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BACTERIOLOGIA DE PLANTAS
Viosa, MG
Maio de 2016
BACTERIOLOGIA DE PLANTAS
- NOTAS DE AULA -
1. Introduo
2. Histrico
Poucos bacteriologistas
1912 - Gregrio Bondar Murcha bacteriana da mandioca
(Xanthomonas axonopodis pv. manihotis)
Dcada de 40 e 50 - Dr. Otvio Drummond Murcha bacteriana das solanceas
(Ralstonia solanacearum)
- Dra. Vitria Rossetti Doenas dos citros:
Cancro ctrico
(Xanthomonas axonopodis pv. citri)
1
Engo Agrnomo, DS. Professor Titular. Depto. de Fitopatologia/UFV.
Bacteriologia de Plantas 3
3. Importncia
Importncia econmica das fitobacterioses Varia em funo do pas ou regio em que elas
ocorrem.
Tamanho: varia em funo da temperatura de incubao, meio de cultura, idade da cultura e mtodo
de colorao 1,0-5,0 x 0,5-1,0 m.
Protozorio
Cabea de
nematide
BYV
TMV
WSMV
CMV Fungo
TNSV (miclio)
Molcula de Hemoglobina
Virides
Molicutes
Ncleo
Bactria Nuclolo
Diagrama esquemtico das formas e tamanhos de alguns fitopatgenos em relao clula vegetal
(Adaptado de Agrios, 1997).
4.2. Estrutura
Passado:
Pequena importncia tamanho da clula bacteriana;
qualidade dos microscpios.
Interesse: funces bioqumicas e fisiolgicas das clulas estudo de doenas e fermentaes.
Hoje:
Estrutura da clula bacteriana bem conhecida
Microscopia tica;
Microscopia eletrnica;
Tcnicas citolgicas;
Corantes;
Marcadores radioativos, etc.
Mesossomo
Ribossomos
Membrana celular
Citoplasma
Parede
celular Cpsula
Cromossomo
Plasmdeo
Flagelo
4.2.1. Flagelos
Monotrquia
Lofotrquia
Peritrquia
4.2.2. Cpsula
A maioria das bactrias possui uma camada de polissacardeos externa parede celular, a qual
chamada genericamente de cpsula; por serem externos clula bacteriana esses polissacardeos
so denominados exopolissacardeos (EPS).
Funes:
Aderncia;
Proteo dessecao, radiaes, agentes antimicrobianos, fagocitose, etc.;
Virulncia algumas fitobactrias.
Ralstonia solanacearum, Erwinia amylovora, Xanthomonas axonopodis pv. manihotis:
isolados capsulados: virulentos;
isolados no-capsulados: avirulentos.
Quantidade de EPS
Isolado Grau de Virulncia
(g/1012 clulas)
Gram-positiva Gram-negativa
Citoplasma
Memb. citop.
10% peptidoglicano
Parede celular (10-15 nm)
(peptidoglicano)
50% peptidoglicano
Membrana externa
(20-25 nm)
4.2.5. Citoplasma
4.2.5.1. Ribossomos
30S
Partculas densas, onde ocorre a sntese protica,
sendo encontrados em grande nmero em todas
as clulas procariticas.
Consistem de 2 subunidades de tamanhos 50S
diferentes (50S e 30S), que juntas formam o
ribossomo bacteriano 70S; S= unidade de
sedimentao de uma partcula quando
centrifugada em alta velocidade. 70S
Constituio: rRNA e protenas.
Ribossomo de clulas procariotas
Cromossomo
Somente um cromossomo (DNA). O cromossomo a estrutura interna das clulas que
fisicamente carrega a informao hereditria de uma gerao para outra.
Consiste de uma nica molcula de DNA de fita dupla na forma circular.
No possui membrana nuclear.
enrolado, espiralado e de forma altamente compacta - cerca de 1.200 vezes maior que a
clula bacteriana.
Informao gentica essencial para a vida da clula bacteriana.
Plasmdeos
Pequenas molculas de DNA normalmente circulares, auto-replicativas, que no fazem parte do
cromossomo bacteriano.
Informao gentica no essencial para a vida da clula bacteriana podem carregar genes que
codificam para resistncia a antibiticos, enzimas que degradam substncias qumicas
complexas, produo de bacteriocinas, patogenicidade, etc.
Podem estar ausentes ou existir de um a vrios por clula.
Podem ser transferidos de uma clula bacteriana para outra por conjugao.
+
Perodo de
gerao
Perodo ou tempo de gerao tempo necessrio para que a clula bacteriana se divida (ou para
que a populao duplique).
No o mesmo para todas as bactrias.
Bactrias fitopatognicas para a maioria o perodo de gerao varia de 20 a 60 minutos.
Reproduo por fisso progresso geomtrica, em que a populao dobra a cada perodo de
gerao.
Fase estacionria
de clulas
Fase de morte
ou de declnio
Log do nmero
Fase logartima
ou exponencial
Fase lag
Tempo
FASE LAG o perodo necessrio para que a populao bacteriana se ajuste ao ambiente de um novo
meio e possa sintetizar as enzimas ou coenzimas necessrias ao funcionamento da clula.
FASE DE MORTE OU DECLNIO a taxa de morte maior do que a taxa de reproduo e, portanto, o
nmero de clulas viveis decresce rapidamente. As condies mais importantes para a rpida morte
bacteriana so a depleo de nutrientes essenciais e o acmulo de substncias inibidoras,
principalmente cidos.
Bacteriologia de Plantas 14 10
12
10
16
6
12
4
10
2
8
0
6
0 12 24 48 72 96 120
4
Tempo (horas)
(horas)+
Tendncia de crescimento de populaes de Pseudomonas syringae pv. garcae em
2 (Adaptado de OLIVEIRA, 1998)
folhas de cafeeiro
6.1.1. Molicutes
Fitoplasmas
Assemelham-se aos micoplasmas.
Pleomrficos.
No so cultivados em meio de cultura.
Causam mais de 200 diferentes doenas em centenas de hospedeiros.
No Brasil, ocorrem diversas doenas associadas a fitoplasmas, sendo exemplos o superbrotamento
do maracujazeiro, da mandioca, do feijoeiro e da soja, o enfezamento vermelho do milho, o clice
gigante do tomateiro e o declnio do caquizeiro.
Espiroplasmas
Molicutes helicoidais.
Podem ser isolados em meio de cultura artificial, tanto de plantas doentes quanto de insetos
vetores infectados.
Exemplos de doenas:
Stubborn dos citros (Spiroplasma citri).
Enfezamento plido do milho (Spiroplasma kunkelii)
Bactrias:
Mais de 10.000 espcies descritas.
A maioria decompositor saproftico.
Cerca de 150 espcies causam doenas em plantas a maioria saprfita facultativo.
Agrobacterium
Bastonetes Gram-negativos;
Aerbias estritas;
Clulas mveis por um a seis flagelos peritrquios;
Colnias no-pigmentadas em meio de cultura;
Tipicamente habitantes do solo;
Isolados fitopatognicos possuem pelo menos um plasmdeo, o plasmdeo indutor de tumor (Ti)
ou raiz (Ri);
Incitam tumores e proliferao de razes em diversos hospedeiros;
Agrobacterium tumefaciens, A. rhizogenes e A. vitis.
Erwinia e Pectobacterium
Bastonetes Gram-negativos;
Anaerbias facultativas (crescem na presena ou ausncia de oxignio);
Clulas mveis por flagelos peritrquios;
As espcies de Erwinia no apresentam atividade pectoltica e causam sintomas tais como morte
das pontas, murchas, cancros, etc.
Erwinia psidii morte das pontas em goiabeira.
As espcies de Pectobacterium apresentam atividade pectoltica e so causadoras de
podrides-moles.
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum podrido-mole em dezenas de hospedeiros.
Pseudomonas
Bastonetes Gram-negativos;
Aerbias estritas;
Clulas lofotrquias;
Produzem pigmentos fluorescentes;
Pseudomonas syringae pv. tomato pinta bacteriana do tomateiro
Pseudomonas cichorii manchas foliares em diversos hospedeiros.
Ralstonia
Bastonetes Gram-negativos;
Aerbias estritas;
Clulas lofotrquias;
Colnias no-fluorescentes, com freqente produo de um pigmento marrom difusvel em meios
complexos;
Acumulam poli--hidroxibutirato;
Ralstonia solanacearum murcha bacteriana das solanceas.
Xanthomonas
Bastonetes Gram-negativos, monotriquos;
Aerbias estritas;
Produtoras de xantomonadinas colnias amarelas em meio de cultura;
No utilizam asparagina como fonte de carbono e nitrognio.
Xanthomonas campestris pv. campestris podrido negra das brssicas.
Xanthomonas axonopodis pv. citri cancro ctrico.
Xylella
Bastonetes gram-negativos, no-pigmentados;
Aerbias estritas;
Clulas atrquias;
Nutricionalmente fastidiosas
Colonizam o xilema das plantas hospedeiras;
Xylella fastidiosa Clorose variegada dos citros (CVC) ou amarelinho dos citros.
Streptomyces
Procariotas filamentosos, apresentando hifas delgadas e ramificadas;
Miclio com cadeias de 3 a muitos esporos;
Gram-positivos;
Todas as espcies so habitantes de solo;
Streptomyces scabies e S. acidiscabies sarna comum da batata.
Subespcie grupo dentro de uma espcie de bactria fitopatognica que se diferencia de outros
grupos, principalmente por suas caractersticas nutricionais ou fisiolgicas.
Patovar grupo dentro de uma espcie de bactria fitopatognica que se diferencia de outros grupos
quanto habilidade de infectar determinadas espcies hospedeiras.
7. Fisiologia
8. Ecologia
Quanto fonte de nutrientes e relao com a planta hospedeira as fitobactrias podem apresentar
diferentes fases:
Parasita: demandam nutrientes dos tecidos vivos, resultando em doena no hospedeiro.
Saprfita: nutrientes so obtidos de restos de cultura em decomposio.
Residente: quando presente na superfcie de plantas, obtendo nutrientes dos exsudados dos
seus rgos. Populaes residentes possuem importante papel na epidemiologia de
bacterioses de plantas.
se presentes na planta hospedeira em ambiente favorvel pode ocorrer a penetrao e
ter incio a colonizao dos tecidos da planta, resultando em doena.
se presentes em plantas no-hospedeiras fonte de inculo para plantas hospedeiras
presentes na rea de cultivo.
Algumas fitobactrias so tipicamente habitantes de solo, ou seja, o aumento da populao ocorre
na planta hospedeira, mas esta populao decresce lentamente no solo, na ausncia do hospedeiro.
Ex.: Espcies de Agrobacterium, Pectobacterium, Dickeya e Streptomyces e Ralstonia
solanacearum.
Bactrias que colonizam a parte area das plantas so consideradas invasoras de solo, pois quando
no solo sua populao decresce rapidamente. Persistem no solo enquanto o tecido da planta doente
no for totalmente decomposto pela microbiota do solo. A rotao de culturas e a destruio ou
enterrio de restos de cultura assumem, portanto, importante papel no controle.
Ex.: Pseudomonas cichorii, Pseudomonas syringae pv. tomato, Xanthomonas axonopodis pv.
phaseoli, Xanthomonas campestris pv. campestris.
9. Sobrevivncia
Bactrias fitopatognicas no formam esporos de sobrevivncia, mas podem se manter viveis por
longos perodos desfavorveis.
Cpsula importante funo de proteo para fitobactrias.
Conhecimento de como e onde as fitobactrias sobrevivem, entre uma estao de cultivo e a
estao seguinte, necessrio para o controle efetivo de fitobacterioses.
Sementes.
10. Disseminao
Agentes biticos e abiticos disseminao de bactrias entre plantas e entre partes de uma
planta.
10.2. Insetos
Insetos podem visitar plantas doentes e assim carregar clulas bacterianas aderidas s sua patas,
disseminando-as dentro do campo e entre campos de cultivo. Tambm, podem atuar como vetores de
fitobactrias.
11. Penetrao
Ferimentos exsudao de fludo intercelular, o qual pode exercer quimiotactismo positivo sobre
fitobactrias.
12. Colonizao
13.3. Murchas
Enfermidades graves que geralmente culminam com a morte da planta.
Afetam principalmente plantas herbceas.
A bactria penetra pelas razes e coloniza, geralmente, os vasos do xilema, interferindo com a
translocao de gua e nutrientes, levando murcha e morte da parte area das plantas.
Alguns exemplos de bactrias que causam murchas vasculares so:
Ralstonia solanacearum, agente causal da murcha bacteriana das solanceas e do moko da
bananeira;
Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, agente causal do cancro bateriano do
tomateiro e do pimento;
Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens, agente causal da murcha bacteriana do
feijoeiro e da soja.
1 - Bloqueio dos vasos por clulas bacterianas ou polissacardeos (EPS) produzidos pelo
patgeno;
2 - Respostas da planta gomas, resinas e tiloses;
Tiloses so produzidas por clulas do parnquima adjacente e se projetam no interior dos
vasos, contribuindo para a sua obstruo.
3 - Toxinas produzidas pela bactria.
- podem destruir as clulas do parnquima adjacente aos vasos, dando origem a materiais que
se acumulam nos mesmos;
- podem ser translocadas para as folhas levando reduo da sntese de clorofila, reduo da
fotossntese, alterao na permeabilidade de membranas e no controle da perda de gua por
transpirao, o que resulta em epinastia, murcha, necrose e morte.
13.4. Podrides-moles
Ocorre comumente em rgos de reserva tais como tubrculos, rizomas, bulbos e frutos.
Causam prejuzos no campo, bem como no armazenamento e na comercializao.
As bactrias que incitam as podrides-moles secretam diversas enzimas pectolticas, as quais
degradam substncias pcticas presentes na lamela mdia e na parede celular das clulas do
hospedeiro, levando macerao (amolecimento e decomposio) dos tecidos atacados.
Geralmente associada a odor desagradvel devido invaso dos tecidos em decomposio por
bactrias secundrias, as quais produzem diversas substncias volteis com forte odor de
putrefao.
As podrides-moles so causadas, principalmente, por Pectobacterium spp. e Pseudomonas spp.
13.5. Galhas
Ocorrem sobre caules e razes de plantas infectadas.
Ocorrem hipertrofia e hiperplasia dos tecidos da planta atacados pela bactria, em decorrncia do
desbalano de hormnios.
As fitobactrias que induzem sintomas de galhas so Agrobacterium spp. e algumas espcies de
Arthrobacter, Pseudomonas, Rhizobacter e Rhodococcus.
T-DNA
Cromossomo Plasmdeo Ti
Clula de Agrobacterium tumefaciens mostrando o
cromossomo e o plasmdeo Ti com a regio do T-DNA.
13.6. Cancros
Relativamente poucas doenas bacterianas apresentam sintomas de cancro, mas algumas so
amplamente disseminadas e causam graves prejuzos.
So leses em caules, alongadas, profundas, permanecendo uma linha bem definida entre os
tecidos sadios e os afetados.
As bactrias comumente envolvidas na induo de sintomas de cancro so: Pseudomonas syringae
pv. syringae, P. syringae pv. morsprunorum, Xanthomonas axonopodis pv. citri e Clavibacter
michiganensis subsp. michiganensis.
13.7. Sarnas
Sintomas caracterizados por reas rugosas, corticosas e escuras, de tamanho varivel.
Ocorrem em frutos, tubrculos e razes.
Resultam da proliferao anormal das clulas da periderme, em resposta infeco pelo patgeno.
As sarnas bacterianas so causadas por espcies de Streptomyces.
Controle deve ser integrado adoo de diversas medidas de controle desde antes do plantio at
a comercializao.
14.1.1. Quarentenas
Normalmente qualquer pas do mundo possui suas leis quarentenrias.
Embrapa Quarentena Vegetal: responsvel pelo intercmbio e quarentena de germoplasma
vegetal.
Quarentena Vegetal: Toda atividade destinada a prevenir a introduo e/ou a disperso de pragas
quarentenrias.
A Quarentena Vegetal refere-se a um perodo em que as plantas permanecem em um local
fitossanitariamente seguro, em observao e anlise, visando a sua futura liberao para o plantio no
campo ou distribuio mercadolgica. Este perodo baseia-se no ciclo da planta e da praga.
PROCARIONTES:
Apple chat fruit phytoplasma Peach yellows phytoplasma
Apple proliferation phytoplasma Pear decline phytoplasma
Burkholderia glumae Pectobacterium rhapontici
Candidatus liberibacter africanus Pseudomonas syringae pv. atrofaciens
Clavibacter michiganensis subsp. insidiosus Rhodococcus fascians
Clavibacter michiganensis subsp.nebraskensis Spiroplasma citri
Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus Xanthomonas axonopodis pv. aurantifolli raa B
Erwinia amylovora Xanthomonas campestris pv. cassavae
Erwinia salicis (= Xanthomonas cassavae)
Grapevine flavescence dore phytoplasma Xanthomonas oryzae pv. oryzae
Palm lethal yellowing phytoplasma Xanthomonas oryzae pv. oryzicola
Pantoea stewartii Xanthomonas vasicola pv. musacearum
Peach X disease phytoplasma Xanthomonas populi
Peach rosette phytoplasma Xylophilus ampelinus
CITROS:
BATATA SEMENTE:
INSTRUO NORMATIVA N 32 DE 20 DE NOVEMBRO DE 2012 - Ministrio da
Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA).
Cancro ctrico primeiro relato no Brasil foi em 1957, na regio de Presidente Prudente, SP.
Alm do estado de So Paulo, o cancro ctrico ocorre, tambm, nos estados de Mato Grosso, Mato
Grosso do Sul, Minas Gerais, Paran, Rio Grande do Sul, Roraima e Santa Catarina.
CANECC Campanha Nacional de Erradicao do "Cancro Ctrico".
rgo do MAPA responsvel pelo programa de erradicao do cancro ctrico no Brasil.
Nos estados do Paran, Santa Catarina e Rio Grande do Sul, a erradicao de plantas doentes no
obrigatria e permitida a adoo de prticas de manejo da doena.
14.2.5. Irrigao
A gua um fator de grande influncia na quantidade de doenas bacterianas em uma lavoura.
Portanto, no deve ser fornecida em excesso, de forma a evitar um ambiente favorvel ao
desenvolvimento da doena.
Irrigao por asperso favorece doenas da parte area.
Irrigao por sulcos favorece doenas de solo.
A qualidade da gua , tambm, importante, pois pode se constituir em fonte de inculo de
fitobactrias.
Controle Biolgico:
Ecologicamente correto.
Respeito sade humana.
Poucos exemplos j funcionando.
A. radiobacter K84 produz uma bacteriocina denominada agrocina 84, qual A. tumefaciens
sensvel. Bacteriocina: substncia antimicrobiana produzida por bactrias, capaz de inibir o
crescimento de outras bactrias taxonomicamente relacionadas.
Plasmdeo pAgk84:
Cromossomo Produo de agrocina 84;
Resistncia a agrocina 84;
Transferncia (genes tra).
Agrobacterium radiobacter
Plasmdeo Ti
Cromossomo Tumorognese
Sensibilidade agrocina 84
Agrobacterium tumefaciens
Antagonista
Popula
o
Patgeno
Tempo
Plasmdeo Ti
Cromossomo (tumorognese)
Plasmdeo pAgK84
Plasmdeo pAg1026
Cromossomo (tra)
Agrobacterium radiobacter K1026 incapaz de efetuar conjugao e transferir seu plasmdeo para
outras bactrias, eliminando o risco de surgimento de patgenos resistentes agrocina 84, que
levaria quebra do controle.
Tem-se apenas um antibitico com registro vlido e disponvel para uso no Brasil. A
casugamicina, cuja formulao comercial o Hokko Kasumin (casugamicina 2%), um
bactericida/fungicida indicado para o controle de doenas bacterianas e fngicas, conforme a tabela
abaixo.
Resistente
3 Com pulverizaes freqentes as clulas Sensvel
bacterianas resistentes passam a
predominar na populao.
14.5.2. Cpricos
Quatro princpios ativos:
- Hidrxido de cobre;
- Oxicloreto de cobre;
- xido cuproso;
- Sulfato de cobre.
Bactericidas/Fungicidas
Relativamente baratos e facilmente encontrados no mercado.
Uso preventivo pulverizaes para proteo da parte area.
Uso contnuo surgimento de populaes bacterianas resistentes, semelhana do que ocorre
com antibiticos.
Bactrias fitopatognicas que esto protegidas no solo ou no interior dos tecidos das plantas no
so controladas com eficincia por antibiticos, cpricos ou cloreto de benzalcnio, pois no so
atingidas pelo princpio ativo dos produtos.