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KJELDAHL
El mtodo Kjeldahl se utiliza en qumica orgnica para la determinacin del contenido
de nitrgeno en muestras orgnicas lo cual es de gran inters en mbitos de tanta
transcendencia hoy en da como son el alimentario y el medioambiental.
APLICACIONES
Desde 1883 en que John Kjeldahl present sus trabajos, su mtodo ha ganado una gran
aceptacin y se aplica en una amplia variedad de trabajos para los anlisis de alimentos,
bebidas, piensos, grano, carnes, aguas residuales, suelos para cultivos y otros. Hoy por
hoy es el mtodo ms usado para el anlisis de protenas y se efecta mediante la
determinacin de nitrgeno orgnico. Esto es as porque los diferentes tipos de
protenas coinciden todas ellas en una proporcin similar de dicho nitrgeno orgnico.
En la mayora de los casos de utiliza el factor de clculo siguiente:
En esta tcnica se digieren las protenas y otros compuestos orgnicos de los alimentos
en una mezcla con cido sulfrico en presencia de catalizadores. El nitrgeno orgnico
total se convierte en sulfato de amonio mediante la digestin. La mezcla resultante se
neutraliza con una base y se destila. El destilado se recoge en una solucin de cido
brico. Los aniones de borato as formado se titulan con HCL estandarizado para
determinar el nitrgeno contenido en la muestra.
En general, el mtodo Kjeldahl tiene la ventaja de poderse ejecutar mediante equipos
no muy sofisticados y puede ser realizado por tcnicos poco experimentados.
VENTAJAS DEL MTODO
Apropiado para varios tipos de pro ductos.
Alta confiabilidad.
Usado como mtodo de referencia.
DESVENTAJAS DEL MTODO
Interfieren compuestos nitrogenados no proteicos.
Uso de catalizadores txicos o caros.
Eleccin del factor de conversin.
Como consecuencia de su estructura a base de aminocidos individuales, el contenido
en nitrgeno de las protenas vara slo entre unos lmites muy estrechos (15 a 18%; en
promedio 16%). Para la determinacin analtica del contenido en protena total, se
determina por lo general el contenido de nitrgeno (N) tras eliminar la materia orgnica
con cido sulfrico (mtodo de Kjeldahl), calculndose finalmente el contenido de
protena con ayuda de un factor (en general f = 6,25). Se asume que el SO3 que se
forma durante el tratamiento a altas temperaturas se adiciona como cido de Lewis al
grupo NH del enlace peptdico (base de Lewis) de la protena, formndose el
correspondiente cido amidosulfnico, el que posteriormente se transforma en sulfato
amnico por degradacin. El sulfato amnico se determina a continuacin, tras
liberacin del NH3 y destilacin, por medio de una valoracin cido-base.
Como en el tratamiento Kjeldahl de alimentos no se determinan slo protenas o
aminocidos libres, sino tambin cidos nucleicos y sales de amonio y tambin
nitrgeno ligado de compuestos orgnicos o vitaminas, el nitrgeno ligado orgnico se
expresa como nitrgeno total calculado como protena o como protena total (N x f).
No obstante, como por lo general los alimentos slo contienen cantidades traza de
compuestos aromticos nitrogenados y de vitaminas, el error as cometido se considera
despreciable.
FUNDAMENTO: La sustancia a investigar se somete a un tratamiento oxidativo con
cido sulfrico concentrado en presencia de una mezcla catalizadora (las sales/xidos
metlicos sirven para el transporte de oxgeno con formacin intermedia de oxgeno
naciente; el sulfato potsico sirve para elevar el punto de ebullicin, alcanzndose
temperaturas de 300-400C durante la digestin). Del sulfato amnico formado se libera
el amonaco por tratamiento alcalino y ste se transporta con ayuda de una destilacin
en corriente de vapor a un recipiente con cido brico y se realiza una titulacin con una
solucin valorada de cido sulfrico. El contenido en protena de la muestra se calcula
teniendo en cuenta el contenido medio en nitrgeno de la protena en cuestin.
MATERIALES Y REACTIVOS
II. DESTILACIN:
Presentar el baln con la muestra digerida a un refrigerante por medio de una trampa
adecuada. Preparar un erlenmeyer con 12,5 ml de H2SO4 0,25N (sobre el cual se va a
recoger el NH3 destilado), y colocarlo a la salida del refrigerante cuidando que el
extremo del mismo quede sumergido en la solucin cida. Antes de conectar
completamente el baln se va agregando con cuidado la cantidad necesaria de solucin
de NaOH 40% como para neutralizar el cido sulfrico, primero sin agitar para que se
ubique en el fondo, y una vez agregado todo, conectar bien el baln, agitar para lograr
la mezcla (el medio se hace fuertemente alcalino que se detecta por formacin de un
precipitado pardo oscuro, dispersado por efecto de la ebullicin) y simultneamente se
comienza el calentamiento a ebullicin del contenido del baln. Se sigue destilando
hasta llegar a aproximadamente 200 ml en el erlenmeyer colector (los primeros 150 ml
de destilado contienen generalmente la totalidad del NH3). Una vez alcanzado dicho
volumen, se retira el erlenmeyer enjuagando dentro del mismo el extremo del
refrigerante , para no perder nitrgeno y luego se apaga el calentamiento.
III. VALORACIN:
El destilado se valora con solucin de NaOH 0.25 N, hasta lograr el viraje del indicador
fenolftalena al color inicial rosado.
Clculos:
Protena total % = VMuestra x NAcido x 14 x F x 100 / 1000x gr de muestra
MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales:
1 extractor soxhlet
1 soporte universal
1 aro mediano con nuez
1 plancha de calentamiento
1 embudo de decantacin de 250 ml
1 matraz redondo de 500 ml
1 refrigerante a reflujo dotado de sus 2 gomas para conexin a red de agua y desage.
Un vidrio de reloj
Balanza analtica
Tijera
Engrampado
Una esptula
Papel de filtro
Reactivos:
PROCEDIMIENTO
1. Obtenida la lechuga de mar se procede a secar y moler hasta que este finamente
pulverizado (ver imagen), luego se procede a pesar.
2. Se arma un cartucho de papel filtro y se engrampa como se muestra en la imagen 2.
3. El alga pesada se coloca en un cartucho y se cubre con algodn.
4. Se monta el equipo soxhlet, pero sin reflujo (ver imagen).
5. El cartucho se coloca en la pieza media del dispositivo de extraccin Soxhlet o
compartimento de muestra.
6. Se llena por la parte de arriba del soxhlet con una cantidad suficiente de disolvente ter
de petrleo.
7. Se procede entonces a completar el montaje del dispositivo de extraccin.
8. La parte superior del reflujo se tapona con desecante (sulfato sdico anhidrido) envuelto
en algodn para evitar la entrada y condensacin de vapor de agua.
9. Tras el montaje se pone en marcha la cocinilla y se regula el caudal de agua del reflujo.
10. El ter, una vez que alcanza su temperatura de ebullicin, se evapora y llega al
refrigerante condensndose y cayendo en el compartimento del cartucho de muestra.
11. Durante el proceso de extraccin hacemos prueba de grasas: con una pipeta extraemos
ter de petrleo y dejamos caer unas gotas a un portaobjeto, si al evaporarse el ter de
petrleo a temperatura ambiente se observa que queda un residuo grasoso nos da a
entender que an no culmina la extraccin de grasas. Si por el contrario se evapora
completamente daremos por finalizado.
12. Cuando el ter deja de hervir, se quita el Soxhlet con cuidado y se extrae el cartucho.
13. Se vuelve a colocar el dispositivo para calentar el matraz redondo y, cuando est el
Soxhlet bastante lleno, pero antes de que sifone, se procede de forma anloga a
anteriormente para recolectar el ter de la parte intermedia en un recipiente
debidamente etiquetado.Repetir este proceso una segunda vez hasta que la cantidad
de ter en el matraz redondo sea muy poca.
14. Apagar la cocinilla y dejar que enfre el baln y luego pesarlo para comparar el peso que
tubo antes de iniciar la extraccin.
ATENCIN:
RESULTADOS
15.36 --------------100%
0.14---------------X%
X%= 0.9114%
Supuesto de grasa
Porcentaje de humedad
12.3%-----------------------100gr
X%----------------------15.36gr
X% = 1.889%