0865_ch1.qxd 22.08.

2007 13:32 Page 1

Partea nti

EMBRIOLOGIE
General
0865_ch1.qxd 22.08.2007 13:32 Page 2
0865_ch1.qxd 22.08.2007 13:33 Page 3
Chapter 2 1
Capitolul
Gametogenesis: Conversion
Embriologie: Frontiere vechi i
of Germ
noi; Cells Into
introducere Male and
n mecanismele
Female Gametes
moleculare de reglare i sem-
nalizare
IMPORTAN CLINIC
De la stadiul de celul unic la nou-nscut cu vrsta de
nou luni (Fig. 1.1 A,B). Un proces de dezvoltare care
reprezint integrarea uimitoare a unor fenomene de o
complexitate progresiv mai mare. tiina care studi-
az aceste fenomene este denumit embriologie, iar
domeniul include cercetri efectuate asupra factorilor
moleculari, celulari i structurali care contribuie la
formarea unui organism. Importana acestor studii de-
riv din faptul c furnizeaz informaii eseniale pen-
tru punerea la punct a unor strategii de ngrijire
medical care conduc la obinerea unor rezultate su-
perioare. Aadar, creterea gradului de nelegere a
embriologiei a condus la crearea unor tehnici noi de
diagnosticare i de tratament prenatal, a unor proce-
duri terapeutice cu ajutorul crora sunt depite unele
probleme legate de infertilitate i la punerea la punct
a unor metode de prevenire a malformaiilor congeni-
tale, care reprezint cauza principal a mortalitii in-
fantile. Toate aceste progrese n domeniul ngrijirilor
medicale prenatale i n domeniul sntii
reproducerii sunt semnificative nu numai pentru con-
tribuia lor la creterea ratei naterilor normale, ci i
pentru efectele lor pe termen lung n perioada postna-
tal. De fapt, att capacitatea cognitiv a unui individ,
ct i caracteristicile comportamentale ale acestuia
sunt afectate de condiiile de via intrauterin, iar
anumii factori materni, cum ar fi fumatul, starea de
nutriie, stresul, diabetul i alii influeneaz starea de
sntate a organismului dup natere. Mai mult,
aceste influene, asociate cu factori moleculari i celu-
lari, stabilesc riscul potenial de declanare a anumitor
boli la vrsta adult, cum ar fi cancerul i afeciunile
cardiovasculare. Aadar, factorii care acioneaz n
perioada prenatal au numeroase efecte care influ-
eneaz starea de sntate att pe termen scurt ct i pe perimentale a cunoscut o dezvoltare exploziv. Au
termen lung, astfel nct embriologia i dezvoltarea
fetal reprezint un obiect de interes pentru toi spe-
cialitii din domeniul sanitar. De asemenea, cu ex-
cepia medicilor din cteva specialiti, marea majori-
tate a celorlali medici i specialiti din domeniul
sntii vor interaciona cu femei aflate la vrsta
reproducerii, astfel nct exist posibilitatea ca ei s
aib o influen major asupra rezultatului final al
acestor procese de dezvoltare i asupra urmrilor
negative ale acestora.
SCURT ISTORIC AL EMBRIOLOGIEI
Intervalul de timp n care se realizeaz progresia de la
stadiul de celul unic la stadiul n care primordiile
organelor sunt formate (la om, primele 8 sptmni de
dezvoltare) este denumit perioada de embriogenez
(numit uneori i perioada de organogenez); inter-
valul de timp ntre acest moment i natere este denu-
mit perioada fetal, n timpul creia diferenierea
continu iar ftul crete i ctig n greutate.
Metodele tiinifice de studiu al embriologiei au
evoluat pe parcursul mai multor sute de ani. Nu este
deloc surprinztor faptul c iniial au predominat
abordrile de tip anatomic. S-au efectuat observaii,
iar acestea au devenit din ce n ce mai sofisticate odat
cu perfecionarea instrumentelor optice i a tehnicilor
de disecie. Pe msur ce oamenii de tiin au fcut
comparaii ntre specii i au nceput astfel s neleag
succesiunea fenomenelor dezvoltrii, cercetrile au
inclus i studii comparative i de evoluie. Au fost de
asemenea studiai copiii cu malformaii congenitale,
iar observaiile au fost comparate cu cele efectuate la
copiii care au prezentat tipare normale de dezvoltare.
Studiul originii i cauzelor embriologice ale malfor-
maiilor congenitale a fost denumit teratologie.
n secolul XX, domeniul embriologiei ex-
fost puse la punct numeroase experimente avnd ca
0865_ch1.qxd 22.08.2007 13:33 Page 4
4 Partea nti | Embriologie general
B luni.
scop urmrirea celulelor n timpul perioadei de dez-
voltare pentru a stabili care sunt structurile care se
formeaz pornind de la o anumit celul. Aceste
abordri au inclus observaii ale embrionilor trans-
pareni de la organismele din genul Urochordata, care
conin celule pigmentate vizibile la microscop.
Ulterior au fost utilizate coloraii vitale pentru a
colora celulele vii, astfel nct dezvoltarea acestora s
poat fi urmrit. La sfritul anilor 60 au nceput s cu rol de semnal este sonic hedgehog.
fie folosite tehnici de marcare radioactiv i de au-
toradiografie. n aceast perioad a fost descoperit
unul dintre primii markeri genetici, odat cu crearea
organismelor himer pui-prepeli. n cadrul acestei
abordri, celulele de prepeli, care prezint un tipar
unic de distribuie perinucleolar a heterocromatinei,
au fost grefate la embrioni de pui aflai n stadiile in-
cipiente de dezvoltare. Ulterior, embrionii gazd au
fost examinai din punct de vedere histologic pentru a
determina evoluia celulelor de prepeli. Variante ale
acestei abordri au inclus obinerea unor anticorpi ori-
entai mpotriva unor antigene specifice prezente pe
suprafaa celulelor de prepeli, fapt care a contribuit
semnificativ la identificarea acestor celule.
Monitorizarea celulelor prin aceste metode i prin alte
tehnici furnizeaz informaii valoroase despre
originea diferitelor organe i esuturi.
Experimentele de grefare au furnizat
primele date despre schimbul de semnale care se
deruleaz ntre diferitele esuturi. Exemple de astfel
de experimente includ grefarea nodului primitiv din
poziia sa normal pe axa corpului n alt poziie, ur-
mat de constatarea faptului c aceast structur in-
duce dezvoltarea unei a doua axe a corpului. Un alt
experiment, n cadrul cruia au fost utilizate primordii
Figura 1.1 A. Ovulul fecundat, imediat
nainte de fuziunea dintre pronucleii mas-
culin i feminin. B. Ft la vrsta de apte
ale membrelor, a dovedit c dac un fragment tisular
din marginea axial posterioar a unui membru este
grefat la nivelul marginii anterioare a unui alt mem-
bru, atunci degetele de la nivelul membrului gazd
vor fi duplicate, avnd aspectul de imagine n oglind.
Aceast regiune posterioar cu rol de semnalizare a
fost denumit zona de activitate polarizat (ZPA),
iar n prezent se cunoate faptul c molecula proteic
Aproximativ n aceeai perioad (1961),
teratologia ca disciplin a ajuns n centrul ateniei din
cauza unui medicament denumit Thalidomid, care a
fost administrat la femeile nsrcinate ca agent
antiemetic i sedativ. Din nefericire, medicamentul a
indus apariia unor malformaii congenitale, inclusiv
malformaii ale extremitilor, caracterizate prin ab-
sena unuia sau mai multor membre (amelie) sau prin
absena oaselor lungi ale membrelor, astfel nct la
nivelul toracelui erau ataate direct mna sau piciorul
membrului afectat (focomelie; Fig. 1.2). Asocierea
dintre medicament i malformaiile congenitale a fost
stabilit n mod independent de doi clinicieni - W.
Lenz i W. McBride - i a constituit dovada faptului
c produsul de concepie este vulnerabil la factori
materni care traverseaz placenta. La scurt timp, nu-
meroase modele pe animale, care demonstrau influ-
ena asupra procesului de dezvoltare a factorilor de
mediu, a medicamentelor i a mutaiilor genetice, au
furnizat informaii suplimentare despre etapele dez-
voltrii i originea malformaiilor congenitale.
n prezent, la lista metodelor experimentale
utilizate pentru studierea proceselor normale i anor-
male ale dezvoltrii au fost adugate metodele mole-
culare. Numeroase metode de identificare a celulelor
0865_ch1.qxd 22.08.2007 13:34 Page 5
Capitolul 1 | Embriologie: Frontiere vechi i noi; introducere n mecanismele moleculare de reglare i semnalizare
Figura 1.2 Copil cu focomelie (absena oaselor lungi
ale unui membru) cauzat de medicamentul thalido-
mid.
- prin utilizarea unor markeri genetici, a sondelor flu-
orescente i a altor tehnici de marcare - au crescut ca-
pacitatea cercettorilor de a urmri dezvoltarea
celulelor individuale. Utilizarea altor tehnici - cum ar
fi tehnologiile knock-out, knock-in i antisens - cu
scopul de a modifica expresia genic a condus la
crearea unor modaliti noi de inducere a dezvoltrii
anormale i a permis studiul funciei unei singure
gene prezente ntr-un esut specific. Astfel, apariia
biologiei moleculare a condus embriologia spre un
nivel superior, iar pe msur ce sunt descifrate rolurile
genelor individuale i sunt descoperite interaciunile
dintre gene i factorii de mediu, nelegerea proceselor
normale i anormale de dezvoltare devine din ce n ce
mai aprofundat.
INTRODUCERE N MECANISMELE MOLE-
CULARE DE REGLARE I SEMNALIZARE
Biologia molecular a deschis calea ctre noi
modaliti de studiere a embriologiei i de aprofun-
dare a nelegerii aspectelor normale i patologice ale
procesului de dezvoltare. Secvenierea genomului
uman, mpreun cu crearea unor tehnici de investigare
a reglrii genetice la mai multe niveluri de complexi-
tate, au condus embriologia ctre un nivel superior.
Aadar, embriologia a progresat de la nivel anatomic
la nivel biochimic i apoi la nivel molecular, iar
fiecare etap a condus la creterea gradului de
cunoatere.
n genomul uman exist aproximativ
35.000 de gene, valoare care reprezint numai o
5
treime din numrul de gene postulat nainte de fi-
nalizarea Proiectului Genomului Uman. ns, datorit
diverselor niveluri de reglare a expresiei genice,
numrul proteinelor sintetizate pornind de la aceste
gene se apropie de numrul de gene prezis iniial.
Ipoteza "o gen - o protein" a fost ns infirmat.
Astfel, prin diferite mecanisme, pe baza informaiei
coninute ntr-o singur gen pot fi sintetizate mai
multe proteine.
Expresia genic poate fi reglat la mai
multe niveluri: (1) pot fi transcrise numai anumite
gene, (2) molecula de ARN premesager care se
formeaz prin transcripia ADN-ului unei gene poate
fi procesat selectiv i astfel poate da natere mai mul-
tor tipuri de ARN mesager (ARNm), care apoi sunt
transportate n citoplasm, (3) moleculele de ARNm
pot fi translatate selectiv i (4) proteinele sintetizate
pe baza informaiilor coninute n moleculele de
ARNm translatate pot fi modificate n mod
difereniat.
Transcripia genic
Genele sunt incluse ntr-un complex de ADN i pro-
teine (n cea mai mare parte histone) denumit cro-
matin, iar unitatea structural elementar a acestui
complex este nucleozomul (Fig. 1.3). Structura
fiecrui nucleozom const dintr-un octamer de pro-
teine histonice i dintr-un segment de ADN cu
lungimea de aproximativ 140 perechi de baze. Doi nu-
cleozomi adiaceni sunt unii ntre ei printr-un seg-
ment de ADN (ADN de legtur), ataat de o alt
protein histonic (histona H1; Fig. 1.3). Nucleozomii
asigur mpachetarea strns a ADN-ului, astfel nct
transcripia nu se poate realiza. n aceast stare inac-
tiv cromatina are aspectul unui irag (ADN-ul) de
mrgele (nucleozomii) i este denumit
heterocromatin. Pentru realizarea transcripiei,
ADN-ul din nucleozomi trebuie desfurat.
Cromatina care conine ADN desfurat este denu-
mit eucromatin.
Complex de histone
ADN
Nucleozom
Histone
H1 ADN de
legtur
Figura 1.3 Desen care ilustreaz nucleozomii,
unitile structurale elementare ale cromatinei. Fiecare
nucleozom este alctuit dintr-un octamer de proteine
histonice i dintr-un segment de ADN care conine
aproximativ 140 perechi de baze. Nucleozomii adia-
ceni sunt unii printr-un segment de ADN de legtur
ataat de o protein histonic de alt tip.
0865_ch1.qxd 22.08.2007 13:34 Page 6

6 Partea nti | Embriologie general

Regiunea
promotorului Exonul 1 Intronul 1 Exonul 2 Intronul 2 Exonul 3 Intronul 3 Exonul 4

Regiunea netranslatat de la captul 3'

Cutia Codonul de Secven Terminarea Situs de terminare

TATA iniiere a amplificatoare translaiei a transcripiei
translaiei Situs de
poliadenilare
Figura 1.4 Schem a unei gene "tipice", observndu-se promotorul care conine cutia TATA; exonii, care
reprezint secvene de ADN ce vor fi translatate n proteine; intronii; situsul de iniiere a transcripiei; situsul de
iniiere a translaiei, care conine codonul corespunztor primului aminoacid din structura proteinei; regiunea 3', care
nu este translatat i care include situsul de poliadenilare - poliadenilarea contribuie la stabilizarea moleculei de
ARNm, face posibil transportul acestei molecule n afara nucleului i permite derularea procesului de translaie.

Genele sunt localizate n lanul de ADN i
conin regiuni care pot fi translatate n proteine, denu-
mite exoni, precum i regiuni localizate ntre exoni i
care nu sunt translatate, denumite introni (Fig. 1.4).
Pe lng exoni i introni, structura unei gene tipice in-
clude urmtoarele elemente: promotorul, un segment
de ADN la nivelul cruia se ataeaz ARN
polimeraza pentru a iniia transcripia; un situs pen-
tru iniierea transcripiei; un situs pentru iniierea
translaiei, care are rolul de a specifica primul
aminoacid din structura proteinei; un codon care
semnalizeaz ncetarea procesului de translaie; i
o regiune 3' care nu este translatat i care include o
secven (situsul de poliadenilare, la nivelul cruia se
adaug dup transcripie un polimer de adenin - poli-
A) care servete la creterea stabilitii ARNm, face
posibil transportul acestei molecule din nucleu n cito-
plasm i permite iniierea procesului de translaie
(Fig. 1.4). Prin convenie, capetele 5' i 3' ale unei
gene sunt specificate n relaie cu molecula de ARN
transcris pe baza informaiei din gena respectiv.
Astfel, ADN-ul este transcris de la captul 5' la cap-
tul 3', astfel nct promotorul este localizat n amonte
de situsul de iniiere a transcripiei (Fig. 1.4).
Promotorul, la nivelul cruia se ataeaz ARN-
polimeraza, conine de obicei secvena de baze
TATA, motiv pentru care acest situs este denumit cu-
tia TATA (Fig. 1.4). ns, pentru ca polimeraza s se
poat ataa la nivelul promotorului, este necesar
prezena unor proteine adiionale denumite factori de
transcripie (Fig. 1.5). Factorii de transcripie au i
un domeniu specific de legare la molecula de ADN,
precum i un domeniu de transactivare, care ac-
tiveaz sau inhib transcripia genei de a crei regiune
promotor sau amplificator sunt ataai factorii de tran-
scripie. n asociere cu alte proteine, factorii de tran-
scripie activeaz expresia genic prin inducerea
desfurrii segmentului de ADN care intr n struc-
tura nucleozomului, prin eliberarea polimerazei (care
astfel poate transcrie matria ADN) i prin mpiedi-
carea formrii unor noi nucleozomi la nivelul seg-
mentului respectiv de ADN.
Amplificatorii (enhancers) sunt segmente
de ADN cu funcie reglatoare, care activeaz uti-
lizarea promotorilor i controleaz eficiena acestora
i rata transcripiei. Amplificatorii pot fi localizai la
orice nivel de-a lungul unei catene de ADN i nu este
obligatoriu s fie situai n apropierea promotorului.
La fel ca i promotorii, amplificatorii leag factori de
transcripie (ataarea acestora se realizeaz prin inter-
mediul domeniului de transactivare) i au rolul de a
regla momentul expresiei unei gene i tipul de celule
n care gena respectiv este transcris. De exemplu,
controlul expresiei aceleiai gene n esuturi diferite
se poate realiza cu ajutorul unor amplificatori diferii.
Astfel, gena pentru factorul de transcripie PAX6,
care este implicat n dezvoltarea pancreasului, a glo-
bilor oculari i a tubului neural, conine trei amplifi-
catori separai, iar fiecare dintre acetia regleaz ex-
presia genei ntr-un anumit tip de esut. Amplificatorii
acioneaz prin modificarea cromatinei, astfel nct
promotorul devine accesibil pentru enzimele cu rol n
transcripie, sau prin facilitarea atarii ARN-
polimerazei. Exist i secvene de ADN care inhib

ARN polImeraz II ARN polImeraz II ADN

TATA

Complex de factori Situs de iniiere Transcript ARN

de transcripie a transcripiei

Figura 1.5 Schem n care se observ ataarea enzimei ARN-polimeraza II de cutia TATA a promotorului unei
gene. Ataarea necesit prezena unui complex de proteine, precum i a unor proteine suplimentare denumite fac-
tori de transcripie. Factorii de transcripie conin un domeniu specific pentru ataarea de molecula de ADN i au
rolul de a regla expresia genic.
0865_ch1.qxd 22.08.2007 13:34 Page 7

Capitolul 1 | Embriologie: Frontiere vechi i noi; introducere n mecanismele moleculare de reglare i semnalizare 7

transcripia, motiv pentru care sunt denumite atenua-
tori (silencers). Fenomenul permite unui factor de
transcripie s activeze o anumit gen n timp ce in-
hib expresia altei gene, prin ataarea moleculelor
acestuia la diveri amplificatori i atenuatori. Aadar,
factorii de transcripie conin un domeniu de legare la
ADN care este specific pentru o anumit secven de
baze, precum i un domeniu de transactivare care se
ataeaz la nivelul unui promotor, al unui amplificator
sau al unui atenuator i care activeaz sau inhib gena
reglat de aceste elemente.
Ali factori care regleaz expresia genic
Transcriptul iniial al unei gene este denumit ARN
nuclear (ARNn) sau uneori ARN premesager. ARNn
are o lungime mai mare dect ARNm, deoarece
conine intronii care sunt ndeprtai (n cadrul pro-
cesului de excizie a intronilor) pe msur ce ARNn
este transportat din nucleu n citoplasm. De fapt, pro-
cesul de excizie a intronilor ofer celulelor posibili-
tatea de a produce diferite proteine pe baza infor-
maiei coninute ntr-o singur gen. De exemplu, prin
ndeprtarea unor introni diferii se realizeaz diverse
combinaii de exoni, proces denumit excizie alterna-
tiv (splicing alternativ) (Fig. 1.6). Acest proces se
desfoar la nivelul spliceozomilor, care reprezint
complexe alctuite din molecule de ARN nuclear
mic (ARNsn) i proteine i care recunosc situsuri
specifice de excizie localizate n interiorul moleculei
de ARNn. Proteinele sintetizate pe baza informaiei
coninute n aceeai gen sunt denumite izoforme de
splicing (numite i variante de splicing sau forme
alternative de splicing), iar acestea ofer unor celule
diferite posibilitatea de a utiliza aceeai gen pentru a
sintetiza proteine specifice pentru tipul celular respec-
tiv. De exemplu, pe baza informaiei coninute n gena
WT1 se sintetizeaz anumite izoforme n celulele im-
plicate n dezvoltarea gonadelor i izoforme diferite n
celulele implicate n dezvoltarea rinichilor.
Chiar i dup ce o protein este sintetizat
(translatat), aceasta poate suferi modificri post-
translaionale care i influeneaz funcia. De
exemplu, unele proteine trebuie clivate sau fosforilate
pentru a deveni active. Altele trebuie s se combine cu
alte proteine, s fie eliberate din zonele n care au fost
sechestrate sau s fie transportate n anumite regiuni
ale celulei. Aadar, exist numeroase niveluri de
reglare a sintezei i activrii proteinelor, astfel nct
dei genomul uman conine numai aproximativ
35.000 de gene, numrul proteinelor care pot fi sinte-
tizate este probabil de aproximativ trei ori mai mare
dect numrul de gene.
Inducia i formarea organelor
Organele se formeaz n urma interaciunilor ntre
celule i esuturi. De cele mai multe ori, un grup de
celule sau esuturi induce modificarea dezvoltrii
unui alt grup de celule sau esuturi, procesul fiind de-
numit inducie. n cazul fiecrei astfel de interaciuni,
un tip celular sau tisular reprezint inductorul care
produce un semnal, iar cellalt este respondentul la
semnalul respectiv. Capacitatea de a rspunde la un
astfel de semnal este denumit competen, iar com-
petena presupune activarea esutului respondent de
ctre un factor de competen. ntre celulele
epiteliale i celulele mezenchimale exist numeroase
interaciuni inductive, care sunt denumite interaci-
uni epitelio-mezenchimale (Fig. 1.7). Celulele
epiteliale sunt unite ntre ele i formeaz tuburi sau
straturi, pe cnd celulele mezenchimale au aspect de
fibroblati i sunt dispersate n matricea extracelular
(Fig. 1.7). Exemple de interaciuni epitelio-mezenchi-
male sunt urmtoarele: ntre endodermul intestinal i
mezenchimul nconjurtor, cu formarea organelor de-
rivate din intestin, inclusiv ficatul i pancreasul; ntre
mezenchimul membrelor i ectodermul supraiacent
(epiteliul), cu formarea primordiilor membrelor i
dezvoltarea acestora; ntre endodermul corespunztor
mugurilor ureterali i mezenchimul corespunztor
blastemului metanefric, cu formarea nefronilor.

Regiunea 5' Exon tisular specific Regiunea 3'

netranslatat Exoni (esutului osos) Introni netranslatat

Gen
ipotetic

Proteina I

Proteina II
(sintetizat n
esutul osos)

Proteina III
Figura 1.6 Schematizare a unei gene ipotetice, care ilustreaz procesul de excizie alternativ a intronilor, cu for-
marea unor proteine diferite pornind de la aceeai gen. Spliceozomii recunosc situsuri specifice localizate la
nivelul transcriptului iniial (ARN nuclear) al unei gene. Pe baza acestui proces de recunoatere se realizeaz ex-
cizia unor introni diferii, ceea ce face posibil sinteza mai multor proteine pornind de la o gen unic. Proteinele
care pot fi sintetizate pornind de la informaia coninut ntr-o singur gen sunt denumite izoforme de splicing.
0865_ch1.qxd 22.08.2007 13:34 Page 8
8 Partea nti | Embriologie general
Mezenchim
Epiteliu
Figura 1.7 Desen care ilustreaz interaciunea epite-
lio-mezenchimal. Dup emiterea unui semnal iniial
de ctre unul dintre esuturi, se realizeaz inducia
celuilalt esut, care se va diferenia ntr-o structur
specific. Primul esut constituie inductorul, iar cel de-
al doilea respondentul. Dup iniierea induciei, sunt
transmise semnale (sgeile) n ambele direcii pentru
finalizarea procesului de difereniere.
Interaciuni inductive se pot realiza i ntre dou esu-
turi de tip epitelial, un exemplu fiind inducia formrii
cristalinului de ctre epiteliul depresiunii (cupei) op-
tice. Dei inducia este declanat de un semnal iniial
emis de inductor ctre respondent, comunicarea
bidirecional ntre cele dou tipuri de esuturi sau
celule este esenial pentru continuarea diferenierii
(Fig. 1.7, sgeile).
Comunicarea intercelular
Comunicrile intercelulare sunt eseniale pentru in-
ducie, pentru elaborarea rspunsului esutului com-
petent i pentru interaciunea dintre celulele induc-
toare i celulele respondente. Aceste "linii de comuni-
caie" au ca substrat interaciuni paracrine (prin care
proteinele sintetizate de o celul difuzeaz pe distane
scurte i interacioneaz cu alte celule) sau interaci-
uni juxtacrine (care nu implic proteine difuzive).
Proteinele difuzive responsabile pentru semnalizarea
paracrin sunt denumite factori paracrini sau fac-
tori de cretere i difereniere (GDF). Exist nu-
meroi GDF, ns majoritatea sunt grupai n patru
familii, iar membrii aceleiai familii sunt utilizai n
mod repetat pentru reglarea dezvoltrii i a
diferenierii sistemelor de organe. Mai mult, aceiai
GDF regleaz dezvoltarea organelor n tot regnul ani-
mal, de la Drosophila la om. Cele patru familii de
GDF sunt familia factorului de cretere a fi-
broblatilor (FGF), familia WNT, familia hedgehog
i familia factorului de transformare a creterii.
Familia FGF
Au fost identificate 24 de gene pentru FGF, iar infor-
maia pe care o conin este folosit pentru sinteza a
sute de proteine izoforme prin excizia alternativ a in-
tronilor sau prin modificarea codonilor iniiatori.
Proteinele FGF sintetizate pe baza informaiilor
coninute de aceste gene activeaz un grup de recep-
tori cu funcie tirozin-kinazic denumii receptorii
pentru factorii de cretere a fibroblatilor (FGFR).
La rndul lor, aceti receptori activeaz diverse ci de
semnalizare. FGF sunt deosebit de importani n
cadrul proceselor de angiogenez, de cretere axonal
i de difereniere a mezodermului. Cu toate c n
aceast familie exist un grad de redundan, astfel
nct un anumit FGF l poate nlocui pe altul n unele
situaii, fiecare molecul de FGF pare a fi
responsabil pentru producerea unor evenimente
specifice ale procesului de dezvoltare. De exemplu,
FGF8 este important pentru dezvoltarea membrelor i
a structurilor cerebrale.
Proteinele hedgehog
Exist trei gene hedgehog: Desert, Indian i sonic
hedgehog. Tipul sonic hedgehog are rol n numeroase
etape ale dezvoltrii, care includ formarea
primordiilor membrelor, inducia tubului neural i
dezvoltarea acestuia, diferenierea somitelor, seg-
mentarea intestinului i altele. Receptorul pentru pro-
teinele din familia hedgehog este denumit Patched,
iar acesta se leag de o protein denumit
Smoothened. Proteina Smoothened realizeaz trans-
ducia semnalului hedgehog, ns este inhibat de
Patched pn n momentul n care o protein hedge-
hog se ataeaz de acest receptor. Aadar, rolul fac-
torului paracrin hedgehog n acest exemplu este de a
se ataa de receptorul su specific pentru a opri in-
hibiia unei molecule transductor care n caz contrar ar
fi activ i nu de a activa n mod direct aceast mole-
cul.
Proteinele WNT
Exist cel puin 15 tipuri diferite de proteine WNT,
care au rol n procesele dezvoltrii. Receptorii aces-
tora sunt membrii unei familii de proteine ondulate.
Proteinele WNT sunt implicate n reglarea formrii
primordiilor membrelor, n dezvoltarea mezencefalu-
lui i n controlul anumitor aspecte ale diferenierii
urogenitale i a somitelor.
Superfamilia TGF
Superfamilia TGF cuprinde peste 30 de membri i
include factorul s de transformare a creterii,
proteinele morfogenetice osoase (BMP), familia
activinei, factorul inhibitor mllerian (MIF, hor-
monul anti-mllerian) i altele. Membrii superfami-
liei TGF dein roluri importante n cadrul proceselor
de formare a matricei extracelulare i de ramificare
epitelial care se produce n timpul dezvoltrii
plmnilor, rinichilor i a glandelor salivare.
Proteinele din familia BMP induc formarea oaselor i
au roluri multiple, printre care reglarea diviziunii
celulare, a morii celulare (apoptoza) i a migrrii
celulare.
Cile de transducie a semnalelor
Factori paracrini
Factorii paracrini acioneaz prin intermediul cilor
de transducie a semnalului, activnd n mod direct
o astfel de cale sau blocnd activitatea unui factor in-
0865_ch1.qxd 22.08.2007 13:34 Page 9

Capitolul 1 | Embriologie: Frontiere vechi i noi; introducere n mecanismele moleculare de reglare i semnalizare 9

hibitor al cii respective (inhibiia inhibitorului, situ-
aie ntlnit n cazul semnalizrii cu ajutorul pro-
teinelor hedgehog). Cile de transducie a semnalului
includ o molecul semnal (ligandul) i un receptor
(Fig. 1.8). Receptorul strbate membrana celular i
are un domeniu extracelular (regiunea de ataare a
ligandului), un domeniu transmembranar i un
domeniu citoplasmatic. Prin ataarea de un receptor,
ligandul induce o modificare conformaional a struc-
turii receptorului, cu activarea consecutiv a domeni-
ului citoplasmatic. De obicei, n urma acestei activri
receptorul dobndete activitate enzimatic, iar de
cele mai multe ori este vorba de activitate protein-ki-
nazic, astfel nct receptorul poate fosforila alte pro-
teine utiliznd ATP ca donor de grupri fosfat.
Fosforilarea activeaz aceste proteine, care la rndul
lor fosforileaz alte proteine, astfel nct se formeaz
o cascad de interaciuni proteice care n final con-
duce la activarea unui factor de transcripie.
Factorul de transcripie activeaz sau inhib expresia
anumitor gene. Cile de transmitere a semnalelor sunt
foarte numeroase i complexe, iar n anumite situaii
se caracterizeaz prin faptul c o protein inhib o alt
protein care la rndul ei activeaz o a treia molecul
proteic (situaie similar cu cea ntlnit n cazul
semnalizrii prin intermediul proteinelor hedgehog).
Comunicarea juxtacrin
Substratul comunicrii juxtacrine este reprezentat
de asemenea de ci de transducie a semnalelor, ns
nu implic utilizarea unor factori difuzivi. n schimb,
exist trei modaliti de realizare a acestui tip de co-
municare: (1) O protein localizat pe suprafaa unei
celule interacioneaz cu un receptor situat pe
suprafaa unei celule adiacente, ntr-o manier
analog cu cea ntlnit n cazul comunicrii
paracrine (Fig. 1.8). Calea Notch reprezint un
exemplu al acestui tip de comunicare. Proteina recep-
tor Notch traverseaz membrana celular i se leag
de celulele a cror membran conine proteine Delta,
Serrate sau Jagged. Interaciunea ntre una dintre
aceste proteine i Notch induce o modificare confor-
maional a proteinei Notch, astfel nct o parte din
segmentul citoplasmatic al acestei proteine receptor
este clivat. Poriunea clivat se ataeaz apoi de un
factor de transcripie i activeaz expresia anumitor
gene. Comunicarea mediat de proteina Notch este
deosebit de important n cadrul proceselor de
difereniere neuronal, de formare a diferitelor tipuri
de vase sanguine i de segmentare a somitelor. (2)
Una dintre celule secret n matricea extracelular
substane cu rol de liganzi, care interacioneaz cu re-
ceptori specifici prezeni la nivelul celulelor din
vecintate. Matricea extracelular reprezint mediul
n care exist celulele. Acest mediu este alctuit din
molecule de dimensiuni mari secretate de ctre celule,
care includ diverse tipuri de colagen, proteoglicani
(condroitin-sulfai, acid hialuronic i alii) i glico-
proteine, cum ar fi fibronectina i laminina. Aceste
molecule formeaz un substrat de care celulele se pot
ataa i pe care acestea pot migra. De exemplu,
laminina i colagenul de tip IV reprezint componente
ale laminei bazale care au rolul de a media ataarea
celulelor epiteliale, iar moleculele de fibronectin
formeaz structuri pe care se poate realiza migraia
celular. Receptorii care realizeaz legtura ntre
moleculele extracelulare - cum sunt fibronectina i
laminina - i celule sunt denumii integrine. Aceti
receptori "integreaz" moleculele matricei extracelu-
lare i moleculele care intr n componena
citoscheletului celular, de exemplu microfila-
mentele de actin, astfel nct confer celulelor ca-

Ligand
Receptor
Membran celular

P P Regiune
P P activat (fosforilat)

Pori P Protein activat

nucleari Citoplasm

P
Complex proteic
activat

P Complexul proteic
activat acioneaz
ca factor de transcripie
Nucleu

Figura 1.8 Schem a unei ci tipice de transducie a semnalului, care are ca substrat un ligand i receptorul su
specific. Receptorul este activat consecutiv atarii ligandului. n mod tipic, n urma activrii receptorul dobndete
activitate enzimatic tirozin-kinazic, dei n unele situaii aceast activitate poate fi de alt tip. Activitatea kinazic
declaneaz fosforilarea n cascad a numeroase alte proteine, iar n final este activat un factor de transcripie care
regleaz expresia anumitor gene.
0865_ch1.qxd 22.08.2007 13:34 Page 10
10 Partea nti | Embriologie general
pacitatea de a migra de-a lungul structurilor din ma-
tricea extracelular prin utilizarea unor proteine con-
tractile, cum ar fi actina. De asemenea, integrinele
pot induce expresia anumitor gene i pot regla
diferenierea celular, aa cum este cazul con-
drocitelor, care trebuie s fie ataate de matricea ex-
tracelular pentru a putea forma esut cartilaginos. (3)
Exist i o cale direct de transmitere a semnalelor de
la o celul la alta, prin intermediul jonciunilor gap
(de comunicare). Aceste jonciuni cu structur
canalicular sunt dispuse ntre celule i permit tre-
cerea unor molecule mici i a ionilor. Comunicarea pe
aceast cale este important n cazul celulelor aflate n
strns vecintate, cum sunt celulele epiteliale de la
nivelul intestinului i al tubului neural, deoarece per-
mite acestor celule s acioneze simultan. Fiecare ast-
fel de jonciune este format din proteine denumite
conexine, care sunt dispuse astfel nct formeaz
canale transmembranare, iar jonciunea ia natere prin
alinierea acestor canale ce aparin unor celule adia-
cente.
Este important de reinut c procesul trans-
duciei unui semnal se caracterizeaz printr-un grad
nalt de redundan. Datorit acestui fapt, pierderea
funciei unei proteine-semnal, consecutiv unei mu-
taii genetice, nu conduce ntotdeauna la apariia de
anomalii ale procesului de dezvoltare sau la deces,
deoarece poate fi compensat prin aciunile altor
membri din aceeai familie. De asemenea, exist in-
teraciuni strnse ntre diferitele ci de transducie a
semnalelor. Aceste interaciuni dau natere la nu-
meroase puncte de control la nivelul crora trans-
ducia semnalelor poate fi reglat.
REZUMAT
Pe parcursul ultimului secol, embriologia a
progresat de la o tiin pur observaional la
o tiin care implic utilizarea unor metode
tehnologice i moleculare sofisticate. Utilizate mpre-
un, observaiile i tehnicile moderne conduc spre
nelegerea mai clar a originilor proceselor normale
i anormale ale dezvoltrii i totodat sugereaz
modaliti profilactice i terapeutice care pot fi uti-
lizate pentru a preveni i trata malformaiile congeni-
tale. n aceast privin, cunotinele despre funciile ataeaz ligandul specific. Activarea induce de cele
genelor au determinat crearea unor metode complet
noi de abordare a subiectului.
n genomul uman exist aproximativ
35.000 de gene, ns aceste gene codific aproximativ
100.000 de proteine. Genele sunt coninute ntr-un
complex de ADN i proteine denumit cromatin, a
crui unitate structural elementar este nucleo-
zomul. Cromatina are aspectul unui irag (ADN-ul)
de mrgele (nucleozomii), strns mpachetat, iar acest
tip de organizare poart denumirea de
heterocromatin. Pentru a se realiza transcripia,
ADN-ul trebuie s fie despachetat din nucleozomi, iar
cromatina cu noua structur este denumit
eucromatin. Genele sunt localizate n catenele de
ADN i conin regiuni care sunt translatate n pro-
teine, denumite exoni, i regiuni care nu sunt trans-
latate, denumite introni. Din structura unei gene
tipice mai fac parte o regiune promotor, la nivelul
creia se leag ARN-polimeraza pentru a iniia tran-
scripia; un situs de iniiere a transcripiei, care
conine informaia referitoare la primul aminoacid din
lanul proteic; un codon de terminare a translaiei;
i un segment 3' care nu este translatat i care in-
clude o secven (situsul de poliadenilare) ce con-
tribuie la stabilizarea moleculei de ARNm. ARN
polimeraza se ataeaz la nivelul unui segment al
regiunii promotor care de obicei conine secvena
TATA, segment denumit cutia TATA. Procesul de
ataare necesit prezena unor proteine suplimentare
denumite factori de transcripie.
Pornind de la informaia coninut ntr-o
singur gen, uneori pot fi sintetizate mai multe pro-
teine diferite prin procesul de excizie alternativ a
intronilor, n urma cruia spliceozomii ndeprteaz
selectiv anumii introni. Proteinele sintetizate astfel
sunt denumite izoforme de splicing sau variante de
splicing. Structura proteinelor poate fi schimbat i
prin modificri posttranslaionale, cum ar fi fosfori-
larea sau scindarea.
Inducia reprezint procesul prin care un
grup de celule sau esuturi (inductorul) determin
modificarea evoluiei unui alt grup de celule sau esu-
turi (respondentul). Capacitatea de a rspunde la
semnalul emis de inductor este denumit compe-
ten, iar aceasta este determinat de ctre un factor
de competen. Numeroase fenomene de inducie au
la baz interaciuni epitelio-mezenchimale.
Comunicrile intercelulare se pot realiza
prin mijloace paracrine, care implic factori di-
fuzivi, sau juxtacrine, care implic diferii factori
non-difuzivi. Proteinele responsabile pentru comuni-
carea prin mijloace paracrine sunt denumite factori
paracrini sau factori de cretere i difereniere
(GDF). Exist patru familii principale de GDF: fa-
milia factorilor de cretere a fibroblatilor (FGF),
familia proteinelor WNT, familia proteinelor
hedgehog i familia factorului s de transformare
a creterii (TGFs). Comunicarea prin mijloace jux-
tacrine se realizeaz cu ajutorul unor produi de la
nivelul matricei extracelulare, al unor liganzi care se
ataeaz de receptorii de pe suprafeele celulare i al
comunicrilor intercelulare directe.
Cile de transducie a semnalelor includ
fiecare o molecul semnal (ligandul) i un receptor.
De obicei, receptorul strbate integral membrana
celular i este activat atunci cnd la nivelul su se
mai multe ori capacitatea de a fosforila alte proteine,
cel mai frecvent prin dobndirea unei activiti
kinazice. Ca urmare, este declanat o cascad de
aciuni enzimatice, care n final conduce la activarea
unui factor de transcripie specific, urmat de expresia
anumitor gene.
PROBLEME
1. n condiii normale, FGF i receptorii lor specifici
(FGFR) sunt responsabili pentru dezvoltarea cra-
niului i a suturilor craniene. Cum pot fi ntre-
rupte cile de comunicare implicate n aceste pro-
cese ale dezvoltrii? Substratul acestor ci de
transmitere a semnalelor este de tip paracrin sau
juxtacrin? Putei exemplifica o situaie n care
atunci cnd expresia unei anumite gene din fa-
milia FGF este ntrerupt, consecinele negative
pot fi absente?