tipul
mamiferelor.
La nevertebratele marine monoxidul de azot
are rol multiplu fiind implicat n hrnire, aprare,
rspunsurile la stresul indus de factorii de mediu,
nvare, metamorfoz, not, simbioz, asocierea
celulelor sanguine i reglarea presiunii sanguine.
Eficiena foarte mare a mecanismului a permis
conservarea i eficientizarea n scara filogenetic.

(R. Furchgott, F. Murat i L. Ignarro au primit


premiul Nobel pentru Medicin, 1998, pentru
descoperirea rolului NO n funcionarea sistemului
cardiac).

Mecanismele de reglare a sintezei NO sunt diverse:

- mediatorii de tipul: acetilcolina, histamina,


serotonina, bradichinina, glutamate activeaz sinteza
NO;

-citokinele, interleukinele, interferonul, TNF


(tumoral necrosis factor ) induc sinteza de NO;

-apariia NO fr intervenia enzimatic este


posibil din nitrit, n condiiile creterii pH-ului, cum
este n cazul ischemiei.

22
Biologie celulara si moleculara

Monoxidul de carbon (CO) funcioneaz ca i molecule semnal


pentru sistemul nervos. Este asemntor NO i intervine n dilataia vaselor
de snge. Sinteza CO n celule ale creierului, ca i n cazul anterior, este
stimulat de neurotransmitori. CO poate stimula guanilat ciclaza, care de
asemenea, reprezint inta fiziologic a semnalelor CO.

Neurotransmitorii
Transport semnalele ntre neuroni sau de la neuroni la celule int cum
ar fi celulele musculare. Ei reprezint un grup de molecule mici hidrofile, din
care fac parte: acetilcolina, epinefrina (adrenalina) serotonina, histamina,
glutamatul, glicina, acidul -aminobutiric (GABA).
Deoarece sunt molecule hidrofile, neurotransmitorii nu pot strbate
mambrana plasmatic i de aceea, se leag la receptorii suprafeei celulare.
Muli receptori ai neurotransmitorilor sunt canale cu poart dependent de
ligand, de exemplu receptorul pentru acetilcolin.
Legarea neurotransmitorilor la receptori induce o modificare a
conformaiei receptorilor, care deschid poarta canalelor ionice, determinnd
schimbri n fluxul de ioni din celula int.
Ali receptori ai neurotransmitorilor sunt cuplai cu proteinele G, care
determin diferite rspunsuri intracelulare. n cazul receptorilor pentru
neurotransmitori, proteinele G asociate regleaz indirect activitatea
canalelor ionice.

Histamina i serotonina
Histamina si serotonina sunt amine responsabile n principal de
manifestrile clinice ale reaciilor alergice.
Histamina este secretat de mastocite, celule existente n tesutul
consjunctiv. Mastocitele depoziteaz histamin n vezicule de secreie i o
elibereaz rapid prin exocitoz atunci cand sunt stimulate. Stimulul poate fi
reprezentat de o infecie local, reacii imunologice sau diferite leziuni
tisulare.

23
Biologie celulara si moleculara

Principalul efect al histaminei const n dilataia local a vaselor


sanguine i creterea permeabilitii lor. Aceasta faciliteaz accesul
proteinelor serice (anticorpii) precum i al leucocitelor la situsul leziunii.
Mastocitele mai secret i alte dou peptide care au capacitatea de a atrage
eozinofilele la situsul leziunii. Eozinofilele, produc enzime care inactiveaz
histamina, ceea ce duce la oprirea efectului acesteia (feedback).
Un mediator chimic local cu aceleai aciuni ca ale histaminei este
serotonina.

Factorii de cretere
Factorii de cretere sunt polipeptide ce cuprind o mare varietate
de molecule semnal care controleaz creterea i diferenierea celular
(Tabel 12. 3).
Factorul de cretere al nervilor (NGF) este un membru al familiei
neurotrofinelor care regleaz dezvoltarea i supravieuirea neuronilor.
Factorul de cretere epidermic (EGF) este un polipeptid de 53 de aminoacizi
care are rol n controlul proliferrii celulare, att n timpul dezvoltii
embrionare ct i la organismele adulte.
Factorul de cretere derivat din plachete (PDGF) este implicat n
vindecarea rnilor. El este depozitat n plachetele sanguine i este eliberat n
timpul coagulrii sngelui pe ran. PDGF stimuleaz proliferarea
fibrobrastelor din vecintatea cheagului, contribuid astfel la regenerarea
esuturilor distruse.
Serul sanguin conine o serie de factori care intervin n reglarea i
stimularea creterii celulare. n ultimii ani, prin creterea celulelor n cultur,
se folosesc ca medii de incubare, mediile definite care, n loc de ser, conin
componente cunoscute, care au efect de stimulare a creterii. n aceste
medii, serul este nlocuit cu proteine purificate din ser.
De exemplu, factorul de cretere epidermal (EGF) stimuleaz creterea
majoritii tipurilor de celule n cultur, unele celule pe lng EGF, necesit
i insulina sau IGF-1 (factorul de cretere asemntor insulinei).
Factorii de cretere stimuleaz creterea celular acionnd ca ageni de
semnalizare. Ei pot fi clasificai n categoria factorilor de semnalizare
autocrin deoarece, n general, celulele care i secret posed i receptori
pentru ei.

24
Biologie celulara si moleculara

Mecanismele prin care factorii de cretere stimuleaz creterea i


diviziunea celular sunt nc insuficient cunoscute. Ceea ce este clar este
faptul c ei nu acioneaz prin activarea cilor metabolice, ci intervin n
trecerea celulei din starea de repaus n starea activ.
Cercetri mai recente au reuit s explice mecanismul de semnalizare
celular prin intermediul factorilor de cretere, ca urmare a descoperirii
receptorilor pentru EGF, PDGF i insulin.
n rspunsul celulei la aceti factori intervine protein kinaza tirozin
specific, ea fiind stimulat n momentul n care la receptor se leag ligandul
respectiv. Fosforilarea tirozinei n anumite proteine este deci un mecanism
important prin care factorii de cretere stimuleaz creterea celular.
Hormonii polipeptidici, neuropeptidele i factorii de cretere se leag
de receptorii membranari. Avnd n vedere rolurile importante ale factorilor
de cretere n controlul proliferrii celulare, anomaliile observate n
semnalizarea prin factorii de cretere, determin numeroase boli.
nelegerea proceselor legate de reglarea creterii celulare are o
importan deosebit pentru studiul celulelor canceroase. O caracteristic a
celulelor normale este aceea c ele sunt stimulate de factorii de cretere, ele
aflandu-se n inhibiie n ceea ce privete creterea i diviziunea.
Mecanismul de inducere a cancerului const n primul rnd din
dereglarea mecanismelor de inhibiie a creterii celulelor normale, deoarece
principala caracteristic a celulelor canceroase este creterea
necontrolat.Expresia anormal a unui receptor strns nrudit cu receptorul
EDGF este un important factor declanator al cancerelor umane de sn i
ovar.
Ali factori interleukina -2, stimulator al limfocitelor T,
eritropoietina, care asigur dezvoltarea globulelor roii, fac parte din grupul
citokinelor.
Receptorii pentru citokine dei au activitate enzimatic intrinsec,
acioneaz prin stimularea intracelular a proteinelor tirozin kinazice cu care
ei se asociaz prin legturi necovalente.

25
Biologie celulara si moleculara

Tabel 12.3 Principalele tipuri de molecule semnal de tipul: hormoni peptidic,


neurohormini i neuropeptide, factori de cretere

Modul de aciune
Tipuri de molecule semnal
Hormoni peptide

Insulina Regleaz nivelul de glucoz si


intervine n stimularea proliferrii
celulare
Glucagon Stimuleaz sinteza de glucoz
Hormon de cretere Stimuleaz creterea

Hormonul FSH Stimuleaz creterea ovulelor i a


foliculilor ovarieni
Prolactina Stimuleaz lactaia

Neuropeptide i neurohormoni
Oxitocina Contracia musculaturii netede
Vasopresina Stimuleaz reabsorbia apei la nivel
renal
Encefalina analgezic
-endorfina analgezic
Factori de cretere
NGF (nerve growth factor) Diferenierea i meninerea activitii
neuronilor
EGF (epidermal growth factor) Proliferare celular
PDGF (platelet-derivated growth Proliferarea fibrobrastelor, rol n
factor) angiogenez
Interleukina-2 Proliferarea T-limfocitelor
Eritropoietina Dezvoltarea celulelor roii sanguine

n schimb, receptorii citokinelor funcioneaz n asociere cu tirozin


kinazele nereceptoare, care sunt activate ca rezultat al legrii ligandului.
Acesta legare induce dimerizarea receptorului i fosforilarea ncruciat a
tirozin kinazelor nereceptoare asociate.
Acest categorie de receptori este denumit de superfamilia
receptorilor pentru citokine i cuprinde pe lng receptorii pentru citokine

26
Biologie celulara si moleculara

(interleukina -2 i eritropoietina) i receptori pentru hormonii peptidici


(hormonul de cretere i prolactina).
Receptorii pentru citokine au un domeniu extracelular N-terminal care
leag ligandul, un helix transmembranar i un domeniu C-terminal
(citosolic), acest domeniu citosolic este lipsit de activiti catalitice.

Ci de transducie a semnalului intracelular (RAS, RAF,


MAP-kinazelor)
Calea MAP kinazei este alctuit dintr-o cascad de protein kinaze cu
rol important n semnalizarea tuturor celulelor eucariote. MAP kinazele
(protein kinaze activate de factori mitogeni) sunt activate ca rspuns la
diferii factori de cretere sau alte molecule de semnalizare
Cele mai bine caracterizate forme de MAP kinaze din celulele
mamiferelor aparin familiei de ERK (kinaze reglatoare de semnal
extracelular).
Activarea ERK are un rol important n semnalizarea proliferrii
celulare, indus de ctre factorii de cretere, care actioneaz fie prin
receptorii tirozin kinazei (PTKR), fie prin receptori cuplai cu proteina G
(GPCR). Protein kinaza C poate s activeze cile ERK care stimuleaz
proliferarea celular indus de esterii forbol, iniiatori ai tumorilor.
Cile de Ca2+ ct i cele ale AMPc se intersecteaz cu semnalizarea
ERK, stimulnd sau inhibnd calea ERK n diferite tipuri de celule.
Activarea ERK este mediat de dou protein kinaze din amonte, care
sunt cuplate la receptorii pentru factorii de cretere printr-o protein legat la
GTP numit Ras (Figura 12.8). Activarea Ras duce la activarea Raf, kinaz
serin/treonin specific, care fosforileaz i activeaz o protein kinaz
secundar numit MEK (MAP kinaza sau ERK kinaz).

27
Biologie celulara si moleculara

Figura 12.8 Intersectarea semnalelor intracelulare cu rol n procesul de


proliferare-calea de semnalizare ERK (dup Berridge, 2010- Cell Signaling
Biology )

ERK (kinaze reglatoare de semnal extracelular) PTKR (receptorii specifici


tirozin kinazei), (GPCR) receptori cuplai cu proteina G, PLC (fosfolipaza C), PLA
(posfolipaza A), Src-non-receptor protein tyrosine kinases, ETS, SAP1, ELK1
(MAPK target proteins), MEK1/2 (MAPK/ERK kinase 1/2), DAG (diacil- glicerol)
Ras, Sos (proteine tip G monomerice)

Rolul principal al cii ERK a fost evideniat n celulele animale cu


ajurorul proteinei Ras, identificat ca proteina oncogenic a virusurilor
tumorale, care determin sarcoamele la obolani. Numele ei vine de la rat
(obolan) i de la sarcom.
Microinjectarea proteinei Ras active induce direct proliferarea
celulelor normale de mamifere. Prin microinjectarea de anticorpi anti-Ras
sau prin expresia unei mutante Ras dominant negative se blocheaz
proliferarea celular indus prin factorul de cretere.

28
Biologie celulara si moleculara

Tabel 12.4 Cile de semnalizare MAPK (ERK, p38, JNK) (dup Berridge,
2010- Cell Signaling Biology )

Calea ERK de Calea p38 Calea JNK


semnalizare

Citokine, Stres Stres osmotic, Radiatii,


Factori de crestere osmotic Citokine

proliferarea celular apoptoz proliferare, apoptoz,


dezvoltare embrionar

Proteinele Ras aparin la o mare familie care cuprinde aproximativ 50


de proteine nrudite, ele sunt numite frecvent micile proteine legate la GTP,
deoarece Ras i proteinele nrudite au abia jumtate din dimensiunea
subunitii a proteinei G, dar leag guanin nucleotidul funcionnd similar
cu subunitatea a proteinelorr G. Dar, spre deosebire de subunitile ale
proteinei G, Ras funcioneaz ca un monomer.
n timp ce Ras regleaz creterea i diferenierea celular, alte
subfamilii ale micilor proteine legate de GDP, cum ar fi proteinele ARF i
Rab, regleaz transportul de vezicule. Alte proteine mici care leag GTP
sunt implicate n importul proteinei nucleare (proteina Ran) i n organizarea
citoscheletului ( proteinele subfamiliei Rho).

29
Biologie celulara si moleculara

Pe lng ERK au mai fost identificate i alte dou MAP kinaze numite
JNK i p 38. Aceste dou MAP kinaze sunt activate nu numai de factorii de
cretere, dar i de citokine i de stressul din mediul nconjurtor
(ultraviolete).
JNK i MAP kinaza p38 sunt activate de ctre kinaze cu specificitate
dubl, distinct aa numitele MAP kinaz-kinaze (MKK). Asemntor ERK,
MAP kinaza, JNK poate fi translocat n nucleu pentru a fosforila factori de
transcripie care regleaz gene precoce imediate (Tabel 12.4).
Un alt mod de influenare a expresiei genelor din nucleu este asigurat
de calea Jak/STAT (signal transducer and activator of transcription), o
alternativ fa de calea MAP kinazei pentru c ofer o conexiune mult mai
direct ntre protein/tirozin kinaze i factorii de transcripie.
n aceast cale , fosforilarea tirozinei substratului proteic influeneaz
direct localizarea i funcionarea factorului de transcripie. Elementele cheie
n aceast cale sunt proteinele STAT (transductori ai semnalului i activatori
ai transcripiei), care conin domenii SH2. Aceste proteine sunt inactive n
celulele nestimulate i sunt localizate n citoplasm.
Stimularea receptorilor citokinici conduce la activarea proteinelor
STAT, care prin domeniile SH2 se leag la secvenele ce conin
fosfotirozina din domeniile citoplasmatice ale receptorilor polipeptidici. Ca
urmare factorii de transcripie STAT servesc ca legturi directe dintre
receptorii pentru citokine i factorii de cretere, de pe suprafaa celular, i la
reglarea expresiei genelor din nucleu.

Prostaglandinele
Sunt compui chimici derivai din acidul arahidonic care, dei sunt
molecule liposolubile, i exercit aciunea de ligand la fel ca i hormonii
proteici, prin legarea la receptorii de suprafa.
Prostaglandinele, prostacicline, tromboxani i leucotriene fac parte din
grupul mare al lipidelor numite eicosanoizi, care spre deosebire de hormonii

30
Biologie celulara si moleculara

steroizi, se leag la receptorii membranari. Eicosanoizii acioneaz la nivel


local, pe cile de semnalizare autocrin sau paracrin i stimuleaz celulele
int s produc diferite rspunsuri (agregarea plachetelor, inflamaia,
durerea, contracia muchiului neted).
Prostaglandinele sunt sintetizate continuu n membranele celulelor din
majoritatea esuturilor, prin degradarea fosfolipidelor sub aciunea
fosfolipazei (A2 ), eliberndu-se apoi n spaiul extracelular.
Prostaglandinele sunt degradate, de ctre enzimele existente n lichidele
extracelulare.
Majoritatea acestor mediatori funcioneaz ca mediatori locali n
semnalizarea paracrin, fiind rapid distrui n apropierea situsului n care au
fost sintetizate. Legndu-se la receptori specifici, ele moduleaz rspunsul
celulelor la ali hormoni, dar au i efecte profunde asupra multor procese
celulare. Unele prostaglandine determin agregarea plachetelor sanguine i
aderena lor la pereii vaselor sanguine.
Deoarece plachetele sanguine au rol important n coagulare,
prostaglandinele pot afecta evoluia bolilor vasculare. Producnd
vasodilataie n esuturile lezate (nroirea rnilor), provoac inflamaia
acestora.
Aspirina i ali ageni antiinflamatori inhib sinteza
prostaglandinelor. Unele prostaglandine sunt
produse n cantiti mari la nivelul uterului
producnd contraciile musculare netede a acestuia
n timpul naterii. Datorit acestui efect, sunt folosite
astzi ca ageni farmacologici pentru inducerea
avortului.

Transducia semnalului i citoscheletul


Funciile celor mai multe celule sunt influenate direct de adeziunea
celular i de organizarea citoscheletului. Uneori receptorii care determin
adeziunea celular acioneaz pentru a iniia cile de semnalizare
intracelular care regleaz i alte aspecte ale comportamentului celular ,
inclusiv expresia genelor. Factorii de cretere acioneaz pentru a induce
modificri ale citoscheletului care conduc la micarea celular sau la
schimbri ale formei celulare. Deci, componentele citoscheletului
31
Biologie celulara si moleculara

acioneaz att ca receptori, ct i ca inte n cile de semnalizare celular


corelnd forma celulei cu alte rspunsuri celulare.
Factorul de cretere care induce modificarea motilitii celulare (rol n
proliferare) are roluri eseniale n procesele cum ar fi vindecarea rnilor i
dezvoltarea embrionar prin intermediul citoscheletului de actin.
Studii ale rspunsurilor fibroblastelor la stimularea prin factorii de
cretere au demonstrat rolul important al proteinelor mici care leag GTP
(Rho, Rac, Cdc 42) n controlul asamblrii i dezasamblrii filamentelor de
actin. Astfel, factorii de cretere induc modificri n organizarea
citoscheletului, care determin apariia unor prelungiriale suprafeei celulare
(filopode, lamelipode) precum i constituirea contactelor focale i a fibrelor
de stress.
Membrii familiei Rho pot activa cile de semnalizare MAP kinaze,
astfel nct, micile proteine ce leag GTP funcioneaz ca reglatori, att ai
expresiei genelor, ct i ai remodelrii citoscheletului (Cdc 42-induce
formarea de filopode, Rac mediaz formarea de lamelipode, Rho- implicat
n formarea contactelor focale i a fibrelor de stress).
Activitile acestor proteine Rho sunt corelate secvenial: Cdc 42
activeaz Rac, iar Rac activeaz Rho. Aceast ierarhie sugereaz
posibilitatea ca aceste proteine s controleze modificrile citoscheletului
care produc micarea celular.

Coordonarea spaial i temporal a semnalizrii celulare


Cile de semnalizare celular sunt foarte bine organizate n ceea ce
privete spaiul i timpul. n legtur cu aspectele de organizare spaial
principiul de baz este c: componentele semnalizrii sunt asociate prin
proteine modulare, domenii de proteine care trebuie s fie conectate corect
pentru a permite trecerea rapid a fluxului cu informaia adecvat reglrii.
Un alt aspect important al aranjrii spaiale este localizarea cilor de
semnalizare n celul. Sunt o serie de proteine int (scafoid proteins) care
funcioneaz ca fixatori i adaptori ai componentelor de semnalizare n

32
Biologie celulara si moleculara

poriunile care formeaz complexe macromoleculare de semnalizare (Figura


12.9).
Aceste componente schel pot, de asemenea, s direcioneze
complexele macromoleculare la locaii specifice din interiorul celulei cum ar
fi insulele membranare lipidice i caveolele.

Figura 12.9 Ierarhia spatial a semnalizrii, dup Berridge, 2010.

Acest sistem (ipotetic) de semnalizare sugereaz o poziie fix a


componentelor, dar modul de realizare a semnalizrii n cascad sugereaz
mobilitate, acest mobilitate fiind mai evident n cazul proteinelor care au
domenii de transducie care interacioneaz cu diferite lipide de semnalizare
din structura membranelor celulare.
Unul din aspectele interesante ale microdomeniilor implicate n
semnalizare este modul n care acestea sunt utilizate de neuroni pentru a
crete capacitatea lor de a procesa informaiile. Faptul c, prelucrarea de
informaii poate fi limitat la volume foarte mici nseamn c fiecare neuron
este capabil de prelucrare simultan a unei cantiti mari de informaii.
Organizarea spaial a cilor de semnalizare arat c elementele
componente ale semnalizarii sunt adesea foarte bine organizate (Figura 12.9)
i, adesea, localizate poriuni ale membranei celulare, cum ar fi caveolele.

33
Biologie celulara si moleculara

Acest lucru este deosebit pentru c atribuie receptorilor diversificarea cilor


de semnalizare.
Astfel, dac semnalizarea implic generarea de mesageri secundari, n
imediata apropiere a receptorilor , va fi un punct de convergent, n cazul n
care concentraia va fi la un maxim i transmiterea va consta n scderea
exponenial a mesagerului difuzat n citosol. n acest fel se creeaz un al
doilea domeniu al mesagerului secundar, ca i component cheie n
semnalizarea celular.
Astfel de captri specifice de semnale sunt deosebit de relevante pentru
procesul de modificri sinaptice n timpul nvrii i memorrii.
Mrimea acestor domenii de semnalizare va depinde de o serie de
aspecte, cum ar fi rata de producere a semnalului, rata de difuzie semnal, rata
de eliminare semnalului prin mecanismele OFF. Mesagerii secundari joac
un rol important n determinarea volumului acestor domenii de semnalizare,
iar acest lucru poate s fie un element deosebit de important pentru
miniaturizarea semnalizrii (rol major l are prezena ionului de calciu) n
interiorul creierului.
Oscilaiile sunt o trstur caracteristic a multor sisteme de control
celular. Astfel de activitate oscilant poate avea o gam larg de frecvene .
Exist trei tipuri principale de activitate oscilant:
1- membranar (10 milisecunde-1 secund)
2-citoplasmatic (1 minut)
3- ceasul celular circadian.
Creierul conine oscilaii ajungnd la cea mai mare frecven de 0,2-
200 Hz, iar multe dintre aceste aspecte apar ca o proprietate a reelei
neuronale i au fost numite oscilatoare de reea. Cu toate acestea, este
evident c neuronii i multe alte celule, pot genera, de asemenea, oscilaii
endogene (de membrana sau citosolice).
Un rol important n acest proces de reglare temporal a mecanismelor
moleculare l are ionul de calciu i respectiv mecanismele de modulare a
concentraiei acetui ion.
Dou mecanisme distincte intercelulare: unul bazat pe transmiterea
chimic sinaptic n principal prin intermediul acidului -aminobutiric
(GABA), unul printr-o comunicare direct prin intermediul punctelor de
jonciune GAP, permit sincronizarea dintre celulele nervoase din sectorul
sistemului nervos central. Stimulul luminos provenit din retin i care
urmeaz traseul RHT (retinohipotalamic) produce o stimulare a expresiei
genelor pentru genele ceas. Se pare c aceeast stimulare genic este
34
Biologie celulara si moleculara

declanat de glutamat care acioneaz asupra celulelor nervoase pentru a


stimula cile de semnalizare intercelular astfel: crete nivelul ionului de
calciu, activeaz factorii de transcripie (proteine), activeaz sinteza de
AMPc.
Aceste ritmuri oscilatorii au rol important n reglarea genelor,
transcripie, coordonarea degradrii proteinelor. Exist gene ceas care sunt
legate funcional i care menin coordonarea molecular oscilatorie.

Bolile i medicamentele n disfuncii ale semnalizrii


celulare
Un numr mare de boli sunt cauzate de defecte n cile de semnalizare.
Natura acestor defecte i modul n care acestea sunt induse variaz enorm.
Organismelor patogene i viruii pot interfera cu evenimente de semnalizare,
cauznd unele dintre aceste defecte.
Cele mai multe dintre boli grave la om, cum ar fi hipertensiunea
arterial, boli de inima, diabet si multe forme de boal mintal, par a rezulta
din subtile modificari fenotipice de semnalizare. Astfel de remodelare
fenotipic modific comportamentul celulelor, astfel nct, funciile lor
normale sunt afectate, ceea ce duce la boli.
Majoritatea bolilor nu pot fi explicate prin afectarea unei singure etape
a unei ci, de semnalizare, ci prin multiple alterri care afecteaz reelele
ntr-o manier complex.
Tabel 12.4 Medicamente i modul de aciune asupra receptorilor

Modul de aciune asupra receptorilor


Medicamente i utilizarea acestora sau mediatorilor secundari ai celulei
Practololul Antagonist pe receptorii 1
-utilizat pentru tratamentul adrenergici, reduc frecvena i fora
aritmiiilor cardiace i al anginei contraciilor cardiace
pectorale
Terbutalina Agonist care se leag la receptorii
-utilizat n tratamentul astmului adrenergici i mimeaz aciunea
hormonului, provoac dilatarea
bronhiilor pulmonare
Diazepamul i napotonul Se leag de receptorii GABA i
-utilizate n tratamentul insomniei, poteneaz aciunea inhibitoare a
anxietii i depresiei acestora, ca urmare are loc
deschiderea canalelor pentru Cl-,

35
Biologie celulara si moleculara

hiperpolarizarea membranei i astfel


se impiedic excitarea celulei
Chlorpromazinul Antagonist al dopaminei
-neuroleptic utilizat pentru
tratamentul schizofreniei
Acidul lisergic (LSD) Agonist al serotoninei
-efecte halucinogene
Cafeina Poteneaz transmiterea adrenergic
-stimulent al activitii cardiace i opunndu-se degradrii AMPc (prin
cerebrale inactivarea fosfodiesterazei)
Aspirina Inactiveaz ciclooxigenaza, enzim
-efect antiinflamator implicat n sinteza prostaglandinelor

Similar, medicamentele, fie c interacioneaz specific cu o singur


int sau cu mai multe molecule i vor perturba cascadele metabolice i de
semnalizare, ntr-un mod complex.
n plus, din moment ce multe tipuri de celule utilizeaz aceleai
molecule pentru semnalizare n contexte diferite, multe tipuri celulare pot fi
afectate n grade diferite de acelai medicament. Introducerea recent a
evalurii expresiei genice i proteice pe baza unor sisteme de analiz de mare
capacitate, ca i a analizelor metaboliilor permit o mai bun nelegere a
gradului i localizrii interferenelor.
Experimentele celulare ofer astfel o soluie pentru studierea
modulrii unei inte farmacologice n reeaua sa natural complex precum i
a potenialelor efecte asupra altor reele.
Testele celulare au avantajul c nu necesit purificarea intelor
farmacologice. Totui, n multe cazuri, testele celulare necesit manipularea
celular pentru a permite citirea specific a semnalului. Supraexprimarea
receptorilor de suprafa celular sau a proteinelor intracelulare pot avea
efecte substaniale asupra fiziologiei celulei i trebuie luate n considerare
atunci cnd se utilizeaz aceste teste pentru descoperirea noilor
medicamente.
Reaciile precoce ale hormonilor, factorilor de cretere i
neurotransmitorilor sunt deseori mediate prin intermediul mesagerilor
secunzi sau influxului i efluxului rapid de ioni. Modificrile proteinelor
post-translaionale i translocaia proteinelor sunt urmtoarele etape care
altereaz statusul fiziologic al unei celule.

36
Biologie celulara si moleculara

Asemenea modificri sunt capabile s conduc la modificri rapide ale


cilor metabolice, precum i la alterri ale activitii genelor i expresiei
proteice, ducnd n final la noi fenotipuri celulare, ce includ proliferarea i
moartea celular.
Ierarhic, citirea spaio-temporal va genera o bun cunoatere a
mecanismelor de aciune a medicamentelor i va permite prezicerea efectelor
sistemice.
ncercarea gsirii unor tratamente adecvate este corelat de redundana
mecanismelor de semnalizare celular, care ofer oportuniti multiple n
vederea gsirii de ci de tratament i de ameliorare a bolilor.
De exemplu o serie de medicamente sunt realizate cunoscnd tipul i
modul de funcionare al unor receptori (Tabel 12.4). Receptorii mesagerilor
intercelulari pot fi adesea inta unor medicamente.

CAPITOLUL 13
CICLUL CELULAR
DISFUNCII CU IMPLICAII PATOLOGICE
Fazele ciclului celular
Semnale care controleaza ciclul celular i punctele de control
Mecanisme moleculare de reglare ale ciclului celular
Factorii de cretere i ciclinele D
Semnele inhibitorii n derularea ciclului celular-cancerul
Genetica bolii canceroase

Diviziunea celulelor reprezint una dintre cele mai importante


caracteristici ale formelor vii, prin care se asigur reproducerea i
conservarea caracteristicilor morfo-fiziologice, odat cu transmiterea la
celulele fiice a genomului propriu. Procesul este reglat i controlat cu mare
strictee. La formele eucariote acest control este realizat de ctre proteinele
de tipul kinazelor
Ciclul celular cuprinde patru procese:
-creterea volumului celular

37
Biologie celulara si moleculara

-replicarea ADN
-distributia cromozomilor duplicai la celulele fiice
-diviziunea celular

Fazele ciclului celular


Celulele umane, n cultur, se divid o dat la 24 h, ciclul celular avnd
2 etape: interfaza i mitoza. Mitoza (diviziunea nucleului) const n
separarea cromozomilor i se ncheie cu separarea citoplasmei (citokineza).
Mitoza i citokineza dureaz numai o or, astfel nct, interfaza, perioada
dintre mitoze, ocup 95% din ciclul celular.
Celula crete cu o vitez constant n timpul interfazei, astfel nct
majoritatea celulelor i dubleaz dimensiunile ntre dou mitoze succesive.
Sinteza ADN are loc numai ntr-o anumit etap a interfazei (faza S). Ciclul
celular este mprit n 4 etape (Figura 13.2):
1- faza M= mitoza (urmat de citokineza)
2- faza G1 (gap1) corespunde intervalului de repaus (gap1) dintre
mitoz i iniierea replicrii ADN. n timpul fazei G1 celula este metabolic
activ, crete continuu, dar nu-i replic ADN-ul.
3-faza S (de sintez)- n care se desfoar replicarea ADN.
4-faza G2 (gap 2) n care celula continu s creasc i s sintetizeze
proteinele pregtindu-se pentru mitoza.
Pentru celula uman cu proliferare rapid, ntr-un ciclu de 24 de ore,
faza G1 dureaz 11 ore, faza S opt ore, faza G2 patru ore, faza M-o or.
Ciclurile mai scurte de aproximativ 30 minute se ntlnesc la celulele
embrionare, la scurt timp dup fertilizarea oului. Aceste celule embrionare
nu cresc, dar se divid rapid n celule mai mici. Deci ciclurile embrionare nu
au fazele G1 i G2 (Figura 13.1), iar replicarea ADN se face foarte rapid
astfel nct fazele S foarte scurte alterneaz cu fazele M (Alberts, 1998).

38
Biologie celulara si moleculara

Figura 13.1 Ciclul celular n cazul celulelor embrionare (n timpul


dezvoltrii embrionare celulele nu cresc, citoplasma se divide rapid i lipsesc fazele
G1 i G2, fapt care duce la alternana fazelor M i S)

Spre deosebire de proliferarea rapid a celulelor embrionare, unele


celule animale de la organismele adulte nu se mai divid deloc (neuronii), i
multe alte celule se divid ocazional pentru a nlocui celulele care se pierd
prin rnire sau moarte. Astfel, fibroblastele din piele, celule din plmni,
ficat, rinichi intr ntr-un stadiu de repaus al ciclului celular numit G0 n care
rmn metabolic active (Figura 13.2), dar nu mai prolifereaz dect dac
sunt stimulate de semnale extracelulare, care le scot din G0 i le trec n G1.

M=mitoza
G1-faz de gap 1, corespunde
intervalului de repaus dintre
mitoz i iniierea replicrii
ADN
G2=faza de gap 2, celula
continu s creasc i s
sintetizeze proteinele
pregtindu-se pentru mitoz
S= replicarea ADN
I=interfaz
G0=repaus al ciclului celular

Figura 13.2 Ciclul celulelor cu toate fazele caracteristice, ntlnit la


majoritatea celulelor eucariote

39
Biologie celulara si moleculara

Semnalele care controleaza ciclul celular i punctele de


control
Succesiunea fazelor ciclului celular este determinat de existena unor
mecanisme de control reglate prin semnale din mediul extracelular (cum ar fi
factorii de cretere) sau printr-o serie de procese celulare coordonate (cum
sunt creterea celular, replicarea ADN i mitoza).
Primul punct de control al ciclului celular este situat la sfaritul fazei
G1 i el decide trecerea din faza G1 n faza S. Acest punct reglator (START)
a fost definit prima oar pe baza cercetrilor efectuate pentru nmugurirea
drojdiei Saccharomyces cerevisiae. Dup ce au trecut de START celulele
intr n faza S i se divid.
Spre deosebire de celule de drojdie, la celulele umane faza START
este denumit i faza de restricie. Celulele care nu depesc acest punct de
restricie intr ntr-un stadiu de repaus al ciclului celular G0 n care creterea
nceteaz, iar sinteza proteinelor se reduce.
Uneori ciclul celular mai prezint un punct de restricie situat la
tranziia ntre faza G2 i faza M. La organismele animale un astfel de punct
de control este ntlnit la ovocite. Astfel, ovocitele vertebratelor pot rmne
blocate n G2 perioade foarte lungi de timp, pn cnd, stimularea hormonal
permite trecerea n faza M.
Desfurarea ciclului celular este reglat de factorii de cretere, dar i
de succesiunea n diferite stadii ale ciclului. De exemplu, este foarte
important ca celula s nu nceap mitoza nainte de terminarea replicrii
genomului. Aceast coordonare ntre diferitele faze ale ciclului celular este
dependent de un sistem de puncte de control i de feedback-uri ce mpiedic
intrarea n fazele urmtoare, naintea finalizrii evenimentelor din faza
curent.
Exist cteva puncte de control care au rolul de a mpiedica replicarea
i transmiterea la celulele fiice a cromozomilor deteriorai sau incomplei.
1- punctul de control n faza G2- mpiedic iniierea mitozei naintea
terminrii replicrii ADN. Dac apare o deteriorare a ADN (exp. cauza
iradierea) aceast oprire n G2 ofer posibilitatea reparrii leziunilor ADN
nainte ca ele s fie transmise celulelor fiice. Nu se cunosc mecanismele prin
care ADN nereplicat sau deteriorat semnalizeaz oprirea la acest punct de
control.

40
Biologie celulara si moleculara

2- punctul de control din faza G1-permite repararea defectelor ADN


nainte de intrarea n faza S, unde ADN deteriorat ar fi replicat incorect. La
mamifere oprirea n punctul de control G1 este mediat de proteina p53 ,
care este activat rapid ca rspuns la prezena unor leziuni la nivelul ADN.
Gena care codific p53 este frecvent mutant
n celulele canceroase. Mutaiile genei p53
mpiedic oprirea ciclului n G1 ca rspuns la
lezarea ADN, astfel nct, acest ADN va fi transmis
la celulele fiice fr s mai fie reparat. Acest
transmitere a ADN lezat are ca rezultat creterea
frecvenei mutaiilor i a instabilitii generale a
genomului precum i apariia cancerului.
3- punctul de control de la sfritul mitozei- acesta supravegheaz
alinierea cromozomilor n fusul mitotic asigurnd distribuia exact a unui
set complet de cromozomi la celulele fiice.

Mecanismele moleculare de reglare ale ciclului celular


Un factor care actioneaz ca reglator general al tranziiei de la G2 la M
este denumit factorul promotor al maturrii (MPF=maturation promoting
factor), a fost identificat n citoplasma ovocitelor stimulate hormonal.
Tabel 13.1 Etapele formrii moleculelor reglatoare

Etapele ciclului celular Reglatori moleculari

Sinteza ciclinei B
Faza S
Ciclina B formeaz complexe cu Cdc1
Kinaza Cdc1 este activat,
Faza S si G2 Cdc1 este fosforilata pe treonina 161
Cdc1 este dublu fosforilata pe treonina
14 i tirozina 15

Activarea complexuluiCdc1/ciclina B ca
urmare a defosforilrii treoninei 14 i
G2 - Mitoza tirozinei 15 de ctre o fosfataz proteic
numit Cdc25.

41
Biologie celulara si moleculara

Activarea Cdc1 declaneaz degradarea


ciclinei B, care are loc prin proteoliza
mediata de ubiquitina.

Degradarea ciclinei B duce la inactivarea


Ieirea celulei din mitoz Cdc1

PIP 2 (fosfatidilinozitol 4,5-difosfat) regleaz


formarea actinei i controlul formrii inelului
Citokineza contractil ce va separa cele 2 celule fiice

Activarea calmodulinei ai /sau protein


kinazei C poate de asemenea, asigura
feedback-ul pentru efectorii PIP 2 i reglarea
GTP-aza pentru reglarea polimerizrii actinei

Un alt tip de reglator este cel al proteinelor de tip cicline. Aceste


proteine au fost identificate n citoplasma celulelor, fiind acumulate n
interfaz i degradate spre sfritul fiecrei mitoze. Aceste proteine sunt de
mai multe tipuri (ciclina A i ciclina B) i funcioneaz ca inductori ai
mitozei, acumularea i distrugerea lor controlnd intrarea i ieirea din faza
M.
MPF este alctuit din dou subuniti: Cdc1 i ciclina B. Ciclina B
este o subunitate reglatoare necesar pentru activitatea catalitic a protein
kinazei Cdc1, confirmnd ipoteza ca activitatea MPF este controlat prin
acumularea i degradarea ciclinei B n timpul derulrii ciclului celular (Tabel
13.1).

Factorii de cretere i ciclinele D


Cile de semnalizare intracelular situate n aval de receptorii pentru
factorii de cretere au un rol important n reglarea mecanismelor moleculare
care permit desfurarea ciclului celular.
Astfel, sinteza ciclinei de tip D este indus ca rspuns la stimularea
prin factorii de cretere . Ciclinele de tip D sunt sintetizate att timp ct
factorii de cretere sunt prezeni.

42
Biologie celulara si moleculara

Atat timp ct factorii de cretere sunt prezeni in G1, complexele Cdk4


(cyclin-dependent kinases)/ciclina D permit celulelor s depeasc punctul
de restricie. Dac acest lucru nu are loc atunci vor intra n faza G0.
Deoarece ciclina D este o inta pentru semnalizarea prin factorii de
cretere este de ateptat ca deficienele care apar n controlul sintezei ciclinei
D s contribuie la dereglarea mecanismelor de control al proliferrii
celulelor, care devin astfel canceroase.
De exemplu, mutaiile care determin expresia continu necontrolat a
ciclinei D, contribuie la apariia mai multor cancere umane cum ar fi:
limfoamele, cancerele de sn. De asemenea, mutaiile care inactiveaz
inhibitorii Cdk (de exemplu p16) ce se leag la complexele Cdk/ciclina D
sunt frecvente n celulele umane canceroase.
Legtura dintre ciclina D, controlul creterii i cancer este evideniat
de proteina Rb (retinoblastoma ) care este produsul unei gene
tumorosupresoare, a crei inactivare duce la dezvoltarea tumorii.
n timp ce proteinele oncogene cum ar fi Ras i ciclina D determin
proliferarea celular, proteinele codificate de genele tumorosupresoare
acioneaz ca frne care ncetinesc desfurarea ciclului celular.
Alte tipuri de reglatori ai ciclului celular codificai de genele
tumorosupresoare sunt inhibitorii Cdk, care se leag de complexele
Cdk/ciclina D i proteina reglatoare a creterii p53.

43
Biologie celulara si moleculara

Figura 13.3 Reglarea ciclului celular de cicline i inactivarea proteinei


retinoblastoma (Rb) dup Expert reviews in Molecular medicine 2002 Cambridge
University Press

Rb are un rol cheie n cuplarea mecanismelor ciclului celular cu


expresia genelor necesare pentru derularea ciclului celular i sinteza ADN.
De exemplu, fosforilarea Rb de ctre Cdk/ciclina D are loc cnd celula trece
prin punctul de restricie G1 (Figura 13.3). n forma sa nefosforilat (n G0
sau la nceput de G1), Rb se leag de factorii de transcripie E2F (factor de
transcripie) ce controleaz expresia genelor implicate n derularea ciclului
celular i replicarea ADN, precum i a unor gene care codific enzimele
necesare pentru sinteza dezoxiribonucleozid trifosfailor.
Rb acioneaz ca un comutator molecular care transform E2F din
supresor, n activator al genelor implicate n sinteza ADN i derularea
secvenial a ciclului celular.

Semnale inhibitorii n derularea ciclului celular-cancerul


Proliferarea celulelor este controlat nu numai de factorii de cretere, ci
i prin diferitele semnale care inhib derularea ciclului celular. De exemplu,
agenii care produc lezarea ADN determin oprirea ciclului celular, pentru a
permite celulei s repare ADN lezat. De asemenea, contactele intercelulare
sau ali factori extracelulari acioneaz de obicei ca inhibitori pentru
proliferarea celulelor int. Efectele acestor semnale inhibitoare sunt mediate
prin reglatori ai ciclului celular reprezentai de inhibitori ai Cdk.
De exemplu protein p53 este un factor de transcripie a crui funcie
principal este de a stimula expresia inhibitorului Cdk, p21. Protein p21
inhib mai multe complexe Cdk- cicline, ca urmare a activrii sale de ctre
protein p53, n acest fel contribuie la oprirea ciclului celular ca rspuns la
lezarea ADN.
De asemenea, protein p21 poate inhiba direct replicarea ADN, prin
legarea la antigenul nuclear al proliferrii celulare (PCNA), care este o
subunitate a ADN polimerazei .
Cel mai bine caracterizat inhibitor extracelular al proliferrii celulare
este TGF, un factor polipeptidic ce inhib proliferarea multor tipuri de
celule epiteliale prin blocarea ciclului celular n G1.
Aceast aciune pare s fie mediat prin activarea inhibitorilor CdK,
p15 i p 27 care se leag la complexele Cdk4/ciclina D. n absena Cdk 4,
fosforilarea Rb nu mai are lor i ciclul celular se oprete n G1.

44
Biologie celulara si moleculara

n unele celule de mamifere, mesagerul secundar AMPc inhib


proliferarea celulelor n G1, prin activarea inhibitorului Cdk, p27.
Studiul celulei canceroase contribuie la nelegerea mecanismelor de
reglare a activitilor celulare. Celulele canceroase cresc i se divid ntr-o
manier necontrolat invadnd esuturile i organele normale.
Cancerul rezult din proliferarea oricrui tip de celul din organism,
astfel nct exist mai mult de 100 de tipuri de cancere, care difer dupa
comportamentul sau dup rspunsul la tratament.
Cea mai important problem n patologia cancerului este distribuia
ntre celulele maligne i cele benigne. O tumor este o anomalie a
proliferrii celulare. Tumora benign rmne limitat n zona de origine, n
timp ce forma malign este capabil s invadeze esutul normal din jur i s
disemineze prin organism prin sistemul sanguin sau limfatic, n procesul
numit metastazie.
La nivel celular, evoluia cancerului presupune un proces cu mai multe
etape care implic mutaii i selecia celulelor cu capacitate de proliferare,
metastazare, supravieuire i invazie.
Prima etap, iniierea, este determinat de modificarea genetic care
induce proliferarea anormal a unei singure celule. Apoi proliferarea
acesteia determin formarea unei populaii clonale de celule tumorale.
Evoluia tumorii ncepe cu o mutaie suplimentar ce are loc n
celulele din populaia tumoral. Unele mutaii confer celulei un avantaj
selectiv, cum ar fi creterea mai rapid. Procesul este numit selecie clonal,
ntruct noua clon de celule tumorale a evoluat pe baza unei viteze mari de
cretere sau pe baza altor proprieti (supravieuire, invazie, metastazare),
care i confer un avantaj selectiv.

Particulariti ale celulelor canceroase


1. Celulele canceroase prezint anomalii ale mecanismelor de
proliferare i n special este remarcat absena inhibiiei dependent de
densitate. Celulele canceroase nu rspund la semnalele care produc ncetarea
proliferrii celulelor normale i intrarea acestora n stadiul G0, ci continu
s se divid atingnd densiti celulare crescute.
2. O alt diferen fa de celula normal se refer la necesarul de
factori de cretere care este redus, n cazul celulelor canceroase atat in
vitro ct i in vivo.

45
Biologie celulara si moleculara

n unele cazuri celulele canceroase pot s produc factori de


cretere, realiznd o stimulare autocrin fiind astfel, mai puin dependente
de factorii extracelulari, fiziologici.
Dependena redus a celulelor canceroase fa de factorii de cretere
se explic i prin anomaliile existente pe unele ci de semnalizare
intracelular.
Dintre acestea menionm:

dereglarea activitii receptorilor pentru factorii de cretere


mutaii ale proteinelor Ras sau ale proteinelor kinazelor,
care sunt elemente de transducie a semnalului, ce determin
proliferarea celular.
3. Adezivitatea foarte redus face ca aceste celule s poat invada
sau metastaza alte esuturi. Adeziunea foarte redus este i rezultatul alterrii
morfologiei citoscheletului, multe celule tumorale, au o form mult mai
sferic dect celulele normale, deoarece sunt mai slab ataate la celulele
vecine sau la matricea extracelular.
4. De asemenea, celulele maligne secreta proteaz care digera
componentele matricei extracelulare, permindu-le s invadeze esuturile
sntoase. De exemplu, secreia de colagenaz explic nsuirea
carcinoamelor de a digera i ptrunde prin membrana bazal pentru a invada
esutul conjunctiv subiacent.
5. n plus, celulele canceroase secret factorii de cretere care
stimuleaz formarea de noi vase de snge fenomen numit angiogenez.
Angiogeneza este necesar pentru a susine creterea dimensiunii
tumorii ce cuprinde peste un milion de celule. Aceste vase se formeaz ca
rspuns la factorii de cretere, produi de celulele tumorale, care stimuleaz
proliferarea celulelor endoteliale din pereii capilarelor din esutul sntos
nconjurtor.
6. Celulele canceroase au ca i caracteristic lipsa capacitii de
difereniere, astfel c, rmn ntr-o faz iniial a diferenierii, practic nu-
i termin diferenierea. Acest lucru face ca ele s-i menin nivelul de
proliferare ridicat.
7. Lipsa reaciei la semnalele extracelulare face ca aceste celule s nu
intre n apoptoz (moartea celular programat), ceea ce le face mai
rezistente la radiaii i la chimioterapeuticele care lezeaz ADN.

46
Biologie celulara si moleculara

Genetica bolii canceroase

Cancerul este un termen generic pentru o gam extrem de


larg de boli caracterizate prin alterarea proceselor de cretere i proliferare
celular.

Proliferarea celular necontrolat are ca rezultat formarea


unei mase celulare numite tumor sau neoplasm (gr. neo = nou, plasein = a
forma). Procesul de formare a unei tumori este denumit tumorigenez.
Neoplasmele maligne invadeaz esuturile nvecinate i adesea metastazeaz
(disemineaz) coloniznd teritorii aflate la distan, trsturi care le disting
pe acestea de tumorile benigne

Cauzele care conduc la apariia cancerelor sunt numeroase i


variate i includ factorii de mediu, predispoziia genetic i vrsta. Aceti
factori determin sau contribuie la transformarea celulelor normale n celule
canceroase prin perturbarea unui spectru larg de ci fiziologice. Aceast
complexitate a mecanismelor fiziopatologice este principala piedic n
dezvoltarea unor mijloace terapeutice specifice i eficiente.

Indiferent de etiologie ns, toate cancerele apar ca urmare a unor


evenimente genetice i epigenetice. Majoritatea acestor evenimente se
produc n cursul vieii individului, la nivelul celulelor somatice. n absena
reparrii lor, aceste mutaii somatice sau dobndite se vor transmite la
celulele fiice, conducnd la formarea unei clone. Deoarece apar la nivelul
celulelor somatice, asemenea mutaii nu pot fi ns transmise n succesiunea
generaiilor de organisme; ele nu sunt ereditare.

Uneori, anumite mutaii care predispun la apariia cancerului


apar la nivelul celulelor germinale. Asemenea mutaii germinale se transmit
de la o generaie la alta i au ca rezultat agregarea familial a unor cancere
specifice.

Indiferent dac un cancer apare spontan la un singur individ


sau se produce la mai multe persoane dintr-o familie, ca un caracter ereditar
cancerul este considerat o boal genetic deoarece iniierea i dezvoltarea
unei tumori implic producerea n cascad a unor mutaii multiple, n diferite
gene care controleaz proliferarea celular, repararea ADN, ciclul mitotic i

47
Biologie celulara si moleculara

moartea celular. Aceste gene pot fi separate n dou categorii majore:


oncogenele i genele supresoare de tumori.

Oncogenele reprezint variantele mutante


(activate) ale unei clase de gene normale numite
protooncogene. Activarea acestor gene este
rezultatul unor mutaii cu ctig de funcie.
Oncogenele au efect dominant la nivel celular; ca
atare, o singur alel mutant (activat) este
suficient pentru modificarea fenotipului celular.

Genele supresoare de tumori sunt gene care


blocheaz dezvoltarea neoplaziilor maligne prin
reglarea creterii i proliferrii celulare. Mutaii cu
pierderea funciei acestor gene conduc la proliferare
i cretere celular necontrolate i la apoptoza
ineficient. Genele supresoare de tumori se
manifest ca gene recesive la nivel celular, pentru
convertirea fenotipului fiind necesar pierderea sau
mutaia ambelor alele (inactivarea alelic).

Oncogenele

Primele date despre existena oncogenelor au fost aduse la sfritul


anilor '60 prin studiul unor virusuri capabile s induc dezvolarea unor
tumori la diverse specii animale. Genele celulare normale au fost denumite
protooncogene, iar variantele lor activate oncogene celulare (c-onc).

Au fost identificate i virusuri oncogenice umane. Printre acestea se


numar att virusuri ARN (precum virusul HTLV1 implicat n etiologia
leucemiilor adulte cu celule T sau virusul hepatitic tip C care determin
cancere hepatocelulare), ct i virusuri cu genom ADN (cum sunt, de
exemplu, virusul Papilloma HPV implicat n producerea cancerelor
tractului genital, virusul hepatitic tip B hepatocarcinoame, virusul
Epstein-Barr limfomul Burkitt, virusul HV40 mezotelioame sau virusul
herpetic tip 8 sarcomul Kaposi).

48
Biologie celulara si moleculara

Tabelul 13.2 Exemple de oncogene activate n cancerele umane, dup


Covic, 2004.

Oncogena Localizarea Funcia proteinei codificate


cromosomic

ABL
9q34.1 tirozin kinaza citoplasmatic

CCND1
11q13 ciclina D1 implicat n controlul
ciclului celular

EGFR
(ERBB1) 7p12.3-p12.1 receptorul pentru factorul de
cretere epidermal

ERBB2
(HER2/neu) 17q21.1 receptor membranar tirozin kinazic
nrudit cu EGFR

MDM2
12q14.3-q15 reglator al activitii proteinei p53

MET 7q31 receptor transmembranar pentru


factorul de cretere

hepatocitar (HGF)

MYC 8q24.1 factor de transcripie

MYCN 2p24.1 factor de transcripie

MYCL1 1p34.3 factor de transcripie

PDGFB 22q13.1 subunitatea a factorului de


cretere derivat din plachete

49
Biologie celulara si moleculara

HRAS 11p15.5 proteina G citoplasmatic

KRAS2 12p12.1 proteina G citoplasmatic

NRAS 1p13.2 proteina G citoplasmatic

RET 10q11.2 receptor transmembranar tirozin


kinazic pentru factorul neurotrofic

derivat din celulele gliale (GDNF)


i pentru neurturina

n prezent sunt cunoscute peste 100 oncogene. n funcie de


nivelul celular unde acioneaz proteinele codificate de acestea, oncogenele
pot fi clasificate n mai multe categorii (Tabel 13.2):

oncogene care codific factori de cretere (de


exemplu PDGFB);
oncogene care codific receptori ai factorilor de
cretere (de exemplu EGFR, RET);
oncogene care codific componente ale cilor de
semnalizare intracelular (de exemplu familia RAS,
gena ABL);
oncogene care codific proteine nucleare, n special
factori de transcripie (de exemplu MYC);
oncogene care codific proteine implicate n controlul
ciclului celular (de exemplu MDM2).

Fiind gene dominante, majoritatea mutaiilor responsabile de activarea


oncogenelor apar la nivelul celulelor somatice. Mutaiile germinale sunt
considerate a fi, foarte probabil, incompatibile cu dezvoltarea embrionar.
Sunt cunoscute totui dou excepii n care mutaiile oncogenelor pot fi
transmise de la o generaie la alta, determinnd forme ereditare de cancer:

50
Biologie celulara si moleculara

-neoplaziile endocrine multiple tip 2 determinate de mutaiile


oncogenei RET

-cancerul renal papilar ereditar produs prin mutaia oncogenei


MET.

Activarea oncogenelor n celulele somatice se poate realiza prin mai


multe mecanisme:

Activarea oncogenelor prin mutaii punctiforme.

Acest mecanism este ntlnit n cazul unor oncogene care


codific receptori transmembranari sau proteine citoplasmatice (exemple:
gena RET, familia genelor RAS etc.). De pild, genele RAS codific
proteine G (care leag guanozin-trifosfat GTP) implicate n cile de
transducie ale semnalelor.

Mutaiile punctiforme ale acestor gene conduc la sinteza unor


proteine RAS anormale, capabile s semnalizeze continuu, chiar n absena
GTP. Rezultatul este stimularea creterii celulare i transformarea tumoral.

Mutaiile RAS sunt observate n aproximativ


15% din toate cancerele (al doilea eveniment
mutaional ca frecven dup mutaia genei TP53),
dar mult mai adesea n unele forme de cancer, cum
sunt cele de colon, sn, plmni i vezica urinar. n
plus, genele RAS au fost documentate experimental a
fi inta mutaional a diveri carcinogeni.

Activarea oncogenelor prin translocaii cromozomice.

Uneori protooncogenele pot fi activate prin mutaii


cromozomice, cel mai adesea translocaii. Au fost descrise peste 40
asemenea translocaii cu potential activator al unor oncogene, n special n
leucemii i limfoame, dar i n unele sarcoame.

Exist dou mecanisme prin care translocaiile cromozomice


pot conduce la activarea oncogenelor. n unele cazuri punctele de ruptur
sunt localizate la nivelul intronilor a dou gene, rezultatul rearanjrii

51
Biologie celulara si moleculara

cromozomice fiind producerea unei proteine himerice, cu proprieti noi


(mutaie cu ctig de funcie). Cel mai cunoscut exemplu este translocaia
ntre cromosomii 9 i 22 ntlnit n leucemia mieloid cronic.

Alteori translocaia activeaz o oncogen prin plasarea acesteia n


apropierea unui promotor puternic din structura altei gene. Un asemenea
exemplu l constituie activarea oncogenei MYC n limfomul Burkitt prin
plasarea acesteia din poziia sa normal (8q24) n proximitatea promotorului
genei pentru lanul greu al imunoglobulinelor (14q32), foarte activ n
celulele B care sintetizeaz Ig.

Activarea oncogenelor prin amplificare genic.

Amplificarea genic este un fenomen care are ca rezultat


producerea mai multor copii ale unor oncogene normale structural.
Fenomenul este responsabil de activarea unor oncogene precum cele din
clasa MYC i ERB .

Activarea oncogenelor prin inserie viral.

Retrovirusurile oncogene, ca de exemplu HTLV1,


ndeplinesc rolul unor vectori, transportnd oncogene activate de la un
organism la altul. Virusurile ADN acioneaz ns prin inseria n genomul
gazd a unor oncogene fr corespondent uman (ca, de pild, gena pentru
antigenul T al virusului SV40 implicat n etiologia mezotelioamelor, ori
antigenele E6 i E7 ale papilomavirusului tip 16 implicat n producerea
cancerelor de col uterin).

Mezoteliomul malign este o tumor cu originea n celulele mezoteliale,


care alctuiesc majoritatea foielor seroaselor (structuri speciale, foarte
fine, care delimiteaza cavitile.

Leucemia mieloid cronic (LMC)

LMC este o boal caracterizat prin


expansiunea clonal a celulelor stem hematopoietice

52
Biologie celulara si moleculara

transformate malign, ceea ce are drept rezultat o


cretere a numrului celulelor mieloide, eritroide i
al plachetelor circulante. Transformarea celulelor
circulante are loc ca rezultat al expresiei oncogenei
himerice BCR-ABL.

Aproximativ 95% din pacienii cu LMC au un


cromozom Philadelphia, produs prin translocaia
t(9;22), iar restul au translocaii complexe sau
variante ale translocaiei principale. Protooncogena
ABL (Abelson) care codific o tirozin kinaz
citoplasmatic este localizat pe cromozomul 9q34,
iar gena BCR (breakpoint cluster region), ce codific
o fosfoprotein, este localizat pe cromozomul
22q11.

n cursul formarii cromosomului Philadelphia


gena ABL este rupt la nivelul intronului 1, iar gena
BCR cel mai adesea la nivelul intronului 11. n urma
translocaiei, la nivelul cromosomului 22 se
formeaz gena himeric BCR-ABL alctuit din
exonii 1-11 ai genei BCR i 2-11 ai genei
ABL.

Pn n prezent nu se cunosc pe deplin


funciile proteinelor BCR i ABL. Proteina ABL se
gsete n citoplasm, nucleu i la nivelul membranei
celulare i intervine n multiple procese: controlul
ciclului celular, semnalizarea integrinic i
dezvoltarea neural.

Proteina BCR este implicat n reglarea


activitii proteinelor din familia RAS i a GTP-
azelor RAC i RHO. Spre deosebire de proteina ABL
normal, proteina himeric are activitate tirozin
kinazic constitutiv i este localizat n principal n

53
Biologie celulara si moleculara

citoplasm, unde se leag intens de microfilamentele


de actin.

BCR-ABL fosforileaz cteva substraturi


citoplasmatice i activeaz, probabil, o serie de
cascade de semnalizare care controleaz creterea i
diferenierea, precum i adeziunea celulelor
hematopoietice. Proliferarea necontrolat a
celulelor stem hematopoietice conduce la eliberarea
n circulaie a unor celule imature, genernd LMC.

In cursul progresiei LMC pot apare


modificri cromosomice noi, precum trisomia 8 sau
19, i(17q) ori un al doilea cromozom Philadelphia.
Apariia acestor modificri are ca rezultat debutul
crizei blastice.

Din punct de vedere clinic LMC se


caracterizeaz prin evoluie trifazic. Stadiul iniial
(sau cronic) este caracterizat prin debut insidios cu
manifestri precum pierderea ponderal,
splenomegalia minim sau moderat. n timp, LMC
evolueaz spre o faz accelerat i apoi spre criza
blastic caracterizat prin leucocitoz progresiv,
anemie, trombocitoz sau trombocitopenie, febr,
accentuarea splenomegaliei i leziuni osoase, cu
evoluie fatal rapid.

Metodele de tratament utilizate constau n


transplantul medular sau administrarea de alpha
interferon pentru cei fr donori compatibili.
Administrarea altor citostatice are efecte numai pe
scurte perioade de timp.

Identificarea proteinei de fuziune BCR-ABL a


condus la sinteza unui inhibitor specific (Imatinib
mesylate Gleevec) capabil s induc moartea prin

54
Biologie celulara si moleculara

apoptoz exclusiv a celulelor care exprim proteina


anormal.

Imatinib mesylate-ul este un medicament


extrem de eficient i a devenit rapid agentul
terapeutic de elecie pentru cazurile noi de LMC
pentru care nu este indicat transplantul medular
alogenic.

Genele supresoare de tumori

Experimentele de fuziune celular au evideniat faptul c fenotipul


transformat al unei celule tumorale poate fi adesea corectat prin fuziunea
celulei maligne cu una normal. Aceasta arat c tumorigeneza implic
nu numai activarea dominant a unor oncogene, dar i mutaii cu pierderea
funciei ale altor gene. Aceste gene au fost denumite gene supresoare de
tumori (tumor-suppressor genes). Deoarece celulele rezultate n urma
acestor fuziuni sunt cu certitudine heterozigote, genele supresoare de
tumori au efect recesiv la nivel celular.

Dei genele supresoare de tumori au efecte recesiv la nivel celular,


posibilitatea apariiei unei mutaii care s inactiveze a doua alel n cel puin
o celul a organismului este crescut i, ca urmare, retinoblastomul ereditar
(ca i alte boli genetice produse de motenirea unor asemenea mutaii ale
genelor supresoare de tumori) au un model de transmitere dominant. Exista
ns i forme ereditare de cancere determinate prin transmiterea unor mutaii
germinale dar n care modul de transmitere a bolii este unul recesiv.

Studiile citogenetice au permis identificarea mai multor mecanisme


de inactivare a celei de-a dou copii a unei gene supresoare de tumori n
cancerele ereditare:

deleii;
recombinri somatice prima dovad a existenei
acestui fenomen la nivelul celulelor somatice;
pierderea unui cromozom;
pierderea unui cromozom asociat cu duplicaia
cromozomului restant;

55
Biologie celulara si moleculara

Pierderea heterozigozitii este mecanismul cel mai frecvent de


inactivare a celei de-a doua alel, n cancerele ereditare produse prin
motenirea unei gene supresoare de
tumori mutante. Cnd pierderea
heterozigozitii nu este observat, cel
de-al doilea eveniment mutaional este
de regul o mutaie punctiform sau
Genele supresoare de
inactivarea transcripional a celei de-a
tumori codific proteine cu
doua alel printr-un eveniment
funcii extrem de diverse:
epigenetic.

Identificarea genelor
supresoare de tumori a fost realizat receptori membranari
prin dou categorii de studii: (precum PTCH);

clonarea poziional a genelor


implicate n producerea unor proteine citoplasmatice (de
forme rare de cancere ereditare exemplu: APC, NF1);
;
analiza fragmentelor
cromozomice care sufer proteine nucleare (TP53,
frecvent deleii n cancerele RB1, VHL, WT1, ATM,
sporadice (prin studii de BRCA1 etc.).
pierdere a heterozigozitii ori hibridizare genomic comparativ).

Pe lng implicarea lor n producerea unor cancere ereditare,


genele supresoare de tumori sunt inactivate adesea i n cazul cancerelor
sporadice. Inactivarea genei TP53 este, de exemplu, cel mai frecvent
eveniment mutaional ntlnit n cancerele sporadice (circa 50% din acestea,
dar cu frecvene mai mari n anumite localizri: cancerele mamare,
colorectale, vezicale, pulmonare, cervicale etc.).

Alte gene supresoare de tumori care sunt frecvent inactivate


n cancerele sporadice sunt APC (in aproximativ 70% dintre cancerele
colorectale), NF1 (n cancerele cu origine n celulele nervoase), genele MMR

56
Biologie celulara si moleculara

n circa 15% dintre cancerele colorectale, n timp ce mutaiile BRCA1 i


BRCA2 sunt ntlnite relativ rar n cancerele de sn i ovar sporadice.

Anomalii citogenetice n cancer

Anomaliile citogenetice sunt consecina instabilitii genomice -


caracteristic tuturor cancerelor i responsabil de creterea numrului
mutaiilor care conduc la dezvoltarea neoplaziilor. Exist trei categorii
majore de anomalii cromozomice care pot fi ntlnite n cancer: anomalii
numerice, anomalii structurale i amplificri genice.

Anomaliile cromozomice numerice implic pierderea sau ctigul


unor cromozomi n ntregime aneuploidie. Numrul cromozomilor poate fi
redus hipoploidie, crescut hiperploidie sau aparent normal
pseudodiploidie.

Asemenea modificri sunt ntlnite n majoritatea tipurilor tumorale.


In general nu exist anomalii numerice specifice pentru un anumit tip
tumoral, dei unele variante pot fi ntlnite mai frecvent n unele forme de
cancer.

Asemenea exemple sunt pierderea cromozomului 10 n glioblastoame


(reflectnd adesea inactivarea genei supresoare de tumori PTEN), ori adiia
unui cromozom 7 n carcinoamele renale papilare (reflectnd duplicaia
oncogenei MET).

Aneuploidia poate explica mai bine dect mutaiile unor gene


izolate modificrile fenotipice dramatice ale celulelor canceroase
(deoarece sunt implicate sute sau mii de gene) i poate explica de
asemeni, mai bine, latena aciunii unor carcinogeni ori dobndirea rapid
a rezistenei multiple a celulelor tumorale la agenii citostatici.

Una dintre direciile majore de cercetare n cancer este


identificarea genelor care controleaz aparatul mitotic, inte n
generarea instabilitii cromozomice.

GENA TP53

57
Biologie celulara si moleculara

Inactivarea sa n culturile celulare este


asociat cu apariia aneuploidiei, anomalii ale
fusului de diviziune i cu blocarea progresiei prin
ciclul celular la nivelul punctului de control G2/M.
Pe de alt parte, exist ns i linii celulare
cu mutaii ale genei TP53 care sunt diploide. Mai
mult, mutaia TP53 este un eveniment tardiv n
evoluia majoritii cancerelor, n timp ce
aneuploidia apare precoce. Toate aceste rezultate
sugereaz c TP53 poate exacerba instabilitatea
cromozomic, dar este puin probabil s fie o cauz
primar a acesteia.

Teoretic, genele implicate n producerea aneuploidiei pot controla


condensarea cromozomilor, coeziunea cromatidelor surori, funcia i
structura kinetocorilor i centrosomilor, ori dinamica microtubulilor.

Un prim punct de control este reglarea activitii fusului de diviziune


care prentmpin separarea cromatidelor surori nainte de alinierea
corespunztoare a cromozomilor la nivelul fusului mitotic. Astfel,
reducerea expresiei genei MAD2L1 (cromosomul 4q27) evideniat n
numeroase cancere mamare este asociat cu instabilitate cromozomic
tradus prin aneuploidie.

O a doua cauz potenial a aneuploidiei implic funcia


anormal a centrosomilor. In multe tipuri de cancere umane, cum sunt cele
de sn, plmn, colon sau prostata au fost evideniate fusuri de diviziune
multipolare sau un numr anormal de centrosomi.

Pn n prezent au fost identificate cteva gene care controleaz


activitatea centrosomilor i anume cele care codific kinazele CDK2,
STK15 ori PLK1.

Anomalii cromozomice structurale

Cea mai frecvent categorie de anomalii cromozomice


structurale ntlnite n cancerele umane este cea a translocaiilor. Pot fi

58
Biologie celulara si moleculara

evideniate dou categorii majore de anomalii structurale: tipul complex i


tipul simplu.

Tipul complex este observat n special n tumorile solide i const


n rearanjri complicate ce intereseaz mai muli cromozomi. Caracterizarea
lor este posibil adeseori numai prin metode bazate pe hibridizarea
fluorescent in situ (FISH) ori hibridizarea genomic comparativ (CGH).

O consecin frecvent a unor asemenea rearanjri complexe este


apariia cromosomilor marker, ntlnii frecvent n tumorile solide. De
asemeni, pot rezulta adeseori pierderi ale unor fragmente cromosomice mari
(traduse la nivel molecular prin pierderea heterozigozitii), ctiguri de
material genetic ori generarea unor noi produi genici.

Bazele moleculare ale apariiei anomaliilor cromosomice de


structur sunt nc incomplet nelese.

Tipul simplu de anomalii cromosomice de structur este


caracterizat prin apariia unor rearanjri care implic segmente cromozomice
adeseori specifice pentru anumite tipuri de neoplazii. Ele apar mai frecvent
n leucemii i limfoame ca i n unele tipuri de sarcoame sau forme rare de
cancer . Datorit specificitii lor, identificarea acestor forme de anomalii
cromosomice poate fi utilizat pentru clasificarea neoplasmelor i pentru
predicia rspunsului lor terapeutic.

Analizele moleculare ale unor asemenea anomalii cromosomice au


condus la identificarea unor noi gene, implicate n dezvoltarea cancerelor, n
special oncogene. Aceste rearanjri conduc n general la activarea
oncogenelor prin repoziionarea lor lng un promotor puternic sau prin
fuziunea cu o alt gen activ. Asemenea rearanjri specifice par s fie
eseniale pentru dezvoltarea sau progresia cancerelor n care apar.

Spre deosebire de tipul complex, tipul simplu de rearanjri


cromosomice nu pare s fie rezultatul unei instabiliti genetice care s
promoveze apariia lor cu o frecven mai crescut dect n celulele normale.
De fapt, multe dintre aceste anomalii structurale reprezint aberaii ale unor
procese normale de recombinare, precum cele promovate de proteinele RAG

59
Biologie celulara si moleculara

care intervin n rearanjri genelor ce codific imunoglobulinele sau receptorii


TCR.

Amplificrile genice

Amplificrile genice sunt evideniate citogenetic sub forma


regiunilor colorate omogen (homogeneously stained regions - HSR) ori a
cromosomilor minusculi (double minutes DMIN). Ampliconii rezultai
conin 0,5 - 10 megabaze ADN.

Rezultatul l reprezint apariia a zeci sau sute de copii ale unei


singure gene, n general protooncogene sau gene implicate n rezistena la
ageni antitumorali. Amplificarea genic este un fenomen ntlnit n
numeroase tipuri de cancere: colorecatale, de sn, cancerele capului i
gtului sau n neuroblastoame. Fenomenul este asociat n special fazelor
avansate de boal i implic un prognostic nefavorabil. Cteva exemple sunt
amplificarea N-MYC n 30% din neuroblastoamele avansate, ori
amplificarea ERBB2 (HER2/neu) n cancerele mamare avansate.

Mecanismele care conduc la apariia amplificrilor genice


sunt n cea mai mare parte necunoscute. O cauz potenial este mutaia
genei TP53, deoarece amplificrile genice apar mult mai frecvent n celulele
cu aceast gen inactivat. Oricum, bazele moleculare sunt cu siguran mai
complexe, ntruct fenomenul poate apare i n celulele tumorale cu gena
TP53 integra.

Evoluia multistadial a cancerelor

Cu puine excepii, cancerele se dezvolt dintr-o singur celul


somatic i din urmaii acesteia. In cursul evoluiei neoplazice clona
acumuleaz o serie de modificri genetice i epigenetice care determin
modificri fenotipice majore, n final lund natere o populaie de celule care
scap mecanismelor de control al creterii i proliferrii celulare, rezultatul
fiind dezvoltarea unui cancer.

60
Biologie celulara si moleculara

Conform modelului Weinberg, transformarea unei celule normale


ntr-o celul canceroas necesit 6-7 mutaii succesive. Rata tipic a
mutaiilor este ns 10-7 per gen i per celul. Ca urmare, probabilitatea
apariiei a 7 mutaii succesive ntr-o singur celul din cele circa 1013 ale
unui organism uman ar fi extrem de redus: 1013 x 10-42 = 10-29. Frecvena
crescut a cancerelor poate fi explicat prin intervenia a dou mecanisme:

- unele mutaii exacerbeaz capacitatea de proliferare celular,


determinnd naterea unei populaii crescute de celule int pentru
mutaiile urmtoare.
- unele mutaii determin instabilitatea ntregului genom,
crescnd rata global a mutaiilor.

Exacerbarea capacitii proliferative este consecina


mutaiilor proto-oncogenelor ori a genelor supresoare de tumori (subclasa
gatekeeper), care permit:

producerea autosuficient a semnalelor necesare creterii celulare;


insensibilitatea la stimulii care se opun creterii;
sustragerea de sub controlul mecanismelor apoptozei;
potenial replicativ nelimitat.

Instabilitatea genetic mbrac cele dou forme majore:

- instabilitatea microsateliilor (MIN) determinat de mutaii


ale genelor implicate n repararea erorilor de mperechere;
- instabilitatea cromosomic (CIN) determinat de mutaii ale
genelor care controleaz diverse componente ale aparatului mitotic.

Intre cele dou forme de instabilitate genetic exist o corelaie invers


aa cum se observ de exemplu n cancerele colorectale sau endometriale.
Cancerele cu MIN sunt n general diploide, iar cancerele aneuploide au n
general mecanisme eficiente de reparare a erorilor de mperechere. Ambele
forme de instabilitate genetic par a fi ns evenimente precoce n
dezvoltarea tumoral.

In cadrul evoluiei multistadiale a cancerelor unele evenimente sunt


ntlnite aproape obligatoriu. Acestea sunt: imortalizarea (dobndirea

61
Biologie celulara si moleculara

capacitii de proliferare nelimitat), apariia unor modificri epigenetice,


mutaii ale genomului mitocondrial, angiogeneza, invazia i metastazarea.

Imortalizarea celulelor tumorale

Celulele normale ale organismului uman pot suferi un numr


limitat de diviziuni (limita Hayflick) dup care intr ntr-un stadiu numit
senescena replicativ. Acest fapt se datoreaz scurtrii progresive a
telomerelor, care este rezultatul caracterului asimetric al replicrii celor dou
catene ale ADN.

S-a constatat c aproximativ 90% din cancerele umane au ns


telomeraza reactivat. Reactivarea telomerazei poate fi indus de ctre
oncogena MYC sau de ctre oncogena E6 a virusului Papilloma. Reactivarea
telomerazei nu este ns suficient pentru imortalizare, un alt eveniment
necesar fiind inactivarea cii P16-RB-E2F1 de control a ciclului celular.

Aproximativ 10% din cancerele umane sunt ns capabile s


menin lungimea normal a telomerelor i capacitatea de proliferare
necontrolat n absena reactivrii telomerazei. Recent s-a stabilit c aceast
trstur poate fi rezultatul mutaiei genelor care intervin n repararea
erorilor de mperechere (MMR).

Aceste gene sunt necesare pentru evitarea mutaiilor i pentru represia


recombinrii omologe. Cum secvenele telomerice nu sunt perfect omologe,
alterarea funciei acestor gene poate conduce la recombinri ntre capetele
cromosomice care pot avea ca rezultat meninerea lungimii telomerelor i, ca
urmare, a capacitii de proliferare. Pe de alta parte, deoarece mutaiile
genelor MMR cresc rata mutaiilor, creterea capacitii de proliferare
telomeraza-independent poate fi secundar apariiei unor mutaii la nivelul
genelor care influeneaz recombinarea telomerelor. De exemplu, unele
mutaii ale ADN-polimerazei pot avea consecine asemntoare.

Una dintre caracteristicile constante ale liniilor celulare


imortalizate este aneuploidia. Semnificaia i bazele moleculare ale acestei
asocieri sunt ns incomplet cunoscute.

Modificri epigenetice n cancer

62
Biologie celulara si moleculara

Expresia genelor poate fi reglat nu numai prin evenimente


genetice cum sunt mutaiile ori deleiile, ci i prin modificri epigenetice.
Principala modificare epigenetic rspunztoare de alterarea expresiei genice
este metilarea regiunilor promotor. Metilarea ADN uman apare la nivelul
poziiei 5' a citozinei din cadrul dubletelor C- .

Hipermetilarea este asociat cu un proces de dezacetilare a


histonelor, iar rezultatul este modificarea conformaiei structurale a
cromatinei. Hipermetilarea aberant este o caracteristic frecvent ntlnit n
cadrul cancerelor umane i este asociat adeseori cu inactivarea unor gene
supresoare de tumori.

Cum hipermetilarea se poate accentua o dat cu proliferarea


celular, aceasta poate conduce la grade diferite de inactivare a expresiei
genice, spre deosebire de inactivarea produs de mutaiile genice. Pe de alt
parte, hipermetilarea poate fi potenial reversibil.

De exemplu, n unele forme de cancer inactivarea prin hipermetilarea


promotorului genei CDH1 (care codific caderina E o protein implicat n
adeziunea celular) este un eveniment precoce care ar favoriza invazia
tumoral. Pe de alta parte, formarea unor agregate celulare care s permit
supravieuirea celulelor metastazate poate necesita reexprimarea caderinei E,
obinut prin reducerea regional a metilrii promotorului su.

Mutaii ale ADN mitocondrial

Genomul mitocondrial este mai vulnerabil la alterrile oxidative i sufer o


rat mai nalt a mutaiilor dect genomul nuclear. Tumorile prezint
adeseori mutaii ale ADNmt. Asemenea alterri au fost identificate n
cancerele de vezic urinar, sn, colon, cap i gt, rinichi, ficat, stomac, n
leucemii i limfoame.

Rata crescut a mutaiilor la nivelul genomului mitocondrial poate fi


explicat prin trei factori:

localizarea n apropierea lanului de transport al electronilor


care genereaz o concentraie crescut a speciilor reactive de
oxigen;

63
Biologie celulara si moleculara

existena unor capaciti limitate de reparare a leziunilor ADN-


ului mitocondrial n raport cu cel nuclear;
absena proteciei asigurate de histone i de organizarea sub
forma fibrelor de cromatin.

Deoarece ADNmt nu conine introni, majoritatea mutaiilor apar la


nivelul secvenelor codante. Fiecare tip de cancer analizat pare s
conin un model caracteristic al mutaiilor ADNmt. Aceasta conduce la
ideea ca aceste mutaii ar putea fi un component esenial n evoluia
tumorilor.

Exist mai multe explicaii posibile ale modului n care aceste mutaii
ar putea interveni n evoluia multistadial a cancerelor:
una dintre consecine ar putea fi creterea produciei radicalilor liberi
de oxigen care sporete i mai mult rata mutaiilor;
capacitii de glicoliz anaeroba care este o caracteristic comun
tuturor celulelor tumorale. Cantitatea de ATP astfel produs este ns
mai mic dect n celulele normale, ceea ce ar avea consecine asupra
capacitii acestor celule de a traversa ciclul celular i de a-i repara
leziunile ADN;
inseria unor fragmente ale ADNmt n interiorul genelor nucleare ar
putea fi o cauz a activrii unor oncogene. Astfel de fragmente ale
genelor ND4, citocromului c, oxidazelor I, II i III au fost identificate
n mai multe cazuri n interiorul unor gene nucleare.

64
Biologie celulara si moleculara

CAPITOLUL 14
DIFERENIERE I PLASTICITATE CELULAR

Diferenierea celular
Populaiile de celule
Inducia celular
Reglarea diferenierii celulare
Celule nedifereniate-celule stem
Diferena dintre celulele stem embrionare i cele adulte
Folosirea celulelor stem n tratamentul unor boli grave

Diferenierea celular

Diferenierea celular ct i dezvoltarea structurilor corpului trebuie


s fie reglate prin ci de semnalizare intercelulare care coordoneaz
activitile celulelor individuale i n final dau natere unor organisme
complexe cum sunt fiinele umane.
Dezvoltarea este iniiat de fuziunea spermatozoidului i ovulului n
momentul fecundrii. Oul fecundat sufer o serie de clivaje mitotice rapide,
care divid volumul mare de citoplasm din interiorul micilor celule, formnd
o morul i apoi o blastul.
Celulele blastulei se rearanjeaz pentru a forma trei straturi
germinative care dau natere diferitelor esuturi.

65
Biologie celulara si moleculara

Stratul germinativ extern, ectodermul d natere pielii i sistemului


nervos, stratul germinativ intern, endodermul d natere celulelor tractului
digestiv i la organe, cum sunt ficatul i pancreasul, iar stratul germinativ
median, mezodermul d natere esutului conjunctiv, muscular i celulelor
sanguine.
Celulele interacioneaz unele cu altele i sufer o serie de aranjamente
pentru a forma organele i esuturile corpului.
Un organism cum este cel uman este format dintr-un numr foarte
mare de celule foarte diverse ca form i ca funcie, aflate ntr-un proces
dinamic n timp i spaiu.
Astfel, un nou nscut are cteva mii de miliarde de celule (1012), iar
un adult are are mai multe milioane de miliarde (1015). Toate aceste celule
care provin dintr-o celul ou sunt genotipic identice, dar fenotipid diferite.
Celulele cresc i se divid, migreaz, se recunosc i ader (ntre ele sau
cu matricea extracelular), se difereniaz i mor.
Procesul prin care celulele cu aceeai informaie genetic, ajung s
difere considerabil ca form i funcie se numete difereniere. n acest
proces toate celulele au nevoie de ansamblul de molecule intercelulare, de
asemenea, de un aport de substane nutritive (prin snge) precum i de
interrelaiile stabilite prin semnalele electrice sau prin mesagerii chimici.
Deci, fiecare tesut este format dintr-un amestec de diferite tipuri de
celule (determinate genetic) care vor coexista n acelai mediu datorit
memoriei celulare aceasta menine starea de difereniere. De asemenea,
matricea intercelular secretat de celule contribuie i la meninerea
diferenierii.

Populaiile de celule
Diferitele tipuri de celule sau de populaii celulare pot fi sistematizate astfel:
- celule statice sau adulte- celule cu un anumit grad de difereniere, care nu
se mai divid, care adesea scad treptat ca numr cum sunt: celulele
cristalinului, neuronii, fibrele musculare, respectiv fibrele muchiului
cardiac, ovocitele.
Dup ce apar n cursul dezvoltrii embrionare
aceste celule se difereniaz i apoi se menin fr s
se divid n tot cursul vieii. Dac ele sunt distruse

66
Biologie celulara si moleculara

cum este n cazul celulelor miocardice, ca urmare a


infarctului miocardic, nu mai pot fi nlocuite.
-celule n tranzit celule provenite din celule precursoare, cu o existen
relativ scurt, care se sinucid prin maturare (spermatocite, keratinocitele,
mielocitele, neuroblastele, etc). Unele din aceste celule sunt capabile de
diviziune (spermatocitele) altele nu (spermatidele).
- celule adulte care i reiau proliferarea cand este nevoie s nlocuiasc
celulele lezate sau moarte. Printre celulele din acest tip menionm
fibroblastele pielii, celulele musculare netede, celulele epiteliale ale
organelor interne (pancreas, rinichi, plmni, prostat, snge.
Celulele ficatului n mod normal se divid
foarte rar. Dac se pierde un numr de hepatocite,
de exemplu prin ndeprtarea chirurgical a 2/3 din
ficatul unui obolan, celulele rmase sunt stimulate
s prolifereze, regenernd esutul lips n numai
cteva zile.
-celulele stem-celule capabile de automeninere, cu capacitate de renoire,
care persist pe tot parcursul vieii indivizilor. Deci, orice tip de celule din
organism, care sunt capabile s-i pstreze numrul prin proliferare pe tot
parcursul vieii, n ciuda pierderilor fiziologice sau patologice sunt definite
celule stem.
Celulele stem se divid i produc celule fiice, care se difereniaz sau
rmn celule stem, ce reprezint o surs pentru producia de celule
difereniate de-a lungul vieii. Diferenierea celulelor sanguine constituie cel
mai bun exemplu de proliferare continu a celulelor stem.
Eritrocitele, granulocitele i celulele
macrofage (care particip la fagocitoz), plachetele
(care sunt fragmente de megacariocite i au rol n
coagulare) i limfocitele (care induc rspunsul imun)
au o durat de via limitat (de la o zi la cteva
luni) i sunt produse prin diviziunea unei celule stem
comune- celula stem pluripotent- din mduva
osoas. Descendenii celulei stem pluripotente
urmeaz diferite ci de difereniere. Aceste celule
dup cteva diviziuni repetate pe msur ce se
difereniaz complet, i nceteaz proliferarea.

67
Biologie celulara si moleculara

Deci meninerea populaiilor de celule sanguine difereniate este dependent


de proliferarea continu a celulei stem pluripotente.

Tabel 14.1 Date comparative privind caracterele celulelor difereniate i


ale celor nedifereniate
Caracterele generale ale celulelor Caracterele generale ale
difereniate celulelor nedifereniate
Funcia principalul obiectiv Lipsa Singurul rol posibil
specific al diferenierii funciei al celulelor
celulare este specifice nedifereniate este
formarea unor celule acela de a da natere
foarte strict unor tipuri de celule
specializate specializate, n
funcional urma determinrii
succesive
Structura Celulele specializate Lipsa unei Toate celulele
specific au form i structur structuri nedifereniate sau
caracteristic specifice parial difereniate
corespunztoare unei se aseamn.
dezvoltri a Nucleul este
organitelor celulare eucromatic, are
necesare ndeplinirii dimensiuni mari n
funciei specifice raport cu
(celulele implicate n dimensiunile celulei.
sinteza de proteine au Citoplasma este
reticulul redus n raport cu
endoplasmatic rugos dimensiunile
i complexul Golgi nucleului, este slab
foarte dezvoltate) bazofil datorit
unui numr crescut
de ribozomi liberi.
Organitele celulare
sunt reduse ca
numr i puin
dezvoltate.
Compoziia Diferenierea este compoziii - Lipsa unei
chimic nsoit de chimice compoziii chimice
specific acumularea unor specifice
proteine specifice sau
de instalarea unei
68
Biologie celulara si moleculara

activiti enzimatice
specifice
Adeziunea Se realizeaz Adeziunea Celulele
pe substrat solidaritatea pe nedifereniate pot
i intercelular i substrat istabili jonciuni de
jonciunea formarea esuturilor jonciunea tip GAP, cu alte
i a organelor atunci celule cu care vin n
cand mai multe contact la un
pturi celulare vin n moment dat. Aceste
contact. jonciuni au
dimensiuni mai mici
dect cele realizate
ntre celulele
difereniate. Ele sunt
caracterizate printr-
un mare dinamism
(se desfac i se refac
cu rapiditate) se
pare c apariia lor
este corelat cu
momentul aciunii
unor inductori.
Inhibiia Celulele difereniate Capacitate Celulele
capacitii sunt greu divizibile mare de nedifereniate sunt
de sau indivizibile. Din diviziune rapid divizibile.
diviziune prima categorie, Astfel, n urma
indivizibile, fac parte aciunii inductorilor
neuronii, celulele are loc creterea
musculare, celulele numrului de celule.
cardiace); Celulele
divizibile care au un
ritm variat de
diviziune reglat n
funcie de necesiti
(hepatocitele).
Tesuturile n care
celulele specializate
au o durat de viat
foarte scurt datorit
unei funcionri
intense conin celule
tinere, incomplet

69
Biologie celulara si moleculara

difereniate, capabile
de diviziune pentru
autontreinere i
pentru refacerea
populaiei de celule
adulte specializate

Inhibiia Atunci cnd Inhibiia Celulele


de contact densitatea celulei de contact nedifereniate pot
dintr-un esut atinge migra, se pot divide
un anumit grad, i atunci cand
celulele sunt oprite densitatea celular
din migrare i atinge un anumit
proliferare grad, att micarea
ct i diviziunea
celular nceteaz.
Datorit acestei
proprieti pot veni
n contact, prin
migrare, cu alte
tipuri de celule,
moment n care se
opresc din migrare

Un agregat celular organizat pentru efectuarea unei funcii comune


speciale formeaz esutul. Conceptul de esut constuie o baz pentru
recunoaterea diferitelor tipuri de celule care alctuiesc un corp i totodat
pentru a nelege felul cum acestea conlucreaz.
Cu toat diversitatea morfologic i funcional, agregatele de celule
ce compun diferitele esuturi i organe, pot fi reduse i clasificate la 4 tipuri
de esuturi fundamentale: esutul epitelial, esutul conjunctiv, esutul
muscular, esutul nervos.
Fiecare dintre acestea se caracterizeaz printr-un set de nsuiri
morfologice generale i de proprieti funcionale. Fiecare tip poate fi
subdivizat pornind de la unele caractere specifice cum ar fi: substana
fundamental sau intercelular care prezint proprieti speciale.
esuturile epiteliale se caracterizeaz prin apoziie a celulelor
componente i printr-o polaritate i o suprafa liber a celulelor. Epiteliile se
clasific pe baza localizrii, a formei i aranjrii celulelor componente.

70
Biologie celulara si moleculara

Epiteliile sunt acele esuturi de o mare diversitate histochimic i


structural, avnd drept caracter morfologic comun faptul c, sunt alctuite
din agregate strnse de celule poliedrice, bogate n citokeratine, iar ca
nsuire fundamental, aceea de a realiza i controla homeostazia mediului
intern i autonomia organismului fa de mediul extern.

Forma i dimensiunile celulelor epiteliale variaz mergnd de la


columnare , cuboide, squamoase, incluznd i formele intermediare ale
acestora. Aspectul lor poliedric se datoreaz suprapunerii lor n straturi.
Nucleul are forme asemntoare cu cele ale celulelor, axul mare al nucleului
este totdeauna paralel cu axul mare al celulei, fapt important pentru
determinarea dispoziiei celulelor precum i pentru clasificarea epiteliilor.

n citoplasma celulelor epiteliale, organitele citoplasmatice ale


celulelor epiteliale nu prezint deosebiri eseniale, ci doar variaii cantitative
i topografice. n schimb matricea celular (hialoplasma sau citoplasma)
conine o serie de molecule organice specifice acestor epitelii.

S-a artat c dei numrul tipurilor de proteine din matricea celular


variaz foarte mult exist o serie de 6 tipuri de proteine fundamentale:
actina, i tubulin, proteinele filamentelor intermediare, clatrina,
spasmina (care se contract n prezena calciului) i calmodulina.

Aceste proteine alctuiesc citoscheletul matricei ca o reea principal


(cu filamente de actin i microtubuli), filamente intermediare ce cuprind
diferite proteine organizate sub form de fascicule i sub form de reele laxe
aa cum sunt citokinele. Celulele epiteliale sunt clasificate dup tipul
citokinelor coninute.

Celulele epiteliale se renoiesc prin activitate mitotic. Rata renoirii


poate fi rapid n epiteliul intestinal (2-5 zile) sau la 50 zile n pancreas. n
epiteliile stratificate, activitatea mitotic este n profunzime.
n anumite condiii patologice i fiziologice un anumit tip de esut
epitelial se poate transforma n alt tip de epiteliu, proces reversibil care se
numete metaplazie.

De exemplu, la fumtori epiteliul


pseudostratificat al cilor respiratorii se transform
n epiteliu pavimentos. De asemenea, avitaminoza,
atrage schimbarea aspectului epiteliului traheal i
vezical, care din pseudostratificate devin stratificat-
pavimentoase.

71
Biologie celulara si moleculara

Un alt epiteliu n care celulele prezint o mare plasticitate este epiteliul


de tranziie. Celulele n acest tip de esut i pot schimba forma n funcie de
condiiile ambiante, astfel este epiteliul vezicii urinare denumit i uroteliu.

Acesta apare sub forma unor celule turtite bistratificate, cnd vezica
urinar este plin sau apare nalt, format din trei tipuri de celule (celule
cubice profunde, celule n form de rachet i celule acoperitoare
superficiale, n form de umbrel). Aceste diferene sunt datorate adaptrii ca
barier la trecerea apei i a srurilor minerale. esutul de tranziie prezint de
asemenea, la suprafaa celulelor superficiale o ptur cu cheratin ceea ce
face acest esut s nu fie lezat de substanele nocive din urin.

esuturile conjunctive
Avnd n vedere morfologia elementelor componente si structura
substanei fundamentale, distingem trei mari categorii de esuturi
conjunctive:
- esuturi conjunctive proriu-zise sau moi cu rol de legtur
- esutul cartilaginos
- esutul osos
n cazul esutului conjunctiv propriu-zis, se ntlnesc numeroase celule,
a cror varietate este foarte mare, mprite n dou categorii: celule
autohtone i celule migratoare.

Celulele autohtone sunt reprezentate de fibrocite, histiocite,


plasmocite, mastocite, celule grase sau lipocite, celule pigmentare.
Celulele migratoare sunt reprezentate de elementele sanguine care
ptrund n reeaua conjunctiv: limfocite, monocite, leucocite (neutrofile,
acidofile, bazofile).
Dintre acestea, celula conjunctiv cea mai frecvent este fibroblastul,
acesta deriv din celule mezenchimatoase sau din fibroblaste preexistente. n
esutul conjunctiv aceste fibroblaste au dou variante: fibroblastul activ,
angajat n procese metabolice i fibroblastul n repaus funcional sau fibrocit.
Fibroblastul activ este o celul cu citoplasm abundent cu organite
bine reprezentate, au astfel un aparat de sintez dezvoltat, reprezentat printr-
un reticul endoplasmatic rugos, cu cisterne dilatate, cu numeroi
poliribozomi, un complex Golgi perinuclear, numeroase mitocondrii
filamentoase, lizozomi, centrul celular, microtubuli i microfilamente.

Microfilamentele sunt foarte dezvoltate n fibroblastele din jurul


plgilor pe cale de vindecare. Acestea joac rol important n procesele de

72
Biologie celulara si moleculara

vindecare i se numesc miofibroblaste (sunt prezente i n axul vilozitilor


intestinale).
Nucleul fibroblastelor este bogat n eucromatin i are doi nucleoli.
Membrana fibroblastelor prezint receptori specifici pentru diferite molecule
extracelulare (insulina, factorul de cretere, lipoproteine).
Fibrocitul (Figura 14.1) este o celul mic i alungit, cu prelungiri
bifurcate, cu nucleul heterocromatinizat i cu puine organite celulare. Bine
reprezentai sunt lizozomii sub form de autofagozomi.

Fibroblastele sunt celule care particip la formarea substanei


fundamentale, sintetizeaz i secret proteine fibroase i elastin,
glicozaminoglicanii care intr n alctuirea substanei fundamentale.

Figura 14.1 Fibrocit


Mastocitul este o alt celul din esutul conjunctiv, cu adaptri
funcionale deosebite, din lungul vaselor. Membrana mastocitelor conine
receptori specifici pentru imunoglobuline. n citoplasm se gsesc puine
organite celulare, RER redus, Ap. Golgi slab dezvoltat, ns prezint
numeroase vezicule granulare.
Funcia mastocitelor este ca la impactul antigen anticorp, la suprafaa
mastocitelor s apar complexele antigen-anticorp care duce la o eliberare a
veziculelor intracelulare ( Figura 14.2) pline cu: heparin (anticoagulant i
factor antilipemic), histamin (vasodilatatori determin creterea
permeabilitii vaselor i accesul apei i a serumproteinelor), factorul
chemostatic pentru eozinofile (substan reactiv n ocul anafilactic) i
serotonin (vasoconstrictor al musculaturii netede traheobronsice). Toate
aceste substane sunt mediatori chimici.

73
Biologie celulara si moleculara

Figura 14.2 Mastocit

Tot din categoria esutului conjunctiv fac parte i celulele adipoase


(Figura 14.3). n afar de celulele adipoase alb-galbene, mai exist esutul
adipos brun, format din celule de culoare ntunecat datorit unui citocrom
existent n mitocondrii. Nucleul acestor celule este central, au numeorase
mitocondrii i ribozomi, REN dezvoltat. Acest tip de esut adipos este bine
dezvoltat la embrion i la nou nscut, scade treptat cu vrsta.

El se pare c are rol n adaptarea extrauterin a noului nscut, funcia


principal fiind de a genera cldura organismului.
Frigul stimuleaz termogeneza care determin eliberarea de
norepinefrin n esuturi. Acest hormon activeaz lipaza din adipocite. n
celulele grase brune la nivelul mitocondriilor procesul de fosforilare
oxidativ este slab cuplat cu oxidarea. Insuficiena fosforlrii oxidative face
ca oxidarea acizilor grai s se desfoare cu vitez crescut i s nu se
sintetizeze ATP, ca urmare toat energia este ndreptat ctre eliberare de
cldur.

Figura 14.3 Adipocite

Sistemul reticuloendoplasmatic-histiocitar este format dintr-un


complex de celule de origine mezenchimal alctuit din celule foarte diferite
ca form i localizare i care este difuz rspndit n tot organismul, ca urmare
acest sistem are mai mult rol fiziologic
Celule caracteristice sunt:

74
Biologie celulara si moleculara

- celule migratoare (histiocite) din esutul conjunctiv lax


-celule reticulate din sistemul ganglionar limfatic (splin, ganglioni,
mduva oaselor, amigdale)
- celulele Kupffer din ficat
- celulele sinusurilor venoase din mduva osoas
- celulele alveolelor pulmonare

Funciile sunt: fagocitar (fa de germenii patogeni, celule


degenerate, celule sanguine, iar prin pinocitoz - toxine eliberate de
microorganisme), funcie metabolic (au proprietatea de a acumula i
transforma chimic lipide, proteine i produse de degradare a hemoglobinei;
elaborare anticorpi i citopoetic (produce elemente figurate);
granulopexia (atrocitoza) acumularea sub form de vacuole a compuilor
de origine extern (colorani, toxine, praf etc).

Aparent una din funcii predomin ntr-un esut anume. Funcia


metabolic n ficat, atrocitoza n plmn, citopoeza n mduv. n stri
patologice, orice celul a acestui sistem, i poate modifica toate
potenialitile. Histiocitele active, pentru a se putea deplasa printre esuturi,
prezint ca organite de micare membrane ondulante. Activitatea acestui
sistem este controlat de sistemul nervos central.
Timocitele sunt celule mari, mijlocii i mici produse de zona
cortical a timusului (organ limfoid cu cea mai mare activitate limfopoetic
din organism, n perioada neonatal, cu rol de coordonator al dezvoltrii i
meninerii structurilor i funciilor ganglionilor limfatici i ai splinei).
Timocitele sunt celule cu nucleul foarte mare, cromatin bogat, cu
unul sau mai muli nucleoli. ntre timocite i celulele epitelio-reticulare s-au
observat puni citoplasmatice prin care se face hrnirea timocitelor i se
transmit informaiile imunitare. Timocitele nu sunt imunologic active, dar
transmit competena lor limfocitelor din organele limfopoetice, conin un
factor care stimuleaz limfopoeza.
De asemenea, timocitele sunt implicate n metabolismul hidromineral,
n metabolismul fosforului i calciului, n metabolismul nucleoproteic i
lipidic.
esutul muscular are ca i celul caracteristic fibra muscular
striat. Aceasta este o celul ultraspecializat, capabil s se contracte de
1000 de ori mai mult dect propria greutate.

75
Biologie celulara si moleculara

Membrana fibrei musculare este de 9 nm grosime i apare trilaminat


ultrastructural. Celula poate avea sute de nuclei (20-40/cm), ei ocup 1% din
volumul fibrei, deoarece un nucleu din alte celule (mononucleate) ocup
cam 5-6% din volumul celulei, numrul mare de nuclei pare s provin i de
la celulele satelit, adiacente fibrelor musculare, situate sub lamina bazal.
Aceste celule satelit sunt de dimensiuni mici, alungite, turtite.
Fibrele musculare fiind celule difereniate nu se divid. Regenerarea
lor se realizeaz pe seama diviziunii celulelor satelite (celule mononucleate)
acestea pot funciona ca resurse pentru repararea fibrelor scheletice lezate.
Aceste celule inactive, n cazul unei leziuni musculare, se activeaz i
prolifereaz prin diviziuni i apoi fuzioneaz refcnd fibra scheletic sau
formnd o alt fibr de novo. Se pare c aceste celule au originea n pre-
mioblatii embrionar nedifereniai, a cror dezvoltare a fost stopat n cursul
miogenezei.
Aceste celule sunt caracterizate de nuclei mari heterocromatici, puin
citoplasm i cu puine organite.
Celulele musculare cardiace se caracterizeaz printr-o funcionare
sinciial, dei sunt separate. Celulele se dispun cap la cap, jonciunile au o
structur i funcionalitate special existent numai n miocard, formnd
discurile intercalare.
Fibrele cardiace ventriculare au in general un singur nucleu celular, el
este nconjurat de o poriune de citoplasm cu aspect granular n care se
gsesc granule de pigment galben pigment de uzur lipofuscin, care se
aglomereaz odat cu naintarea n vrst. Mitocondriile sunt cele mai
bogate, acestea reprezint 35% din volumul organitelor (n celulele fibrelor
scheletice 3-4%, n hepatocite 15%).
n celulele atriale exist vezicule secretorii specifice, localizate
perinuclear, care conin factorul natriuretic (factorul natriuretic atrial-FNA)
de natur polipeptidic care produce diureza, natriureza. Astfel, scade
tensiunea arterial i se reduce secreia de renin i aldosteron. FND este
prezent n sngele sanguin fiind cel mai puternic compus de semnalizare
natriuretic de origine endogen. Este de 3 tipuri:
A- la nivelul celulelor cardiace atriale;
B- la nivelul miocardiocitelor ventriculare;
C- situat n celule endoteliale ale vaselor de snge.

esutul nervos

76
Biologie celulara si moleculara

n alctuirea tesutului nervos se gsesc dou categorii de celule: celule


nervoase sau neuronii i celule de susinere nevroglice. Celulele nervoase se
caracterizeaz printr-o mare varietate de forme i de mrimi. Dac se ia n
considerare i prelungirile respective, mrimea suprafeei neuronale apare
enorm.
De exemplu, o celul din ganglionul spinal, are un diametru de 120
m, calculnd suprafaa corpului celular, aceasta este de 432.000 m 2. Dac
axonul are diametrul de 12 m i lungimea de 1m, suprafaa este de
36.000.000 m 2 (de 837 ori suprafaa celulei).
Celulele suport, nevroglii, sunt n numr de 10: 1 neuron, deoarece
sunt mai mici dect neuronii ocup 50% din volumul esutului nervos.
Acestea sunt de mai multe tipuri: astrocite, oligodendrocitele , microgliile,
glia ependimar. Toate au prelungiri numeroase i scurte, la microglii
expansiunile sunt cu aspect de spini.
Microgliile secret un polipeptid denumit factor de proliferare glial,
cu rol n cicatrizri.

Inducia celular
Toate specializrile i coneziunile intercelulare produc efecte
intracelulare (const n apariia n interiorul celulei a unor modificri
structurale succesive care sunt responsabile de apariia formei i structurii
specifice celulei difereniate) sau intercelulare (acumularea unor proteine
specifice, proteine cu funcii enzimatice, ce va avea ca rezultat funcional al
diferenierii, apariia unor funcii specifice fiecrui tip celular constituit).
Apariia celulelor difereniate, specializate presupune interaciunea
intim dintre anumii factori inductori i o populaie de celule (celule
induse).
Fenomenul de inducie explic un mare numr de fapte embriologice,
iar natura inductorilor poate varia, ei putnd aciona ca activatori ai genelor,
ca depresori ai transcripiei ARN mesager, etc.
Celulele aflate sub efectul inductorului nu sunt pasive, ci trebuie s se
caracterizeze prin capacitatea de a reaciona , numit competen i depinde
nu numai de gradul reacional, dar i de momentul n care se exercit
inducia.

77
Biologie celulara si moleculara

De obicei grupul de celule indus devine, el nsui, inductor pentru alte


grupe celulare nedifereniate nc. Procesul de inducie nu se exercit
ntotdeauna n acelai sens.
Circulaia informaiei este explicat prin:
1- ipoteza transferului de macromolecule informaionale de la inductor
la indus- in cursul diferenierii celulare, celulele stabilesc jonciuni de tip
gap, ce se formeaz i se desfac foarte repede. Aceste jonciuni sunt
permeabile pentru anumite molecule printre care se presupune c are loc un
transfer de molecule ARN reglator sau mesager, de la inductor la indus.
Prin procesul revers-transcripiei, n celula indus are loc sinteza unei
molecule de ADN pe substratul de ARN provenit de la inductor. n acest fel,
molecula ADN nou format este ncorporat n aparatul genetic al gazdei i
din acel moment devine reglatorul procesului de difereniere
2- celula indus gazd, deine ncorporate n genomul su mesajul
pentru programul diferenierii, program care nu se poate realiza dect sub
aciunea inductorilor de tip hormonal, polipeptide, neurotransmitori sau
factori de cretere.
Acetia se leag de receptorii specifici ai membranei celulei induse i
declaneaz aciunea unor mesageri chimici de tipul AMPc, GMPc. Acetia
vor determina apariia a unor produi de metabolism ce vor aciona asupra
aparatului genetic din nucleu.
Modificrile genetice survenite sunt transmise citoplasmei (RE rugos i
complexului Golgi), n regiunile n care are loc sinteza de membrane
celulare. Aceste poriuni nou sintetizate de membrane se ataeaz
membranei plasmatice, se ncorporeaz i are proprieti diferite de restul
membranei determinate genetic. Aceast poriune este responsabil de
permisivitatea celulei pentru un anumit inductor, avnd capacitatea de a
recunoate i a lega inductorul.
Teoria sistemului competen este superioar teoriei simple a induciei.
Se observ c multe substane pot aciona ca i inductori, iar numai anumite
tipuri de esuturi pot rspunde la aciunea factorilor inductori. Explicaia
acestui fenomen este capacitatea de competen, de a rspunde, la anumii
evocatori i este regsit n aciunea modelatoare a genelor asupra procesului
diferenierii i dezvoltrii.
Competena = abilitatea de a rspunde la un
semnal inductor

78
Biologie celulara si moleculara

Evocaia = semnalul general ce comand unui


esut tipul de celule din care urmeaz a fi alctuit.
Individualizarea = procesul prin care celulele
esutului capt propria lor identitate

Reglarea diferenierii celulare


n cadrul dezvoltrii unui organism, diferitele esuturi care, n
ontogenez, sunt toate de tip proliferativ i modific ulterior profund ritmul
de diviziune astfel c, potenialul mitotic se schimb sau dispare. Cele mai
multe esuturi i pierd capacitatea de proliferare n stare adult, unele ns,
pstrnd o subpopulaie celular, pot asigura regenerarea esutului
respectiv, iar altele au o mare capacitate de cretere n tot cursul vieii.

Fenomenele de difereniere, trecerea i starea de nedifereniere urmat


de redifereniere sunt des ntlnite i dau natere la controverse.

Astfel de fenomene, se produc n


degenerescena walerianunde, celulele Schwann se
difereniaz n fagocite care se divid.

Creierul vertebratelor completeaz lipsa


substanelor prin proliferarea nevrogliei i a
elementelor din piamater.

Rolul mitozelor const n reorganizarea structurilor celulare (de


exemplu reorganizarea mitocondriilor i aparatului Golgi n spermiogeneza),
fie n dezorganizarea structurilor celulare, cum se ntampl n procesul de
regenerare a ficatului, cnd au loc transformri mitocondriale n timpul
diviziunii hepatocitelor.

Acest ultim rol explic lipsa diviziunilor neuronilor aduli care ar duce
la dezorganizarea activitii nervoase a ntregului organism.

In general, reglarea diviziunilor celulare are loc prin mai multe


mecanisme:

de autoreglare tisular
de heteroreglare tisular
de control prin retroinhibiie
de control prin produi metabolici tisulari

79
Biologie celulara si moleculara

Mecanismele care realizeaz o autoreglare tisular au la baz faptul


c, exist la mamiferele adulte un control homeostatic al dinamicii
echilibrului celular exprimat printr-un control constant ntre celulele nou
formate, celulele care cresc i cele care mor.

Controlul proceselor de proliferare se realizeaz n acest caz, fie


printr-un proces genetic, fie printr-un control epigenetic al produilor tisulari
specifici (orice modificare n biosinteza proteic duce la o modificare la
nivelul genelor, o astfel de substan cu rol reglator este o glicoprotein
numit generic chalone, care regleaz potenialul mitotic prin represia sau
activarea genelor care determin proliferarea).

Heteroreglarea tisular - unele esuturi sunt active din punct de


vedere fiziologic numai n anumite perioade i, n acest caz, reglarea
proeselor de proliferare se face cu ajutorul hormonilor, avnd loc o
heteroreglare, deoarece aceste esuturi intr n diviziune sub aciunea
stimulilor hormonali produi de alte esuturi.

Mecanismul de control prin retroinhibiie - se refer la existena n


plasma extracelular a unor proteine care au rol direct n reglarea proliferrii
celulare. Mecanismul a fost sugerat n urma observaiilor lui Glinos i G.
Gey. Folosind ser sanguin de la un obolan adult, creterea hepatocitelor in
vitro este inhibat, ns serul provenit de la obolani hepatectomizai are
aciune inhibitoare mai sczut. Inhibarea mitozelor depinde de concentraia
plasmei care, atunci cand crete, duce la inhibare accentuat, iar cnd este
diluat duce la stimularea mitozelor n ficatul adult.

ntr-o cultur de hepatocite ajunse la stadiul adult acestea ncep s


sintetizeze proteine a cror concentraie acioneaz ca represor al ADN-ului,
celulele pierzndu-i capacitatea de diviziune.

Controlul prin produi metabolici tisulari presupune existena unor


factori produi chiar de celule i care pot regla procesul de proliferare. Aceti
factori sunt eliberai n mod normal n celule. Se poate stimula proliferarea
unui organ dac se injecteaz intraperitoneal, la obolan, un omogenat
provenit de la acel organ.

Eliberarea unor factori, din esuturile necrozate, produce diviziunea


celulelor de acelai fel. Creterea eficient a indicelui mitotic se obine cu
omogenatele din fragmente autolizate timp de 24-48 h. Acest fenomen
prezint i specificitate tisular, omogenatele influennd numai organele din
care au provenit.

80
Biologie celulara si moleculara

n ceea ce privete diferena dintre celulele diferenate i nedifereiate,


se pare c din punct de vedere biochimic sau molecular se apreciaz c, o
celul difereniat este capabil s produc o cantitate mare de molecule
neeseniale pentru funcionarea celulei, dar definitorii pentru esutul din care
face parte celula.

De pild, toate celulele produc citocromi, colesterol, dehidrogenaz


succinic, triptofan-sintetaz, glucozo-6 fosfataz, ARN, celule eseniale
viabilitii acestor celule. n schimb, unele produc albumine, cheratine,
hemoglobine, condroitin-sulfai, molecule care nu sunt eseniale pentru
viabilitatea lor, dup cum oocitele produc ARN m sau ARNr active sau
represate, n mare cantitate i care nu contribuie cu nimic la supravieuirea
imediat a viitoarelor blastomere.

Filtrajul genetic, pe seama cruia sunt puse aceste diferene, este


realizat n primul rnd prin sinteza difereniat a acizilor nucleici i prin
mitoz, fiind bine cunoscut faptul c, o celul care se divide nu se mai
difereniaz.

Oprirea diviziunii celulare se face prin creterea concentaiei AMPc,


care stimuleaz ARN-polimeraza II, cu rol n producerea ARNm, cu o serie
de consecine asupra modificrilor membranei plasmatice. Astfel, reglajul
genetic care codific modificarea reversibil a suprafeei celulare este legat
de activitatea mitotic. Ptrunderea calciului n celul determin, pe de alt
parte o cretere a GMPc cu consecine asupra sintezei ADN i asupra
mitozei. Permeabilizarea membranei pentru calciu este i ea dat de o serie
de factori.

n celul i mai exact n structura cromozomilor, telomerele, joac un


rol decisiv n reglarea procesului de replicare i respectiv diviziune celular.
Modificarea acestor secvene (TTAGGG) de sfrit sau capt cromozomial,
indus de o modificare a enzimei telomeraza ( cum ar fi deficiena), cauzeaz
disfuncii celulare ce const n diviziuni repetate i respectiv moartea celulei
(senescen replicativ).
Apariia modificrilor la nivelul genelor responsabile de producerea
telomerazei determin apariia predispoziiei la cancer, inducerea
modificrilor n celulele stem.

(Drs. Elizabeth H Blackburn, Jack W Szostak


and Carol W Greider pentru descoperirea
telomerazei, n 2009- Nobel Prize Physiology or
Medicine)

81
Biologie celulara si moleculara

Celule nedifereniate-celule stem


Celulele stem sunt celule nedifereniate care posed capacitatea de a se
transforma n celule nalt specializate, care mai departe pot forma orice tip de
esut i organ din corp.
Importana lor rezid tocmai n aceast posibilitate de a se dezvolta n orice
tip de celul din organismul uman. Celulele stem embrionare sunt celule
nedifereniate care au particulariti ce le deosebesc fundamental de celulele
adulte cu funcii specializate.

Capacitatea lor de diviziune este nelimitat n condiiile n care


organismul cruia aparin este viu, iar din aceast caracteristic deriv cea
mai important funcie pe care o au i pentru care sunt atat de folosite, i
anume aceea de a aciona precum un sistem de refacere i reparare a oricrei
pari constituente a organismului.

La fiecare diviziune a unei celule mam, apar celule fiice cu


capacitatea de a rmne n stadiul de celul stem sau de a se dezvolta n
celule cu funcii specializate, cum ar fi celulele musculare, nervoase sau
celulele sangvine.

Totui, nu toate celulele stem posed aceeai capacitate de replicare


sau acelai potenial de difereniere, motiv pentru care, cercettorii le-au
mprit n mai multe clase, astfel:

n funcie de capacitatea lor replicativ i de potenialul de


difereniere, celulele stem au fost clasificate n:

1. Celule stem totipotente. Sunt produse prin fuziunea unui ovocit


cu un spermatozoid. Tot celule totipotente sunt i cele aprute dup
primele diviziuni ale ovocitului fecundat. Acestea se pot diferenia n
orice tip de celul, sunt capabile s formeze o placent i un embrion
ntreg;

2. Celule stem pluripotente. Sunt descendente ale celulelor


totipotente. Se pot diferenia n toate tipurile celulare, cu excepia
celulelor totipotente. Sunt capabile s formeze esuturi derivate din toate
cele trei foie embrionare (endoderm, mezoderm i ectoderm);

3. Celule stem multipotente -care au proprieti de regenerare a


unor esuturi specifice, cum ar fi pielea, ficatul, tractul intestinal.

82
Biologie celulara si moleculara

Sunt celule care produc celulele dintr-o singura familie, progenitori


ai celulelor din diferite esuturi (ex:celulele stem hematopoietice se vor
diferenia n celulele sanguine: hematii, celule albe, trombocite etc). Au
un potenial regenerativ imens i i rennoiesc continuu populaiile
celulare;

4. Celule stem unipotente. Aceste celule pot produce un singur tip


de celule, dar au proprietatea de a se rennoi, ceea ce le difereniaz de
celulele non-stem.

Proprietile celulelor stem le fac utile diferitelor specialiti clinice,


precum i cercetrii medicale, ns folosirea lor ridic probleme etice i n
prezent, datorit faptului c, celule stem pluripotente provin de la un alt
organism viu, considerat o fiin n sine, i anume embrionul uman (cu varsta
cuprins ntre 2 zile i 8-9 sptmni).
Argumentele n favoarea depirii acestei bariere de ordin etic sunt
utilizarea celulelor stem embrionare n poteniala vindecare a unor boli
grave, printre care i diferite tipuri de cancere, precum i faptul c recoltarea
lor se face doar de la embrionii furnizai de clinicile de fertilizare.

Sursele de celule stem pot fi: organismul adult, celulele embrionare,


celulele canceroase sau de la nivelul cordonului ombilical.

Diferena dintre celulele stem embrionare i cele adulte


Diferena major ntre celulele stem embrionare i cele adulte deriv
din originea lor, i anume din organismul din care sunt recoltate. Celulele
embrionare provin din embrioni cu vrsta de maxim 7 zile, care pot fi, la
rndul lor, donai sau produi n exces n timpul proceselor de fertilizare in
vitro. Celulele stem adulte sunt fie prelevate din organisme adulte, fie din
cordonul ombilical.

Cercettorii au evideniat faptul c i dup natere persist n


organism un grup restrns de celule nedifereniate, considerate a avea rol de
rezerv n cazul n care apar pe parcurs situaii care s impun folosirea lor.

Inconvenientul major al acestor celule stem l reprezint faptul c, n


urma diviziunii lor, numrul de celule fiice este foarte limitat i inferior
celulelor stem embrionare.
O alt diferen const n longevitatea celulelor embrionare, care sunt
capabile de a-i menine abilitatea de a forma orice alt tip de celul chiar i
dup luni sau ani de utilizare i cretere n laborator.
83
Biologie celulara si moleculara

Celulele stem adulte sunt celule nedifereniate aflate printre celule cu


funcii specializate, n cadrul unui esut sau organ, care au capacitatea de
autoregenerare i de difereniere n cele mai importante tipuri celulare. Rolul
esenial al acestor celule n organismul viu este acela de a menine
integritatea i de a repara uzura esutului n care se gsesc.

Astfel, de celule stem au fost identificate n multe esuturi i organe. Se


pare c ele ocup, n cadrul esutului, o zon specific bine delimitat, unde
pot rmne sub form nedifereniat chiar i ani, pn cnd sunt activate i
ncep s se divid sub influena direct a leziunilor tisulare. Printre organele
care conin n mod cert celule stem adulte se numr: creierul, pielea, ficatul.

Celulele stem adulte prezint, comparativ cu celulele stem embrionare,


anumite avantaje i dezavantaje care le indic sau nu n utilizarea terapeutic.

Printre avantaje se numr i faptul c, nu exist probleme de ordin etic


n ceea ce privete utilizarea lor. De asemenea, n cazurile n care donatorul
i primitorul sunt aceeai persoan, nu exist riscul respingerii transplantului
celular prin intervenia sistemului imun.

Dac nsa, donatorul este diferit de acceptor, poate s apar reacie


imun din partea organismului gazd care s duc la respingerea
transplantului.
ns cercetatorii au descoperit 3 dezavantaje extrem de importante
celulelor stem adulte care impun pruden i pot chiar contraindica folosirea
lor n terapie:

- sunt celule mature i nu au capacitate mare de proliferare, n sensul c


pot genera doar anumite tipuri celulare, n numar limitat.

- n cadrul unui organism, celulele stem adulte sunt greu de identificat.

Spre deosebire de ele, celulele stem embrionare sunt uor de reperat,


deoarece formeaz populaia celular dominant n organismul embrionului,
practic orice tip de celul embrionar putnd juca rol de celul stem.

De asemenea, celulele embrionare se pot divide de un numr nelimitat


de ori, genernd tot timpul celule noi n cantiti utile, att pentru cercetare
ct i pentru terapie.

84
Biologie celulara si moleculara

- n al treilea rnd, celulele stem adulte se dezvolt greu, fapt evideniat


de numeroase studii care au artat durata lung de timp, de ordinul lunilor
chiar, necesar unor celule stem adulte de a se transforma n tipul particular
de celule vizat iniial, fapt deosebit de dezavantajos n cazul n care starea
pacientului aflat n tratament impune transplantarea rapid a celulelor.
Celulele stem embrionare, nsa au rata de diviziune rapid i pot fi chiar
depozitate, astfel c dac apare nevoia administrrii lor, aceasta se poate
realiza imediat.

Folosirea celulelor stem n tratamentul unor boli grave


Experimentele i cercetrile efectuate pe celule stem embrionare au
nceput efectiv de-abia din anul 1998, cnd un grup de oameni de tiin,
condui de dr. James Thomson, de la Universitatea din Wisconsin, SUA, a
pus bazele unei metode de izolare i cultivare a celulelor.

Studiile i experimentele desfurate n ultimii ani au demonstrat c


aceste celule au capacitatea de a influena decisiv numeroase domenii ale
medicinii, att datorit abilitii de formare a celulelor de tipul neuronilor,
hepatocitelor, cardiomiocitelor, celulelor pancreatice sau endoteliale, ct i
prin posibilitatea de a interaciona n mod direct cu aceste celule
modificndu-le materialul genetic n vederea folosirii lor n cadrul terapiei-
genice.

Toate bolile cunoscute pn n prezent au o baz celular, un defect


aprut n replicarea celular, n regenerarea i repararea tisular, care s
creeze un teren propice pentru dezvoltarea i autontreinerea procesului
patologic. innd cont de acest fapt, se poate afirma, teoretic doar c, orice
boal poate fi tratat folosind celule stem.

Celulele stem din cordonul ombilical sunt derivate din sngele din
placenta i vasele ombilicale i pot fi prelevate dupa natere. Inc din anul
1988 aceste celule au fost folosite pentru a trata boala Gunther, sindromul
Hunter, sindromul Hurler, leucemia limfoblastic acut i alte afeciuni n
special ale copiilor.

Atunci cnd celulele provin de la un donor diferit de cel ce va


beneficia de aceast terapie poart numele de tratament allogenic, cnd
provin de la acelai pacient este denumit autolog i cnd este colectat de la
indivizi identici (ex: gemeni monozigoi), singenic.

85
Biologie celulara si moleculara

Intre bolile pentru care se studiaz intensiv tratamentul cu celule stem


sunt incluse: diabetul, boala Parkinson, boala Crohn, afeciuni cardiace, boli
genetice, cancere.

Diabet: n ceea ce privete diabetul, cercettorii ncearc s influeneze


transformarea celulelor stem n celule productoare de insulin, acestea
urmnd a fi transplantate persoanelor diagnosticate cu o asemenea afeciune.

Boala Parkinson: n declanarea bolii n sine este incriminat


distrugerea neuronilor dintr-o anumit regiune a creierului. Boala se
caracterizeaz prin pierderea capacitii de control a micrilor voluntare
asociind i un tremor fin al extremitilor.

De muli ani, tratamentul acestei boli, care afecteaz peste 2% din


populaia de peste 65 de ani, se bazeaz pe administrarea de levodopa,
substan pe care creierul o transform n dopamin (aceasta lipsind la
persoanele afectate, datorit pierderii, n cadrul procesului patogenic a
neuronilor care o produc). Pe parcursul terapiei, ns, levodopa i pierde din
eficien, n paralel crescnd rata de apariie a efectelor secundare, pacientul
devenind n final, o cauza pierdut. Dac ns, se reuete obinerea de celule
nervoase viabile i funcionale se poate ncerca transplantarea acestora i
nlocuirea celor bolnave.

Cancer: exist forme de cancer, precum cel de sn, n care


chimioterapia i radioterapia au ca efect secundar distrugerea mduvei
osoase, ceea ce impune mult precauie i restrnge mult din folosirea
acestor modaliti terapeutice. Dac prin intermediul celulelor stem se poate
reface mduva osoas, medicii ar putea institui terapia anticanceroasa mai
repede i n doze mai mari, n vederea sporirii eficienei.

De asemenea, celulele stem pot fi folosite i n vederea formrii de


celule cu aciune specific anticanceroas, contribuind astfel, la lupta
mpotriva cancerului iniiat de organism.Celulele stem pot fi folosite i n
vederea refacerii unei pri de esut sau chiar pentru transplantul diferitelor
organe n cazul n care acestea au trebuit excizate n scop terapeutic.

Traumatisme medulo-spinale: celulele stem sunt folosite pentru


formarea celulelor nervoase ce intr n componena mduvei spinale. Scopul
este de a obine ameliorarea simptomatologiei i chiar vindecarea
persoanelor cu hemiplegii sau tetraplegii survenite n urma unor leziuni
grave ale coloanei vertebrale.

86
Biologie celulara si moleculara

Boala Crohn: este o inflamaie cronic de natur autoimun, cu


localizare predilect la nivelul ileonului terminal. Mucoasa intestinului
prezint numeroase ulceraii i fisuri profunde datorate unor procese imune
aberante, n care celulele imune sunt direcionate mpotriva celulelor
intestinale. n acest caz, terapia cu celule stem vizeaz nlocuirea acestor
celulele imune cu unele cu funcie normal.

Boli genetice: aceste boli se caracterizeaz prin existena unui defect


cu localizare la nivelul diferitelor gene sau cromozomi, care afecteaz
organismul nca de la natere, cum ar fi: anemia falciform, fibroza cistic,
boli neuromusculare, precum i cancere (acestea avnd o important
componenta genetic, pn n prezent identificndu-se cel puin 4 categorii
de gene implicate n apariia lui).

Pentru moment, numrul pacienilor tratai cu celule stem este foarte


redus, cei care au beneficiat de un astfel de tratament avnd boli grave, n
stadii terminale.Deocamdat, medicii evit s recurg la acest tratament, iar
cnd o fac, sunt foarte prudeni, ntruct acest domeniu al medicinei este la
nceput i exist nc numeroase necunoscute cu privire la funcionarea
celulelor stem.

ncurajator este faptul c cercettorii europeni au descris, n


septembrie 2006, rezultate promitoare n ceea ce privete transplantul de
celule din mduva osoas cu scopul tratrii leziunilor post infarct miocardic.

CAPITOLUL 15

BAZELE MOLECULARE I FIZIOLOGICE ALE


CITOPROTECIEI
Citoprotecia i factorii care determin homeostazia ionic
Importana meninerii structurilor biomembranelor
Neutralizarea substanelor toxice de natur chimic
Influena stresului asupra metabolismului celular

87
Biologie celulara si moleculara

Citoprotecia i factorii care determin homeostazia


ionic
Citoprotecia funcia celulei de a menine homeostazia sub aciunea
factorilor agresivi.
n realizarea citoproteciei sunt implicate mai multe mecanisme care se
refer la:
Homeostazia proceselor de oxido-reducere ca factor de
citoprotecie
Homeostazia ionic i reglarea ph-ului intracelular.
Rolul biomembranelor
Procesele bioenergetice ca factor esenial
Organismul vine n contact direct cu un numr din ce n ce mai mare
de substane toxice, multe din ele cu aciune citotoxic, ce solicit la
maximum, n multe cazuri peste limita acceptabil, mecanismele de adaptare
i protecie.
Semnificativ este faptul c, conceptul de citoprotecie a fost introdus i
s-a generalizat n gastroenterologie deoarece mucoasa gastrointestinal
reprezint cel mai fascinant exemplu de bioprotecie. Un singur strat de
celule, cu o grosime de dou sutimi de milimetru, asigur protecia, att fa
de factorii agresivi proprii (acid clorhidric i pepsin), dar i fa de un
mediu septic i traumatizant, n multe cazuri citotoxic.
Conceptul de citoprotecie a fost elaborat pentru prima dat n anul
1975, cnd s-a constatat c prostaglandinele (PG) au proprietatea de a
preveni apariia ulcerului experimental al mucoasei gastrice la obolani.
Segal i Segal (1986) postuleaz c citoprotecia este un fenomen
complex n care homeostazia celular este puternic implicat i, ca urmare ,
sunt angajai toi factorii care intervin n complexele mecanisme metabolice.
Citoprotecia este un proces mai complex
dect participarea unei substane sau chiar a unui
sistem de substane, deoarece meninerea structurilor
i funciilor biologice sub aciunea factorilor agresivi
mobilizeaz metabolismul n ntregime.
Trebuie avut n vedere c nsi trecerea celulei de la respiraia
anaerob la respiraia aerob, cu randament energetic superior, a nsemnat
un risc asumat deoarece oxigenul este toxic pentru celul.

88
Biologie celulara si moleculara

Dup cum este cunoscut, molecula de oxigen, n stare normal (starea


triplet-nivelul de energie a electronilor sczut), este stabil i deci puin
reactiv, dar n procesele metabolice se exercit o activitate cu formare de
elemente puternic reactive: oxigen singlet (1O2)-forma diamagnetic, anionul
superoxid (O2-), radicalul hidroxil (OH-) i ap oxigenat (H2O2). Toate
formele reactive ale oxigenului reprezint un pericol potenial pentru
integritatea celular, fiind citotoxice.
Radicalii cei mai periculoi sunt oxigenul singlet i radicalul hidroxil.
Totodat, n prezena ionilor metalici (Fe2+), radicalii superoxid i peroxidul
de hidrogen (teoretic mai puin periculoi) se pot combina i forma radicali
hidroxil, conform reaciei Haber. Ca urmare celula este expus continuu la
aciunea citotoxic a radicalilor liberi formai n decursul respiraiei
oxidative.
Principiul general de protecie a celulei const n a transforma radicalii
toxici n oxigen molecular, prin oxidare, sau n ap prin reducere, ultima cale
fiind cea mai eficient. Ca urmare, organismul i-a elaborat un sistem
complex de aprare antioxidant la care particip att enzimele ct i
substanele reductoare.
Cea mai important reacie de citoprotecie, care acioneaz n prima
linie de aprare celular, neutraliznd peste 90% din radicalii liberi formai,
este reacia de dismutare care prezint principalul avantaj c nu utilizeaz, ca
substrat, compui eseniali pentru celul.

2O-2 + 2H SOD H2O2 +O2

2H2O2 CATALAZA 2H2O +O2

Procesul este catalizat de enzima superoxiddismutaza (SOD)


considerat de unii cercettori ca fiind cea mai important enzim a vieii
aerobe, datorit eficienei cu care realizeaz neutralizarea radicalilor
citotoxici. Apa oxigenat este descompus dup reacia 2 , n ap i oxigen
molecular.
Oxigenul singlet nu se descompune prin cataliz enzimatic i este
neutralizat prin aciunea antioxidanilor biologici existeni n celul.
Prin antioxidani se neleg acele substane care inhib viteza de
oxidare, prin eliberarea de H i care acioneaz dup urmtoarea schem:

RO2 +HAROOH + A
89
R+HARH+A
Biologie celulara si moleculara

n care HA este substana antioxidant, iar A este un radical inactiv sau


slab activ. n felul acesta procesul de protecie const n nlocuirea radicalilor
activi RO2 i R, cu radicali inactivi A, care nu au capacitatea de a prelungi
reacia n lan i care, n final, formeaz produse stabile prin dimerizare
(A+AAA; A+ RO2ARO2).
Dintre antioxidanii prezeni n celul, vitamina E joac un rol
deosebit de important. Tocoferolii inhib procese de oxidare i limiteaz
formarea peroxizilor toxici exercitnd un efect antiradical general.
Carotenoizii, vitamina A, vitamina C i gruprile tiolice au, de
asemenea, un rol de protecie important n celul. Ele se gsesc, totodat,
ntr-o strns interaciune conducnd la un efect maxim.
n citoprotecie un rol central l joac gruprile tiolice (-SH) ale
proteinelor, peptidelor i aminoacizilor: glutationul, cisteina, metionina, care
intervin n toate procesele metabolice importante i n meninerea structurilor
celulare.
Gruprile SH intervin n reglarea sintezei proteice i implicit, n
procesele de asociere, disociere a ribozomilor. De asemenea, sunt implicate
n activitatea ARN-polimerazei, ADN-dependente.
Gruprile tiolice au interaciuni directe i indirecte cu majoritatea
vitaminelor.
Dintre compuii tiolici un rol aparte l are glutationul care este un
constituient aproape universal al sistemelor biologice funcionale, absolut
necesar dezvoltrii i supravieuirii celulei.

glutationul
Este considerat un sistem foarte complex contribuid la sinteza unor
proteine, activarea unor enzime, n special cele tiolice.
Sistemul celular de oxido-reducere a glutationului este controlat de
multiple sisteme enzimatice n care un rol deosebit l are glutation-
peroxidaza. Ea exercit o aciune de protecie a celulei fa de diferii
90
Biologie celulara si moleculara

poluani (nitrii, nitrozamine, peroxizi, metale), substane toxice,


medicamente. Aceast enzim reprezint cea mai eficient protecie fa de
peroxidare.
Rolul esenial pe care-l au gruprile tiolice SH n metabolism
determin interaciuni complexe cu majoritatea vitaminelor: A, D, E, K, B,
B2, B6, B12, acidul folic, acidul pantotenic, niacina, biotina, acidul ascorbic,
interaciuni care const n reglarea i medierea activitii vitaminice.
Homeostazia ionic celular influeneaz profund metabolismul i
diferenierea celular, acionnd la trei nivele, ceea ce d posibilitatea celulei
s-i modifice, n limite largi, proprietile i funciile (Tabel 15.1).
La primul nivel acioneaz asupra variaiei mrimii potenialului de
membran, a pH-lui i a altor parametrii protoplasmatici.
La al doilea nivel influeneaz metabolismul energetic i proteic.
La al treilea nivel, homeostazia ionic celular acioneaz asupra
informaiei genetice.
Meninerea constant a concentraiei ionice se realizeaz cu ajutorul
pompelor ionice: pompa de Na+/K+, pompa de calciu.
Diferii mediatori biologici au influen
profund asupra pompei de calciu. Serotonina, n
concentraii de 10-6, provoac o diminuare a
acumulrii calciului i o stimulare a transportului
pasiv. Prostaglandinele provoac o modificare a
permeabilitii membranei pentru calciu.
Lipoperoxidarea lipidelor din reticulul
endoplasmatic modific conformaia membranelor.
n concentraii mici lipoperoxizii activeaz Ca2+-
ATPaza, pe cnd n condiiile unei peroxidri de
durat se realizeaz inactivarea enzimei cu formare
de produi secundari.
S-a constatat c, odat cu vrsta, se
nregistreaz o dereglare a transportului de Ca2+,
activitatea Ca2+-Mg2+- ATP azei i viteza de
transport a Ca2+ scade, crete energia de activare a
enzimelor, corelata cu afectuarea membranelor.
n aprecierea rolului protector al ionilor metalici trebuie s se in
seama c, n ansamblu, fiecare ion depinde de alt ion din diet (calciu

91
Biologie celulara si moleculara

depinde de fosfor i magneziu, fierul de cupru, zincu de cupru), factorii


genetici, toxici, traumatici i patologici care influeneaz necesarul pentru
fiecare persoan.
De asemenea, produsul sau forma sub care este ingerat i metabolizat
(coninutul de fitai din alimentaie, starea de oxidare a compusului,
cantitatea de fibre influeneaz disponibilitatea sau toxicitatea ionului
mineral). Un interes deosebit l prezint condiiile de absorbie a
microelementelor de ctre organism. Necesarul de microelemente este
dependent de stadiul de cretere, maternitate, intensitatea activitilor fizice.
Absorbia microelementelor este inhibat n intestin de fosfai, fitai
(combinaii dintre unii acidul fitic din cereale i unele minerale), taninuri,
acid oxalic, EDTA (acidul etilendiaminotetraacetic), prezena fibrelor
alimentare i a glucidelor. Cea mai mare parte a microelementelor se
absoarbe n duoden i n prima zon a intestinului subire. Intensitatea
trecerii microelementelor prin stratul de celule epiteliale depinde de
concentraia metaloproteinelor.
Ptrunderea n organism a microelementelor n doze mari poate duce la
dereglarea metabolismului de absorbie a unor microelemente ca urmare a
concurenei ntre ele pe canalele specifice de transport la nivelul celulelor
intestinale.
Administrarea timp ndelungat a fierului
provoac creterea excreiei cuprului i mai ales a
manganului. Cauza o constituie concurena dintre
fier si mangan pentru transferin, iar fierul care
prezint o mai mare afinitate pentru aceasta
perturb transportul manganului. n felul acesta se
explic de ce, n urma terapiei sau profilaxiei cu
preparatele de Fe, se poate perturba metabolismul
altor microelemente n organism, n special al
manganului.
Transferina= proteina prezent n serul
sangvin, sintetizat de ctre ficat, al carei rol
fiziologic esenial este transportul fierului necesar
sintetizrii hemoglobinei, ncepnd de la celulele
intestinale pn la maduva osoas.
Creterea dozelor alimentare sau
medicamentoase de zinc provoac anemie datorit

92
Biologie celulara si moleculara

reducerii concentraiei fierului i cuprului n plasma


sngelui i n ficat, concomitent cu inhibarea
absorbiei fierului n intestin.
Absorbtia zincului n intestin este perturbat de
concentraii mari de calciu i fosfor n
alimentaie.Excesul de fosfor antreneaz precipitarea
calciului sub form de fosfat tricalcic insolubil, care
se elimin prin fecale.

Tabel 15.1 Implicaiile principalilor ioni anorganici n reglarea i


funcionarea metabolismului celular
Ionul
Implicaii celulare i patologice
Calciu Integritatea sistemului osos
Transmiterea influxului nervos
Excitabilitatea neuromuscular
Coagularea sngelui
Activarea unor enzime
Secreia de hormoni
Funcionarea membranelor celulare
Magneziu Activator pentru aproximativ 300 enzime, n special cele care
folosesc ATP
Rol n procesele energetice
Permeabilitatea celular
Excitabilitatea neuromuscular
Sinteza proteinelor, lipidelor i a acizilor nucleici
Contracia muscular
Fosforilarea oxidativ
La nivel celular, hipomagnezia provoac tulburri ale
transportului potasiului prin membran, ceea ce conduce la
creterea pierderilor renale de potasiu. n felul acesta se explic de
ce corecia deficitului de magneziu este chiar mai eficace pentru
corijarea deficitului intracelular de potasiu dect perfuziile de
potasiu.
Deficitul de magneziu afecteaz sistemul nervos, muchii, tractul
gastrointestinal.
Fier Component al hemoglobinei, mioglobinei, citocromilor, sisteme
enzimatice din lanul respirator;
Este necesar pentru activitatea ribonucleotid-reductazei,
influennd toate funciile celulei prin amprenta care o pune asupra
sintezei ADN-ului

93
Biologie celulara si moleculara

Cupru Are o nalt activitate biologic deoarece intr n compoziia a


numeroase enzime i particip la o serie de procese fiziologice.
Intervine n cretere, dezvoltare, hematopoiez, imunogenez,
respiraie celular.
Cea mai important funcie este participarea la structura unor
oxidaze finale, n special citocromoxidaze, ascorbatoxidaza,
tirozinaza.
Ceruloplasmina- are activiti enzimatice intensificndu-se n
condiii de stress i n dereglri endocrine.
Funcioneaz ca i oxidaz care catalizeaz oxidarea aminelor
aromate, a adrenalinei, noradrenalinei, serotoninei, metioninei i
acidului ascorbic.
Funcioneaz ca fier-oxidaz ce regreaz eliberarea fierului depus
n ficat, trecerea lui n plasm i formarea hemoglobinei.
n insuficien de Cu n alimentaie se constat o diminuare a
activitii fier-oxidazelor, a concentraiei de fier i hemoglobinei n
snge, scade durata vieii eritrocitelor i se deprim maturarea
acestora.
Mangan Intervine n aciunea unor enzime, hormoni, vitamine
Intervine n fermentaia alcoolic i n oxidarea aerob a
glucidelor
Intensific efectul hipoglicemiant al insulinei
Particip n hematopoiez i sinteza hemoglobinei
Crom Implicat n metabolismul lipidic, glucidic i protidic
Carena este nsoit de creterea semnificativ a intoleranei
pentru glucoz, viteza de eliminare din snge fiind redus la
jumtate, ceea ce mrete predispoziia pentru diabet.
Seleniu Intr n structura enzimei glutationperoxidazei (GSH-Px) cu rol
esenial n neutralizarea peroxizilor, asigurnd protecia celular.
Intensific activitatea sistemului enzimatic al citocrom P-450, de
mare importan pentru detoxifierea ficatului, stimuleaz sinteza
ubichinonelor i particip la metabolismul sistemului imunitar.
Are proprieti anticancerigene.
Favorizeaz ncorporarea calciului i fosforului n os.
Zincul Intr n compoziia dehidrogenazelor, a peptidazelor, fosfatazelor,
izomerazelor etc.
Astfel particip la sinteza i descompunerea acizilor nucleici.
Influeneaz permeabilitatea membranei celulare.
Particip la neutralizarea toxinelor i rezistena fa de virusuri.

Importana meninerii structurilor biomembranelor

94
Biologie celulara si moleculara

Dezvoltarea multor procese patologice la nivel celular este corelat cu


dereglarea funciilor de barier sau modificarea structural a membranei.
Principalii factori care pot deregla funcia de barier a lipidelor sunt:
peroxidarea lipidelor
aciunea fosfolipazelor (endogene i exogene)
dereglarea balanei osmotice
absorbia pe membrana a unor poliamide, polilactone i n special
proteine.
Peroxidarea lipidelor conduce la o cretere a permeabilitii
membranei mitocondriale pentru protoni i ali ioni monovaleni, ceea ce
deregleaz selectivitatea biomembranelor. Modificarea permeabilitii
membranelor mitocondriilor i eritrocitelor pentru ioni (K+, Na+, Cl-) s-a
determinat n urma oxidrii grupelor tiolice ale proteinelor din membran
datorit peroxidrii.
Fosforilaza endogen a mitocondriilor se activeaz n condiiile
incubrii anoxice a organitelor, n prezena ionilor de calciu, i aciunea ei
conduce la o ireversibil degradare a mitocondriilor, n hipoxia esuturilor.
Ca rezultat al acestui proces are loc creterea permeabilitii membranelor
mitocondriale pentru ionii de hidrogen i K+, umflarea organitelor,
decuplarea oxidrii fosforilante i ieirea componenilor matricei i a
transportorilor transmembranari (n special a citocromului) din mitocondrii.
n celulele vii, membranele biologice se caracterizeaz prin diferene
mari de potenial. Potenialul de repaus al membranelor plasmatice a
celulelor nervoase sau musculare este de 70 mV, n timp ce potenialul
membranelor interioare ale mitocondriilor ajunge la 200 mV.
Modificarea potenialului de strpungere a biomembranelor
depinde de urmtorii factori:
modificarea compoziiei chimice a membranelor
aciunea substanelor superficiale active
creterea gradului de ncrcare a suprafeelor
adugarea de ioni de calciu mrete permeabilitatea electric a
membranelor
dezvoltarea unei asimetrii de ncrcare a membranelor.

Prezena colesterolului mrete stabilitatea electric a membranelor.


n membrana plasmatic, colesterolul reprezint principalul component care
mrete vscozitatea biomembranelor i, ca urmare, stabilitatea electric a
acestora.
95
Biologie celulara si moleculara

Rolul de protecie a colesterolului prezint o deosebit importan n


patologie. Toi factorii care deregleaz funcia de barier a membranelor
acioneaz, n primul rnd, asupra stabilitii electrice i reduc dramatic
potenialul de strpungere ceea ce favorizeaz instalarea strilor patologice.
Alimentaia influeneaz structura i funciile biomembranelor prin
componeni necesari edificrii acestor structuri i prin ntreinerea
fiziologic, prin urmtoarea secvenialitate: lipide alimentarelipide
membranarestarea funcional a membranelor.

Neutralizarea substanelor toxice de natur chimic


Organismul acioneaz mpotriva xenobioticelor prin metabolizarea
lor, proces care are loc n special la nivelul ficatului, dar i n alte esuturi. O
consecin important a biotransformrii este trecerea mai mult sau mai puin
avansat de la lipofilie (fapt ce favorizeaz absorbia) la hidrofilie
(favorizeaz excreia n urin i fecale), excepie fac compuii volatili care se
elimin preponderent prin expiraie.

n decursul evoluiei organismul a elaborat o serie de mecanisme de


detoxifiere celular, de natur enzimatic, acestea putnd fi clasificate n
mai multe categorii:
Oxido-reductaze
Transferaze
Hidrolaze
Liaze
Izomeraze
Ligaze sau sintetaze
Enzimele care particip la procesul de metabolizare a xenobioticelor
se numesc enzime xenobiotice i au sediul n microzomi (structuri
veziculare derivate din reticulul endoplasmatic). Particularitatea
metabolizrii xenobioticelor este c, la proces, particip i enzimele interne
"endogene"care nu pot deosebi substanele exogene datorit asemnrii cu
propriul substrat.
Hidrocarburile aromatice policiclice, aflatoxinele, nitrozaminele,
coloranii azoici ca i alte structuri cu potenial toxic sau cancerigen din
alimente i mediul nconjurtor sunt metabolizate de sisteme enzimatice
microzomale (la nivel hepatic).
Cea mai mare important n detoxifierea celular o are hidroxilarea
care se realizeaz dup un lan respirator celular i care, n afar de faptul c,

96
Biologie celulara si moleculara

are un spectru larg de aciune, particip la biotransformarea unor metabolii


naturali, cum sunt colesterolul, diferii hormoni, cu implicaii biochimice
profunde.
Lanul de hidroxilare, asemntor sub acest aspect secvenial cu cel
microzomal, folosete ca oxidant, oxigenul molecular i necesit pentru
funcionare NADH sau NADPH i citocromul P450.
Cel mai mare interes l reprezint sistemul de hidroxilare microzomal
implicat n metabolismul toxicelor, medicamentelor, cancerigenelor,
hormonilor steroizi i a numeroi compui strini, xenobiotice, care ptrund
n organism din mediul nconjurtor.
n reticulul endoplasmatic al celulelor hepatice exist urmtoarele
tipuri de reacii de hidroxilare:
alifatic (oxidarea prin acest sistem a barbituricelor)
aromatic
dezaminare (aminele liposolubile cum e amfetamina i analogii si, se
transform n ceton i amoniac sub aciunea sistemului enzimatic din
ficat)
S-a stabilit c, pentru oxidarea majoritii xenobioticelor, pe aceast
cale, este necesar s participe numai 3 componente ale complexului
multienzimatic din microzomii ficatului:
citocrom P450
NADPH-citocrom P450 reductaza
fosfatidilcolina
Prezena acestor componente, a NADPH i a oxigenului asigur
refacerea activitii catalitice a sistemelor microzomale.
Citocromul P-450 are, n calitate de grupare prostetic, protoporfirina
cu fier. Citocrom P-450 are rol de activator al oxigenului pentru oxidazele cu
funcii mixte. El se reduce cu ajutorul NADPH printr-un sistem de structur
cruia intr flavoproteinele (FP) i proteinele cu fier, citocromul P-450 redus
reacioneaz cu oxigenul din aer. Prin aceasta, unul din atomii de oxigen se
reduce formnd apa, iar al doilea se leag cu citocromul P450.
Citocromul P-450 oxidat reacioneaz cu compuii aromatici formnd
complexul O-P-450-RCH3. Apoi, se descompune complexul, rezultnd
compusul aromatic hidroxilat i citocromul P-450 oxidat.

97
Biologie celulara si moleculara

Prin acest mecanism se detoxific organismul de xenobiotice. S-a


stabilit c, introducerea n organism a peste 200 de substane strine, induce
o cretere a concentraiei enzimelor de hidroxilare i a citocromului P- 450.
Schema de oxidare microzomal n cazul unui medicament -MH,
MOH (medicamentul oxidat) este urmtoarea:

MH + NADPH + H+ + O2 -Citocrom P450 MOH + NADP +


H2 O
De asemenea, citocromul P-450 joac un rol important n metabolismul
acizilor grai.
Fosfolipidele particip la toate stadiile procesului de hidroxilare. Ele
formeaz o ambian hidrofob pentru enzimele legate de membrane sau
pentru pri dintre acestea, crend condiii optime pentru intercaiunea
citocrom P450 cu reductaza. Fosfolipidele formeaz micelii sau lipozomi i
au o mare influen asupra reaciilor citocromului P-450 la nivel molecular:
mresc stabilitatea complexului enzim substrat
pot forma complecsi cu citocromul i reductazele i mresc
stabilitatea acestor complexe
accelereaz reducerea citocromului P-450 reductazei
exercit un efect favorabil asupra reaciilor de oxidare n mediul
hidrofob asigurnd o mare mobilitate componentelor sistemelor
microzomale.

n procesele moleculare fosfolipidele joac rol de substane


tensioactive sistemelor microzomale. Sistemul de hidroxilare microzomal
este influenat de activitatea hormonal, de asemenea, mrirea activitii de
hidroxilare a microzomilor s-a constatat la animalele n stare de stress cnd,
s-a activat sistemul hipofizo-adrenalinic.
Caracteristic pentru sistemul de hidroxilare microzomal este inducrea
activitii n urma administrrii de medicamente, hormoni, insecticide,
cancerigeni, care sunt hidroxilai. Nu exist o legatur determinat ntre
natura substanelor i capacitatea de a induce sinteza enzimelor. Comun este
numai proprietatea de a se solubiliza, n lipide, la valori de pH-fiziologic
normale.
Intensificarea activitii sistemului de hidroxilare este corelat cu
creterea coninutului de enzime i poate fi privit ca o sintez indus a
enzimelor. n felul acesta, se accelereaz sinteza citocromului P -450 i
NADPH-P 450- oxidoreductaz, intensificndu-se totodat i formarea unor
noi membrane endoplasmatice.

98
Biologie celulara si moleculara

Efectul stimulat al xenobioticelor asupra procesului de metabolizare


permite organismului s se dezintoxice rapid i eficient. Totodat inducia
enzimelor microzomale stimuleaz metabolismul sau sinteza unor metabolii
normali cum ar fi colesterolul, diferii hormoni.
Administrarea de fenobarbital la animale intensific hidroxilarea
androgenilor, estrogenilor, glucocorticoizilor din microzomii ficatului. Acest
efect se manifest in vivo prin accelerarea secreiei de steroizi i micorarea
aciunii estradiolului i progesteronului.
Prin administrarea cronic a unor substane nocive are loc o cretere a
nivelului enzimelor implicate n metabolizarea endogen, cu efect de
reducere a potenialului de aprare a organismului fa de alte substane
nocive i se poate altera metabolizarea constituienilor normali.
Datorit induciei enzimatice are loc o oxidare microzomal intens,
celula consum cantiti mari de glucoz, glicogen, glutamat i se
nregistreaz scderea producerii de ATP, a sintezei acizilor grai i a
colesterolului n favoarea corpilor cetonici.
Inducia enzimatic predomin clar n ficat, dar a mai fost evideniat n
rinichi, plmni, intestine i piele.
Stimularea activitii enzimatice microzomale este nsoit de creterea
greutii ficatului, proliferarea reticulului endoplasmatic neted, mrirea
cantitii de fosfolipide i activitii citocromului microzomal.
n reacia de metabolizare a xenobioticelor, prin procesul de
hidroxilare enzimatic, sunt implicate direct vitamina E, vitamina PP,
aminoacizii i peptidele cu sulf, seleniul, glucoza, dar indirect ntregul
complex de substane care determin desfurarea normal a metabolismului.
Numeroi antioxidani biologici ca: vitamina C, polifenolii acioneaz
asupra ciclului citocromului P-450 indirect, ca donator de electroni pentru
citocromul b5 i, n felul acesta, asupra reaciei 4 din citocromul P-450.
Astfel, administrarea vitaminei C stimuleaz funciile citocromului P-
450 mrind rezistena organismului fa de xenobiotice (substane chimice,
aflatoxine, pesticide, etc.). O combinare a vitaminei C cu alfa-tocoferolul
poate mri capacitatea de detoxifiere a ficatului persoanelor supuse la factori
agresivi.

Influena stresului asupra metabolismului celular


n condiii de stress cronic, organismul trece la un nou nivel de
homeostazie, modificndu-se toate tipurile de metabolism, proteic, lipidic,
glucidic. Etapele primare ale acestor transformri sunt:
inhibarea enzimelor cheie ale glicolizei n diferite esuturi i
activarea enzimelor cheie ale gluconeogenezei n ficat i n rinichi
intensificarea mobilizrii lipidelor
99
Biologie celulara si moleculara

Factorii mediului extern care acioneaz asupra sistemului de reglare a


organismului, mresc nivelul activitii funcionale a celulelor.
Mecanismul celular prin care acioneaz stresorii se exercit prin
intermediul nucleotidelor ciclice. Substanele care cresc AMPc, ca
noradrenalina, histamina, i teofilina sunt imunosupresoare, n timp ce
substanele care acioneaz favorabil asupra GMPc, aa cum sunt acetilcolina
i insulina sunt imunostimulatoare.
Stresul determin, concomitent cu afectarea organelor int, i o
cretere a cantitii de colesterol.
Toate mecanismele modificate duc ctre descompunerea ATP-ului
din celule i creterea raportului ADP-AMP-Pi/ATP, proces cunoscut sub
denumirea de reglare fosforilant (RF), deoarece ATP-ul inhib, iar
produii lui de descompunere intensific oxidarea fosforilant. RF face parte
din factorii reglatori poteniali ai lanului de biosintez a proteinelor
(ADNARNproteine).
Creterea masei mitocondriilor i intensificarea sistemului energetic
conduce la un nou nivel de funcionare. Mrirea masei structurii funcionale
st la baza profilaxiei modificrilor dezadaptative i a prevenirii aciunii
excitanilor puternici.
Lizozomii sunt printre primele ultrastructuri celulare care sunt
incluse n reacia de rspuns a organismului la factorii adveri. Ca
urmare, se mrete numrul i dimensiunile lizozomilor, se modific
localizarea lor n celul, crete permeabilitatea membranelor, se activeaz
enzimele hidrolitice.
Concomitent, au loc modificri n membrana citoplasmatic i se
reduce activitatea fosfatazei alcaline, markerul enzimatic al acesteia. Se
consider c activitatea fosfatazei alcaline i acide din snge trebuie privit
ca un semn al unor modificri profunde ale membranelor citoplasmatice i
lizozomale.
Sub aciunea proteazelor lizozomale, fagocitele mresc secreia de
amine biogene (histamina, serotonina) din celulele grase. Serotonina
determin un deficit de oxigen, iar procesele energetice celulare sunt
orientate spre glicoliz, ca urmare se acumuleaz un exces de acid lactic.

100
Biologie celulara si moleculara

CAPITOLUL 16

APOPTOZA CELULAR

Apoptoza versus necroza


Fazele procesului apoptotic
Schimbri celulare n timpul apoptozei
Cile declanrii apoptozei
Recunoaterea i nlturarea celulelor apoptotice
Reglarea molecular a apoptozei
Implicaiile apoptozei n patologie

101
Biologie celulara si moleculara

Apoptoza i cancerul
Apoptoza versus necroza
Moartea celular fiziologic este esenial pentru dezvoltarea i
funcionarea normal a organismelor multicelulare. Celulele non-necesare,
deteriorate i potenial nocive trebuie nlturate din microclimatul celular
sntos pentru asigurarea homeostaziei structurale i funcionale a esutului.
Exemple ale morii celulare fiziologice au fost observate la aproape toate
tipurile celulare pe parcursul dezvoltrii i maturrii.

Pe parcursul dezvoltrii embrionare modelarea celular specific i


organogeneza sunt asigurate de un program spaio-temporal definit genetic
de proliferare i moarte celular.

In esuturile adulte, moartea celular fiziologic apare de asemenea,


proeminent n interiorul esuturilor ciclic stimulate sau dependente hormonal,
cum sunt endometrul, prostata i glanda mamar, dar i in turnoverul stady-
state al multor alte esuturi.

Moartea selectiv a celulelor este fundamental pentru dezvoltarea,


reglarea i funcionarea sistemului imun, incluznd eliminarea timocitelor
auto-reactive, selecia negativ a limfocitelor T si B i distrugerea celulelor
realizat de limfocitele T citotoxice. Celulele ce au suferit deteriorri
genetice ireparabile sunt de asemenea, detectate de procese endogene,
probabil limitndu-se astfel, diseminarea leziunilor genetice potenial nocive.
Limfocitele ce invadeaz esuturi privilegiate din punct de vedere
imunologic sunt rapid eliminate, astfel protejndu-se regiunile sensibile de o
deteriorare produs printr-un rspuns inflamator .

Conceptul unificator al tuturor acestor circumstane diverse este acel


c procesul de moarte celular este mediat de un set comun de evenimente i
se desfoar pe ci biochimice similare conducnd la o dispunere stereotip
a modificrilor structurale.

Aceast moarte celular este numit apoptoz. Apoptoza este un


proces nnscut, conservat din punct de vedere evolutiv, prin care celulele
sistematic i inactiveaz, i dezasambleaz i i degradeaz propriile
componente structurale i funcionale pentru desvrirea propriului lor
deces.

Acest proces poate fi activat intracelular printr-un program de


dezvoltare definit genetic sau extracelular prin intermediul proteinelor

102
Biologie celulara si moleculara

endogene, citokinelor i hormonilor ca i de componente xenobiotice,


radiaii, stresul oxidativ i hipoxia.
Abilitatea unei celule de a intra n apoptoz ca rspuns la un semnal de
moarte depinde de statusul su proliferativ, poziia ciclului celular i de
expresia controlat a genelor care promoveaz, inhib i afecteaz programul
de moarte.

Moartea celular a fost considerat la nceput un proces haotic. Totui,


aa cum o celula i poate echilibra metabolismul, pendulnd ntre anabolic i
catabolic, tot astfel, un organism multicelular trebuie s echilibreze ratele de
proliferare celular i de moarte celular pentru meninerea homeostaziei.

De asemenea, un organism trebuie s ndeparteze celulele senescente,


deteriorate sau anormale care ar putea s interfere cu buna funcionare a unui
organ sau s-ar putea transforma malign.
De obicei apoptoza afecteaz celule individuale i, odat iniiat, se
propag rapid. Ingestia celulelor apoptotice de ctre macrofage nu induce
eliberarea enzimelor proteolitice sau a oxigenului singlet care e toxic.
Fragmentarea celulelor are loc fr scurgerea coninutului celular n
spaiul extracelular, iar ndeprtarea celulelor apoptotice nu provoac un
rspuns inflamator. Absena inflamaiei reprezint o trstur crucial
permindu-se astfel, moartea celulei fr deteriorarea celulelor adiacente.
Moartea celular poate fi accidental sau programat ntr-un
organism multicelular. Dovezile sprijin ipoteza existenei unui program de
sinucidere inerent n celulele vertebratelor care este activat atunci cnd
moartea celulei este dorit pentru binele restului comunitii celulare.
n esuturile vertebratelor s-au descris dou modele de moarte
celular cu morfologie distinct: apoptoza i necroza , ns mecanismele lor
la nivel molecular nu sunt nc complet nelese.

Necroza poate fi descris ca i colapsul metabolic celular i apare


cnd celula nu-i mai poate menine homeostazia ionic. Pe masur ce
nivelurile de ATP se epuizeaz i gradientul ionic transmembranar se disip,
celulele se umfl i organitele intracelulare se dilat.
Iniial se observ nmuguriri reversibile ale membranei, modificri
timpurii n conformaia i funcia mitocondriilor i celula devine rapid
incapabil de a menine homeostazia. Depind un prag, procesul devine
ireversibil.
Membrana celular poate deveni situsul major al alterrilor
pierzndu-i astfel capacitatea de reglare a presiunii osmotice, celula se
umfl i crap.

103
Biologie celulara si moleculara

Deteriorrile membranelor interne permit eliberarea enzimelor


lizozomale, coninutul celulei este mprtiat n spaiul tisular nconjurator i
provoac un rspuns inflamator nespecific.

Necroza este indus tipic de modificri extreme n mediul


nconjurtor al celulei, ce determin leziuni severe i brute, provocate de
exemplu de ischemie, hipertermie meninut sau traume fizice sau chimice.
Se presupune ca necroza nu este influenat genetic.

Apoptoza este o form de moarte celular n care procesul este mult


mai subtil. Este adesea echivalat cu moartea celular programat.
Apoptoza se refer la o serie de modificri morfologice pe parcursul
procesului de moarte celular, modificri diferite de cele observate n
necroz, fiind asociat cu procesul normal de reglare a esuturilor.
Apoptoza apare n celule individuale dispersate, nu n grupuri de celule
nvecinate, aa cum se ntampl n necroz.
Motivul pentru care celulele trebuie s moar este diferit de la un tip
celular la altul, la fel i mecanismul de declanare. Deseori semnalul de
sinucidere provine din mediul nconjurator, ca n expunerea la/sau retragerea
dintr-un mediu cu hormoni sau factori de cretere.

Acest aspect este incitant din punct de vedere conceptual, atta vreme
ct se traduce prin faptul c, soarta unei celule este dependent de activitatea
alteia; chiar dac moartea este programat, locusul programului este n afara
celulei care trebuie sa moar.

n alte cazuri, de exemplu turnoverul neutrofilelor, se pare c celula are


un ceas intern autonom care ar controla programul de moarte a celulei
(adevaratul program de moarte celular autonom a fost identificat la
nematode i genele ce controleaz acest proces au fost elucidate).

Cile de activare a apoptozei vor fi diferite, n celule diferite, dar


mecanismul de moarte n sine va fi mereu acelai, ceea ce nseamn c exist
o cale final comun. Este foarte important ca, n studiul apoptozei, s
ncercm sa facem distincia dintre procesele care sunt specifice celulei de
cele care sunt specifice morii.

Se pare c exist multe mecanisme declanatoare ale cilor de


sinucidere, chiar i ntr-un singur tip de celul. Nu toate acestea vor fi
recunoscute imediat ca fiind programate.

De exemplu, pentru a activa calea apoptotic, timocitele pot fi


semnalizate de ctre glucocorticoizi sau de o cross-linkare a receptorului
104
Biologie celulara si moleculara

pentru antigen, n acest caz, ambii stimuli fiind considerai fiziologici. Dar,
timocitele vor suferi un proces apoptotic identic dup expunerea la o doza
mic de radiaii ionizante sau la o otrav. Deoarece nici unul dintre aceti
ageni nu este fiziologic, n acest caz moartea celulelor nu poate fi strict
definit ca fiind programat.

Totui definiia poate fi lrgit n sensul c, n anumite celule, cnd


sunt deteriorate nespecific, se poate activa fiziologic o moarte programat.
Aceasta presupune c deteriorarea sa nu fie foarte severa pentru ca
programul s poata fi exprimat: dac timocitele sunt meninute la 43C vor
muri prin necroz, dar dac se revine, suficient de rapid, la o temperatura de
37C, vor muri prin apoptoza.

S-a sugerat c, ar fi prea periculos pentru limfocite s ncerce repararea


unor astfel de tipuri de leziuni, atta vreme ct o reparare imperfect ar putea
duce la instalarea autoimunitii sau a leucemiei, n astfel de cazuri celulele
activndu-i mecanismul apoptotic.

Fazele procesului apoptotic


Celulele au mecanisme intrinseci prin care sunt capabile s identifice
condiiile variate la care sunt expuse i s deceleze ntre normal i patologic.
Se poate vorbi de cteva stri fiziologice ale celulelor, n condiii normale:
1) celul metabolic activ, dar nu desfoar nici procesul de proliferare i
nici cel de apoptoz (celula aflat n faza G0);
2) celul n curs de desfurare a procesului de proliferare
(G0G1SG2mitoza);
3) celul pe punctul de a desfura procesul de moarte celular fie pe
calea programat (G0D1FD2fragmentare celular
apoptotic), fie pe calea neprogramat (necroza).

105
Biologie celulara si moleculara

Figura 16.1 Schema desfurrii ciclului celular care arat opiunile unei
celule aflate n faza G0

D1 definete perioada pe parcursul creia se activeaz noi gene a


cror expresie proteic este cerut pentru inducerea fragmentrii ADN (faza
F).

D2 definete perioada nsi celula se fragmenteaz n corpi


apoptotici.
Celulele pot fi induse s intre pe calea morii celulare programate din orice
faz a ciclului celular de proliferare (G1, S sau G2) (Figura 16.1).
Semnalele locale sau sistemice
ale factorilor de cretere ce regleaz
progresia in interiorul ciclului celular
sunt specifice tipului celular si sunt
independent determinate ca parte a
fenotipului de difereniere a celulei n
cauz.

Astfel, acelai factor de cretere


(ex: factorul transformant de cretere
1) poate avea efecte agoniste sau
antagoniste n cadrul ciclului celular al
diferitelor tipuri de celule (inductor al
proliferrii celulare n celulele
mezenchimale sau inductor al arestului

106

Figura 16.2 Celul


Biologie celulara si moleculara

n G0 sau progresia prin fazele


apoptozei pentru celulele epiteliale).

Procesul apoptotic poate fi


mprit n trei etape distincte:
- angajarea, n care celula care
a primit un stimul apoptotic letal
devine ireversibil angajat pe calea
morii;
- executarea, pe parcursul
creia apar majoritatea modificrilor
structurale;
-clearance-ul, n cadrul cruia
resturile celulare sunt ndepartate prin
fagocitoz.

Modificrile structurale ce apar pe parcursul fazei executorii au fost


descrise pentru prima dat de Kerr i colaboratorii, iar acum sunt din ce in ce
mai bine nelese din punct de vedere al mecanismului.

Schimbri celulare n timpul apoptozei


Modificri morfologice i biochimice coordonate apar n interiorul
nucleului, citoplasmei, organitelor i membranei plasmatice (Figura 16.2,
Figura 16.3). Modificrile morfologice care se observ cel mai uor sunt cele
care apar n interiorul nucleului.

Cromatina condenseaz i formeaz agregate de-a lungul periferiei


nucleare relevnd un model conformaional semilunar. Caracterizarea
morfologic a cromatinei demonstreaz o degradare ordonat a ADN-ului de
ctre o nucleaz endogen dependent de cation, nti n fragmente mari de
30-50 kilobaze pn la fragmente nucleozomale de 180-200 perechi de baze.

nceput fragmentare
ADN, cromatina se
heterocromatinizeaz

Fragmentarea nucleului

107
Biologie celulara si moleculara

Fragmentarea celulei

Figura 16.3 Fenomenele citologice din timpul apoptozei, dup Cooper, 2009.

Totui, clivarea cromatinei la fragmente nucleozomale nu are loc n


toate tipurile celulare i poate fi inhibat fr a bloca celelalte modificri ale
apoptozei. Odat cu condensarea cromatinei este alterat ultrastructura
nuclear. Lamina nuclear i reeaua de filamente intermediare care menine
integritatea anvelopei nucleare i distribuia porilor nucleari sunt clivate
proteolitic.

Astfel, distrugerea structurii reelei nucleare ar putea permite


alturarea porilor nucleari i frmiarea nucleului n fragmente ce conin
cromatin.

Celelalte organite citoplasmatice rmn intacte din punct de vedere


structural cu toate c disfunciile mitocondriale sunt asociate cu apoptoza.
Modificrile nucleare sunt precedate de reducerea potenialului
transmembranar mitocondrial, necuplarea transportului de electroni de la
sinteza ATP-ului i creterea generrii de specii reactive de oxigen.

n citoplasm apare aciunea transglutaminazelor, filamentele


citoscheletale se agreg n formaiuni paralele i reticulul endoplasmic se
dilat i fuzioneaz cu membrana plasmatic crend cratere n forma de sac
la nivelul fuziunii.

Membrana celular se umfl i se cuteaz ntr-o msur mult mai mare


dect n necroz, fenomenul a fost numit zeioz. Integritatea structural a
membranei este ulterior compromis prin pierderea asimetriei fosfolipidice, a
microvililor i a jonciunilor intercelulare.

Celula se sfericizeaz, se ndeparteaz de vecinii si i se contract


dramatic i expulzeaz protuberane care se separ n corpi apoptotici
nvelii n membran (Figura 16.3).

108
Biologie celulara si moleculara

n interiorul esuturilor, celulele apoptotice i corpii apoptotici sunt


recunoscui i fagocitai rapid de ctre celulele vecine sau macrofage.

Recunoaterea celulelor apoptotice de ctre fagocite poate implica


interacii ale lectinelor macrofagelor endogene cu resturi zaharidice N-acetil
specifice exprimate pe suprafaa celulelor apoptotice, interaciile specific
mediate de receptori cu fosfatidilserina din stratul exterior al membranei
plasmatice i interaciile trombospondina/receptori de suprafaa celular, ce
conin resturi incomplet caracterizate, de pe suprafata celulelor apoptotice.

Semnificativ pentru strategia central a acestui tip de moarte celular


este clerance-ul rapid i eficient al resturilor apoptotice de ctre fagocitele
vecine, amatoare sau profesioniste, deoarece previne rspunsul inflamator
care, altminteri, ar urma calea distrugerii celulare i deversarea proteinelor
intracelulare i a acizilor nucleici n spaiul extracelular.

Multi factori care influeneaz angajarea sau susceptibilitatea celular


la apoptoz sunt implicai direct n recepia i transmiterea semnalului
apoptotic. Aceti factori reglatori sunt frecvent selectai pentru a bloca
procesul pe parcursul transformrii neoplazice sau dezvoltrii rezistenei la
medicamente i sunt subiectul modificrii virale.

Pe parcursul fazei D1 apoptotice, celula sufer o reprogramare


genetic, proces pe parcursul caruia gene care erau normal exprimate acum
sunt supresate i invers.

Aceste modificri epigenetice au ca rezultat fragmentarea dublu


catenar a ADN pe parcursul fazei F.

Celulele care sufer apoptoza, se contract considerabil, iar electrono-


micrografiile evideniaz o citoplasm extrem de condensat cu organite ce
par a fi normale. Cea mai plauzibil explicaie ar fi aceea c celula a pierdut
apa i, cum nu se evideniaz o umflare imediat, probabil a pierdut ioni
izoosmotic.

Dei apoptoza este un proces opus necrozei, reprezentnd calea


fiziologic de moarte celular, poate fi de asemenea, provocat de stimuli
patologici. n general, orice stimul ce produce necroza prin distrugere
celular direct poate induce apoptoza, n cazul n care celula iniial
supravieuiete. n acest sens, apoptoza reprezint un rspuns celular
coordonat la stimuli vtmtori care nu sunt imediat letali.

109
Biologie celulara si moleculara

Nu se poate vorbi de o serie invariabil de evenimente metabolice ce


au loc n cursul apoptozei. Totui, timpuriu, n apoptoz, n multe tipuri
celulare apare o cretere susinut a nivelului de calciu ionizat citosolic.

Calciul, poate activa latent enzime care contribuie la modificrile


structurale din cursul apoptozei. Aceste enzime includ o endonucleaz
nuclear calciu dependent care cliveaz invariabil ADN i o
transglutaminaz care modific proteine citosolice. Proteazele calciu
dependente (calpaina) degradeaz citoscheletul.

Modificarile membranei plasmatice


Fagocitarea rapid corpilor apoptotici de ctre celulele adiacente, ct
timp membranele lor celulare sunt intacte (pentru prevenirea inflamaiei i
lezrii esuturilor n care se formeaz, n special cnd procesul apare n
condiii fiziologice) implic operarea unui mecanism de recunoatere foarte
specific i exist dovezi care susin existena mai multor astfel de
mecanisme. In mod normal, fosfolipidele membranei plasmatice sunt
distribuite asimetric.

Lipidele ce conin colina, cum ar fi fosfatidilcolina (FC) i


sfingomielina sunt concentrate pe faa extern a membranei plasmatice n
timp ce aminofosfolipidele cum sunt fosfatidiletanolamina (FEA) i
fosfatidilserina (FS) abund pe faa intern a membranei plasmatice (Figura
16.4-a).

Pierderea asimetriei fosfolipidice i expunerea FS a fost prima oar


demonstrat pentru limfocite, dar aceast descoperire a fost confirmat ntr-o
serie de tipuri celulare.
Externalizarea FS este rapid sugernd mai degrab un transport facilitat
dect o difuzie pasiv a lipidelor prin bistrat. Aceast activitate se presupune
c este mediat de o protein enzimatic activat de calciu, ATP
independent i nespecific din punct de vedere al fosfolipidelor transportate
.

Din punct de vedere biologic, expunerea FS la suprafa e considerat


a fi un ligand pentru nlturarea rapid a celulelor ce-l exprim (Figura 16.4-
b). O alt consecin biologic este legat de faptul c FS servete drept
cofactor pentru cascada de coagulare, domeniu n care, datele ncep s se
contureze sugernd c FS poate avea o serie de efecte anti-inflamatoare sau
imunosupresive.

110
Biologie celulara si moleculara

Figura 16.4 Modificrile plasmatice nainte (a) i dup instalarea


apoptozei (b), fosfatidil serina dispus n mod normal citosolic devine externalizat
(b), fapt ce permite recunoaterea fragmentelor apoptotice de macrofage, dup
Cooper, 2009

Cile declanrii apoptozei


1. Extrinseci- const n activarea unor receptori pro-apoptotici.
Substanele care se leag la acetia se numesc liganzi apoptotici i sunt de
tipul: Apo2L/TRAIL, CD95/FasL. Acetia construiesc receptorii de
recunoatere de tipul: DR4/DR5 i CD95/Fas, TNF (tumour necrosis factor
), receptori care fac parte din categoria celor ce mediaz rspunsurile
inflamatorii.

111
Biologie celulara si moleculara

Figura 16.5 Declanarea apoptozei pe calea extrinsec i inducerea


cascadei de caspaze (de iniiere i efectoare), dup Cooper, 2009, modificat.

2. Intrinseci - sunt mecanisme declanate ca i rspuns la distrugerea


ADN, dereglarea ciclului celular, detaarea de matricea extracelular,
hipoxia celular i ali factori de stress.
Aceast cale dezvolt sinteza de proteine pro-apoptotice care activeaz
enzimele caspaze din mitocondrii (Figura 16.6, Figura 16.7).
Proteinele pro-apoptotice sunt reglate de ctre permeabilitatea
membranei mitocondriene. Mitocondriile elibereaz citocrom c (Figura
16.7), care se asociaz cu un adaptor apoptotic (Apaf-1=protease activating
factor 1). Aceast asociere permite formarea unui complex multiproteic
numit apoptozom (cu rol de reglare enzimatic a caspazei 9). Iniiatorul
caspazei 9 se afl n interiorul complexului multiproteic (Figura 16.6).

112
Biologie celulara si moleculara

Figura 16.6 Complex multiproteic de tip apoptozom cu rol n reglarea


caspazelor, dup Cooper, 2009

3- Cascadele de caspaze joac un rol vital n inducia, transducia,


amplificarea i realizarea semnalelor apoptotice. Caspazele sunt un grup de
enzime cisteine care sub aciunea factorilor externi i interni distrug
proteinele eseniale din celul.

Figura 16.7 Calea apoptozei cu participarea mitocondriei, dup Cooper,


2009

113
Biologie celulara si moleculara

Caspazele pot fi de 2 tipuri: iniiatori i efectori (Figura 16.5).


Iniiatorii se afl n apoptozom (Figura 16.5).
Enzimele caspaze intervin n: distrugerea ADN, distrugerea laminei, a
proteinelor citoscheletului (miozina, actina, -actinina, tubulina, vimentina)
i proteinele aparatului Golgi

Recunoaterea i nlturarea celulelor apoptotice


Evenimentul final, comun pentru majoritatea celulelor apoptotice este
reprezentat de recunoaterea i ndeprtarea lor de ctre fagocite. Celulele
apoptotice sunt ndeprtate naintea lizei lor, acest eveniment sugernd c ele
exprim modificri specifice pe suprafaa ce semnalizeaz fagocitelor
legarea i nglobarea lor.

Aceste fagocite pot fi profesioniste (macrofagele) sau amatoare


(fibroblaste, celule epiteliale i celule musculare netede din pereii vaselor de
snge). Pn acum au fost descrii mai muli receptori pe macrofage i alte
celule ce leag celulele apoptotice i mediaz nglobarea lor. Acetia sunt
reprezentai de receptori lectin-like, receptorul pentru vitronectine v3 ,
CD36, receptorul de recunoatere al fosfatidilserinei, nc necaracterizat,
CD14 i receptori scavanger.

Mecanismul prin care aceti receptori mediaz fagocitoza celulelor


apoptotice nu este cunoscut, iar liganzii acestor receptori nu sunt nc bine
caracterizai. Cu toate acestea comun multor celule rmne expunerea
fosfatidilserinei pe faa extern a membranei plasmatice, acest fosfolipid
prnd a fi recunoscut ntr-o manier stereospecific de ctre subseturi de
macrofage, de ctre celule melanoma, de celule musculare netede din pereii
vaselor de snge.

n mod normal, fosfolipidele de membran sunt distribuite asimetric.


Macrofagele sunt fagocite profesioniste ce ndeprteaz celulele i corpii
apoptotici, dar la acest proces pot participa i alte tipuri celulare, ca de
exemplu celule epiteliale i tumorale ce pot ngloba celule apoptotice vecine.
n timpul nglobarii celulelor apoptotice, macrofagele nu elibereaz ageni de
tipul eicosanoizilor i citokinelor.

Lipsa acestui rspuns pare a fi determinat de mecanismul prin care


celulele apoptotice sunt ingerate, dat fiind c celulele apoptotice, opsonizate
pentru a putea fi preluate de receptorii Fc ai macrofagelor, induc, de
exemplu, eliberarea de tromboxan. Totui, dac celulele apoptotice nu sunt

114
Biologie celulara si moleculara

preluate de ctre macrofage, ele se umfl i se dezintegreaz eliberandu-i


coninutul.

Dac ar avea loc un astfel de eveniment pe parcursul clearance-ului


neutrofilelor din situsurile inflamate, eliberarea coninutului granulelor
citoplasmatice ar avea consecine nefaste. Mai mult dect att, evadarea
nedorit a materialului nuclear din leucocitele moarte, poate fi de asemenea
periculoas, nucleozomii eliberai din limfocitele apoptotice neingerate pot
stimula sinteza de ADN i imunoglobuline in limfocitele viabile.

Exist mai multe mecanisme posibile de recunoatere a celulelor


apoptotice de ctre fagocite i de asemenea, mai multe statusuri int etalate
de celulele apoptotice.

Recunoaterea celulelor apoptotice de fagocite


1- lectinele fagocitelor

Un mecanism obinuit de interacie intercelular l reprezint legarea


carbohidrailor de la suprafaa celular a unei celule de lectinele altei celule,
mecanism ce poate fi inhibat specific de ctre zaharuri simple recunoscute de
lectine.
Unele din consecinele apoptozei sunt reprezentate de modificrile
specifice ale carbohidrailor de pe suprafaa membranei celulare. Se
presupune c pierderea, printr-un mecanism nc necunoscut, a unui reziduu
terminal de acid sialic din lanurile laterale glicoproteice ar putea s expun
N-acetilglucozamina, N-acetilgalactozamina i galactoza, mascate n condiii
normale, restituind aceste reziduuri accesibilitii interaciunii cu presupusele
lectine macrofagice (Figura 16.8 -1).

115
Biologie celulara si moleculara

Figura 16.8 Trei mecanisme prin intermediul crora fagocitele ar putea


recunoate celulele ce intr n apoptoz.

2 -receptori trombospondinici ai fagocitelor

Macrofagele umane derivate din monocite pot recunoate neutrofile


i limfocite umane apoptotice prin intermediul receptorilor pentru
vitronectina (VnR) v3 i receptorii scavenger din clasa B (CD36). Aceti
receptori se leag de trombospondin, ce servete drept punte ntre
macrofage i celulele apoptotice (Figura 16.8-2). Se pare c aceast
recunoatere este independent de expunerea fosfatidilserinei la suprafaa
membranei celulei apoptotice i pare a fi legat de fenotipul macrofagului i
nu de tipul celulei apoptotice.

3- receptorii pentru fosfatidilserina

Este clar c macrofagele pot recunoate fosfatidilserina ntr-o


manier dependent de doz i de stereospecificitate, fapt ce sugereaz
existena receptorului pentru FS (Figura 16.8-3). Au fost descrii o serie de
receptori cu rol n medierea recunoaterii FS i anume CD68, CD14,
anexinele, receptorii scavenger.
Exist i date care sugereaz recunoterea FS de pe celulele
apoptotice de ctre fagocite amatoare. Nu se tie totui dac aceti
receptori sunt specifici pentru FS. Cel mai probabil este c mai muli
receptori pot lega FS, dar rmne nc sub semnul ntrebrii dac ei pot
recunoate FS pe suprafaa celular.

116
Biologie celulara si moleculara

Reglarea molecular a apoptozei

In pofida numeroaselor progrese ce s-au realizat n cercetarea


tiinific este foarte dificil identificarea moleculelor responsabile de
apoptoz cu ajutorul demersurilor biochimice i moleculare n sistemele
mamaliene.
Nematodul Caenorhabditis elegans reprezint un model particular de
studiu al reglrii genetice a apoptozei extrem de util.
Astfel, s-a identificat un numar mare de mutaii ce afecteaz stadii
specifice ale procesului apoptotic i genele corespunztoare care au fost
ordonate ntr-o schem genetic.
Doua dintre aceste gene, ced-3 si ced-4 sunt necesare pentru toate
formele de apoptoz din cadrul dezvoltrii i se consider a codifica efectorii
finali ai cii apoptotice. O alt gen reglatoare cheie, ced-9, este necesar
pentru supresia apoptozei n celulele programate s supravieuiasc.
Aceast gen codific o protein omolog cu familia Bcl-2 din
sistemul uman. Mai mult dect att, expresia lui Bcl-2 poate inhiba apoptoza
n nematode i poate chiar substitui parial pierderea funciei lui Ced-9, ceea
ce indic faptul c cel puin cteva componente ale cii apoptotice sunt
conservate n evoluie.
La mamifere sunt aproximativ 20 de proteine de tipul Bcl-2 care sunt
mprite n trei grupe funcionale:
grupul antiapoptotic (Bcl-2, Bcl-xL) include proteine care
funcioneaz ca forme inhibitoare ale apoptozei
proteine proapoptotice (Bax, Bak) care induc activarea caspazelor
proteine BH3 proapoptotice (Bid, Bad, Noxa, Puma, Bim) care
funcioneaz asupra semnalelor ce induc apoptoza.

Au fost izolate mutaiile din 14 gene diferite ce afecteaz apoptoza n


diferitele ei etape. Mutaiile ce influeneaz decizia de a muri afecteaz doar
un numr mic de gene. Genele implicate n etapele ulterioare sunt comune
tuturor celulelor somatice, din organism, angajate pe calea morii.

Implicaiile apoptozei n patologie

117
Biologie celulara si moleculara

Dereglarea procesului apoptotic, care are ca


rezultat o moarte celular excesiv, insuficient sau
prematur, constituie fundamentul iniierii i
progresiei multor maladii umane.

Se presupune c o exacerbare a apoptozei


celulelor neuronale ar putea contribui la progresia i
severitatea mai multor dereglri neurodegenerative,
care includ maladia Alzheimer, scleroza lateral
amiotrofic, atrofia muscular spinal, maladia
Parkinson, maladiile neuromotorii i chiar atacul
cerebral.

Apoptoza excesiv la nivelul celulelor T


circulante este corelat cu sindromul
imunodeficienei severe i SIDA.

Manifestarea insuficient a acestui proces


constituie mecanismul de declanare al anumitor boli
autoimune i limfoproliferative. Inhibarea procesului
apoptotic prin pierderea mutaiilor funcionale n
genele activatoare ale morii sau ctigarea unor
mutaii funcionale n genele supresoare de moarte
este incriminat n transformarea neoplazic.

Virusurile i-au dezvoltat mecanisme, care


manipuleaz calea apoptotic, pentru a-i asigura
perpetuarea propriei supravieuiri, nhibnd
apoptoza celulelor infectate, pentru a permite
replicarea viral, i activnd apoptoza mecanismelor
celulare de aprare ale gazdei. innd cont de
aceste realitai, manipularea cilor apoptotice prin
intervenie farmacologic sau genetic promite noi
oportuniti terapeutice pentru o serie de maladii.

Circumstanele apariiei apoptozei se mpart n


2 mari categorii. Apoptoza apare n esuturile
normale, unde rspunde de deleia celulelor, i este
de asemenea, observat n contexte patologice
specifice. Cel puin ntr-o parte din situaiile din
categoria a doua, poate fi susinut teoretic faptul c
vine n sprijinul unei semnificaii biologice.

118
Biologie celulara si moleculara

Supravieuirea celulelor n curs de distrugere


ar putea fi nociv gazdei. n contrast, necroza este
totdeauna patologic, fiind consecina lezrii majore
a celulei i nu i poate fi atribuit nici o funcie
homeostatic.

Celulele rspund la leziune, dac pot, prin


apoptoz. Dac un medicament induce apoptoza ntr-
un limfocit, de obicei furnizeaz mai multe date
despre celul dect despre medicament, deci astfel
de experimente trebuie interpretate cu precauie.

Implicatiile acestui proces in terapie sunt


evidente: un medicament care inhib apoptoza poate
fi folosit n prevenirea pierderii celulei, acordnd
timp altor forme de terapie s nlture infecia. n
cancer, dimpotriv, va avea valoare terapeutic o
cale de stimulare a apoptozei n celulele maligne.
Modul de obinere al acestui efect cu specificitate
adecvat reprezint o provocare, la fel ca n cazul
agenilor chemoterapeutici uzuali.

O alta potenial terapie este reprezentat de


anticorpii declanatori ai apoptozei, dar foarte
importante sunt i imunotoxinele, care ascund
liganzi, care induc apoptoza.

Concomitent cu explorarea potenialului


terapeutic al apoptozei este necesar descoperirea
mecanismelor i moleculelor implicate.

Legturile intercelulare caracteristice


formelor superioare de via nu ar fi posibile, fr
un mecanism de ndepartare individual a celulelor,
care nu mai sunt necesare sau care nu mai
funcioneaz normal. Reglarea defectiv a morii
celulare programate ar putea juca un rol n etiologia
cancerului, SIDA, bolilor autoimune si bolilor
degenerative ale sistemului nervos central.
Manipularea farmacologic a apoptozei ofer noi
posibiliti de profilaxie i tratament acestor maladii.

119
Biologie celulara si moleculara

Apoptoza i cancerul
Oncologii au fost tradiional preocupai n principal de proliferarea
celular, cu toate acestea, n ultimul timp, atenia lor se ndreapt, cu un
interes din ce n ce mai mare, spre studiul apoptozei.

Extinderea cunotinelor despre controlul apoptozei la nivel


molecular a dus la lrgirea semnificaiei ei potenial oncologice, depind
simpla alimentare a unei explicaii mecaniciste pentru deleia celulelor
tumorale. n particular, descoperirea faptului c apoptoza poate fi reglat de
produii unor anumite protooncogene i de gena supresor tumoral p53, a
deschis noi drumuri viitoarelor cercetri.

Atunci cnd modificrile de la nivelul ADN provoac acumularea


anormal de celule se produce transformarea malign. Ratele comparative,
ale morii celulare i ale diviziunii celulare, determin viteza de cretere a
cancerului. Anumite celule canceroase se divid mult mai ncet dect celulele
normale, dar cancerul continu sa se extind, datorit prelungirii timpului de
via al celulei.

Muli carcinogeni provoac rupturi ADN sau interfer cu enzimele


necesare pentru replicarea corect a ADN. Celula poate rspunde la acest tip
de alterare n mai multe feluri: poate ntrzia diviziunea celular pn la
repararea leziunii, poate suferi apoptoza sau poate progresa fr ntrerupere
n ciclul de cretere celular.

Apoptoza este o metod eficient de prevenire a transformrii


maligne, deoarece ea ndeprteaz celulele care posed alterri genetice.
Apoptoza anormal poate promova dezvoltarea cancerului, att prin
permiterea acumularii de celule n diviziune, ct i prin blocarea ndeprtrii
variantelor genetice cu potenial malign ridicat.

nc nu se cunosc factorii, care determin celula s urmeze una din


cele 3 ci: intrarea n apoptoz dup leziune, repararea deteriorrii sau
continuarea ciclului celular. Paradoxal, anumite gene care stimuleaz
diviziunea celular, cum este c-myc, particip la deciderea cii de urmat.
Concentraiile de ARN i proteina pentru c-myc cresc timpuriu n apoptoza
i supraexprimarea acestor oncogene induce apoptoza n fibroblaste.

Oncogena Bcl-2 ar putea fi supresorul general al morii celulare


pentru genele care regleaz direct apoptoza. Toate celulele hematopoietice i

120
Biologie celulara si moleculara

limfoide, multe celule epiteliale i neuroni conin gena Bcl-2, ntlnit n


special n membrana mitocondrial, nucleu i reticul endoplasmic.

Limfoamele foliculare de celule B posed o concentraie crescut de


proteina Bcl-2, datorit unei translocaii, care plaseaz gena Bcl-2 sub
controlul unui promotor puternic, cel al genei care codific lanul greu al
imunoglobulinei.

Produsul proteic al genei supresoare tumorale p53 poate ntrzia


progresia ciclului celular, naintea iniierii sintezei replicative de ADN.
Multe cancere umane posed mutaii sau deleii la nivelul genei p53.

Proteinele codificate de virusurile oncogene pot, de asemenea, lega i


inactiva proteina p53. Funcionarea defectuoas a p53 poate promova
dezvoltarea cancerului, prin permiterea duplicrii ADN n celulele cu mutaii
secundare, nainte de o reparare complet.

Totui, p53 este doar un inhibitor al diviziunii celulare, n alte situaii


se comport ca o apoptogen direct (o gena care provoac apoptoza).
Superproducerea proteinei p53 normale, n linia celular leucemic mieloid,
induce rapid moartea celular prin apoptoz.

n multe tipuri celulare, proliferarea necesit cel puin 2 stimuli


externi, uneori numii semnale de competen i progresie. Semnalele de
competen declaneaz evenimentele metabolice comune att replicrii, ct
i apoptozei; semnalul de progresie abate celula spre replicare, altfel survine
apoptoza.

Apoptoza poate fi considerat o cale alternativ, care distruge


celulele incapabile s strabat punctul de control nainte de replicarea ADN
i se petrece n celulele competente activate, cnd un semnal de progresie
este absent sau anormal sau cnd o celul nu-i repar o leziune ntr-o
perioad critic.

Majoritatea medicamentelor anticancerigene: inhibitori ai


topoizomerazei, ageni alchilani, antimetabolii i hormoni antagoniti,
produc apoptoza n celulele sensibile. n urma acestor observaii, este
subneles faptul c eficiena lor nu depinde totdeauna doar de interacia cu o
int biochimic specific; un efect asupra evenimentelor metabolice
conducnd la apoptoz poate, de asemenea, influena rspunsul la
chemoterapie.

121
Biologie celulara si moleculara

S-a descoperit faptul c, n diferite cancere umane, concentraia


endonucleazelor calciu- dependente, care degradeaz ADN-ul pe parcursul
apoptozei, variaz enorm. Tendina unei celule cancerigene de a suferi
apoptoza poate fi important, n special pentru terapia tumorilor maligne cu o
rat sczut de cretere, care sunt de obicei rezistente la ageni citostatici.

Apariia spontan a apoptozei n tumori

Apoptoza poate fi gsit n toate tumorile virtuale, netratate. Dei s-


au efectuat puine studii cantitative precise, evalurile histologice indic
faptul c extinderea apoptozei n anumite tumori umane se apropie de ceea
ce s-a observat n esuturile cu involuie rapid evideniind semnificaia ei
cinetic, uneori considerabil.

Factorii responsabili pentru apariia spontan a apoptozei n tumori


sunt, indubitabil, diveri. Apoptoza, deseori este proeminent mai ales la
locusul de confluen cu necroza, unde se presupune c ischemia moderat
este implicat n iniierea ei, aceasta fiind o cauz cunoscut a activrii
apoptozei n esuturile non-neoplazice. S-a aratat c, TNFa (factorul de
necroz tumoral) induce apoptoza n liniile de celule tumorale in vitro, astfel,
o serie de fenomene apoptotice observate in vivo, n tumori ar putea fi
atribuite eliberrii acestei citokine de ctre macrofagele infiltrante.

n alte cazuri, apoptoza poate fi rezultatul atacului tumorii de ctre


limfocitele T citotoxice. Totui, un nivel ridicat al apoptozei este observat i
n locusurile pre-neoplazice i n nodulii care se dezvolt n ficat, dupa
administrarea de carcinogeni chimici, este improbabil ca factorii mentionai
ar putea fi operativi n aceste circumstane.

Este posibil ca prezumtivele mecanisme reglatoare ale populaiilor


celulare, descrise mai sus, acioneaz ntr-o etap timpurie a procesului de
carcinogenez, cu o apoptoz crescut, care echilibreaz temporar creterea
proliferrii celulare. n sfrit, nivelurile crescute de apoptoz n tumori pot
fi rezultatul unui proces intrinsec al acestor celule. Ratele de apoptoz, gsite
n tumori similare difer, fiind rezultatul expresiei diferitelor oncogene.

122
Biologie celulara si moleculara

GLOSSAR
adenin -Baz purinic din structura acizilor nucleici
aderens -Jonciune intercelular n care filamentele de actin ale
citoscheletului sunt legate de membrana plasmatic
aminoacil ARNt sintetaz-Enzim care asigur ataarea corect a
aminoacizilor la secvena anticodon a ARN
amfipatic-Molecul care are att regiuni hidrofobe ct i hidrofile
anafaz-Etap a diviziunii celular n care cromatidele se separ i
migreaz ctre polii celulei
actina-Actin care prin polimerizare formeaz filamentele
citoscheletului
adaptina-Protein care se ataeaz de receptoriii membranari i
intervine n formarea veziculelor cu clatrin
aminoacid-Componenta monomeric a proteinelor
angiogenez-Formarea de vase sanguine noi
ankirin-Component proteic a citoscheletului membranar
anticodon-Secven nucleotidic la ARNt care formeaz perechi de
baze complementare cu secvena ARN mesager
antiport-Transport prin membran a dou molecule n direcii opuse
apoptoz-Proces activ de moarte celular programat
apoptozom- Complex proteic format din citocrom c i care activeazp
caspaza 9 implicat n apoptoz
aquapor-Canal proteic prin care apa trece rapin prin membrana
plasmatic

123
Biologie celulara si moleculara

ATP (adenozin-trifosfat)-Molecul cu rol n stocarea energie celulare


ATP-sintetaz-Complex proteic din structura membranei
mitocondriene care asigur cuplarea transferului de protoni cu sinteza
de ATP
autocrin-Tip de semnalizare celular prin care celula rspunde la
propriile semnale secretate (ex: factori de cretere)
autofagozom-Vezicul ce conine organite proprii celulei, uzate, ce
urmeaz a fi distruse de enzimele lizozomale
Bcl-2-Un tip de proteine (20 de proteine cunoscute la om) care
intervine n reglarea apoptozei
caderine-Molecule de interaciune intercelar
calmodulina-Molecul complex care fizeaz calciu intracelular
carrier-Protein transportoare
caspaz-Protein din grupul proteazelor care intervine n procesul de
apoptoz
caveole-Invaginaii ale membranei celulare
Cdk-Protein serin/treonin kinaz care intervine n controlul ciclului
celular
colesterol-Molecul lipidic major din structura membranelor
celulare i precursor al hormonilor steroizi
clatrina-Protein care mbrac vezicule prin care se realizeaz
transportul intracelular de macromolecule
c-myc-Proto-oncogen care codific factorii de transcripie, este
activat n cazul unor tumori
codon-Unitate de baz a codului genetic (exist 64 de codoni formai
din 3 nucleotide)
cis-Golgi-Poriune a Aparatului Golgi prin care intr proteinele de la
reticulul endoplasmatic
cromatin-Complexul filamentar dintre ADN i proteinele histone,
componenta de baz a cromozomilor
coenzim -Molecul care alturi de enzim particip la cataliza unor
reacii biologice
coenzima A-Compont cu rol de transportor al gruprii acetil, din
ciclul reaciilor metabolice
coenzima Q-Molecul mic liposolubil care transfer electronii la
nivelul membranei mitocondriene
colagen-Protein din structura matrixului extracelular
COP I , COP II-Proteine cu rol de nveli al veziculelor transportoare
de la nivelul Ap. Golgi i RE

124
Biologie celulara si moleculara

ciclin-Proteine cu rol de reglator al activitii ciclului celular n


interaciune direct cu Cdk
citozin-Baz azotat pirimidinic
citoschelet-Retea de proteine care asigur forma celulei i permite
micarea i comunicarea dintre celule
desmozom-Legtur dintre celule (epiteliale) prin care filamentele de
keratin sunt ancorate de membran
dineina-Protein motor care se deplaseaz de-a lungul microtubulilor
distrofin-Protein a citoscheletului celulei musculare
eicosanoid-Clas de lipide implicate n semnalizarea celular autocrin
i paracrin (prostaglandine, prostacicline,leucotriene,
endocitoz-Ptrunderea unor materiale din spaiul extracelular n
vezicule formate din invaginarea membranei
endozom-Compartiment vezicular implicat n transportul ctre
sistemul lizozomal a particulelor endocitate
ERK-Component a kinazelor MAP care joac rol n proliferarea
celular
exon -Segment din structura unei gene
fibroblast-Tip de celul din esutul conjunctiv
fibronectin-Protein de adeziune celular din matricea extracelular
glicocalix-nveli de natur glucidic al celulei
glicoliz-Proces de scindare a glucozei
guanin-Baz azotat purinic
hemidesmozomi-Regiune de contact intercelular n care filamentele de
keratin sunt ataate de cele de integrin
histon-Protein care intr n structura ccromozomilor
importin-Molecul implicat n transportul prin porii nucleari
Inozitol 3-fosfat (IP3)-Mesager secundar celular care se formeaz din
hidroliza PIP2 i are rol n eliberarea ionilor de calciu din RE
integrin-Protein transmembranar care mediaz adeziunea celular
Jak/Stat-Cale de semnalizare n care factorii de transcripie sunt
activai ca rezultat al fosforilrii membrilor din familia kinazelor JAK
kerain-Proteina din structura filamentelor intermediare ale celulelor
epiteliale
kinezin-Protein motor care se mic de-a lungul microtubulilor ctre
captul pozitiv
kinetocor-Structura specializat la fixarea cromozomilor de
filamentele mitotice
lipozom-Vezicul lipidic folosit pentru introducerea ADN-lui
modificat n celule

125
Biologie celulara si moleculara

LDL-(low density lipoprotein) structur lipo-proteic care transport


colesterol
microzom-Vezicule formate din reticul endoplasmatic cu rol n
citoprotecie
miozin-Protein care formeaz mpreun cu actina un motor
molecular
miozina I -Tip de miozin cu rol n transportul veziculelor sau
moleculelor de-a lungul filamentelor de actin
miozina II-Tip de miozin care produce contracia prin glisarea printre
filamentele de actin
monocistronic-ARNm care decodific un singur lan peptidic
necroz-Moartea celular accidental ca urmare a unei lezri acute
neurofilament-Tip de filament intermediar din structura axonilor
celulelor nervoase
NLS (nuclear localization signal)-Secvene de aminoacizi ataate
proteinelor implicate n transportul dinspre citoplasm ctre nucleu
nucleol-Zon nuclear specializat n transcripia, procesarea i
asamblarea ribozomilor
nucleozid-Baze azotate (purine i pirimidine) legate la un zaharid
(riboz i dezoxiriboz)
nucleozom-Unitate structural a cromozomului format din cromatin
i histone
nucleotid-Nucleozid fosforilat
pinocitoz- Ptrunderea unor de lichide sau unor molecule foarte mici
prin membrana
policistronic-ARNm care decodific mai multe lanuri peptidice
polizom-Ansamblu de ribozomi care particip la traducerea ARNm
prostaglandina-Familie de lipide eicosanoide produs n inflamaie
PK (protein kinase)-Enzim care fosforileaz proteine prin transferul
de la ATP
PKA-Protein kinaza A reglat de AMPc
PKC-Protein kinaza C , protein-serin/treonin kinaz activat de diacil
glicerol i calciu, intervine n semnalizarea intracelular
protein-serin/treonin kinaz-Kinaz care fosforileaz serina i
treonina
proteoglican-Protein legat de glicozaminoglicani
proteoliz-Degradarea lanului polipeptidic
proteom-Toate proteinele dintr-o celul dat
Rab-familia proteinelor legate de GTP, care joac rol n transportul
vezicular

126
Biologie celulara si moleculara

Raf-Proteina-serin/treonin kinaz activat de Ras i legat de


activarea ERK, MAP kinaz
Ran-Familia proteinelor legate de GTP cu rol n exportul i importul
nuclear
Ras-Proteine legate de GTP care cupleaz receptorii pentru factorii de
cretere cu semnalele intracelulare
Rho-Proteine legate de GTP implicate n reglarea citoscheletului
SRP (signal recognition particle)-Secven peptidic cu rol de
semnal la nivelul RE
telomere-Secvene repetate de AND n poriunile terminale ale
cromozomilor.
tromboxan-Eicosanoid implicat n coagularea sngelui
transcripie-Sinteza moleculelor de ARN pe matria ADN
translaie-Sinteza polipeptidelor folosind ca matri ARNm
tropomiozina-Proteina fibroas care regleaz contracia prin blocarea
interaciei dintre miozin i actin
troponina- Complex de proteine legat de actin i care regleaz
contracia muschilor scheletici
Ubichinon -Coenzima Q
ubichitina-Protein cu rol de a marca alte proteine pentru degradare
vimentina-Filament intermediar
vinblastin -Medicament care inhib polimerizarea microtubulilor
vincristin-Medicament care inhib polimerizarea microtubulilor

BIBLIOGRAFIE
Alberts, B. et. al ., 2002. Molecular of the Cell, fourth edition. Garland
Scince

127
Biologie celulara si moleculara

Bolsover, S. R., & al, e., 2004. Cell Biology- A Short Course. Wiley-
Liss.
Boultwood, J., & Fidler, C. 2002. Molecular Analysis of Cancer.
Methods in Molecular Medicine , 302pp.
Comnescu Geanina, 1993. Curs de citologie i histologie animal,
Ed. UNIV. Al. I. Cuza, Iasi, 314.
Constantin Cotrutz et al., 1994. Manual de lucrri practice de biologie
celular, Ed Tehnic Chiinu, 247p.
Covic M., Stefanescu D., Sandovici I., 2004. Genetica Medicala.
Editura Polirom Iasi.
Crocker, J., & Murray, P. G., 2003. Molecular Biology in Cellular
Pathology. John Wilei &Sons Ltd, 393.
Dingerman, T., & al., 2004. Molecular Biology in Medicinal
Chemistry. Wiley VCH-Verlag , 428.
Dubinin, N. P., -Genetica molecular i aciunea radiaiilor asupra
ereditii. Ed St. Buc.
Frederick M. Ausubel et al., 2003- Current protocol in Molecular
Biology, 4648pp.
Geoffrey M. Cooper and Robert E. Hausman, 2009. The Cell A
Molecular Approach-Fifth Editions-, ASM Press Washington, 820p.
Gorduza E.V., 2007. Compendiu de genetica umana si medicala.
Editura Tehnopress Iai.
Gorduza E.V., Buhui M.C., Rusu C., 2003. Genetica umana manual
de lucrari practice. Ed.Kolos Group Iai.
Gorduza E.V., Stoica O.F., 2003. Elemente de Genetica umana.
Editura Timpul Iasi,.
Haggis and col., 1968. Introducere n biologia molecular, 477p
Helgason, C. D., & Miller, C. L. . Basic Cell Culture Protocols.
Methods in Molecular Biology , 365.
Humphrey, T., & Brooks, C., Cell Cycle Control- Mechanism and
Protocols. Methods in Molecular Biology .
Hurt, E. M., & al, 2010. Identification of Vitronectin as an Extrinsec
Inducer of cancer Stem Cell Differentiation and Tumor Formation. Stem
Cells , 390-398.
Inside the Cell- Us. Department of Health and Human services.
(http//www.nigms.nih.gov)
Iuliana Dimofte & colab, 2003- Lucrri practice Biologie celular i
molecular, Ed. Cartea Universitar, 101p.
Johnson, K. E., 1991. Histology and Cell Biology. The National
Medical Series for Independent Study , 422.

128
Biologie celulara si moleculara

Karp, Gerald, 1999. Cell and Molecular Biology-concepts and


experiments, 2nd Edition, John Wiley & Sons Inc., 816pp.
Lela Buckingham and Maribeth L. Flaws, 2007. Fundaments Methods
and Clinical Applications, F.A. Davis Company, Philadelphia, 479 pp.
Lilios Gabriela, 2006. Fiziologie i patologie. Ovidius University
Press, Constana.
Lilios Gabriela, 2006. Aspecte fiziopatologice n ocul reumatic.
Ovidius Univesity Press, Constana.
Lodish, et. al., 2003. Molecular Cell Biology. Fifth Edition , 979. pp.
Lorena Aranbacia Carcamo, 2006. Studying the Localization Surface,
Stability And Endocytosis of Neurotransmitter Receptors by Antibody
Labeling and Biotinylation Approaches from The dinamyc Synapse
Molecular methods in Ionotropic Receptors Biology. Taylor & Francis Goup
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK2552/)
Lllmann, 2000. Color Atlas of Pharmacology-second editions-,
396pp.
Mehedini Rodica et al. Introducere n studiul celulei-note de curs.
Biologie celular i molecular. 154 pp.
Meter R., Scripcaru D., 1976. Manual de lucrri practice de biologie
celular, Ed. Univ. Buc, 267 pp.
Mihai Cruce, 1999. Biologie celular i molecular, Ed. Aius Craiova,
314p.
Mircea Ionescu-Varo, 1976. Biologie celular, Ed. Did. i Ped.
Bucureti, 318p.
Mixich F., Ardelean, A., 2002-Principii fundamentale de biologie
molecular. Editura Medical Universitar, Craiova, 314 pp.
P. James, 1997. "Protein identification in the post-genome era: the
rapid rise of proteomics.". Quarterly reviews of biophysics 30 (4): 279331.
Quesenberry, P. J., Stein, G., Forget, B., & Weissman, S., 1998. Stem
Cell Biology and Gene Therapy. Stem Cell , 570 pp.
Raicu, P., Nachtigal, M., 1969. Citogenetica-principii i metode, 319p.
Rusu, V. and colab., 1991- Biomembrane i patologie. Ed. Medical,
395p.
Selinsky, B. S. (fr an). Membrane Protein protocols: Expresion,
Purification and Characterization . Methods in Molecular Biology , 386.
Smith, A., 2000. Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular
Biology. Revised edition , 753.
Stela Gabriela Jelea , Marian Jelea, 2007. Citologie, Histologie,
Embriologie. Ed. Univ.de Nord Baia Mare.
Stela Zamfirescu, 1999. Biologie celular i molecular, Ovidius
University Press, 200p.

129
Biologie celulara si moleculara

Stenesh, J., 1989. Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology.


A Wiley Interscience Publication.
Stoicescu Ramona Mihaela, 2010. Esenial de Imunologie i
Imunopatologie, Editura Nautica Constana, Colecia Universitaria, ISBN
978-606-8105-19-2, 228 pp.
Stoicescu Ramona Mihaela, 2009. Noiuni de Microbiologie Medical
i Farmaceutic, EdituraCarol Davila, Bucureti, , ISBN 978-973-708-
445-3, 254 pp.
Tudose, I.Gh., 1993. Genetica, vol 1,2. Ed. Univ. Al. I. Cuza Iasi.
Turkensen, K., 2002. Embryonic Stem cells, Methods and protocols.
Methods in Molecular Biology, 185 , 516.
Wolfgang Kuehnel, 2003.Cytology, Histology and Microscopic
Anatomy-4-th Editions-. Thieme Stuttgard- New-York, 544p.
Wu, Felicia and Wu Cheng-Wen, 1990. Structure an Funcion of
Nucleic Acids and Proteins. Ed. Raven Press. New York.
Xia, X., 2003. Data Analysis in Molecular Biology and Evolution.
New York: Kluwer Academic Publishers.
http://cellbase.ascb.org/research.html#Literature
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20738070
http://userpages.umbc.edu/~jwolf/method2a.htm
http://homepages.gac.edu/~cellab/index-1.html
http://www.cell.com/cellpress/trends
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK7572/
http://bcs.whfreeman.com/lodish5e
http://www.web-books.com/MoBio/Free/Ch6F4.htm
http://medical-dictionary.thefreedictionary.com/biotransformation
http://schwartzlab.mit.edu/site/Research_Interests.html
http://www.biochemj.org/bj/
http://themedicalbiochemistrypage.org/home.html

130
Biologie celulara si moleculara

131