PRACTICA NO 5

CARACTERIZACIN BIOQUMICA DE ENTEROBACTERIAS Y BACILOS

La familia de Enterobacteriacea est compuesta por bacilos Gram negativos de

tamao mediano, anaerobios facultativos, mviles o inmviles pero no
esporulados.

Las enterobacteriaceas crecen en medios artificiales, tienen necesidades

nutritivas simples, fermentan la glucosa con produccin de cido lctico y gas,
reducen los nitratos a nitritos y son oxidasas negativos. Las enterobacteriaceas
son organismos ubicuos de distribucin mundial, encontrndose en el suelo, el
agua, la vegetacin y formando parte de la flora bacteriana normal de casi
todos los animales incluido el ser humano.

Algunos miembros de esta familia se encuentran asociados a cuadros

disentricos mientras que otros pueden producir infecciones oportunistas. Las
infecciones pueden afectar a casi todas las localizaciones del cuerpo.

OBJETIVO

Proporcionar al estudiante cepas conocidas de Enterobacterias para lograr

identificacin del gnero y especie.

MATERIALES

De los caldos suministrados con diferentes cepas, realizar una siembra

por agotamiento en agar Mc Conkey, medio diferencial que nos separa
colonias fermentadoras de lactosa de las que no lo hacen. Incubar a
37oC.
Observar morfologa, tamao, aspecto y color de las colonias. Aquellas
que presenten color rosado habrn fermentado lactosa.
De las colonias aisladas, procedentes de agar Mc Conkey sembrar en
las siguientes pruebas bioqumicas:

TSI: Contiene glucosa 0.5-1% fenol, sacarosa y lactosa. Adems rojo de fenol,
que indica fermentacin y sulfato ferroso, para demostrar la produccin de H 2S.
La primera se hace con asa recta en profundidad y estra en superficie.

REACCIN
Fondo amarillo produccin de cido
Superficie inclinada alcalina- color rojo
Todo el medio cido
Burbujas
Ennegracimiento en el fondo
Medio alcalino coloracin roja
INTERPRETACIN
Fermentacin a glucosa (K/A)
Fermentacin de glucosa, lactosa (A/A)
Aergenos
Produccin de H2S
No fermentador de azcar (K/A)
Lisina decarboxilasa: La decarboxilasa es el proceso por el cual las bacterias
producen la enzima decarboxilasa y son capaces de atacar los aminocidos en
su grupo carboxilo (-COOH), dando una amina o una diamina y anhdrido
carbnico. Se siembra igual que en TSI.

Citrato de Simons: Contiene citrato como nica fuente de carbono y sales de

amonio como fuente de nitrgeno, no contiene aminocidos. Las bacterias que
pueden utilizar el citrato tambin extraen nitrgeno con la produccin de
amonio que alcaliniza el medio de cultivo. El indicador de pH es azul de
bromotimol. Se siembra solamente en la superficie.
Interpretacin: La prueba es positiva cuando se observa crecimiento de color
azul intenso. La prueba es negativa cuando no se observa crecimiento ni
cambio de color.

Urea de Christensen: Si la bacteria posee la enzima ureasa, hidroliza urea del

medio liberando amonio y CO2; el indicador utilizado es el rojo de fenol. Se
siembra en superficie con estra.

Movilidad: Se observa en el medio SIM por desplazamiento alrededor de la

lnea de inoculacin, realizada en profundidad y en el centro del agar.

Prueba de indol: Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa, son

capaces de hidrolizar y desaminar el triptfano con la produccin de indol,
cido pirvico y amonio. Despus de la incubacin a las 24 horas adiciones 0,1
mL de reactivo de Kovacs a los tubos con medio SIM , la presencia de indol se
destaca por la coloracin rojiza que se desarrolla en la superficie del tubo.

Reaccin del rojo de etilo: sembrar con el asa un tubo con caldo MRVP,
incubar por 24- 48 horas, pasado este tiempo adiciona 5 gotas de la solucin
rojo de metilo.
Algunas bacterias utilizan la glucosa con gran formacin de cido de forma que
el valor del pH del medio desciende a menos de 4.4. Otras bacterias producen
menos cido reduciendo en menor cantidad el pH del medio. Esta distincin
puede hacerse a travs del rojo de metilo que presenta color amarillo por
encima del pH 5.1 y color rojo cuando el pH desciende a 4.4.

Reaccin de Vogues Proscaver: Sembrar con el asa un tubo con caldo

MRVP, incubar por 24-48 horas, pasando este tiempo adicional 5 mL de la
solucin de sulfato de cobre. En caso positivo se presenta un viraje a rojo,
despus de algunos minutos.
A partir de la glucosa, numerosos microorganismos forman acetona-
acetilmetilcarbinol-2,3 butanodiol o diacetilo. La demostracin de estos
productos metablicos se lleva a cabo con los reactivos de OMEARA,
mejorado por Levine y Col. (1932) con sulfato de cobre o con el reactivo de
BARRIT .

REACCIONES BIOQUIMICAS DE ALGUNAS ENTEROBACTERIAS

PRUEBA MICROORGANISMOS A EVALUAR

E. coli Proteus Salmonella Klebsiella

vulgaris typhi pneumoniae
Gas + D - +

H2S - + + -

TSI A/A H/A K/A K/A

SIM Movilidad D + + +

Indol

H2S

MRVP Vogues - - - -
Proscaver

Rojo de
metilo + + + +

Citrato - D - +
Urea
- + - +
Lisina
+ - + +

+: Ms del 90% positivos

-: Ms del 90% negativos
D: 11 al 89% positivos/diferentes reacciones en distintas cepas de una especie.

CARACTERIZACIN BIOQUMICA DE Bacillus cereus

INTRODUCCIN

La bsqueda de bacterias capaces de producir toxiinfecciones alimentarias es

de especial importancia en la microbiologa de alimentos. El incremento de
estas infecciones ha llevado a que la presencia de agentes determine cada vez
ms en forma rutinaria y completa. El Bacillus cereus es un bacilo esporulado y
aerbico que normalmente se encuentra presente en el suelo, polvo, agua; los
alimentos en los cuales se puede encontrar este bacilo, pueden ser platos de
cereales a partir de maz o almidn de maz, pur de papas, verduras, carne
picada, embutido de hgado, platos de arroz al estilo oriental, sopas etc. El
nmero mnimo de organismos necesarios para causar los sntomas, es de
unos 107 UFC/g excepto en el caso de nios pequeos en los que se produce
enfermedad con solo 105 UFC/g.

OBJETIVO:

Se trata de proporcionar al estudiante los elementos necesario para hacer el

diagnstico bacteriolgico de Bacillus cereus, mediante la identificacin del
mismo.

MATERIALES
1 caja de petri con agar selectivo para Bacillus cereus
Tubos de ensayo con medios. Agar leche, agar almidn, agar gelatina,
caldo nutritivo, caldo glucosa, caldo arabinosa, caldo xilosa.
Solucin de lugol
Reactivo de Griess
Cloruro de mercurio al 15%

METODOS

De la caja de petri que contiene el cultivo bacteriano siembre con un asa una
muestra de cada uno de los tubos que contienen los siguientes medios:

Agar leche, agar almidn, agar gelatina, caldo nitrato, caldo glucosa,
caldo arabinosa, caldo xilosa.
Incube a 37oC por 24 horas
Al da siguiente lea las pruebas bioqumicas de la siguiente manera:

AGAR ALMIDN: Cubrir la superficie del tubo con solucin de lugol; si se ha

producido la hidrlisis de almidn, se tie de azul. La reas hidrolizadas,
aparecen como zonas claras.

AGAR GELATINA: Aada al tubo 5 gotas de cloruro de mercurio al 15%,

elimnelo despus de 5 minutos, lavae el tubo con agua corriente. La reaccin
es positiva cuando una zona clara rodea la estra.

AGAR LECHE: Observe una zona clara que aparece alrededor del crecimiento
que indica degradacin de la casena.
CALDO GLUCOSA, ARABINOSA Y XILOSA: Observe si hubo o no
fermentacin indicada por un color rosado en el medio de cultivo y si hubo o no
produccin de gas, indicada por la aparicin de burbujas en el caldo.

Glucosa + sin gas

Arabinosa
Xilosa

CALDO NITRTO: Aada al tubo unos miligramos de reactivo de Griess y

observe el color que presenta. El color rojo representa prueba positiva de
reduccin de nitratos. Si no hay cambios de color representa una prueba
negativa.