OPERACIONES UNITARIAS

REPORTE DE INVESTIGACIN

UN MTODO SIMPLE Y ECONMICO PARA MEDIR LAS TASAS DE SNTESIS

DE PROTENAS BACTERIANAS EN AGUA DE MAR UTILIZANDO H-LEUCINA

PRESENTAN:

ACAZTENCO GONZLEZ MIRIAM JOSELYN

CORONADO MOLINA CAREN NATALY

GARCA REYES RAFAEL

GUTIRREZ ZENIL JESS

LUNA GAYOSSO PALOMA

RODRGUEZ ZIGA EDNA GUADALUPE

VILLEGAS MARTNEZ ELIZABETH

GRUPO:

7IBT2
 INTRODUCCIN

En el presente artculo se presenta un mtodo simplificado para usar la

incorporacin de h-leucina para medir la sntesis de protenas bacterianas en aguas
de mar, La sntesis de protena bacteriana, medida por la incorporacin de H-leucina
que proporciona la estimacin ms directa de produccin de carbono.
Este mtodo usa pequeos volmenes y centrifugacin en cambio de filtracin.

El mtodo de centrifugacin proporciona grandes ahorros debido a que se pueden

procesar ms muestras y a la vez incubar en el mismo equipo. Sin
en cambio usando el mtodo de filtracin se utilizan diferentes reactivos que hacen
costoso el mtodo.

Una de las ventajas de este mtodo es la reduccin en la cantidad de H-leucina, y

la disminucin de desechos radiactivos utilizados en la filtracin. A de ms de lo ya
mencionado que reduce costos el mtodo de centrifugacin.

OBJETIVOS

General

Describir el mtodo para medir la tasa de sntesis de protena bacteriana en agua

de mar usando H-leucina

Especficos

Describir la centrifugacin como una operacin unitaria en el proceso

Calcular el dimetro crtico de la partcula de la muestra sometida a
centrifugacin
 FUNDAMENTO TERICO

La centrifugacin es una tcnica de separacin que se utiliza para aislar o

concentrar partculas suspendidas en un lquido aprovechando la diferente
velocidad de desplazamiento segn su forma, tamao o peso al ser sometidas a
una fuerza centrfuga.

Se presenta un mtodo simplificado para usar la incorporacin de H-leucina

(H-leu) para medir las tasas de sntesis de protenas bacterianas en agua de
mar.

El mtodo de centrifugacin proporciona ahorros sustanciales en el costo por

muestra, as como una reduccin en la cantidad de desechos radiactivos
generados.

La produccin de carbono bacteriano se ha convertido en un parmetro clave

para cuantificar el carbono fluye a travs de las redes alimentarias acuticas.
La sntesis de protenas bacterianas, medida por la incorporacin de (H-leu),
proporciona la estimacin ms directa de bacterias produccin de carbono.

EQUIPO A UTILIZAR (NIVEL LABORATORIO)

Centrifuga Eppendorf 5415C

Ideal para separaciones rpidas de precipitados y lquidos de diferentes

densidades especficas en la sala de trabajo o en la cmara fra.

tiene capacidad para hasta 18 tubos de 1,5 ml a 2 ml.

Muestra de agua de mar in situ (18 C), en flask de policarbonato

H-leucina [20nM/l]
 EQUIPO A UTILIZAR (NIVEL INDUSTRIAL)

ESPECIFICACIONES DE DISEO Y MANEJO DE EQUIPO

CENTRIFUGA EPPENDORF 5415C

Especificaciones centrifuga Eppendorf 5415C

Velocidad mxima 14,000 rpm
Fuerza-G mxima (RCF) 16,000 x g (RCF)
Mxima capacidad 18 Tubos con capacidad de 1.5 a 2 ml
Dimetro del orificio 11 mm
Aceleracin Aproximadamente de 10 segundos
Desaceleracin Aproximadamente de 15 segundos
Temporizador 30 minutos

Su temporizador incorporado con control de microprocesamiento hace que la centrifuga

Eppendorf 5415C, ofrezca la facilidad y la comodidad de la tecnologa walk-away, lo que
permite una mayor eficiencia, cuenta con caractersticas de automatizacin inteligente que
mejoran la eficiencia y reducen la necesidad de mantenimiento.

El rotor es la pieza que gira impulsada por el motor y sobre la cual se coloca la muestra, son
de materiales ligeros y resistentes a altas velocidades de giro, generalmente es de titanio ya
que es ligero y resistente.Tiene la capacidad hasta para 18 tubos de 1.5 a 2 ml.
La velocidad de rotacin es continuamente ajustable desde 1,000 a 14,000 rpm, el
temporizador de giro es de hasta 30 minutos y se puede configurar el tiempo. Los tiempos de
centrifugacin cortos pueden ser regulado utilizando el momentneo botn LED (parpadea en
Intervalos de 1 segundo).
La Centrifuga Eppendorf 5415C es ideal para separaciones rpidas de precipitados y lquidos
de diferentes densidades especficas en la sala de trabajo o en la cmara fra.

La carcasa, el rotor y la tapa del rotor son en gran medida resistentes a productos qumicos,
todas partes del rotor incluyendo la tapa pueden soportar temperaturas de hasta 121 C.
Cuenta con un ventilador est integrado en el base de la carcasa de la centrfuga y se ejecuta
mientras est encendida.

MANEJO DE EQUIPO

Diagrama de Flujo del Mtodo de Centrifugacin

Agregar 3H-leucina al tubo
Eppendorf (puede almacenarse a
5C hasta su uso)

Aadir la muestra e incubar

A Agregar TCA al 5%

Centrifugar a 6000 rpm

por 10 minutos

Agregar TCA al 5% (o etanol al 80%)

Centrifugar a 6000 rpm

por 10 minutos

Coloque el tubo de
microcentrfuga directamente
en un vial de centelleo lquido
y radio ensayo.
Diagrama de Flujo del Mtodo de Filtracin

Aadir 3H-leucina a tubos

falcon de cultivo estriles de
13.5 ml de capacidad

Almacenar los tubos a 5C antes

de la incubacin

La incubacin se termino
adicionando TCA.

Mantener las muestras a 18 C

durante 30 minutos

Se filtraron en filtros de 0.45

pm (Millipore, HAwp)

Los filtros se enjuagaron dos

veces con un ml de TCA

Los filtros se colocaron en viales

de centello y se disolvieron en 1
mL de acetato de etilo

Las muestras se radioensayaron

despus de la adicin de 7 ml
de lquido cctel de centello

Incubar muestras de 5 ml en
tubos de 13.5 ml como en el
mtodo de filtracin

La s mjuestras se extrajeron con

TCA a temperatura ambiente
 APLICACIONES PRCTICAS

En el rea alimenticia se centrifugan los zumos para controlar la

concentracin de la pulpa, separando la pulpa final del zumo exprimido. Otro
ejemplo seria en la produccin de leche que es centrifugada para escindir su
contenido de agua y de lpidos pues estoy ltimos son separados para
elaborar mantequilla.
rea clnica: se emplea una centrifuga para separar los elementos de la
sangre que estn mezclados en esta.
rea ambiental: en el tratamiento de aguas residuales, la centrifugacin de
estas aguas permite extraer sustancias densas en su interior, no solo slidas,
incluso aceites, grasas y otros componentes que una vez centrifugados
podran descartarse.
rea mdica y farmacutica: en la obtencin de enzimas se centrifugan
ciertas clulas para obtener dichas enzimas.
La separacin de DNA por centrifugacin isopnica a menudo se emplea en
laboratorios genticos para separar el DNA celular y permitir su posterior
estudio y manipulacin.
 PARMETRO A CALCULAR

De acuerdo con los datos indicados en el artculo se va a calcular el Dimetro de

punto crtico, por lo tanto se lleva a cabo lo siguiente:

Datos:

p = 1165 Kg/m3

= 1027 Kg/m 2( )
qc (18)() ( +2 )
r2= 11mm = 0.011m = 1 2

r1= 8mm = 0.008m

()2 ( )( )
b= 0.8m

N= 16000rpm

= 1.7164 x 10- 3 kg/ m.s

qc= 2.3876x10-7 m3/s

Dpc=?

t= 10 min = 600s

Si observamos la frmula para obtener Dpc necesitamos saber cuanto vale w y

cuanto vale v y qc. Las formulas a utilizar son las siguientes:

2()
=
60
= ()[2 2 1 2 ]

=

Sustituyendo los valores en las formulas obtenemos que:

2(1 6000)
= = 1675.51 rad/s
60
 -4 3
= ( 0.8)((0.011)2 (0.008)2 )= 1.43x10 m

1.43104 3 -7 3
= = 2.3876x10 m /s
600
Por lo tanto el clculo de Dpc queda:

3 1.7164103 2(0.011)
2.3876x107 m /s (18) ( ) (
0.008 + 0.011)
=
2 1165
(1675.51 ) ( 3 1027 3 ) (1.43104 3 )

= 1.396989 107

CONCLUSIN

Se cumpli el objetivo al llevar acabo la descripcin del mtodo, y que el

mtodo de centrifugacin utilizado en el presente artculo permite medir la
produccin de carbono bacteriano y a comparacin del mtodo de filtracin,
en ste no consume tantos reactivos y por lo tanto ayuda en la reduccin de
costos. Por otro lado es importante saber interpretar los datos para poder
hacer comparaciones con otros mtodos y saber cul es ms efectivo.
 REFERENCIAS

Marshall Scientific. (10 de noviembre de 2017). Obtenido de

https://www.marshallscientific.com/Eppendorf-5415C-Centrifuge-p/ep-
5415c.htm

Smith, D. (2002). A simple, economical method for measuring bacterial

protein synthesis rates in seawater using H-leucine, 456-488.