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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA
Accin de la enzima bromelina en la disgregacin de hematomas y

disminucin de la inflamacin
Mara Jos Chinchilla Reyes
Qumica Farmacutica
Guatemala, febrero de 2014

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA
Accin de la enzima bromelina en la disgregacin de hematomas y

disminucin de la inflamacin
Informe de Tesis
Presentado por
Mara Jos Chinchilla Reyes
Para optar el ttulo de
Qumica Farmacutica
Guatemala, febrero de 2014

AGRADECIMIENTOS
A Dios y a la Virgen Mara por la bendicin

que me han dado al poder obtener este logro.
A La Universidad de San Carlos de Guatemala
A La Facultad de Ciencias Qumicas y
Farmacia
A MI ASESOR Lic. Julio Chinchilla por su apoyo
incondicional en la elaboracin de este
trabajo de investigacin, sus consejos y su
paciencia pero sobre todo por su valiosa
amistad.
A MI REVISOR Lic. Estuardo Serrano por su apoyo
incondicional, su colaboracin en la
investigacin y por su valiosa amistad.
A La Licenciada Julia Garca y Aylin Santizo

por su apoyo y su cario.
A Mis amigas con las que compart ms de 5
aos de penas, alegras, desvelos Mara
Fernanda Filippi, Gabriela de Len y
Gabriela Higueros.
A Todas las personas que colaboraron en la
fase experimental de la investigacin,
agradezco su confianza
ACTO QUE DEDICO
A DIOS
Por las bendiciones que ha derramado en mi vida, porque me dio la fuerza en los momentos
difciles y la sabidura para culminar mi carrera, sin su amor esto no sera posible. Le estoy
eternamente agradecida.
A MI MADRE SANTSIMA
Por su intercesin, por ser fuente de sabidura, por mandar siempre a sus ngeles a ayudarme, por
su amor de madre.
A MI PAP
Por apoyarme siempre, por ser un ejemplo de esfuerzo y superacin. Gracias por tu esfuerzo
porque s que todo tu trabajo ha sido por nosotras.
A MI MAM
Por ser mi gua en la vida, por apoyarme siempre con sus sabas palabras, por ser un ejemplo de fe
y alegra. Gracias por ser mi maestra en la vida, gracias a tus correcciones, amor y oraciones soy
lo que soy.
A MI HERMANA
Por ser mi amiga y mi apoyo incondicional, sobre todo en mis desvelos y cuando ya no poda ms.
A MIS ABUELITOS
Oscar, Neftal (Q.E.P.D), Gloria y Emilia, por preocuparse siempre por m, por siempre estar
pendiente, por su cario y sus detalles. En especial a mi abuelita Gloria porque siempre estuvo
pendiente de mi almuerzo.
A MI TIA LOURDES Y FER

Por apoyarme, porque siempre se preocuparon por m, por su cario. Por compartir conmigo mis
alegras y mis tristezas.
A MIS TOS
Vinicio (Q.E.P.D.), Irving y Enio, Por el apoyo y cario que siempre me han brindado. En especial
a mi to Enio por compartir conmigo las bendiciones que Dios le ha dado.
A MIS PRIMAS
Porque son mis hermanas, porque hemos compartido momentos inolvidables juntas, por siempre
traer alegra a mi vida.
A MIS PRIMOS
Porque son mis hermanos y a su forma pero me han demostrado su cario y preocupacin por m.
A VERNICA Y YANIRA
Por su cario y sus muestras de apoyo siempre.
A DENSYL
Por su amor y apoyo incondicional, por entenderme y tenerme paciencia en todo momento.
ndice
1. Resumen .............................................................................................................. 1
2. Introduccin ....................................................................................................... 2
3. Antecedentes ....................................................................................................... 3
3.1.Caractersticas de la pia .................................................................... 3
3.2.Enzimas proteolticas .......................................................................... 4
3.2.1. Bromelina ..................................................................... 4
3.3.Fisiologa de la piel ............................................................................. 7

3.4.Absorcin percutnea ......................................................................... 8
3.5.Sistemas Transdrmicos ...................................................................... 9
3.6.Inflamacin ................................................................................... 10
3.6.1. Fases de la inflamacin ............................................... 11
3.7.Hematomas ....................................................................................... 17
4. Justificacin ...................................................................................................... 19
5. Objetivos ........................................................................................................... 20
6. Hiptesis............................................................................................................ 21
7. Materiales y Mtodos ....................................................................................... 22
8. Resultados ......................................................................................................... 28
9. Discusin ........................................................................................................... 34
10. Conclusiones ..................................................................................................... 38
11. Recomendaciones.............................................................................................. 39
12. Referencias........................................................................................................ 40
13. Anexos ............................................................................................................... 43
1
1. Resumen
La bromelina es una enzima presente en la pia la cual presenta accin proteoltica y que por
sus propiedades es utilizada como antiinflamatoria, fibrinoltica, antitrombtica entre otros usos. Se
realiz un estudio en el que se pretenda determinar la accin de la bromelina en la disgregacin de
hematomas y la disminucin de la inflamacin.
Se realiz la extraccin de la enzima a partir de troncos de pia ya que es en donde la enzima se

encuentra en mayor cantidad, esta parte de la planta es la que se descarta luego del corte de la fruta.
La extraccin se realiz con etanol al 95%, se centrifug y se dej evaporar el solvente para obtener
la enzima bromelina. El porcentaje de rendimiento de la extraccin fue de 0.594% el cual es muy
bajo y no se logr utilizar el extracto obtenido de los troncos de pia y se utiliz bromelina
comercial.
Se realiz la preparacin de un gel al cual se le incorpor bromelina comercial obtenido un

preparado farmacutico de accin tpica. Antes de ser utilizado por los pacientes se realizaron
pruebas microbiolgicas las cuales denotaron la ausencia de microorganismos patgenos y
contaminantes.
Para establecer el comportamiento de la enzima con el tiempo se realiz un estudio de

estabilidad, inicialmente a diferentes temperaturas a 25C, 35C y 4C, a las temperaturas ms altas
no fue posible continuar con el estudio ya que el gel presentaba cambios fsicos y disminucin de la
actividad enzimtica por lo que se contino con el estudio de estabilidad a 4C obteniendo un
aumento en la actividad enzimtica del gel, disminucin del pH y manteniendo el color original.
Para la medicin enzimtica se realiz una curva de calibracin con bromelina a diferentes
concentraciones y observando la accin proteoltica de la enzima debido a la precipitacin de la
casena que es una protena presente en la leche.
Por ltimo se realiz un estudio clnico fase I, en donde se aplic el gel con extracto de
bromelina a 13 pacientes que cumplieran con los criterios de inclusin, posteriormente de la
aplicacin del preparado todos indicaron que el gel haba ayudado a la disgregacin de hematomas
medido en relacin del tiempo en el que se desparecen los hematomas segn cada persona. Tambin
se estableci la actividad antiinflamatoria del gel con extracto de bromelina, en donde 10 pacientes
indicaron que disminuy la inflamacin.
2
2. Introduccin
La pia es una fruta tropical cosechada en Guatemala, este fruto es rico en diferentes
nutrientes, contiene en su pulpa enzimas que disuelven las protenas y que reciben el
nombre genrico de bromelana o bromelina. Si bien toda la pulpa de la pia la contiene, la
bromelana se concentra ms en el troncho central de la pia que es precisamente la parte
que se desecha. (Berdonces, J. 2008).
La bromelina es una enzima de accin proteoltica, es decir, capaz de romper las

molculas de las protenas dejando libres los aminocidos que las forman, en cuanto al
campo clnico tienen potencialidades como antiedematosas, antiinflamatorias,
antitrombticas y fibrinolticas.
Debido a que la pia es una fruta de gran consumo en nuestro pas, se utiliz el tallo,
parte que no es utilizada en alimentacin, para realizar la extraccin de la enzima
bromelina, teniendo en cuenta las posibles aplicaciones clnicas de esta enzima se quiere
comprobar su accin en la disgregacin de hematomas y disminucin de la inflamacin.
Dicha enzima ya ha sido utilizada en la industria farmacutica como un favorecedor en

el proceso digestivo pero no para el uso planteado en la presente investigacin ni en la
forma farmacutica establecida.
Para la comprobacin de la accin de esta enzima se aplic en una poblacin que

presentaba frecuentemente hematomas es por esto que se realiz un estudio clnico fase I en
el cual se aplic el preparado farmacutico con el extracto de la enzima y se evalo
descriptivamente la accin de esta en una muestra de pacientes que realizan deporte
constantemente y sufren lesiones o estn expuestos a golpes.
3
3. Antecedentes
3.1 Caractersticas de la Pia

Sinonimia cientfica: Ananas sativus
Sinonimia hispnica: Pia tropical, pia americana
Descripcin: Fruto compuesto, formado por la unin de los frutos de varias
flores alrededor de un eje carnoso. Planta herbcea de la familia de las
Bromeliceas que alcanza hasta 50 cm de altura.
Hbitat: Se cultiva en regiones tropicales de Amrica, Asia y Oceana. Las islas
Hawai, Tailandia y Brasil son los principales productores (Pamplona R., 2002)
La pia tropical contiene en su pulpa unas enzimas que disuelven las

protenas y que reciben el nombre genrico de bromelana. La bormelaina tiene
una actividad fibrinoltica, esto es, que disuelve los pequeos trombos de fibrina.
Por su capacidad de disolver ciertas protenas, la pia tropical es un excelente
postre despus de una comida excesivamente rica en protenas. Si bien toda la
pulpa de la pia la contiene, la bromelana se concentra ms en el tronco central de
la pia que es precisamente la parte que se desecha. (Berdonces, J. 2008)
La pia es una fruta tropical de la familia de las bromeliaceae, es rica en

vitaminas A,B,C y tiene actividad proteoltica debida a la bromelina que se activa
por la cistena, tiosulfato y glutatin. Es inhibida o inactivada por iones metlicos
oxidantes y por agentes que reaccionan con los tioles (acido ascrbico). La
bromelina de los frutos es una proteasa cida, su intensa actividad proteoltica no
se modifica en zonas de pH entre 3 y 8. Es una protena constituida por
aminocidos que se encuentran enrollados en dos partes separadas por un puente
que tiene un lugar activo con un grupo tiol (SH) libre (Gallardo, et.al. , 2009).
4
3.2.Enzimas proteolticas
Las proteasas son enzimas que hidrolizan las cadenas polipetdicas de las
protenas sustrato, se caracterizan por tener gran variedad de especificidades. De
acuerdo con el aminocido o metal que posean en su sitio activo se clasifican en
cuatro familias: serina proteasas, asparticoproteasas, cistena proteasas y
metaloproteasas (Carrera, 2003).
3.2.1. Bromelina
Se trata de una enzima o fermento de accin proteoltica, es decir,

capaz de romper las molculas de las protenas dejando libres los
aminocidos que las forman. Acta en el tracto digestivo deshaciendo las
protenas y facilitando la digestin. (Pamplona R., 2002)
Se obtiene del jugo, de la fruta o de los tallos de la pia (Ananas

comosus). Es una glicoprotena del grupo de las cisten proteasas. Acta de
preferencia sobre los aminocidos bsicos y aromticos de las protenas. Su
pH ptimo vara con el sustrato, en el rango de 5 a 8. Tiene baja tolerancia
trmica. La enzima se utiliza principalmente como ablandador de carne
(tiene buena actividad sobre los tendones y el tejido conectivo rico en
elastina) y para hidrolizar protenas solubles de la cerveza que pudieran
precipitar y causar opacidad por el enfriamiento (Carrera, 2003).
Se ha descrito que muestra varias acciones farmacolgicas por

ejemplo aumenta la absorcin de medicamentos. Se ha utilizado en
tratamientos de desrdenes digestivos, en enfermedades virales y en la
formulacin de vacunas. Tienen potencialidades como antiedematosa,
antiinflamatoria, antitrombtica y fibrinoltica. Recientemente, se demostr
la posible actividad antitumoral de cisteno-proteasas como la bromelina
contenida en la pia en 5 tumores transplantables de ratn, as como la
inhibicin en la proliferacin de tumores cerebrales (Gallardo, et.al. , 2009).
5
En estudios realizados en Alemania, especialmente por los doctores

Steven J. Taussig y Hans A. Nieper, se demostr que la bromelana tomada
por va oral reduce la placa de ateroma, disminuye la agregacin de las
plaquetas y disuelve los trombos de fibrina (Berdonces, J. 2008).
Propiedades Qumicas
Yasuda, Takanashi y Murashi en 1970, reportaron la estructura y

composicin de la bromelina. (Pulido, 2007)
El principal residuo amnico terminal, es la valina y el carboxilo

terminal es glicina (Pulido, 2007)
La enzima es una glicoprotena que tiene un oligosacrido por

molcula, el cual est nico por covalencia a la cadena peptdica. (Pulido,
2007)
La bromelina del tallo tiene un grupo sulfhidrilo reactivo por

molcula, el cual es esencial para la catlisis enzimtica. (Pulido, 2007)
Los principales aminocidos contenidos en la Bromelina son:
Arginina Valina
Arg Val
Acido Aspartico Glicina

Asn Gly
Serina Metionina
Ser Met
Prolina Amonio
Pro NH4
Alanina Glucosamina
Ala Glu
6
Figura No. 1: Estructura de la enzima Bromelina
Fuente: Pulido, 2007
Tabla No. 1 Propiedades fsicas de la bromelina
Origen Tallo de Pia

Peso molecular 33000 Da
Color Blanco
Estado Polvo
Olor y sabor Caracterstico
Solubilidad En agua
pH ptimo 7
Actividad enzimtica 1200 GDU/gr
Temperatura de 70C
inactivacin
Temperatura de 25C
almacenamiento
Fuente: Pulido, 2007
Probablemente es la primera enzima proteoltica de origen de plantas que ha

sido establecida como una glicoprotena. (Budawari, 1996)
7
3.3.Fisiologa de la piel
Existen diferentes estructuras que actan como barrera para la penetracin

de drogas: la capa epicutnea (un manto cido y una capa acuosa), la capa
electrlitica subcrnea, la epidermis, la unin dermoepidrmica, la dermis y la
unidad pilosebcea (Allevato, 2007).
Las drogas pueden atravesar la piel por diferentes rutas: intracelular,

transcelurar, transfolicular, va glndula sebcea, va glndula sudorpara y mixta,
siendo la va intercelular lo ms comn (Allevato, 2007).
En cualquier superficie cutnea la penetracin cumple la ley de Fick que

establece que el flujo es inversamente proporcional al espesor. Al respecto es til
conocer las zonas de piel donde el estrato crneo es sumamente delgado. La piel del
escroto es muy fina y casi tan permeable como la mucosa oral. En la cara y el cuero
cabelludo la permeabilidad tambin es elevada, debido a defectos en la estructura de
la capa crnea y a la abundancia de folculos que actan como agujeros de baja
resistencia; en la cara la penetracin es hasta 10 veces superior que en el torax
(Allevato, 2007).
En trminos generales se reconoce que las personas de origen celta, piel

blanca y ojos azules tienen una capa crnea ms delgada, en contraste con las
personas de piel oscura cuyo estrato crneo tiene un mayor nmero de capas
celulares y es ms denso lo cual le confiere resistencia al intercambio qumico
(Allevato, 2007).
Las glndulas sebceas son ms permeables que los corneocitos, por lo tanto
la unidad pilosebcea (folculo piloso, pelo y glndula sebcea constituye una va
alternativa que permite que las drogas alcancen la dermis invadiendo la
impermeabilidad relativa del estrato crneo intacto (Allevato, 2007).
Para aumentar la difusin a travs de la piel se han ensayado tcnicas de

modificacin de la estructura del estrato crneo, mediante remocin de lpidos
aplicando solventes orgnicos o remocin de corneocitos y lpidos, pero no son
8
mtodos efectivos dada la elevada tasa de recambio de esa capa cutnea. La mejor
estrategia es la hidratacin la que incrementa el espesor vertical de la capa celular
reduciendo su densidad y disminuyendo la resistencia a la difusin (Allevato, 2007).
Los sistemas transdermicos son oclusivos y como tales potencian la

hidratacin al reducir la evaporacin de agua, adems aumentan la temperatura de la
piel a valores cercanos a la central (37) lo cual agrega un refuerzo termodinmico a
la difusin (Allevato, 2007).
3.4. Absorcin percutnea
La penetracin de un principio activo hasta la circulacin sistmica o los

tejidos circundantes involucra multiples procesos: disolucin y liberacin dentro y
desde la formulacin, particin dentro del estrato crneo, difusin a travs del
estrato crneo, particin desde el estrato crneo hacia la fase acuosa de la epidermis,
difusin a travs de la dermis y acceso a la circulacin sistmica y/o tejidos
circundantes (Allevato, 2007).
En forma general, la capacidad de las drogas de difundir a travs de las

membranas biolgicas depende de su peso molecular (<400), del tamao molecular,
del grado de ionizacin solubilidad; el equilibrio entre la liposolubilidad e
hidrosolubilidad; grado de ionizacin (Allevato, 2007).
El estrato crneo funciona como una barrera altamente lipofilica, la cual

evita la prdida excesiva de agua y previene la penetracin de molculas. Los
corneocitos queratinizados conforman una barrera que dificulta el pasaje de
molculas, independientemente de su tipo. Asimismo, los lpidos hidrofbicos
intercelulares lo hacen impermeables a las sustancias hidroflicas (Allevato, 2007).
Se ha planteado que el xito de todo sistema teraputica transdrmico (STT)

depende de la capacidad de la sustancia de difundirse a travs de la piel en
cantidades suficientes para lograr el efecto teraputico deseado (Tabla No. 1)
(Allevato, 2007).
9
Todos los sistemas de este tipo, que se encuentran actualmente en el

mercado, contienen principios activos con un coeficiente de difusin dependiente de
la naturaleza del polmero y del tamao molecular del principio activo. Estos
sistemas obtienen niveles constantes y bajos de sustancia activa en plasma para
lograr su efectividad teraputica (Allevato, 2007).
En los sistemas transdrmicos, una vez que el principio activo se ha liberado

al medio ambiente, la penetracin del frmaco por la piel se realiza a travs de una
serie de pasos de difusin y de transporte activo (Allevato, 2007).
Tabla No.2: Capacidad de penetracin transdrmica.
Grado de penetracin Caractersticas

Pobre Polmeros de alto peso molecular y
macromolculas (protenas y polisacridos).
Pobre Electrolitos solubles en agua (sodio, cloro).
Pobre Sustancias solubles en agua (glucosa, urea).
Buena Sustancias lipo e hidrosolubles.
Excelente Sustancias liposolubles, no polares, bajo
peso molecular.
Fuente: (Allevato, 2007)
3.5.Sistemas Transdermicos
Existen dos tipos de transporte de medicamento a travs de la piel
El transporte pasivo y el transporte activo.
El transporte pasivo de medicamentos a travs de la piel se efecta mediante

una difusin por los tortuosos espacios intercelulares y en funcin de un gradiente
de concentracin (Allevato, 2007)
Los frmacos penetran por difusin pasiva, dependiendo de la interaccin

entre el frmaco, la piel y los excipientes. La piel tiene una funcin de barrera
representada estructuralmente por la dinmica de la capa crnea; las propiedades
fisicoqumicas del frmaco (principio activo + excipientes); la estructura y
10
composicin del estrato crneo son los principales parmetros capaces de modificar
la difusin y la penetracin (Allevato, 2007)
El paso limitante de la absorcin percutnea es la transferencia del principio

activo desde la superficie cutnea a travs del estrato crneo. Este proceso ocurre
bajo la influencia de un gradiente de concentracin y su consecuente difusin por
todas las capas de la piel hasta llegar a la microcirculacin. La penetracin
molecular a travs de las diferentes regiones de la piel est limitada por la
resistencia difusional que ofrecen estas capas y la posicin que ofrece la
microvasculatura a la liberacin sistmica del principio activo (Allevato, 2007).
3.6.Inflamacin
La inflamacin es la respuesta, del sistema inmunolgico de un organismo,

al dao causado a sus clulas y tejidos vascularizados por patgenos bacterianos y
por cualquier otro agresor de naturaleza biolgica, qumica, fsica o mecnica.
Aunque dolorosa, la inflamacin es, normalmente, una respuesta reparadora; un
proceso que implica un enorme gasto de energa metablica. (Bordes, et.al., 2000)
Clsicamente la inflamacin se ha considerado integrada por los cuatros signos

de Celso: Calor, Rubor, Tumor y Dolor. El calor y rubor se deben a las alteraciones
vasculares que determinan una acumulacin sangunea en el foco. El tumor se
produce por el edema y acmulo de clulas inmunes, mientras que el dolor es
producido por la actuacin de determinados mediadores sobre las terminaciones
nerviosas del dolor. (Bordes, et.al., 2000)
11
3.6.1. Fases de la inflamacin
a. Liberacin de mediadores. Son molculas, la mayor parte de ellas, de

estructura elemental que son liberadas o sintetizadas por el mastocito bajo
la actuacin de determinados estmulos.
b. Efecto de los mediadores. Una vez liberadas, estas molculas producen
alteraciones vasculares y efectos quimiotcticos que favorecen la llegada
de molculas y clulas inmunes al foco inflamatorio.
c. Llegada de molculas y clulas inmunes al foco inflamatorio. Proceden en
su mayor parte de la sangre, pero tambin de las zonas circundantes al
foco.
d. Regulacin del proceso inflamatorio. Como la mayor parte de las
respuestas inmunes, el fenmeno inflamatorio tambin integra una serie de
mecanismos inhibidores tendentes a finalizar o equilibrar el proceso.
e. Reparacin. Fase constituida por fenmenos que van a determinar la
reparacin total o parcial de los tejidos daados por el agente agresor o por
la propia respuesta inflamatoria. (Bordes, et.al., 2000)
a. Liberacin de mediadores. El mastocito

Aunque todos los tejidos al lesionarse van a liberar mediadores de la
inflamacin, la fuente principal de los mismos es el mastocito. Esta es
una clula inmune inespecfica que tambin procede de la mdula sea,
aunque los mecanismos de su diferenciacin no son bien conocidos. El
mastocito contiene en el citoplasma grnulos con mediadores de la
inflamacin preformados. Cuando se activa, libera estos factores, junto
con otros de carcter lipdico que son sintetizados de novo. El mastocito
se detecta en casi todos los tejidos, siendo localizado principalmente
alrededor de los pequeos vasos, sobre los que actuarn los mediadores
una vez liberados. (Bordes, et.al., 2000)
12
La liberacin de mediadores ocurre por distintas causas, pero quizs la

ms frecuente sea la lesin directa de la clula por le agente agresivo.
Cuando la inflamacin progresa y se acumulan en el foco suficientes
factores activados del complemento, el C3a y el C5a, actuando sobre
receptores de membrana, inducen la activacin del mastocito y la
consiguiente liberacin de mediadores. Otro mecanismo de activacin se
desarrolla mediante la IgE que es captada en la membrana del mastocito,
ya que ste presenta receptores para la porcin Fc de esta
inmunoglobulina (FceR). El antgeno activa al mastocito cuando conecta
especficamente con dos IgE contiguas sobre la membrana (Bordes,
et.al., 2000)
Los mecanismos bioqumicos que subyacen a este proceso no son an

bien conocidos. Parece que el proceso se inicia en la membrana con
activacin de adenilato-ciclasa y de fosfolipasa A2. La adenilato-ciclasa
determina un incremento inicial de la concentracin intracitoplasmtica
de cAMP, mientras que la fosfolipasa ataca a los lpidos de membrana
produciendo cido araquidnico. Tambin aumenta la permeabilidad de
membrana al Ca++, con lo que se incrementa la concentracin de este
in en el citoplasma. El aumento de la concentracin de Ca++ y el del
cAMP determinan la formacin de microtbulos en el mastocito, as
como el movimiento de grnulos citoplasmticos hacia la membrana
celular, producindose posteriormente la fusin de los grnulos con sta
y la liberacin de mediadores al espacio extracelular. Estos mediadores,
que se encontraban preformados en los grnulos, son principalmente
histamina, enzimas proteolticas, el factor quimiotctico del eosinfilo
(ECF-A, eosinophil chemotactic factor), factor quimiotctico del
neutrfilo (NCF, neutrophil chemotactic factor) y heparina. (Bordes,
et.al., 2000)
El cido araquidnico formado puede seguir dos vas metablicas, la de

la enzima ciclo-oxigenasa que determina la produccin de
13
prostaglandinas (PG) y tromboxanos y la de la lipooxigenasa que

conduce a la formacin de leucotrienos (LT). Todas estas sustancias de
carcter lipdico, sintetizadas de novo por el mastocito, son un segundo
grupo importante de mediadores de la inflamacin. (Bordes, et.al., 2000)
El basfilo es una clula preponderantemente sangunea, acude a los

tejidos durante el proceso inflamatorio y supone un refuerzo en la
liberacin de mediadores ya que se activa por los mismos mecanismos
que el mastocito y libera mediadores equivalentes a los de esta clula.
(Bordes, et.al., 2000)
b. Efectos de los mediadores
Mediadores preformados
1. Histamina.
Es un mediador ampliamente distribuido por el organismo aunque
se detecta principalmente en el mastocito y basfilo. Deriva, por
descarboxilacin, del aminocido histidina. Actuando sobre los
receptores H1 (histamina 1) de los vasos produce vasodilatacin e
incremento de la permeabilidad. Cuando la histamina acta sobre
receptores H2 (histamina 2) produce efectos inhibidores o
reguladores de la inflamacin.
2. Enzimas proteolticas.
De las distintas enzimas proteolticas liberadas por el mastocito,
quizs la ms interesante sea la kininogenasa que acta sobre las
protenas procedentes de la sangre y denominadas kiningenos,
produciendo su ruptura en pptidos ms pequeos denominados
kininas. Las kininas inducen vasodilatacin, aumento de la
permeabilidad vascular y estimulan las terminaciones nerviosas del
dolor.
14
3. Factores quimiotcticos.
El ECF-A incluye dos tetrapptidos de alrededor 500 d. de peso
molecular que atraen eosinfilos al foco inflamatorio, induciendo
simultneamente la activacin de estas clulas. El NCF es una
protena de un peso molecular superior a 750.000 d. con capacidad
de atraer y activar al neutrfilo.
4. Heparina.
Al inhibir la coagulacin, favorece la llegada al foco inflamatorio
desde la sangre de molculas y clulas. (Bordes, et.al., 2000)
Mediadores sintetizados de novo
1. PGE2
Es la prostaglandina ms importante en el proceso inflamatorio.
Produce vasodilatacin y dolor. En coordinacin con el factor C5a y
LTB4 aumenta la permeabilidad vascular. El efecto antiinflamatorio
de la aspirina se debe a que al bloquear la va de la ciclo-oxigenasa
impide la formacin de esta prostaglandina.
2. LTB4.
Es un factor quimiotctico para eosinfilos, neutrfilos, mastocitos
y macrfagos.
3. Factor activador de plaquetas (PAF: Platelets Activating Factor).
Este factor tiene varias propiedades. Activa las plaquetas
determinando su agregacin, con la liberacin de mediadores por
parte de estos cuerpos e inicio de los procesos de coagulacin.
Produce adems, vasodilatacin y aumento de la permeabilidad
vascular. Es, por otra parte, un potente factor quimiotctico y
activador de neutrfilos. (Bordes, et.al., 2000)
15
c. Llegada de molculas y clulas inmunes al foco inflamatorio
Desde el punto de vista cronolgico, los mediadores de la inflamacin

van a producir bsicamente dos efectos. En una primera fase,
alteraciones vasculares que facilitan el trasvase de molculas desde la
sangre al foco inflamatorio, as como la produccin de edema. En una
segunda fase, ms tarda, las propias alteraciones vasculares, as como
la liberacin en el foco de factores quimiotcticos, determinan la
llegada de clulas inmunes procedentes de la sangre y de los tejidos
circundantes (Bordes, et.al., 2000).
d. Regulacin de la respuesta inflamatoria
Como la mayor parte de las respuestas inmunes, el fenmeno

inflamatorio se encuentra estrechamente regulado, evitando, as una
respuesta exagerada o perjudicial. Algunos de los mediadores que
producen activacin, al variar su concentracin o actuar sobre distintos
receptores, van a producir inhibicin, consiguiendo, de esta forma, un
equilibrio o modulacin de la respuesta inflamatoria. Los siguientes
factores intervienen en esta regulacin: (Bordes, et.al., 2000)
1. Histamina.
Actuando sobre receptores H2, induce en el mastocito y
basfilo una inhibicin de la liberacin de mediadores, inhibe
la actividad del neutrfilo, inhibe la quimiotaxis y activa las
clulas T supresoras.
2. PGE.
Produce en el mastocito y basfilo una inhibicin de la
liberacin de mediadores y sobre los linfocitos una inhibicin
de la proliferacin y diferenciacin.
16
3. Agonistas autonmicos.
El mastocito y basfilo parecen presentar receptores y -
adrenrgicos y -colinrgicos que sugieren que la liberacin de
mediadores podra estar sometida a una regulacin autonmica.
La activacin del receptor -adrenrgico produce una
inhibicin, mientras que la activacin del -adrenrgico y -
colinrgico inducen la estimulacin
4. Heparina.
Inhibe la coagulacin y la activacin de los factores del
complemento.
5. Eosinfilo.
Esta clula, atrada por el ECF-A, acude al foco inflamatorio
donde libera una serie de enzimas que degradan determinados
mediadores potenciadores de la inflamacin. La histaminasa
acta sobre la histamina, la arilsulfatasa sobre los leucotrienos
y la fosfolipasa sobre el PAF. (Bordes, et.al., 2000)
e. Reparacin
Cuando las causas de la agresin han desaparecido o han sido

eliminadas por la propia respuesta inflamatoria, se inician los procesos
de reparacin. Estos procesos integran la llegada a la zona de
fibroblastos que van a proliferar y sintetizar colgeno, proliferacin de
clulas epiteliales y proliferacin de vasos dentro de la herida.
No se conocen bien los mediadores responsables de estos fenmenos,
parece ser que la IL-1 es la responsable de la activacin de los
fibroblastos. (Bordes, et.al., 2000)
17
3.7.Hematomas
Las agresiones que puede sufrir nuestro cuerpo son variadsimas, pero
muchas de ellas pueden encuadrarse dentro de la siguiente descripcin de carcter
general: un agente externo que acta de una manera brusca sobre una zona
determinada del cuerpo, logrando superar la resistencia de los tejidos sobre los que
acta. Tras la actuacin de dicho agente, queda un dao en nuestro cuerpo; a eso lo
llamamos traumatismo. As pues, los traumatismos no son los accidentes, los golpes
sino el efecto producido por un agente externo que acta de una manera brusca
sobre una zona determinada del cuerpo logrando superar la resistencia de los tejidos
sobre los que acta (Garca, 2000).
Los traumatismos se clasifican en funcin de la naturaleza del agente que los

produce. As hablamos de traumatismos mecnicos cuando el agente causal es una
energa mecnica; cuando el agente es una sustancia que reacciona con nuestros
tejidos, hablamos de traumatismos qumicos, y cuando se trata de algn otro tipo de
energa entonces nos referimos al traumatismo como producido por agentes fsicos
(Garca, 2000).
Se puede hablar de traumatismos mecnicos cerrados y traumatismos

mecnicos abiertos. Un traumatismo mecnico cerrado es el efecto producido por
una fuerza que acta desde el exterior, de una manera brusca, sobre una zona
determinada del cuerpo, logrando superar la resistencia de los tejidos sobre los que
acta, pero respetando la continuidad del epitelio de revestimiento. Esto se puede
denominar contusin (Garca, 2000).
Las contusiones de primer grado suelen ser lesiones muy localizadas, y se

caracterizan por presentar un dao mnimo, concretado principalmente en la rotura
de vasos sanguneos de muy pequeo calibre o capilares. Estas roturas se traducen
en manchas en la piel. En unos casos vemos un punteado hemorrgico lo que se
conoce como petequias. En otros casos, esas manchas son tan numerosas que
forman un continuo, una mancha de cierto tamao, pero siempre plana y se
18
denominan equimosis o sugilaciones (lo que en lenguaje coloquial llamamos

moretones o cardenales (Garca, 2000).
Reservamos la calificacin de segundo grado para aquellas contusiones en

las que, debido a la rotura de vasos de mayor calibre, se produce un acmulo
importante de lquido ocupando un espacio o incrementando el volumen de la zona.
Cuando la rotura afecta a vasos sanguneos se produce un acmulo de sangre
extravasada, lo que recibe el nombre de hematoma. Dependiendo de la naturaleza
del tejido en que acontece, la sangre puede disecar un nuevo espacio, formando una
especie de cisterna o coleccin lquida, y lo llamamos hematoma circunscrito
(Garca, 2000).
En tejidos ms laxos la sangre difunde por el espacio intersticial sin ocupar

un espacio propio; en estos casos hablamos de hematomas difusos. Posteriormente
la sangre se degradar y terminar por reabsorberse, no quedando rastro del
hematoma. Sin embargo, en algunos casos se produce una reaccin fibrosa
encaminada a aislar el hematoma, ya que la sangre fuera de los vasos resulta
irritante para los tejidos (Garca, 2000).
De esta manera se forma una envoltura conectiva que delimita al hematoma

e impide su reabsorcin; hablamos entonces de un hematoma encapsulado.
Transcurrido un cierto tiempo la fibrina se desnaturaliza, pierde su polimerizacin y
nos encontramos con una cpsula conectiva englobando un lquido y se habla
entonces de un hematoma enquistado. Estos hematomas, en algunas circunstancias
pueden experimentar el depsito de sales clcicas y adquieren consistencia ptrea:
hematoma calcificado (Garca, 2000)
A medida que sanan los moretones (contusiones), generalmente en 2 a 4

semanas, frecuentemente cambian de color, entre ellos negro violceo, azul rojizo o
verde amarillento. Algunas veces la zona del moretn se extiende hacia abajo en
direccin de la gravedad. Por lo general, un moretn en una pierna tardar ms
tiempo en sanar que uno en la cara o los brazos (Blahd, 2011).
19
4. Justificacin
La pia es una fruta con un alto valor nutricional presentando tambin utilidad en el
mbito de la medicina natural especficamente por sus propiedades digestivas, posee una
enzima llamada bromelina que es una enzima proteoltica y cuando es ingerida ayuda a la
disolucin de las protenas de una comida en el tracto gastrointestinal. Teniendo
conocimiento de estas aplicaciones se quiere comprobar si la enzima bromelina tiene accin
tpica ayudando a la disgregacin de hematomas y disminucin de la inflamacin
proveniente de una lesin en pacientes que realizan deporte para contribuir al inicio de un
estudio clnico sobre las propiedades de esta enzima. Por este motivo la presente
investigacin ser un estudio fase I.
Para la comprobacin de la accin de la bromelina en la disgregacin de hematomas

y disminucin de la inflamacin inicialmente se debe extraer la enzima de la pia utilizando
la parte de desecho del cultivo de la misma y darle as un uso teraputico considerando la
presencia de la enzima en una concentracin elevada. Se deber comprobar la accin
proteoltica del extracto por medicin de la precipitacin de la casena que es una protna
presente en la leche. Posteriormente se realizar la fabricacin de un preparado
farmacutico conteniendo el extracto de bromelina que tenga las propiedades de
penetrabilidad necesarias para poder tener el efecto esperado. El preparado se deber
aplicar a la muestra seleccionada y se analizar descriptivamente por medio de un
cuestionario que ser contestado por los participantes del estudio para comprobar la accin
proteoltica de la bromelina en la disgregacin de hematomas y disminucin de la
inflamacin.
20
5. Objetivos
5.1.Objetivo General
5.1.1. Comprobar la efectividad de un producto farmacutico elaborado a base de
bromelina de disgregar los hematomas y disminuir la inflamacin
5.2.Objetivos Especficos
5.2.1. Obtener bromelina del tallo de la pia por medio de un mtodo de extraccin
5.2.2. Comprobar la accin proteoltica de la enzima bromelina mediante la
disgregacin de la casena y establecer en base a la concentracin de la
enzima su actividad proteoltica.
5.2.3. Disear un producto farmacutico de aplicacin tpica que contenga el
extracto de bromelina.
5.2.4. Realizar pruebas microbiolgicas y fsicas del producto elaborado
5.2.5. Determinar la estabilidad y actividad enzimtica de la forma farmacutica
mediante pruebas de estabilidad acelerada durante 3 meses.
5.2.6. Evaluar la accin del preparado farmacutico en la disgregacin de
hematomas e inflamacin.
21
6. Hiptesis
La enzima bromelina presente en un preparado farmacutico tiene la capacidad de disgregar

los hematomas y disminuir la inflamacin.
22
7. Materiales y Mtodos
a. Universo y Muestra
Universo: Personas que presenten hematomas
Muestra: 13 personas que presentan hematomas
b. Materiales
1. Extraccin de Bromelina
Materia prima: Pia obtenida de Finca Las Rosas, Santa Elena Barillas, Villa Canales.
Reactivos
Etanol
Cristalera
1 beaker de 250mL
2 beaker de 1000mL
2 cpsulas de porcelana
1 probeta de 1000mL
Equipo
Extractor de jugos
Centrifugadora
Horno
2. Preparacin de Gel con extracto de Bromelina

Componentes
Carbopol
Trietanolamina
Agua
Bromelina Comercial
Propilparaben
23
Cristalera
1 beaker de 1000ml
2 beaker de 250ml
2 beaker de 100ml
2 varillas de agitacin
1 probeta de 500ml
1 probeta de 10ml
2 esptulas
1 tamizador
Equipo
Balanza
Agitador Universal
Estufa
3. Determinacin Enzimtica del Gel con extracto de bromelina
Reactivos
Fosfato dibsico de sodio
Fosfato monobsico de sodio
Bromelina Comercial
Leche en polvo
Cristalera
1 beaker de 600ml
2 beaker de 250mL
8 beaker de 100ml
2 pipetas volumtricas de 10mL
2 Quitasato
2 varillas de agitacin
2 esptulas
24
Equipo
Termmetros de mercurio
Bomba de Vaco
Embudo Buchner
Estufa
Papel filtro
c. Mtodos
1. Extraccin Bromelina
Moler los trozos del tallo hasta obtener el jugo
Filtrar el jugo de pia obtenido
Medir el volumen de jugo con una probeta
Aadir etanol al 95% al jugo de pia 1.5 veces ms del volumen del jugo.
Almacenar en frasco plstico por 7 das
Despues de 7 das, centrifugar por 20 minutos a 4500rpm
Eliminar sobrenadante y obtener el precipitado
Pesar una capsula de porcelana y adicionar la muestra de concentrado de
bromelina
Poner a secar las muestras a 40C por 48 horas
Pesar las muestras secas
Calcular porcentaje de rendimiento
25
2. Gel a base de Bromelina
2.1. Frmula Cuali-Cuantitativa
Componente Porcentaje Funcin

Carbopol 2.5% Gelificante
Agua 75% Vehculo
Trietanolamina 1% Ajustador de pH
Propilparaben 0.9% Preservante
Bromelina 16.7% Principio activo
Solucin de cido ctrico 4% Ajustador de pH
al 4%
2.2. Procedimiento de manufactura
Al agua destilada con la

ayuda de un tamiz agregar el
Pesar todos los componentes Calentar el agua destilada
carbopol en pequeas
de la formulacin hasta ebullicin
porciones e ir agitando hasta
formar el gel
Un a vez formado el gel

agregar la trietanolamina y
Agregar la Bromelina Agregar el preservante
verificar que el pH del gel sea
7
Adicionar la solucin de cido

ctrico verificar que el pH de Envasar
la formulacin este en 5
26
3. Pruebas microbiolgicas
Como parte del control de calidad del gel se realiz una prueba microbiolgica ya
que segn el RTC de Productos farmacuticos. Medicamentos para uso humano.
Verificacion de la calidad para Cremas, Ungentos, Pastas y
Geles (tpicos) se requiere un recuento microbiolgico por lo que una muestra fue
enviada al Laboratorio de Anlisis Fisicoqumicos y Microbiolgicos-LAFYM-
para su anlisis.
4. Pruebas de Actividad Enzimtica del Gel con extracto de Bromelina

Determinacin de la actividad enzimtica del gel con extracto de bromelina
Pesar 1g de gel.
Agregar 10 ml de solucin buffer de fosfatos pH 7
Agitar la solucin;
Calentar a 40C;
Medir 10 g de leche;
En un baln de 100 ml disolver los 10 g de leche;
Agregar 10mL de leche en un beaker;
Calentar hasta 40C;
Encender el horno a 100C;
Pesar un papel filtro para filtro buchner;
Colocar el papel filtro en el filtro y armar el equipo de filtracin;
Mezclar la leche caliente y la solucin de bromelina con el-buffer;
Filtrar la solucin despus de 1 minuto;
Retirar el papel filtro con el material;
Introducirlo en el horno, a 140C;
Pesar el papel filtro.
Calcular la actividad enzimtica del gel (Alvarado, 2012)
27
5. Ensayo Clnico Fase 1
Criterios de Inclusin:
Mayor de 15 aos
Presentar hematomas frecuentemente
De acuerdo con consentimiento informado (Ver Anexo No.1)
Evaluacin descriptiva: Cuestionario (Ver Anexo No. 2)
Anlisis Estadstico
1. Extraccin de la enzima bromelina

Proceso Producto
2. ProductoEvaluacin de accin proteoltica (Cuantificacin) Unidades
Enzimticas Por conveniencia 10 determinaciones y analizar descriptivamente por
medio de estadstica descriptiva (promedio, desviacin estndar, mediana y rango).
3. Formulacin y elaboracin del producto farmacutico: Ensayo y error.
4. Evaluacin de la calidad del producto Parmetros que debe cumplir como
penetrabilidad en piel y una prueba microbiolgica del gel.
5. Estabilidad Determinacin de actividad enzimtica por duplicado cada 15 das
por 90 das. Grfica de dispersin y descripcin de los resultados.
6. Evaluacin clnica: Ensayo clnico Fase 1. Por conveniencia 13 personas que
cumplan con los requisitos o criterios de inclusin. Aplicar el producto y evaluar
mediante estadstica descriptiva las respuestas (Cuestionario o Ficha).
28
8. Resultados
La investigacin se compuso de varias fases; la extraccin de la enzima a partir de los tallos

de pia, la medicin de la actividad enzimtica de la misma, la preparacin del gel con
extracto comercial de bromelina y finalmente se realiz el estudio de estabilidad para
observar el comportamiento de la enzima. Se estableci la ausencia de microorganismos
patgenos y contaminantes del gel para garantizar un producto farmacutico seguro
microbiolgicamente y posteriormente se realiz el ensayo clnico fase I con pacientes que
presentan hematomas.
A continuacin se presentan los resultados de la investigacin. La tabla No. 1 se indica el

porcentaje de rendimiento de la extraccin de la enzima bromelina a partir de tallos de pia
y la actividad enzimtica.
Tabla No. 1: Porcentaje de rendimiento de extraccin de bromelina
Cantidad de Mililitros de Cantidad de Porcentaje de Actividad

tallos de pia extracto bromelina rendimiento enzimtica
utilizados obtenidos de los obtenido de la de la
tallos de pia extraccin bromelina
30 600 3.5640g 0.594% 976.4558
GDU*
*GDU: Unidades de disolucin de gelatina
Fuente: Datos obtenidos experimentalmente
29
Se determin la actividad enzimtica del gel con extracto de bromelina como se observa en
la tabla no. 2, se presenta por conveniencia 10 determinaciones y se analiz por medio de
estadstica descriptiva obteniendo desviacin estndar, promedio, mediana y rango.
Tabla No. 2: Actividad enzimtica del gel con extracto de bromelina
Actividad
No. Enzimtica GDU
1 1919.29
2 1909.62
3 1928.56
4 1942.40
5 1984.65
6 1916.90
7 1917.83
8 1987.57
9 1972.99
10 1945.30
Desviacin
Estndar 29.48
Promedio 1942.51
Mediana 1935.48
Rango 77.95
Se realiz el estudio de estabilidad del gel con extracto de bromelina a diferentes

temperaturas resultados que se observan en la tabla No.3, en la primera columna se
describen las temperaturas a las que se realiz el estudio, en la segunda columna se observa
el tiempo al cual se realiz la medicin de la actividad enzimtica, en la tercera columna se
encuentra el pH segn el tiempo y posteriormente se observa la actividad enzimtica en la
cuarta columna, el color fue un elemento determinante para el estudio ya que se observ
que entre mayor es la temperatura mayor es el cambio de coloracin del gel y mayor es la
disminucin de la actividad enzimtica. Es decir que la enzima no es estable a altas
temperaturas, la coloracin se describe en la quinta columna.
30
Tabla No. 3: Actividad Enzimtica del gel con extracto de Bromelina
Temperatura Tiempo pH Actividad Color

Enzimtica por
gramo de gel *GDU
0 7 1942.51 Beige
25 15 das 7 1152.74 Caf
35 15 das 7 642.81 Caf oscuro
35 con cido 15 das 5 861.36 Caf
4 15 das 7 2026.9 Beige
En la tabla No. 4 se puede observar la actividad enzimtica del estudio a temperatura de

4C teniendo una duracin de 90 das, se midi cada 15 das y se observ el
comportamiento de la enzima, el color del gel y el pH. En la grfica de dispersin de datos
se establece la relacin entre el tiempo y la actividad enzimtica del gel con dos
repeticiones de la misma.
Tabla No. 4: Actividad Enzimtica del gel con extracto de Bromelina a 4C
Tiempo pH Actividad Enzimtica por gramo de gel Color

0 das 7 1942.51 Beige
15 das 7 2026.90 2042.14 Beige
30 das 5 2133.99 2152.93 Beige
45 das 5 2768.50 2604.57 Beige
60 das 5 3087.55 3133.24 Beige
90 das 5 3356.20 3324.77 Beige
31
Grfica No. 1: Dispersin de datos de Actividad Enzimtica
Grfica de Dispersin
4000
3500
Actividad Enzimtica
3000
2500
2000
Primer Rplica
1500
Segunda Rplica
1000
500
0
0 15 30 45 60 75 90
Tiempo
Fuente: Datos obtenidos tabla No. 4
En la tabla que se presenta a continuacin se observan los resultados de los anlisis

microbiolgicos del gel que fue utilizado para la determinacin de la accin de la
enzima en la disgregacin de hematomas segn el RTC de Productos
farmacuticos. Medicamentos para uso humano. Verificacin de la calidad para
Cremas, Ungentos, Pastas y Geles (tpicos) se requiere un recuento
microbiolgico este recuento fue realizado por el Laboratorio de Anlisis
Fisicoqumicos y Microbiolgicos-LAFYM- en donde certifican la ausencia de
microorganismos patgenos especificados en la USP 34 para productos no estriles
de uso tpico que son Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y el
recuento aerbico total que debe ser de 100 o menor (Anexo No. 5).
32
Tabla No. 5: Resultados de Anlisis Microbiolgico
Anlisis Resultado Dimensional USP,34

Recuento Aerbico <10UFC/g UFC/g 1000 UFC/g
Total
Recuento de Mohos < 10UFC /g UFC/g 100 UFC/g
y Levaduras
Staphylococcus Ausencia Sin dimensionales Ausencia
aureus
Pseudomonas Ausencia Sin dimensionales Ausencia
aeruginosa
UFC/g: Unidades Formadoras de Colonia por gramo.
Fuente: Laboratorio de Anlisis Fisicoqumicos y Microbiolgicos LAFYM-.
A continuacin se presentan los resultados del tiempo en el que se reduce el hematoma

utilizando el gel con extracto de bromelina, se asign un nmero a cada paciente tal como
se observa en la tabla No. 6. Se muestra el tiempo en das en el que desaparece el
hematoma utilizando el gel con extracto de bromelina. Tambin se despliega la etiologa
del hematoma para cada paciente.
Tabla No. 6: Porcentaje del tiempo de desaparicin de hematomas
Paciente Tiempo de desaparicin Etiologa del

No. del hematoma aplicando hematoma
gel
1 7 das Desconocida
2 14 das Venopuncin
3 7 das Golpe contra objeto
4 7 das Picadura de mosquito
5 5 das Golpe por prctica de
Karate
Futbol
artes marciales mixtas
karate
11 7 das Golpe por natacin
12 7 das Desconocida
33
En la tabla No. 7 se muestra los resultados de las respuestas del cuestionario realizado a los
pacientes del estudio clnico, en la primera columna se indica la pregunta realizada y en las
siguientes dos se presenta la frecuencia de las respuestas de los pacientes.
Tabla No.7: Evaluacin del gel como antiinflamatorio
Supuesto Si No
(Frecuencia) (Frecuencia)
Utiliza productos para la 3 10
disgregacin de hematomas
Toma medicamento para la 0 13
desinflamacin del rea del
hematoma
Se inflama el rea afectada 7 6
El gel ayud a la 10 3
desinflamacin del rea
afectada
Fuente: Datos experimentales
34
9. Discusin de Resultados
La determinacin de la capacidad de la enzima bromelina para la disgregacin de

hematomas y disminucin de la inflamacin se determin en diferentes fases en un estudio
de tipo exploratorio.
El primer paso que se realiz fue la extraccin de la enzima de la pia donde se obtuvo
3.5640g de Bromelina con un porcentaje de rendimiento de 0.594% y una actividad
enzimtica del extracto de 976.45 GDU (Unidades de Disolucin de la Gelatina). El
porcentaje de rendimiento y la actividad enzimtica del extracto no dieron los resultados
esperados en la propuesta inicial de este estudio. Por lo que no fue posible la utilizacin de
la bromelina obtenida experimentalmente y se utiliz bromelina obtenida comercialmente.
Debido a que para alcanzar los 5 gramos de extracto por unidad de gel (13 para fines de
estudio) se necesita un promedio de ms de 4,000 tallos de pia, pudiendo esto estar
relacionado con el mtodo de extraccin empleado ya que se utiliz etanol al 95%.
Tambin el rendimiento se vi influido por el tamao del tallo utilizado ya sea de una
planta nueva o una adulta.
El preparado farmacutico de aplicacin tpica que se utiliz fue un gel a base de carbopol
y agua. El cual presentaba una coloracin beige y pH 5. El bajo pH no permiti que se
pudiera conservar el gel, porque, al agregar la bromelina no se obtiene un preparado
homogneo, puesto que la enzima se activa rpidamente. De esa cuenta, era necesario
elevar el pH a 7, por lo que se agreg trietanolamina antes de la bromelina. Cuando el gel
contena la enzima bromelina a un pH 7; se agreg una solucin de cido ctrico al 4%
hasta llevar el gel a pH 5 para activar lentamente la enzima y evitar la separacin en el
preparado.
Para llevar a cabo la medicin de la actividad enzimtica del gel se determin el peso de
casena de la leche que precipit debido a que la bromelina posee accin proteoltica, es
decir, capaz de romper las molculas de las protenas dejando libres los aminocidos que
las forman (Ver Antecedentes pgina 4). En la tabla No. 2 se observan la determinacin
inicial de la actividad enzimtica, se realizaron 10 determinaciones del gel obteniendo un
promedio de 1942.51 GDU, con una desviacin estndar de 29.48 esto denota la dispersin
35
de los datos respecto del promedio obtenido. La mediana fue de 1935.48 GDU y la
diferencia entre el dato mayor y menor fue de 77.95 unidades.
Se realizaron pruebas de estabilidad para establecer el comportamiento de la enzima en

diferentes condiciones ya que las enzimas son molculas que pueden modificar sus
propiedades segn las condiciones a las que son sometidas como pH y temperatura. Para
realizar esta evaluacin se someti el gel a temperaturas de 35C, 25C y 4C, evaluando el
pH y la actividad enzimtica para cada temperatura, resultados que se presentan en la tabla
No. 3. La actividad enzimtica inicial del gel fue de 1964.25 GDU, luego de 15 das la
actividad enzimtica a 35C fue de 642.81 GDU, a 25C fue de 1152.74 GDU mientras
que a 4C es de 2016.9 GDU, se observ mayor actividad en el gel almacenado a 4C.
Durante los 15 primeros das de la evaluacin de la estabilidad del gel se observ que la
enzima sufri degradacin ya que no solamente se observaron cambios en la actividad
enzimtica si no tambin se presentaron cambios fsicos como la coloracin, el gel a 35C y
25C cambiaron su coloracin de beige a caf y caf oscuro respectivamente; lo cual fue un
factor determinante para el estudio, cuyo objetivo era establecer las condiciones ptimas a
las que el gel podra conservarse y as ser utilizado por los pacientes en la evaluacin
clnica. Debido a la degradacin de la enzima se descartaron las pruebas de estabilidad
acelerada a temperaturas de 35C y 25C por 3 meses y se continuaron las pruebas de
actividad enzimtica y pH a 4C.
Durante 3 meses se realizaron pruebas al gel almacenado a 4C estableciendo la actividad

enzimtica y pH a cada 15 das realizando las mediciones por duplicado. En la tabla No. 4
se puede observar que el pH inicial era de 7 a los 15 das no present cambio; a los 30 das
se observ que el pH disminuy a 5 y se mantuvo a los 45 y 60 das. El pH al que el gel
present mayor estabilidad fue en 5 ya que se present homogeneidad sin cambios en la
coloracin. En cuanto a la actividad enzimtica aument con el paso del tiempo observando
la influencia del pH en la misma ya que entre ms acido se encontr el gel mayor fue su
actividad enzimtica. En la grfica No.1 se observa el cambio de la actividad enzimtica en
relacin con el tiempo del estudio de estabilidad del gel, se observa que a medida que
aumenta el tiempo aumenta la actividad enzimtica, en las mediciones a los das 0, 15 y 30
das se observa que los cambios no son mayores mientras que a los 45 y 60 das se puede
36
observar un cambio ms grande, a los 90 das la actividad enzimtica es muy cercana a la

de los 60 das.
En la tabla No.5 se presentan los resultados de los anlisis microbiolgicos aplicados al gel,
en donde se certifica que el preparado se encuentra libre de microorganismos patgenos y
contaminantes. Garantizando as un producto no contaminado y seguro
microbiolgicamente para ser utilizado en la evaluacin clnica.
En la evaluacin clnica del producto se realiz un estudio fase I para lo cual se

seleccionaron 13 personas que presentaban hematomas, debido a que constantemente
estaban expuestos a golpes ya sea por sus actividades como prcticas deportivas o por
fragilidad capilar. Se utiliz un instrumento para la medicin de la accin del gel, en la
tabla No. 6 se observa el tiempo en el que los pacientes mencionaron que desapareci el
hematoma y tambin la etiologa del mismo. Las 13 personas en el estudio indicaron que el
gel ayudo a disminuir el tiempo de disgregacin del hematoma ya que mencionaron que en
otras ocasiones se disgrega en mayor tiempo. Algunos de los pacientes manifestaron que el
hematoma no tuvo el proceso de coloracin que normalmente presenta, si no que fue ms
rpida su desaparicin. En algunos casos el paciente presentaba dos o ms hematomas de
tamao similar y se aplic el gel en uno de los dos, observando que al hematoma en el que
se aplic el gel se disgreg ms rpido en comparacin con el que no se utiliz el gel en el
anexo No. 3, en la imagen No. 5 se observa la comparacin de uno de los casos. El
preparado con extracto de bromelina ayuda a la disgregacin de hematomas ya que esta es
una enzima con accin antitrombtica y fibrinoltica es decir que ayuda en la desaparicin
de los depsitos de fibrina formados por una reaccin fibrosa encaminada a aislar el
hematoma. Uno de los pacientes del estudio present una reaccin adversa, pudindose
presentar por sensibilidad a uno de los componentes remanentes en el gel como por
ejemplo un solvente y se puede catalogar como un posible efecto secundario.
Se comprob que la enzima bromelina posee accin antiinflamatoria, posteriormente a la

aplicacin del gel se cuestion si el gel ayud o no en la disminucin de la inflamacin, en
la tabla No. 7 se observa que a 10 de 13 de las personas que utilizaron el gel les ayud a
disminuir la inflamacin y tambin manifestaron que al utilizar el gel disminua el dolor.
Era importante saber si utilizaban productos cuando apareca el hematoma para poder
37
establecer si el producto que utilizaban disminua el hematoma, 3 personas de 13

mencionaron que s utilizaban algn tipo de producto, dos utilizaban rnica y una utilizaba
crema relajante muscular, ninguno de los dos productos poseen algn tipo de accin
conocida para la disgregacin de hematomas.
38
10. Conclusiones
10.1. El gel con extracto de bromelina es eficaz en la disgregacin de hematomas.
10.2. El gel con extracto de bromelina disminuyo la inflamacin en un 77% de
pacientes.
10.3. La enzima bromelina posee actividad proteoltica al realizar la prueba
utilizando casena de leche.
10.4. El preparado farmacutico con enzima bromelina es estable a temperatura de
4C y pH de 5.
10.5. El gel con extracto de bromelina presenta una actividad enzimtica que
aumenta en relacin al tiempo a una temperatura de 4C.
39
11. Recomendaciones
11.1. Realizar estudios de estabilidad a largo plazo para determinar el tiempo en el
que el gel con extracto de bromelina conserva sus propiedades fsicas y
qumicas.
11.2. Emplear otro de extraccin para obtener un mayor porcentaje de rendimiento del
extracto de bromelina.
11.3. Incorporar el extracto de bromelina a otro tipo de preparado farmacutico
tpico para observar el comportamiento de la enzima.
11.4. Comprobar la accin de la enzima bromelina en la disminucin de la
inflamacin de origen distinto a la producida por golpes y hematomas.
40
12. Referencias
Allevato, M. (2007). Sistemas Teraputicos Transdermicos (Versin electrnica). Recuperado el

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julio de 2012 de: www.articulos.sld.cu/diabetes/files/2009/07/la-bromelina-de-la-pina-
nuevo-complemento-dietetico.pdf
Rodrguez, A., Trujillo, S. (2009). La piel como Va de administracin de frmacos formulados en

parches transdrmicos. Revista OFIL Vol. 19(1).Pp.23-29
43
13. Anexos
Anexo No.1 Cuestionario para evaluacin de la accin de la enzima bromelina
Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia
Escuela de Qumica Farmacutica
Tesis: Accin de Enzima Bromelina en disgregacin de hematomas y disminucin de
inflamacin
Cuestionario Previo a la Aplicacin de la crema
El cuestionario propuesto a continuacin ser utilizado para evaluar la accin de la crema

con el extracto de bromelina sobre la disgregacin de hematomas y disminucin de
inflamacin.
1. Ocupacin
2. Gnero (Masculino Femenino)
3. Edad
4. En cuanto tiempo desaparece el hematoma formado normalmente?

a. Menos de una semana
b. 1 semana
c. 2 semanas
d. 3 semanas
e. 1 mes
f. Ms de 1 mes
5. Usted aplica algn producto en el rea afectada Si, No? Cul o qu tipo de
producto utiliza si su respuesta fue afirmativa?
6. Toma algn medicamento para desinflamar el rea afectada o ayudar a que

desaparezca el hematoma?
44
7. Se inflama el rea en donde presenta el hematoma SI, NO?
Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia
Escuela de Qumica Farmacutica
Tesis: Accin de Enzima Bromelina en disgregacin de hematomas y disminucin de
inflamacin
Cuestionario Posterior a la Aplicacin de la crema

El cuestionario propuesto a continuacin ser utilizado para evaluar la accin de la crema
con el extracto de bromelina sobre la disgregacin de hematomas y disminucin de
inflamacin.
1. En cuanto tiempo desapareci el hematoma?

a. Menos de 1 semana
b. 1 semana
c. 2 semanas
d. 3 semanas
e. 1 mes
f. Ms de 1 mes
2. Sinti usted que la crema ayudo a la desaparicin del hematoma?
3. Usted cree que la crema ayuda a la disminucin de la inflamacin?

45
Anexo No.2 Consentimiento informado
Yo_________________________________ de _______aos de edad he sido informado

sobre los beneficios que podra suponer la utilizacin de la crema con extracto de bromelina
para cubrir los objetivos del proyecto de tesis titulado Accin de la enzima bromelina en la
disgregacin de hematomas y disminucin de la inflamacin.
He sido informado sobre los riesgos que puede ocasionar la utilizacin de la crema que
pueden ser irritacin o enrojecimiento en la piel.
Tomando ello en consideracin, OTORGO mi CONSENTIMIENTO a que esta aplicacin

tenga lugar para cubrir los objetivos especificados en el proyecto.
Guatemala Agosto de 2012
Firma del paciente

46
Anexo No. 3: Imgenes del producto y del proceso de extraccin
Imagen No. 1: Recoleccin de tallos de pia
Imagen No. 2: Jugo del tallo de pia obtenido

47
Imagen No. 3: Extraccin de bromelina
Imagen No. 4: Gel con extracto de bromelina

48
Imagen No. 5: Disgregacin de hematomas
Inicio 6 das despus

49
Anexo No. 4: Volante informativo del gel con extracto de bromelina.
BromeGel
Gel con extracto de

bromelina
BromeGel es un gel que contiene extracto de bromelina, enzima natural

de la pia, que por sus propiedades fibrinolticas ayuda a la reduccin de
hematomas
Ingredientes activos: Extracto de bromelina natural 16%

Mara Jos Chinchilla Reyes Uso: Disgregacin de hematomas
Qumica Farmacutica Indicaciones de uso: Aplicar en el rea afectada tres veces al
Telfono: 30299986 da hasta que desaparezca e hematoma
Precauciones: USO EXTERNO. Evitar contacto con los ojos.
Correo: Evitar la exposicin al sol de las reas en donde se aplic
mariajo903@hotmail.com BromeGel. Si presenta irritacin informe lo mas pronto posible.
Otra informacin: REFRIGERAR
50
Anexo No. 5
Anlisis Microbiolgico
51

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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA

Accin de la enzima bromelina en la disgregacin de hematomas y

Mara Jos Chinchilla Reyes

Guatemala, febrero de 2014

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA

Accin de la enzima bromelina en la disgregacin de hematomas y

Mara Jos Chinchilla Reyes

Para optar el ttulo de

Guatemala, febrero de 2014

A Dios y a la Virgen Mara por la bendicin

A La Licenciada Julia Garca y Aylin Santizo

A MI TIA LOURDES Y FER

3.3.Fisiologa de la piel ............................................................................. 7

Se realiz la extraccin de la enzima a partir de troncos de pia ya que es en donde la enzima se

Se realiz la preparacin de un gel al cual se le incorpor bromelina comercial obtenido un

Para establecer el comportamiento de la enzima con el tiempo se realiz un estudio de

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3.1 Caractersticas de la Pia

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Acido Aspartico Glicina

Figura No. 1: Estructura de la enzima Bromelina

Fuente: Pulido, 2007

Tabla No. 1 Propiedades fsicas de la bromelina

Origen Tallo de Pia

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3.4. Absorcin percutnea

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Tabla No.2: Capacidad de penetracin transdrmica.

Grado de penetracin Caractersticas

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El transporte pasivo de medicamentos a travs de la piel se efecta mediante

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3.6.1. Fases de la inflamacin

a. Liberacin de mediadores. Son molculas, la mayor parte de ellas, de

a. Liberacin de mediadores. El mastocito