El dimetil sulfxido (dimetilsulfxido, DMSO, CH3SOCH3)

Es un lquido orgnico sin color que contiene sulfuro, usado como disolvente orgnico industrial
a partir de 1940, como criopreservante a partir de 1961 y como un medicamento (reduce el dolor
y la inflamacin). Por su propiedad de atravesar rpidamente la epidermis y las membranas
celulares el DMSO sirve tambin como acarreador de drogas o venenos.
Descubierto por Saytzeff en 1866, el dimetilsulfxido se obtiene como subproducto durante el
procesamiento de pulpa de madera para la fabricacin de papel.
Es un solvente aprtico y altamente polar. Por ello, es miscible tanto con el agua como con
solventes orgnicos como alcoholes, cetonas etc. Puede formar complejos en sistemas
biolgicos.
Bsicamente, la sustancia es un simple subproducto del proceso de elaborar papel. Se puede
derivar de la lignina, la sustancia cemento de los rboles como el roble, y tambin puede
sintetizarse del carbn de piedra, petrleo u otras sustancias orgnicas.
Lo que sorprendi por igual a cientficos y qumicos era la tremenda capacidad del lquido para
disolver sustancias. La capacidad nica del DMSO para penetrar los tejidos vivientes sin
ocasionar daos significativos se relaciona con su estructura relativamente compacta y
naturaleza polar as como tambin a su capacidad de aceptar enlaces de hidrgeno. Esta
combinacin de propiedades le permite asociarse con el agua, protenas, carbohidratos, cidos
nucleicos, sustancias inicas y otros constituyentes de los sistemas vivientes. Para entender las
posibles funciones del DMSO en los sistemas biolgicos, de importancia primordial es su
capacidad de remplazar algunas de las molculas de agua asociadas con los constituyentes
celulares. Pero lo que realmente caus un rumor cientfico fue su efecto secante. Puesto que
la humedad generalmente tiende a fomentar infecciones, las propiedades desecantes de un
agente teraputico lo hacen muy valioso para el tratamiento de las quemaduras. Las pruebas de
laboratorio probaron que el DMSO atravesaba fcilmente la piel y las membranas mucosas con
la ventaja aadida de ser capaz de transportar junto con l otras sustancias durante su paso. Por
ejemplo, si un anestsico local o penicilina se disuelven en DMSO, pueden ser transportadas a
travs de la piel a todos los rganos del cuerpo sin usar una aguja! El DMSO se utiliz primero
como agente farmacolgico en 1962 y gan fama como producto que poda aliviar el dolor y la
inflamacin en muchas condiciones, incluyendo aquellos que haban permanecido intratables por
todos los otros mtodos. Los estudios iniciales haban revelado que poda aliviar el dolor, reducir
la inflamacin, impedir el crecimiento bacteriano, suavizar el tejido cicatrizado, mejorar el
suministro sanguneo, era un excelente relajante muscular, poda actuar como diurtico y poda
tambin mejorar la efectividad de otros agentes farmacolgicos. Adicionalmente, el dolor de
esguinces, torceduras, quemaduras, artritis, an las de huesos fracturados, eran eliminados por
completo. El DMSO mata virus y hongos y trabaja maravillosamente contra las cataratas,
lesiones deportivas, escleroderma, miastenia gravis y tuberculosis. En personas con el sndrome
de Down, el retardo mental se ha disminuido considerablemente. Se ha prescrito popularmente
por los veterinarios para las condiciones artrticas y lesiones en los animales.
Resumen de sus usos mdicos generales
El DMSO tiene al menos cuarenta propiedades teraputicas importantes que actan
benficamente en el proceso de curar los traumas al cuerpo y al cerebro. Aqu estn las diecisis
ms comunes:
1. Bloquea la transferencia de mensajes de dolor, desde el sitio del dao al cerebro,
interrumpiendo la conduccin en las pequeas fibras nerviosas no-mielinadas. As que es uno
de los analgsicos tpicos ms fino conocido al hombre.
2. Es un potente anti-inflamatorio y maravilloso como un remedio anti-artrtico.
3. Puesto que es bacteriosttico, fungisttico y virosttico, inhibe el crecimiento de
microrganismos patognicos.
4. Transporta numerosos agentes farmacuticos a travs de las membranas del cuerpo,
administrndolos tpicamente sin recurrir a inyecciones.
5. Reduce la incidencia de trombos plaquetarios en los vasos sanguneos previniendo o
reduciendo as la formacin de cogulos sanguneos.
6. Tiene un efecto especfico sobre la contractilidad cardiaca guardando el calcio de la absorcin
de la fibra del msculo, reduciendo as la carga de trabajo del corazn.
7. Acta como un tranquilizante, produciendo sedacin del cerebro, aun cuando se frote
simplemente en la piel.
8. Aumenta las acciones de los agentes anti-bacterianos y anti-fngicos cuando se combina con
ellos para aplicacin interna o externa.
9. Es un vasodilatador, probablemente relacionado a la liberacin de histamina en las clulas y
a la inhibicin de la prostaglandina.
10. Detiene la liberacin de colinesterasa, una enzima que causa el rompimiento de la
acetilcolina, la cual es una de las formas del complejo de vitamina B necesaria para la funcin
saludable de las neuronas.
11. Tiende a suavizar el colgeno como medio de prevenir o reducir las cicatrices y queloides
por sus efectos peculiares de enlaces cruzados.
12. Elimina los radicales hidroxilos libres de manera que reduce el deterioro de los tejidos en el
envejecimiento.
13. Estimula varios tipos de inmunidad, especialmente la de las clulas eliminadoras de la sangre
que se derivan de los linfocitos.
14. Es un diurtico potente, particularmente cuando se administra intravenosamente.
15. Promueve la formacin de interfern en el organismo como un medio expreso de impulsar la
respuesta inmunolgica.
16. Estimula la curacin de heridas de todo tipo, tanto externas como internas.
Tiene el rango ms amplio y el mayor nmero de acciones teraputicas jams demostradas para
un solo producto qumico derivado de la naturaleza. Tambin tiene la habilidad de aumentarse
acumulativamente en sus efectos. Ya que ataca la enfermedad en s misma mas bien que solo
los sntomas, se ha observado que se necesita mucho menos cantidad de DMSO para obtener
resultados con el paso del tiempo. Esta es una cualidad nica y diferente de este producto, ya
que la mayora de otras drogas generalmente requieren dosis mayores en incremento con el
tiempo para mantener los niveles teraputicos. No hay absolutamente ninguna duda de que ha
probado tener propiedades biolgicas interesantes y valiosas.
Usos adicionales del DMSO
De todas las reas en las cuales se puede emplear el DMSO, el pblico parece estar ms
interesado en aplicarlo para varias formas de artritis, sin embargo, los profesionales informados
saben que el producto tiene un vasto campo de otras aplicaciones. En efecto, en la literatura
mdica y farmacutica de este producto se declara tiene el rango ms amplio y el mayor nmero
de usos qumicos teraputicos.
Puesto que hay varios cientos de usos teraputicos del DMSO, lo siguiente es slo un listado
parcial de su mirada de aplicaciones para el armamento del consumidor mdico:
* DAO DEL CEREBRO Y MEDULA ESPINAL:
De la misma forma que el DMSO retiene los efectos del derrame emblico o hemorrgico, es
superior a cualquier otro tratamiento para las heridas de bala en el cerebro. Es necesario emplear
DMSO oral e intravenoso tan pronto como sea posible despus de que haya ocurrido la herida
en la cabeza. Las calidades curativas del DMSO tambin trabajan rpidamente para regresar los
tejidos de la mdula espinal lesionadas a lo normal.
* SINDROME DE DOWN:
El DMSO administrado como bebida diluido al 50 por ciento dado en un equivalente de medio a
un gramo por kilogramo de peso corporal a nios afectados los trajo a la normalidad. Se utiliza
oralmente en Argentina y en Chile para el tratamiento del sndrome de Down y el retardo mental.
*PROBLEMAS DE CIATICA Y DISCOS LUMBARES:
Cuando se combinan 20 a 50 c.c. de una solucin al 20 por ciento de DMSO con el anestsico
local Xilocana y se inyectan por tres a cinco das consecutivos intramuscularmente en el rea
adolorida de la espalda, el dolor desaparece y permanece ausente por intervalos cada vez ms
largos entre las series de inyecciones. Una solucin de DMSO de grado farmacutico al 20 por
ciento de concentracin inyectada en los discos espinales enfermos libera al paciente de discos
daados del dolor del nervio.
*QUELOIDES, CICATRICES, ACNE, Y QUEMADURAS:
Aplicado tpicamente y repetidamente, el DMSO aplana la masa de cicatrices levantada,
lobulada, nodular de tejido de cicatrices en los queloides y el acn. Efecta mucho de su
decoloracin tambin. Y para eliminar el dolor de las quemaduras de todos los tipos, nada es
mejor.
* DAOS MUSCULOESQUELETICOS Y DEPORTIVOS:
El DMSO concentrado, pintado sobre los tobillos luxados, desgarres musculares, coyunturas
dislocadas y an en el sitio de fracturas simples, quita el dolor como magia. Es la principal
herramienta sanadora de entrenadores y directores de atletas profesionales.
Sorprendentemente, cuando se aplica tpicamente, el DMSO es mejor tolerado en
concentraciones mayores por debajo de la cintura que por encima de la cintura. Todava es ms
efectivo por encima de la cintura, teniendo una respuesta ms rpida para problemas que
 involucren la cara, cuello, los hombros, extremidades superiores, y parte superior del tronco y
espalda. Debe usarse con cuidado por los efectos colaterales, como la sensacin quemante. La
concentracin de la solucin debe disminuirse si ocurre cualquier molestia.
* DESORDENES DEL PIE:
Entre los xitos con pacientes ms grandes est la aplicacin tpica del DMSO para el alivio del
dolor de callos, juanetes, picadas en los pies, uas encarnadas, verrugas plantares y fisuras
entre los dedos del pie.
* CANCER:
Como adjunto excelente en la terapia metablica del cncer, el DMSO potencializa la
quimioterapia. El DMSO y la hematoxilina administrados intravenosamente como una
combinacin tienen excelentes cualidades como agente para el encogimiento de los tumores. La
mezcla es correctiva especialmente para el adenocarcinoma, carcinoma de clulas escamosas,
cncer de prstata, cncer de pecho, linfomas y algunos otros tumores slidos.
* DIABETES:
El DMSO tomado oralmente disminuye el requerimiento de insulina en una de cuatro personas
con diabetes juvenil. El DMSO aplicado intravenosamente tambin mejora el suministro de
sangre vascular perifrico de los diabticos dilatando los vasos ms pequeos de las
extremidades inferiores.
*SINUSITIS NASAL, TIC DOULOUREAUX Y DOLOR DE CABEZA:
Colocado directamente en los orificios nasales, el DMSO abre los senos bloqueados en unos
pocos minutos. Esto lo hace cruzando todas las membranas del cuerpo sin destruir la integridad
del tejido.
* PARA EL TIC DOULOUREAUX:
El DMSO aplicador tpicamente trae alivio en cuatro das, pero es ms rpido y ms duradero
cuando se inyecta directamente en los puntos engatillados del msculo espasmdico.
Empleado tpicamente en la frente y la nuca, el DMSO quitar el dolor de cabeza en treinta
minutos.
* ENFERMEDADES DE LA PIEL, ULCERACIONES, Y HERPES EXTERNO:
Dificultades de la piel tales como la pitiriasis rosa, tinea versicolor y dermatitis eczematoidea se
resuelven por la aplicacin tpica de DMSO. Adicionalmente, habr rpida curacin de lceras
varicosas crnicas, lceras diabticas y ulceraciones relacionadas con infecciones micticas.
El DMSO pintado sobre las lesiones dolorosas conectadas con el herpes zoster (ampollas)
remover sus sntomas neurolgicos de inmediato. Trabaja bien cuando se coloca sobre las
ampollas del herpes simple tambin.
Glicerol. Tambin conocido como glicerina, al lquido incoloro y espeso que
forma la base de la composicin de los lpidos. Es un compuesto alcohlico con
tres grupos OH (hidrxilos)

Contenido
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1 Definicin
2 Historia
3 Estructura qumica de la glicerina
4 Produccin
5 Generalidades de la glicerina
o 5.1 Otros nombres
6 Aplicaciones
7 Usos de la glicerina en la salud
o 7.1 Cuidado personal
o 7.2 Manufactura industrial
o 7.3 Cocina
o 7.4 Otros usos
8 Estabilidad y reactividad
9 Peligros qumicos
 10 Riesgo de inhalacin
11 Fuentes

Definicin
La palabra glicerol, procede del griego Glykos, que significa dulce. Posee un
aspecto de lquido viscoso, no tiene color, pero si un caracterstico olor, adems
de un sabor dulzn. Est un compuesto higroscpico, lo que quiere decir que
tiene la capacidad de ceder o absorber la humedad presente en el medio
ambiente que lo rodea. Es fcilmente soluble en agua, y se descompone
en ebullicin, en la cual entra a una temperatura de 290C. Es un compuesto
lquido si se encuentra a temperatura ambiente, (a unos 25C).
El glicerol se encuentra en todos los tipos de aceites, as como en las grasas
animales o vegetales, siempre que stas vayan asociadas a otros cidos grasos
como puede ser, por ejemplo, el oleico, o esterico.
Aceites como la de palma, o el aceite de coco, poseen una gran cantidad de
glicerol, en torno a un 70-80% de cidos grasos. El glicerol est presente de
manera combinada en todas las clulas de tipo animal y vegetal, formando parte
de las membranas de las clulas a modo de fosfolpidos.
El glicerol utilizado a nivel mundial, hasta el ao 1949, proceda de las industrias
jaboneras. Hoy en da, alrededor del 70% de su produccin, se lleva a cabo
en Estados Unidos, procedente de los glicridos, es decir, procedentes de las
grasas y aceites, siendo de tipo sinttico el resto de la produccin, como
subproducto del propileno.

Historia
Alrededor del ao 600 (a.n.e.), los fenicios divulgaron el conocimiento alqumico
de cmo hacer jabn, unos siglos ms tarde, tuvo su difusin a travs
deMarsella, en los galos y en los pueblos germnicos. Anteriormente este
compuesto orgnico no se llamaba "glicerina" o "glicerol," porque estos nombres
se crearon en el siglo XX. En el siglo XIV durante el reinado de Carlos I, la corona
inglesa monopolizaba el comercio y la fabricacin de jabn. En el siglo siguiente,
este conocimiento se tom de la alquimia para la qumica, un ejemplo histrico
estara en el del qumico ingls Claude Joseph Geoffroy (1741), que intensific
sus estudios sobre la naturaleza de las grasas, lo que le llev al descubrimiento
de la glicerina. Menos de 40 aos despus, el qumico sueco Carl Wilhelm
Scheele fue el primero en aislar este compuesto en 1779, calentando una
mezcla de litargirio (PbO) con aceite de oliva. Fue l quien formaliz el
descubrimiento de que las grasas y aceites naturales contienen glicerina.
Glicerol (modelo 3D), mostrando los tomos y el par solitario de electrones de cada
oxgeno (en rosa)

Estructura qumica de la glicerina

Glicerina: CH2OH-CHOH-CH2OH.
Est compuesta de tres carbonos, ocho hidrgenos y tres oxgenos. Su
estructura, tiene enlaces simples y es tetravalente.

Molcula de la Glicerina

Produccin
Todo el propanotriol producido en el mundo hasta 1949, provena de la industria
del jabn. Actualmente, el 70% de la produccin de glicerol le pertenece a los
Estados Unidos, y proviene de los glicridos (grasas y aceites naturales), y el
resto de la produccin de glicerina sinttica (subproducto del propileno), la
produccin de cidos grasos y steres de cidos grasos (biodiesel).
Se produca mediante saponificacin de las grasas, como un subproducto de
la fabricacin del jabn.
Tambin puede obtenerse como un subproducto durante la produccin
del biodiesel mediante transesterificacin. Los triglicridos reaccionan:

1. Con un alcohol como el etanol.

2. Con un catalizador para proporcionar esteres etlicos de cidos grasos.
3. Glicerol
1. El glicerol puede producirse tambin por diferentes caminos desde
el propileno.
Generalidades de la glicerina
Otros nombres
Glicerol
Glicerina
Propanotriol
Propano-1,2,3-triol 1,2,3-Trihidroxipropano
Frmula semidesarrollada: HOCH2-CHOH-CH2OH
Frmula estructural: C3H8O3
Frmula molecular n/d
Familia qumica: Alcoholes

Aplicaciones
La aplicacin del glicerol es muy variada. Entre sus usos ms frecuentes se
encuentran:

La fabricacin de productos cosmticos, sobre todo en la industria jabonera.

Dentro del rea mdica, se usa en las composiciones de medicamentos, a
modo de jarabes, cremas, etc.
En temperaturas ms altas de los 250C, en los baos calefactores.
En ciertas maquinarias se utiliza como lubricante.
Anticongelante
Fabricacin de distintos productos, sobretodo en la preparacin de ts, cafs,
y otros extractos vegetales, as como la elaboracin de bebidas refrescantes,
donde se aade como aditivo para aumentar la calidad.
Fabricacin de resinas utilizadas como aislantes.
Es un componente importante en barnices, as como en la industria de
pinturas y otros acabados.

Usos de la glicerina en la salud

El glicerol es reconocido como seguro para el consumo humano desde 1959.
Puede ser utilizado en diversos productos alimenticios para diferentes
propsitos. Los niveles de la DL50 en ratas son 12600 mg / kg, en conejillos de
Indias de 18700 mg / kg. Varios estudios han demostrado que una gran cantidad
de glicerol (sinttico o natural) se puede administrar sin la aparicin de efectos
adversos para la salud.
El glicerol es un precursor para la sntesis de triglicridos y fosfolpidos en
el hgado y el tejido adiposo. Cuando el cuerpo utiliza la grasa almacenada para
la energa, glicerol y cidos grasos se liberan en el torrente sanguneo. El glicerol
puede ser convertido en glucosa en el hgado, el suministro de energa para
el metabolismo celular.
Adems tiene una amplia variedad de aplicaciones, tales como emulsionante,
agente suavizador, plastificante, agente estabilizador y humectante
para pastelera, heladera y tabaquera; en lociones corporales, enjuagues
bucales e innumerables preparados farmacuticos y cosmticos; como medio
protector para congelamiento de glbulos rojos, esperma, crneas y otros
tejidos; en tintas de impresin, resinas de pinturas; mezclas anticongelantes; y
como materia prima para la nitroglicerina.

Cuidado personal
Para la piel funciona como emoliente, humectante y lubricante.
Para piernas y pies cansados.
Manos secas.

Manufactura industrial
Preparacin de plastificantes, lubricantes, anticongelantes y solventes.

Cocina
Agente para disolver colorantes y saborizantes.
Agente conservador en la preparacin de conservas y mermeladas.
En la fabricacin de pasteles, glaseados y caramelos.

Otros usos
Agente de limpieza y abrillantador de superficies.
Para piernas y pies cansados.
Preparacin de diversos medicamentos.
Como materia prima en la elaboracin de cosmticos.
Como base de lociones.
En la industria de la impresin.

Estabilidad y reactividad
La sustancia se descompone al arder, en contacto con superficies calientes u
oxidantes fuertes, bajo la influencia de sustancias higroscpicas, produciendo
acrolena. Reacciona con oxidantes fuertes originando riesgo de incendio y
explosin. Condiciones que deben evitarse: Evitar la llama abierta. Materiales a
evitar: Oxidantes fuertes. Productos de descomposicin: Monxido de carbono.
Polimerizacin: No aplicable.

Peligros qumicos
La sustancia se descompone al arder, en contacto con superficies calientes u
oxidantes fuertes, bajo la influencia de sustancias higroscpicas, produciendo
acrolena. Reacciona con oxidantes fuertes originando riesgo de incendio y
explosin.

Riesgo de inhalacin
La evaporacin a 20C es despreciable; sin embargo se puede alcanzar
rpidamente una concentracin molesta de partculas en el aire por pulverizacin
Se denomina Criobiologa (crio: fro) al estudio de los procesos que ocurren durante la
exposicin de material biolgico a bajas temperaturas. Los primeros intentos de utilizar fro
para la conservacin de material biolgico se remontan al ao 1700, pero fue en realidad en
1949, con el descubrimiento del glicerol como crioprotector, cuando comenzaron a realizarse
anlisis metdicos sobre congelacin. En 1972 D. Whittingham, S. Leibo y P Mazur publicaron
los resultados de sus estudios de congelacin de embriones de ratn y en 1983 Trounson y
Mohr publicaron su trabajo sobre el primer embarazo en humanos logrado con embriones
congelados.

La criobiologa en realidad es una ciencia en la que muchos de sus avances fueron resultado
de mtodos de ensayo y error, donde se prueba una opcin y se observa si funciona. Si
funciona se tiene una solucin; si no en el caso de un error- se intenta otra opcin. De esta
forma, una vez determinados los parmetros para un tipo de congelacin se realizan clculos
basados en la evidencia para analizar minuciosamente las caractersticas del fenmeno
observado.

En lneas generales en los estudios de criobiologa se combinan principios fsicos la

temperatura y cambios de estado -, qumicos la composicin de los crioprotectores- y
biolgicos la clula, tejido u rganos, el tipo y/o especie-. En este captulo analizaremos como
reacciona y las consecuencias que sufre una clula a todo este tipo de cambios.
El proceso de congelacin de clulas, embriones o esperma, consiste en descender de la
temperatura corporal o fisiolgica en la que se encontraban, cercana a los 38 C, hasta
temperaturas negativas (bajo cero); en este caso en particular, a la temperatura del nitrgeno
lquido ( 196 C) en el que finalmente los embriones u otro material biolgico sern
depositados y mantenidos en estado inanimado por tiempo indefinido.
El efecto fsico de una baja temperatura, 0 C o menos, sobre una materia lquida es simple: se
traduce en la formacin de hielo, o sea que el efecto del fro hace que el agua cambie del
estado lquido al slido (hielo). Ahora bien, en muy pocas ocasiones encontraremos en la
naturaleza agua en su estado puro, por lo que toda agua que en encontremos en el medio
ambiente estar combinada con sales. Por lo tanto es importante comprender que existe una
correlacin entre la temperatura a la que se somete una solucin (agua, solvente) y la
concentracin de sales que sta contiene (soluto). Consecuentemente, cuando una solucin
comienza a congelarse se forman cristales de hielo, lo que indica que a la vez que el agua se
congela (cristaliza) la concentracin de la solucin (relacin entre molculas de agua libre y
molculas de la sal en solucin) aumenta. De esta misma forma se puede decir que el punto de
congelacin de una solucin disminuye con el aumento de la concentracin de sales. Por
ejemplo, el agua pura (0% de sales) se congela a 0 C, pero la solucin fisiolgica, ClNa 9 ,
comienza a congelarse cerca de los 5 C y alcanza su punto eutctico a 21,6 C. El punto
eutctico de una solucin es el punto trmico en el cual la solucin a consecuencia de la
congelacin misma alcanz un punto en el que ya no hay ms solvente libre en la solucin, o
sea que no hay ms agua libre ya que toda se ha congelado produciendo como resultado la
concentracin mxima de las sales que estaban en solucin.
Volviendo al ejemplo de la solucin fisiolgica, sta comienza a formar hielo (inicio de la
congelacin) cuando se encuentra entre 2 y 5 C, y se congelar totalmente (punto eutctico)
cuando alcanza 21 C, variando la molaridad (M: concentracin de sales) de la solucin inicial
de 0.165 M a 6 M.
La concentracin de una solucin varia acorde a la temperatura a la que se expone; este
fenmeno produce a su vez un descenso del punto de congelacin, un aumento en el punto de
ebullicin, y un aumento de la presin osmtica del medio y se denomina propiedad coligativa
de una solucin.

Principios fsicos de la congelacin

Para comprender como y porque se produce una congelacin, se deben estudiar los principios
fisicos del fenmeno de cambio de estado. Para que ocurra este cambio fsico, por ejemplo en
una clula, se sucede una serie de fenmenos de complementacin entre la presin, la
temperatura y el volumen de la misma.
La ley de fsica que analiza este conjunto de variables considerando la presin a la que un
cuerpo esta sometido se llama ley de Boyle (1662). La ley original dice que el volumen de un
gas contenido dentro de un recipiente disminuye al aumentar la presin sobre el mismo. En el
caso de una clula, el volumen aumenta o disminuye acorde a la presin osmtica interna y la
del medio que la rodea (externa). En realidad, una clula slo puede disminuir su volumen
hasta cierto lmite y el mximo es cuando la clula alcanza el volumen mnimo, que se llama
volumen celular no osmtico y es aproximadamente el 20% del volumen inicial (de aqu que
sea vox populi que el 80% de la clula es agua).
Esta disminucin del volumen celular se representa con un diagrama de fase que grafica los
valores recprocos de la presin osmtica y fue descrito por Jacobus H. Van't Hoff, a quien por
este estudio se le otorg en el ao 1901 el primer premio Nobel de Qumica.

Figura 1: Grfico de la presin osmtica

Figura 2: Grafica de Boyle -Vant Hoff de la respuesta de cigotos de ratn (recproca de la
presin osmtica)

Principios biolgicos de la congelacin

La biologa tiene un rol muy especial en la crioconservacin ya que todo lo que pretendemos
congelar o conservar son bsicamente clulas. Aqu es importante remarcar que tambin
deben estar vivas, ya que las resucitaremos de un estado vegetativo que producir la
congelacin, pero no las podremos recuperar o revivir si estn muertas antes o despus de
congelarlas.
En realidad todo lo que analizamos en este texto se basa en el estudio de un tipo de clula o
una lnea celular. En el caso de intentar congelar tejidos, que son un conjunto organizado de
distintas lneas celulares del sistema, se complica, ya que en teora cada tipo de lnea celular
tiene su propia curva de congelacin. Si pretendemos realizar este mismo estudio con rganos,
que son un conjunto de diferentes tejidos y con distinta funcin, el diseo experimental se
complica an ms.
Por esta razn el tipo, el origen, el tamao y el estado de una clula es importante para
determinar cul es la curva de congelacin ptima. En otras palabras, cada tipo de clula tiene
su propia curva de congelacin, por ejemplo, la congelacin de linfocitos es distinta a la de
fibroblastos y esta es diferente a un embrin. Si a su vez incursionamos dentro de la propia
lnea embrionaria, no es lo mismo un oocito u vulo que un embrin de una clula o cigoto, ni
este a su vez es similar a un embrin de dos clulas ni a un blastocito. Tambin hay ciertas
diferencias entre embriones de distintas especies ya que las curvas de congelacin difieren
entre ratn, bovino o humano an tratndose del mismo tipo de estado celular (Figura 2).
En la congelacin de semen acontece algo muy similar. El esperma humano se congelo con
xito en el ao 1949 y con prcticamente el mismo diseo experimental se logr congelar el
semen de toro, sin embargo, el de esperma de ratn se pudo congelar recientemente en el ao
1990 y an hoy no se ha encontrado un mtodo viable para el esperma de rata. La gran
diferencia entre uno y otro es que el glicerol utilizado para congelar el semen de la mayora de
especies es txico para los espermatozoides de estos roedores.
 Figura 3: Embriones de ratn y bovino (Foto Dr. S. Leibo)

Principios Qumicos de la Congelacin:

Crioprotectores
Las propiedades del glicerol como crioprotector fueron descubiertas en 1949 por los cientficos
Polge, Smith y Parkes. En sus estudios, este grupo, analiz la funcin crioprotectora de
diferentes compuestos qumicos durante la congelacin de esperma humano y de pavo. Como
muchos otros descubrimientos cientficos, en que sucede lo inesperado, el glicerol por si mismo
no era parte del estudio, sino que era solo un componente del fijador histolgico. De manera
que las muestras de semen que deberan fijarse para su estudio fueron conservadas en un
refrigerador y justamente fueron en estas muestras las nicas en que los espermatozoides
sobrevivieron ya que toleraron el fro.
Los crioprotectores son soluciones que protegen del fro actuando sinergicamente en la
deshidratacin de la clula. Por que es tan importante la deshidratacin parcial de la clula?
Simplemente para evitar que durante el proceso de congelacin se formen cristales de hielo en
el interior de la clula, lo cual indefectiblemente se formaran cuando comience a congelarse el
agua intracelular que contiene, por lo que en gran parte, de este fenmeno depende la
viabilidad de la clula congelada.
Por esta razn se aaden al medio de congelacin soluciones con funcin crioprotectoras. La
funcin de estos aditivos es desplazar o extraer el agua del citoplasma y as evitar que durante
la congelacin se formen cristales de hielo en el interior de la clula. Estos compuestos son de
variadas estructuras qumicas y con diverso peso molecular. Para clasificar los crioprotectores
se los puede dividir en permeables y no permeables dependiendo de su capacidad de
atravesar (difusin pasiva) la membrana celular. Dentro del grupo de permeables se
encuentran los polialcoholes o glicoles, como el metanol, glicerol, dimetilsulfoxido (DMSO),
etilenglicol, propilenglicol.
Los clsicos no permeables son los azucares, sean monosacridos, disacridos o trisacridos.
Tambin se clasifica dentro de este grupo a otras molculas de gran tamao como la albmina
bovina y distintos polmeros sintticos como la polivinilpirrilidona (PVP) o polivinilalcohol (PVA)
entre otros.
Idealmente un compuesto crioprotector debe ser de bajo peso molecular (MW), debe pasar a
travs de las membranas celulares (difusin), no ser txico y de alta solubilidad. Obviamente
no todos los compuestos penetran la clula con la misma velocidad; por ejemplo el glicerol es
ms lento que el DMSO y este a su vez mas lento que etilenglicol (EG), de manera que
tambin el volumen final de la clula se ve afectado en funcin del crioprotector. En otras
palabras, la difusin del EG es rpida, la variacin en el volumen de la clula pasa
desapercibida, sin embargo con el glicerol, que difunde lentamente, se puede apreciar bajo la
lupa como la clula se contrae y expande.
Los azucares tienen una solubilidad y viscosidad que depende de su estructura qumica, la
rafinosa (trisacrido) es menos soluble que la sucrosa (disacrido) y esta es menos soluble que
la glucosa (monosacrido). Los azucares son denominados bferes o tampones osmticos; no
son permeables a la membrana celular pero crean una gran presin osmtica en el medio, ante
la cual la clula responde eliminando el agua para equilibrar las presiones, por lo tanto,
deshidratndose.
Con esta rpida revisin de conceptos sobre criobiologa, en los prximos captulos se
analizar cada mtodo de congelacin y la correspondiente descongelacin para cada mtodo
independientemente.

Tipos de congelacin
Si exponemos una clula a las bajas temperaturas de congelacin, el medio que rodea a la
clula se enfriar ms rpido que el interior de la misma, por lo tanto el medio externo, al
congelarse, se volver osmticamente ms concentrado que el interior de la clula. Debido a
esto, la clula reacciona eliminando el exceso de agua (contraccin), y as logra que la presin
producida por la concentracin del medio interno se equilibre con la del medio externo (en otras
palabras, que las presiones osmticas se equiparen y mantengan un equilibrio).
Este fenmeno de reaccin de la clula por equiparar la presin osmtica, sea esta hipertnica
o hipotnica, puede resultar peligrosa si no es en una forma controlada. Si la deshidratacin es
muy rpida o extrema, el dao producido ser irreversible, por lo que se hace necesario
introducir en la ecuacin en estudio la funcin de Tiempo como una nueva variable. (Figura 4).

Figura 4: Tipo de congelamiento y su efecto sobre la clula. ( Mazur 1977)

El tipo de congelacin se determina conforme a la temperatura en funcin del tiempo, dando
como resultado tres tipos de congelacin: (i) lenta, (ii) rpida y, (iii) ultra rpida. En el sistema
de congelacin lenta, por lo general la temperatura desciende aproximadamente 0,5 C por
minuto hasta llegar a - 80 C de esta manera las clulas tienen tiempo suficiente para eliminar
el agua y equilibrarse con el medio, por lo cual se llama tambien mtodo de congelacin
equilibrado. Por el contrario, en los mtodos no equilibrados o rpidos la congelacin ocurre
ms rpidamente que el tiempo requerido por las clulas para deshidratarse y poder equiparar
la presin interna con la del medio externo, como consecuencia, se pueden formar cristales de
hielo en su interior.
Es importante tener en cuenta que no todas las clulas tienen el mismo ndice de congelacin,
lo que en definitiva se traduce como susceptibilidad al fro. La figura 5 muestra un clsico
ejemplo de las temperaturas ptimas requeridas por distintos tipos de clulas.

Figura 5: Tipo de clula y curva de congelacin

En los prximos captulos se analizaran varios protocolos de criopreservacin que se utilizan

en laboratorios reconocidos. Todos funcionan a un nivel similar, solo varan en la complejidad o
en el equipamiento necesario. La intencin es ofrecer una variedad para que se elija el ms
conveniente para el laboratorio. Consejo: Una vez elegido un mtodo no mezclen rutinas con
otro similar.