UNIVERSIDAD INTERAMERICANA PARA EL DESARROLLO

TEMA: ANALISIS TOXICOLOGICO DE cannabinoides EN ORINA

LaBORATORIO: LAB 12

PROFESORa:

DRA. QF: ROQUE SUSANA

INTEGRANTES:
Cordova azaero renzo
Garcia Toribio Alexandra
Torres Vergara Cinthya

CICLO: IX TURNO: NOCHE

LIMA PER
2017
 INTRODUCCIN:
La Marihuana es una planta herbcea anual cuya nica especie es la Cannabis

sativa que presenta tres variedades: Cannabis sativa indica, Cannabis sativa

Americana y Cannabis sativa Rudelaris. La planta, de la familia Cannabinceas, es

originaria de Asia Central, cultivada en extremo Oriente desde tiempos remotos

y se extendi su cultivo a todo Occidente. La marihuana se compone de hojas,

tallo, semillas y flores secas de la planta, mientras que el hachs es obtenido de

la resina de la planta. Su aspecto es el de una pasta ms o menos dura y aceitosa;

el color vara del marrn al negro. Usualmente es fumada en cigarrillos, pipa o

adicionada a alimentos como galletas, brownies y t de hierbas. La resina de la

planta puede ser secada y comprimida en bloques llamados hachis que se fuma.

Todas las partes de la planta poseen las sustancias psicoactivas que caracterizan

su accin txica.

La planta de cannabis contiene alrededor de 400 sustancias qumicas diferentes,

60 de las cuales estn estructuralmente relacionadas con el delta-9-

tetrahidrocanabinol o THC, que es el principal psicoactivo de esta planta, aislado

por R. Mechoulam a mediados de la dcada de 1960. Este canabinoide alcanza

una mayor concentracin en las floraciones de las plantas femeninas, tambin

puede venir en forma de cpsulas (dronabinol o marinol).

Estimulante y depresor del sistema nervioso Principio activo: 9-

tetrahidrocannabinol Hay cannabinoides endgenos para los receptores a nivel

de los que actua el THC, como la Anandamida

 MARCO TEORICO
La concentracin de sustancias psicoactivas depende de la variedad de la

Cannabis: las ms psicoactivas son la ndica y la sativa y la menos concentrada es

la rudelaris. La cantidad de THC vara entre 1 y 4% en los cultivos americanos y

de 5 a 15% en las plantas asiticas ms resinosas. En las variedades

genticamente desarrolladas por lo general se busca que los valores sean los ms

altos posibles. La preparacin de la droga a partir de la planta, vara ampliamente

en calidad y potencia, dependiendo del tipo, clima, suelo, cultivo y mtodo de

preparacin. Habitualmente la planta es cortada, secada, picada y utilizada para

la formacin de cigarrillos o incorporada a los que se expenden comnmente.

Entre los distribuidores y usuarios se les conoce con distintos nombres como

marijuana, marihuana, camo, charas, grifa, hierba, mota, rosa mara, juanita,

yerba, doa juanita y otros.

Los principales compuestos de la planta Cannabis sativa pertenecen a varios

grupos:

A. Cannabinoides: constituyen una serie de sustancias de naturaleza fenlica,

derivados del difenilo y del benzopirano. A este grupo pertenecen una serie de

ismeros del tetrahidrocannabinol, los denominados Delta 1 THC y Delta 6 THC;

los ms abundantes son el cannabinol, cannabidiol, cannabigenol, y el Delta 2 THC.

Dentro de los compuestos de naturaleza cida, los ms importantes son cido A

Delta 1THC, cido B Delta 1THC, cido Cannabidiolico y cido Cannabinlico.

B. Alcaloides: Naturaleza simple: nicotina y tetranocannabina (alcaloide con

propiedades similares a la estricnina). Naturaleza compleja: Cannabinas, A, B, C

y D.

C. Ceras: Compuestos de naturaleza parafnica. El ms importante es el

Nonecosano.

D. Aceites esenciales: Los ms importantes encontrados son: Carofileno, B-

humileno, Limoneno, Selineno.

Adems contiene 50 tipos distintos de hidrocarburos serosos que ayudan a crear

el alquitrn al fumar la marihuana, 103 terpenos, la mayora de los cuales irrita

las membranas pulmonares; tambin contienen 12 cidos grasos, 11 esteroides,

20 componentes nitrogenados, as como agentes txicos incluyendo el monxido

de carbono, el amonaco, la acetona y el benceno, adems el benzaltraceno y la

benzolpirina, que son inductores del cncer y que estn presentes en la

marihuana en cantidades de 50 a 100% ms altas que el fumar el tabaco. Puede

contener mltiples contaminantes.

Microscopa electrnica de barrido de una glndula pedunculada de una hoja de

la planta Cannabis sativa.

Los cannabinoides son substancias que tienen una estructura carboxlica con

veintin carbonos y estn formados por tres anillos, ciclohexano,

tetrahidropirano y benceno (Figura 2). Los principales cannabinoides son el D9-

tetrahidrocannabinol (D9-THC), el D8-tetrahidrocannabinol (D8-THC), el

cannabidiol (CBD) y el cannabinol (CBN). Otros cannabinoides presentes en la

planta aparecen en cantidades diferentes segn la variedad de Cannabis . El

cido cannabidilico, que tiene actividad antibitica, es un constituyente del

camo.
A la izquierda, la estructura del principal cannabinoides psicoactivo, el D9-

tetrahidrocannabinol y la estructura de los principales cannabinoides endgenos:

la anandamida (araquidonil-etanolamida) y el 2-araquidonil-glicerol. A la derecha,

principales acciones de los cannabinoides a nivel neuronal. Los cannabinoides se

sintetizan a partir de lpidos de membrana, se producen bajo demanda y no se

almacenan en vesculas como ocurre con otros neurotransmisores. Los

endocannabinoides se producen como consecuencia de aumentos en el

Ca2+ intracelular e interactan con receptores CB1 ubicados en las neuronas

presinpticas, modulando la liberacin del neurotransmisor (NT). ste activa a

receptores ionotrpicos (iR) y/o metabotrpicos (mR). Los endocannabinoides

son removidos del espacio sinptico por un transportador especfico (T); ya en

el citoplasma, son degradados por la hidrolasa de la amida de cidos grasos.

Estimulante y depresor del sistema nervioso Principio activo: 9-

tetrahidrocannabinol Hay cannabinoides endgenos para los receptores a nivel

de los que acta el THC, como la Anandamida

MECANISMOS DE ACCIN

Unin a receptores especficos CB1:

Ganglios basales

Hipocampo

Cerebelo y crtex frontal

Corazn z pulmn

Parte del aparato reproductivo y urinario

El CB2:

Leucocitos (macrfagos), bazo, amgdalas

Receptores cannabinoides relacionados con: memoria, aprendizaje, actividad

motora, endocrina, analgesia.

FARMACOCINTICA

Absorcin: 5%-10% va oral

15-30% fumada

Distribucin:

Ampliamente en el tejido graso z Menos del 1% alcanza el cerebro

Atraviesa la barrera placentaria

Transfiere a leche materna

Metabolizacin: Hidroxilado en Hgado en 11-hidroxi-THC (activo) y en 11-nor-

9-carboxi-THC que se elimina en su mayor parte en orina.

FARMACOCINTICA

Eliminacin:

80% por bilis z 20% a travs de la orina

Circulacin entero heptica

Vida media una semana y su completa eliminacin aproximadamente un mes

En consumidores crnicos, varias semanas

Dosis txica: No se conoce dosis letal en humanos y en animales de

experimentacin tras administrar dosis muy elevadas (5 g en chimpance) no se

ha observado mortalidad

EFECTOS SNC:

Sedantes

Euforizante

Aumenta el apetito, la autoestima y la capacidad de comunicacin

Disminuye la depresin z sueo placentero y reparador

Sist cardiovascular

Aumento de la frecuencia cardiaca z Aumento presin arterial z

vasodilatacin de los vasos corneales z Aumenta el apetito

EFECTOS

Efectos broncodilatadores y miorelajantes

Inmunosupresin del Sistema inmune

Sist reproductor:

Infertilidad en el hombre

Disminuye la potencia sexual

En las mujeres provoca trastornos menstruales.

INTOXICACIN

Alteraciones del comportamiento

Deterioro de la coordinacin

Sensacin de lentitud en el paso del tiempo

Taquicardia Hipotensin

Sequedad de boca

Impiden la concentracin prolongada

Episodios psicticos Combinado con el alcohol potencian los efectos

depresores sobre el sistema nervioso

Producen un aumento del metabolismo heptico

USO TERAPEUTICO Anorexia Esclerosis mltiple Antiemtico Glaucoma

Analgesia En procesos asmticos Inductor del sueo.

EFECTO ANTITUMORAL DE CANABIOBES

El efecto antitumoral de los cannabinoides se basa fundamentalmente en la

capacidad de estos compuestos para inducir la muerte de las clulas tumorales,

pero cul es la cascada de eventos que lleva a la activacin de ese proceso por

los cannabinoides? Uno de los cambios que ocurre de manera temprana tras la

activacin de los receptores de cannabinoides en las clulas tumorales es la

estimulacin de la biosntesis de esfingolpidos (una familia de lpidos que

desempea un importante papel estructural y sealizador en la clula) y su

acumulacin en el orgnulo donde tiene lugar dicho proceso: el retculo

endoplsmico (RE). En el RE se dan funciones de gran importancia para la clula

entre las que se encuentran la propia sntesis lipdica, la sntesis y plegamiento

de protenas o el almacenamiento de calcio. Cuando este orgnulo sufre algn

tipo de alteracin se activan una serie de mecanismos, denominados de manera

genrica respuesta al estrs de RE, que tienen como objetivo restablecer el

normal funcionamiento del RE. Sin embargo, en ocasiones, la intensidad o

duracin del estmulo que origina la alteracin hace que la ruta de respuesta a

estrs de RE conduzca a la activacin de la muerte celular programada. En

nuestro laboratorio, hemos encontrado que la acumulacin que promueven los

cannabinoides de ciertas especies de esfingolpidos conduce a la activacin de

una ruta de sealizacin relacionada con la respuesta a estrs de RE que lleva a

la muerte de las clulas tumorales. En dicha ruta desempean un papel destacado

dos protenas denominadas p8 (un factor de transcripcin que controla la

expresin de otras protenas) y una de sus dianas, TRB3. El tratamiento con

cannabinoides origina un aumento en los niveles de estas dos protenas, lo que

conduce a la inhibicin de otro importante complejo sealizador denominado

mTORC1 ("mammalian target of rapamycin complex 1") y a la activacin de un

proceso celular que dicho complejo controla, la autofagia.

OBJETIVO:

Conocer el procedimiento del anlisis toxicolgicos de CANABINOIDES

Conocer el procedimiento de extraccin de CANABIONOIDES

Identificar los materiales usados en la extraccin de las

CANABINOIDES

Conocer los reactivos usados en la extraccin de CANABINOIDES

Aplicar las normas de bioseguridad en la manipulacin de reactivos y/o

sustancias.

Conocer los mecanismos de accin y toxicocinetica de las

CANABINOIDES
MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales

Vaso de 250 ml
Bagueta
Pera de bromo
Pipeta de 5ml
Tubos de ensayo
Varilla de vidrio
Gradilla, lpiz, regla
Silica gel, Viales
Capilares
Lamina de vidrio
Bao mara
Baln, brobeta de 25 ml

REACTIVOS

HCL Concentrado
Sulfanilato de Na
Cetona,sol. MgNO2(10%)
Benceno-hexano
ter etlico, papel de pH
Fuente de luz Uv
Mx de orina con marihuana, satandar de cannabinoides
 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

PREPARACION DE ESTANDAR

Paso 1. En un vial agregar

muestra pura de marihuana

Paso 2.
Luego se
agreg
tolueno

Paso 3. Luego agregar

3ml de metanol
 Paso 4. Se agreg 1
gota Hcl concentrado

Paso 5. Colocar en
bao Mara por 30
minutos
 PROCEDIMIENTO DE LA EXTRACCION DEL EXTTRACTO DE

CANABIOIDES

Paso 1
Verter la
orina en el
Beaker

Paso 3. Lectura en el
peachimetro estndar. Paso 2. Medir el pH de la
orina introduciendo la tira
Resultado pH 6 reactiva
 Paso 4.Verter
en la Pera de
vidrio: la orina,
3 mL de ETER
y 1 mL de
TOLUENO;
agitndole
suavemente y
esperar 15
minutos.
Obtenindose el
EXTRACTO
CANNABIDOL y
verter en un vial
 IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA.
La cromatografa en capa fina (en ingls thin layer chromatography o TLC) es

una tcnica analtica rpida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio de Qumica

Orgnica. Entre otras cosas permite:

Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar

as, por ejemplo, la efectividad de una etapa de purificacin.

Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podran ser

idnticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma

sustancia.

Realizar el seguimiento de una reaccin. Es posible estudiar cmo

desaparecen los reactivos y cmo aparecen los productos finales o, lo

que es lo mismo, saber cundo la reaccin ha acabado.

La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lmina de plstico

o aluminio que previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente

(fase estacionaria). Entonces, la lmina se coloca en una cubeta cerrada que

contiene uno o varios disolventes mezclados (eluyente o fase mvil). A medida

que la mezcla de disolventes asciende por capilaridad a travs del adsorbente,

se produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra

entre el disolvente y el adsorbente.

ADSOBENTES Y ELUYENTES

Los dos adsorbentes (fase estacionaria) ms ampliamente utilizados son la gel

de slice (SiO2) y la almina (Al2O3), ambas de carcter polar. La almina

anhidra es el ms activo de los dos, es decir, es el que retiene con ms fuerza a

los compuestos; por ello se utiliza para separar compuestos relativamente

apolares (hidrocarburos, haluros de alquilo, teres, aldehdos y cetonas). El gel

de slice, por el contrario, se utiliza para separar sustancias ms polares

(alcoholes, aminas, cidos carboxlicos). El proceso de adsorcin se debe a

interacciones intermoleculares de tipo dipolodipolo o enlaces de hidrgeno

entre el soluto y el adsorbente. El adsorbente debe ser inerte con las sustancias

a analizar y no actuar como catalizador en reacciones de descomposicin. El

adsorbente interacciona con las sustancias mediante interaccin dipolodipolo o

mediante enlace de hidrgeno si lo presentan.

En general, estos disolventes se caracterizan por tener bajos puntos de

ebullicin y viscosidad, lo que les permite moverse con rapidez. Raramente se

emplea un disolvente ms polar que el metanol. Usualmente se emplea una mezcla

de dos disolventes en proporcin variable; la polaridad de la mezcla ser el valor

promediado en funcin de la cantidad de cada disolvente empleada. El eluyente

idneo para cada caso ha de encontrarse por "el mtodo del ensayo y del error
 SEPARACION E IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

Fase Mvil: cetona

Revelador: disolver 50 ml de sulfanilato de sodio, agregar 20 ml de

solucin NANO2(10%) en bario de hielo y 1ml de HCL concentrado.

Paso 1.

Paso se prepara el capilar,

Paso 2.

Se preparar placa silica gel

haciendo divisiones con una
cuchilla donde se van a
depositar las muestras
problema y el estndar
 3.

Con un capilar tomar un poco

del extracto de canabioides .
Luego picar cada una al
extremo de la placa
cromatografica 33veces, y
muestra estndar 9 veces
dejando secar, vaciar el
contenido del capilar
lentamente sobre su punto y
soplar suavemente cada vez
para secar el disolvente.

Rotulas y
sembrar
 4.

Luego de sembrar las muestras

problema y el estndar colocar
en la cmara o cuba
cromatografica contenida con
la fase mvil y tapar.

Esperar que se evapore dicho

disolvente.

Retirar antes que el recorrido

llegue a la parte final

Luego colocar las

placas bajo la luz
UV. Para su
respectiva
observacin y
marcar con la
ayuda de in lpiz
Luego marcar
cada uno de
los recorridos
con un lpiz
y medir

DETERMINACION DE RF

La retencin se puede explicar en base a la competencia que se establece entre

el soluto a separar y la fase mvil por adsorberse a los centros activos polares
de la fase estacionaria. As, las molculas de soluto se encuentran adsorbidas
en la fase estacionaria y a medida que se produce la elucin van siendo
desplazadas por la fase mvil. La retencin y la selectividad en la separacin
dependen de los valores respectivos de las constantes de los diferentes
equilibrios qumicos que tienen lugar, que estn en funcin de:

la polaridad del compuesto, determinada por el nmero y naturaleza

de los grupos funcionales presentes. Los solutos ms polares quedarn
ms retenidos puesto que se adsorben ms firmemente a los centros
activos de la fase estacionaria, mientras que los no polares se eluirn
con mayor facilidad.
Naturaleza del disolvente. As, para un mismo compuesto, un aumento
en la polaridad del disolvente facilita su desplazamiento en la placa. La
relacin entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente
 desde el origen de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor
constante para cada compuesto en unas condiciones cromatografas
determinadas (adsorbente, disolvente, tamao de la cubeta,
temperatura, etc.). Debido a que es prcticamente imposible
reproducir exactamente las condiciones experimentales, la
comparacin de una muestra con otra debe realizarse eluyendo ambas
en la misma placa.

La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la mancha.

Si sta es excesivamente grande se obtendr un valor errneo del Rf. Se
recomienda elegir un eluyente en el que los componentes de la mezcla
presenten un Rf medio en torno a 0.30.5. Para compuestos poco polares, se
debe utilizar un disolvente apolar como el hexano. En el caso de compuestos
con polaridad media, se aconseja utilizar mezclas hexano/acetato de etilo en
distintas proporciones. Los productos ms polares, requieren disolventes ms
polares como mezclas de diclorometano/metanol en distintas proporciones.

RESULTADOS

MUESTRA: orina con marihuana

RF = = =0

ESTANDAR: MARIHUANA PURA

.
RF = = = .

Conclusin: se lleg a la conclusin de que la muestra de orina obtenida con
marihuana solo dio como RESULATADO la FORMA ENTERA DE DICHA
SUSTANCIA, esto debido que posiblemente en consumidor de MARIHUANA
HAYA CONSUMIDO TRES DIAS ANTES DEL ANALISIS.

Por otro lado el estndar si nos positivo observndose los metabolitos con la
luz UV.
 CUESTIONARIO

1. Escriba la reaccin qumica en la preparacin de revelador azoico

Los colorantes azoicos son colores sinttico o artificiales que contienen un grupo
AZO como parte de su estructura, normalmente son mas estable que los
colorantes naturales(es decir son ms resistentes al calor y no se decoloran ante
la luz).Su cloroformo principal es el grupo AZO (-N-N) en funcin del cloroformo
obtenemos un color u otro
2. Escriba la reaccin qumica en el proceso del revelado.
 3. Escriba otras tcnicas del revelado

Cromatografa en capa delgada (CCD) Existe una serie de mtodos de CCD

para realizar un anlisis cualitativo y semicuantitativo del cannabis, por medio
de diversas fases estacionarias (placas de CCD) y sistemas de disolventes, y
tcnicas ligeramente distintas respecto de la preparacin de la muestra y la
visualizacin por punto. Muchos de estos mtodos tambin producen resultados
aceptables, pero cada mtodo que se emplee en un laboratorio por primera vez
debe ser validado y/o verificado antes de su uso habitual. El siguiente mtodo
se ha ensayado en la prctica y se considera adecuado para su fin.

Espectrometra de movilidad inica (EMI) El anlisis de THC puede realizase

mediante un espectrmetro de movilidad inica. Se han constatado diversos
problemas relacionados con la separacin de seales de la herona y humedad
[51]. Por lo tanto, no es el mtodo ideal.

Cromatografa en capa delgada (CCD) Existe una serie de mtodos de CCD para
realizar un anlisis cualitativo y semicuantitativo del cannabis, por medio de
diversas fases estacionarias (placas de CCD) y sistemas de disolventes, y
tcnicas ligeramente distintas respecto de la preparacin de la muestra y la
visualizacin por punto. Muchos de estos mtodos tambin producen resultados
aceptables, pero cada mtodo que se emplee en un laboratorio por primera vez
debe ser validado y/o verificado antes de su uso habitual. El siguiente mtodo
se ha ensayado en la prctica y se considera adecuado para su fin.
Cromatografa de gases - detector de ionizacin de llama (GC-FID), sin y
con derivacin El propsito del anlisis determina la necesidad de realizar o no
derivacin. Sin derivacin previa (sililacin) de THC y THCA, el anlisis GC
descarboxilar al segundo y producir el contenido total de THC de la muestra
de cannabis, que es la suma del THC libre y el THC que forma el THCA. Puesto
que el contenido total de THC determina la potencia mxima del cannabis que se
fuma habitualmente (y por lo tanto que se descarboxila), la mayora de los
sistemas de justicia penal consideran como parmetro pertinente el contenido
total de THC. Sin embargo, si se deben comunicar ambos contenidos, la
derivacin previa s ser necesaria

Cromatografa de gases-Espectrometra de masa (GC-EM) El anlisis de GC-

EM puede llevarse a cabo de manera anloga a la del anlisis de GD-FID. Se
dispone de espectros patrn de los cannabinoides ms comunes, tanto con forma
derivada como no derivada, en las bases de datos comerciales de EM de uso
corriente.

Cromatografa de lquidos de alto rendimiento (HPLC) El mtodo descrito a

continuacin es un mtodo validado para el anlisis del contenido total de THC
(THC + THCOOH) en la hierba de cannabis despus de la extraccin con
metanol/cloroformo y la ulterior descarboxilacin [54, 55]. La validacin abarca
todo el proceso, desde la preparacin de las muestras hasta el anlisis por HPLC.
Otros mtodos pueden producir tambin resultados aceptables, pero se deben
validar y/o verificar antes de su uso habitual. Mediante la adecuada verificacin,
puede aplicarse tambin el mismo mtodo a otros productos del cannabis.
4. escriba las formulas qumicas de los otros constituyentes de la especie
de cannabis( diferentes al THC, CBD, CBN)
BIBLIOGRAFIA

http://www.sld.cu/galerias/pdf/uvs/patologiaclinica/4.pdf

http://www.elementos.buap.mx/num60/htm/3.htm

http://www.sebbm.es/web/es/divulgacion/acercate-nuestros-
cientificos/257-guillermo-velasco-mayo-2013-cannabinoides
ANEXOS