Portada

Centro de Bachillerato Tecnologico Industrial y de Servicios No. 134

"Nicolas Catalan"

Materia: Procesar Tecnicas Bacteriologicas Basicas (PTBB)

Profesor: Martin Castulo Acosta

Equipo: Aguayo Basilo Eduardo Isaid

Bello Rendon Edgar Alain
Damian Flores Zhaid Alejandro
De la Cruz Piedra Alberto
Montiel Manuel

Grado: 3 semestre Grupo: D

Especialidad: Laboratorista Clinico

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Practica 5
Practica N 5
CONOCIMIENTO Y USO DEL MICROSCOPIO

Objetivo general:
Que el alumno aprenda a manejar correctamente el microscopio, y conocer su utilidad en el laboratorio.

Objetivos particulares:
1. Enfocar correctamente cualquier muestra que se coloque en el microscopio
2. Aprender a mantener en buen estado un microscopio
3. Establecer qu clase de muestras se pueden colocar en el microscopio

INTRODUCCION
El microscopio simple utilizado por Anton Van Leeuwenhoeek en el siglo XVII tena una sola lente y era
similar a una lupa pero Van Leeuwenhoeek era el mejor tallador de lentes del mudo de su tiempo. Tallaba sus
lentes con tanta precisin que una lente solo poda aumentar un microbio 300x y gracias a sus microscopios
simples fue la primera persona que pudo ver las bacterias.
Los contemporneos de Leeuwenhoeek, como Hooke construyeron microscopios compuestos, con mltiples
lentes, de hecho se le adjudica al ptico holands Zacharias Janssen la construccin del primer microscopio
compuesto alrededor de 1600. Sin embargo estos primeros microscopios compuestos eran de baja calidad y
no podan utilizarse para observar bacterias. Recin en 1830 Joseph Jackson Lister (el padre de Joseph Lister)
construyo un microscopio de una calidad mucho mayor .Varias mejoras del microscopio de Lister dieron
como resultado el desarrollo del microscopio compuesto moderno, que es el tipo utilizado en la actualidad en
los laboratorio de microbiologa. Los estudios microscpicos de muestras de materia viva han revelado
interacciones espectaculares entre los microbios.
El termino microscopia ptica se refiere al empleo de cualquier clase de microscopios que utilice la luz visible
para observar las muestras.
La microscopia es el mtodo que se utiliza con mayor frecuencia tanto para la deteccin directa
microorganismos en las muestras mdicas como para la caracterizacin de los microorganismos que crecen en
los cultivos.
La microscopia se define como el empleo de un microscopio para aumentar de tamao (es decir un
agrandamiento visual) objetos demasiados pequeos para ser observados a simple vista con el propsito de
que puedan verse con facilidad sus caractersticas. Dado que la mayora de los agentes infecciosos no pueden
detectarse a simple vista, la microscopia desempea un papel importante en el laboratorio. Los microscopios y
los diferentes mtodos de observacin microscpica son varios pero aqu solo se describirn los ms
utilizados en el diagnostico microbiolgico. Los tipos de microorganismos que se van a detectar, identificar y
caracterizar determinan los tipos de microscopia que es ms apropiada emplear.
Los cuatro tipos de microscopias ms utilizadas en el diagnostico microbiolgica son:
Microscopia de campo claro (conocida tambin como microscopia de luz u ptica),
Microscopia de fluorescencia, Microscopia de campo obscuro y la Microscopia electrnica.
1. Estructura y manejo del microscopio ptico
Las partes esenciales que componen un microscopio ptico son:
Parte mecnica
Pie o soporte:
Sirve como base al microscopio y en l se encuentra la fuente de iluminacin.
Platina:
Superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se encuentra un orificio
que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema de pinza o similar, para sujetar
el portaobjetos con la preparacin, y unas escalas que ayudan a conocer qu parte de la
muestra se est observando. La platina presenta 2 tornillos, generalmente situados en la
parte inferior de la misma, que permiten desplazar la preparacin sobre la platina, en sentido
longitudinal y transversal respectivamente.
Tubo:
Cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte de oculares y
objetivos.
Revlver porta objetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.
Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomar el microscopio para
trasladarlo de lugar.
Tornillo macromtrico o de enfoque grosero:
Sirve para obtener un primer enfoque de la muestra al utilizarse el objetivo de menor
aumento. Desplaza la platina verticalmente de forma perceptible.
Tornillo micromtrico o de enfoque fino:
Sirve para un enfoque preciso de la muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el
macromtrico. Tambin desplaza verticalmente la platina, pero de forma prcticamente
imperceptible. Es el nico tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer
enfoque, al ir cambiando a objetivos de mayor aumento.
Parte ptica
Oculares:
Son los sistemas de lentes ms cercanos al ojo del observador, situados en la parte superior
del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes convergentes cuyo aumento se
resea en la parte superior de los mismos (normalmente 10X en los microscopios que se
utilizarn en esta prctica). Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios
pueden se mono o binoculares.
Objetivos:
Son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del tubo, mediante
el revlver. En esta estructura se pueden acoplar varios objetivos (ordenados de forma
creciente segn sus aumentos, en el sentido de las agujas el reloj). Un anillo coloreado es
distintivo de los aumentos de cada objetivo, que tambin van reseados en el lateral del
mismo. Algunos objetivos no enfocan bien la preparacin al aire, y se deben de utilizar con
un aceite de inmersin (normalmente van marcados con un anillo rojo). Estos objetivos de
inmersin no se utilizarn normalmente en estas prcticas.
Condensador:
Sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los concentra sobre la
preparacin, de manera que proporciona mayor o menos contraste. Se regula en altura
mediante un tornillo (letra J de la figura).
Fuente de iluminacin:
En los microscopios a utilizar, el aparato de iluminacin est constituido por una lmpara
halgena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del microscopio. La luz procedente de la
bombilla pasa por un reflector que enva los rayos luminosos hacia la platina.
Diafragma o iris:
Sobre el reflector de la fuente de iluminacin. Abrindolo o cerrndolo permite graduar la
intensidad de la luz.
Transformador:
Ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es necesario para enchufar el
microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en el pie del microscopio. Adems, el transformador
dispone de un potencimetro para regular la intensidad de la luz.
Montaje y enfoque de una preparacin microscpica
Antes de observar la preparacin al microscopio, esta debe de ser montada sobre vidrio.
Para ello existen dos piezas de vidrio denominadas portaobjetos (porta), que, como su
nombre indica, es el soporte sobre el que va la muestra, y cubreobjetos (cubre) que siempre
ha de colocarse sobre la muestra. Una vez colocada la muestra en el porta, se debe aadir
una gota de agua, o de la solucin acuosa pertinente, antes de colocar el cubre, para evitar
interfaces agua-aire, que provocan zonas ciegas.
Para enfocar la preparacin se ha de seguir de forma minuciosa el protocolo descrito debajo
de la figura.(DESARROLLO)
Consejos prcticos
1) En los microscopios que requieren transformador, el enchufe a la red y desenchufe
debe hacerse sobre el transformador, y nunca debe desenchufarse el microscopio del
transformador.
2) Se debe mantener apagada la luz del microscopio siempre que no se est utilizando,
ya que la vida media de la bombilla es corta.
3) Siempre se debe comenzar el enfoque con el objetivo de menor aumento.
4) Anotar siempre el nmero de aumentos con el que se observa la preparacin. Para
calcularlo basta multiplicar el nmero de aumentos del objetivo por el de los oculares.
Hacer esquemas y dibujos de lo observado con cada aumento.
5) Salvo que se indique lo contrario no utilizar nunca el objetivo de inmersin, ya que se
requiere un aceite especial sin el que, adems de no enfocar bien, existe una gran
probabilidad de daar la lente al rozar con el cubreobjetos.
6) Una vez enfocada, procurar recorrer, con los tornillos de la platina, toda la
preparacin. El microscopio, adems de una gran herramienta en biologa, es un gran
juguete para disfrutar de l descubriendo el apasionante mundo de lo pequeo, para
ello, hay que rastrear todo este mundo.
El Microscopio ptico:
(A) Oculares
(B) Revolver
(C) Objetivos
(D) Platina
(E) Tornillos Para Desplazar La Preparacin Sobre
La Platina En Sentido Longitudinal Y Transversal
(F) Condensador
(G) Tornillo Macro mtrico
(H) Tornillo Micromtrico
( I ) Diafragma Iris
(J) Tornillo Para Regular La Altura Del Condensador
(K) Interruptor
(L) Regulador De La Intensidad De Luz
(M) Pinzas Para Ajustar La
(N) Preparacin Sobre La Platina
Pie O Soporte
Material:
- Muestra de heces fecales
- Agua estancada
- Microscopio
- Porta objetos cubre objetos
- Franela
- Pipeta Pasteur
- Lugol
Desarrollo:
Enfoque Del Microscopio
Los pasos a seguir para la perfecta utilizacin del microscopio son las siguientes:
a) Enchufar el microscopio al transformador y ste a la red.
b) Colocar la preparacin sobre la platina de forma que la estructura a observar quede en
el orificio central de la platina.
c) Poner el objetivo de menor aumento cuyo amplio campo visual facilita el hallazgo de
estructuras importantes.
d) Subir la pletina accionando el tornillo micromtrico y mirando la preparacin desde
fuera hasta alcanzar el tope superior. En ningn caso tocar la preparacin con los
objetivos.
e) Mirando por los oculares, bajar lentamente la platina con el tornillo macro mtrico
hasta conseguir ver el objeto lo ms ntido posible.
f) Ajustar el enfoque con el tornillo micromtrico hasta verlo claramente.
g) Para observar la preparacin a mayores aumentos cambiar de objetivo con un simple
giro del revlver. Las pequeas variaciones que se observan en el enfoque se
producen al cambiar de objetivo y se corrigen con el micro.
h) Para observar otros campos, desplazar la preparacin moviendo los tornillos de la
platina.
Para cambiar la preparacin:
Bajar la platina.
Colocar el objetivo de menor aumento
Quitar la preparacin y colocar la siguiente
Para desconectar el microscopio, adems de los tres pasos anteriores se realiza lo
siguiente:
Apagar y desenchufar el transformador de la red
Tapar el microscopio con su funda
SEGUNDA PARTE
ACTIVIDAD EXPERIMENTAL:-
En el desarrollo de esta actividad se utilizaran 2 tipos de preparaciones:
a) Preparaciones frescas o hmedas
b) Preparaciones fijas
Las primeras se realizan unos minutos antes de su observacin y se pueden utilizar
una gran diversidad de materiales como. Tejidos vegetales y animales, eritrocitos,
bacterias etc., pero existe un inconveniente este tipo de preparaciones no podemos
guardarla por mucho tiempo.
Una preparacin fija se puede guardar por un tiempo indefinido, para prepararla
podemos utilizar el material a observar (pueden ser esporas, clulas,
microorganismos, cortes de tejidos etc.), al cual se le agrega resina sinttica, cera o
blsamo de Canad y finalmente se le coloca un cubreobjetos. Al hacer la fijacin se
debe evitar que queden burbujas de aire en la preparacin porque distorsiona la
imagen
MATERIAL Y EQUIPO
MUESTRAS
Microscopio compuesto Cultivos bacterianos y de hongos
Portaobjetos 1 cabello claro y 1 cabello oscuro
Cubreobjetos Agua estancada
1 frasco gotero 1 hoja vegetal
Papel absorbente Preparaciones fijas
Pinzas de diseccin 1 muestra pequea de tejido muscular de pollo
Agujas de diseccin 1 insecto pequeo (zancudo, piojo, pulga etc.)
Una caja de petri desechable Aceite de inmersin
Colorantes(opcional)
Manual de Practicas
Procesar Tcnicas Bacteriolgicas Bsicas Pgina 37
Desarrollo
I.-Preparaciones hmedas o frescas:
Realiza un montaje hmedo con muestras de cultivos bacterianos y de hongos por
separado de la siguiente manera:
De las cajas que contiene los cultivos, tomar una pequea muestra y colocarla sobre
un portaobjetos, agregar una gota de colorante y diluir la muestra de cultivo con ayuda
de una aguja de diseccin, colocar un cubreobjetos y observa al microscopio.
Enfoca el microscopio como se menciono anteriormente y realiza las observaciones
correspondientes.
Elabora un esquema de cada una de las observaciones, anota en la parte inferior en
nmero de aumentos con los que observaste (10X y 40X) que corresponden al
enfoque realizado.
Realiza las preparaciones en fresco del insecto, tejido vegetal, tejido animal, cabellos
y agua estancada siguiendo el procedimiento realizado anteriormente.
Anota tus observaciones y dibujos correspondientes.
Preparaciones fijas
Realiza las observaciones de las preparaciones fijas que te proporciones el profesor,
con el objetivo 10X, 40X y 100X (en este objetivo agregaremos una gota de aceite de
inmersin a la preparacin para observarla).
Anota las observaciones y dibuja.
RUTA DE TRABAJO
RESULTADOS:
Dibujos de cada una de las preparaciones, en fresco y fijas, con los aumentos
utilizados.
DISCUSION:
CONCLUSION:
BIBLIOGRAFIA

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Practica 6
Practica N 6
ELABORACIN DE MEDIOS DE CULTIVO PARA SEMBRADO MICROBIOLGICO

Objetivo General.-
Aprender a elaborar correctamente medios de cultivo dependiendo del medio que se vaya
a utilizar.
Objetivos Particulares.-
1.- Establecer las medidas de seguridad para elaborar un medio de cultivo
2.- Conocer las cantidades de medio que se utiliza segn lo que se vaya a utilizar
3.- Conocer que medio se utiliza para reconocer cada tipo de bacteria
INTRODUCCION
Un medio de cultivo es un sustrato o solucin de nutrientes en los que crecen y se
multiplican los microorganismos.
Los medios de cultivo son necesarios para cultivar a los microorganismos en el
laboratorio y realizar procedimientos especializados como identificacin de distintos
microorganismos como lo son las bacterias, anlisis de agua y aislamiento de
microorganismos particulares.
Existen diferentes medios para lograr estos anlisis y otros.
Composicin de un medio de cultivo:
Agar.
El agar es un agente solidificado porque una vez que se funde con agua.
Polmero sulfatado compuesto principalmente de D galactosa, 3-6 anhidrido L,
galactosa y acido D. Que es un polisacrido y que se obtiene de ciertas algas marinas.
El agar es un buen agente solidificarte porque no se funde con agua hirviendo, puede
enfriarse hasta una temperatura de 40 C sin endurecerse.
Peptonas.
Son mezclas complejas de compuestos orgnicos nitrogenados y sales minerales que
se obtienen por digestin enzimtico o qumico de protena animales o vegetales. Las
peptonas son muy ricas en pptido y aminocidos pero pueden ser diferentes en
determinadas vitaminas y sales.
Extractos.
Para su preparacin ciertos rganos o tejidos son extrados con agua y alcohol y
posteriormente concentrados hasta la forma final de pasto o polvo.
Fluidos corporales.
Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguneo son frecuentemente
aadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patgenos. La sangre no
puede ser esterilizada y debe por tanto, ser obtenida en condiciones aspticas
directamente de un animal sano.
Sistemas amortiguadores.
Algunos componentes son incorporados a los medios de cultivo para mantener y sales
como fosfato disdico o dipotsico o sustancias como las peptonas previenen una
desviacin del pH.
Indicadores de pH.
Los indicadores de pH son incorporados en algunos medios de cultivo y dan evidencia
visual de los cambios de pH que ocurren.
Agentes reductores.
Cisterinas, tioglicolato y otros que se aaden a los medios de cultivo para crear
condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerfilos y anaerobios.
Agentes selectivos.
La adicin de determinadas sustancias al medio de cultivo puede convertirlo en
selectivo, a la concentracin adecuada actan como medios selectivos frente a
determinados microorganismos.
Material:
1 paquete de cajas de Petri sin divisin
1 paquete de cajas de Petri con 2 divisiones
1 paquete de cajas de Petri con 3 divisiones
Medios de cultivo
Mechero
Autoclave
Balanza granataria
1 franela
Encendedor o cerrillos
Agar
Algodn
Papel destraza
Bata de laboratorio
Gasas
Tijeras
PROCEDIMIENTO:
1. Preparar el nmero de cajas que se le indique para cada medio de cultivo.
2. Consultar el manual de medios de cultivo o el instructivo que viene en el reverso del
frasco de cada medio de cultivo.
3. Los medios de cultivo a preparar son los siguientes:
Agar sal y manitol o agar 110
Eosina y azul de metileno.
Agar soya tripticaseina.
Agar de Mar Conkey.
Agar Mueller Hinton.
Agar salmonella sigella
Agar verde brillante
Agar biggy
RUTA DE TRABAJO:
RESULTADOS:
Realizar los dibujos, procedimiento, composicin y clculos realizados de cada uno de los
medios elaborados:
Agar sal y manitol o agar 110
Eosina y azul de metileno.
Agar soya tripticaseina.
Agar de Mar Conkey.
Agar Mueller Hinton.
Agar salmonella sigella
Agar verde brillante
Agar biggy
DISCUSIN.
CONCLUSIN.
BIBLIOGRAFAS.
CUESTIONARIO

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Practica 7
Prtica No. 7

TCNICAS DE SEMBRADO MICROBIOLGICO

Objetivo general
Que el alumno aprenda a realizar correctamente las tcnicas de sembrado que se
utilizan con ms frecuencia en microbiologa.
Objetivos particulares.
1.- Realizar correctamente las estras masivas en un medio de cultivo
2.- Conocer qu medidas se toman para realizar un buen estriado
3.- Conocer el tipo de estriado segn la caja de petri que se utilice
Introduccin.
Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la
superficie de un medio slido de agar.
Los cultivos de bacterias provenientes de infecciones en diversos sitios corporales se llevan
a cabo mediante la siembra de muestras procesadas directamente en los medios
artificiales.los medios de cultivo y las condiciones de incubacin se seleccionan de acuerdo
con su capacidad para favorecer el crecimiento de las bacterias con mas probabilidades de
estar implicadas en el proceso infeccioso.
Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azucares simples hasta
sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar
una especie bacteriana a partir una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se
siembra en un medio de cultivo slido, donde las clulas que se multiplican no cambian de
localizacin tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin
binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a
la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como
cultivo puro de un solo tipo de bacteria.
El estudio organizado de cualquier microorganismo requiere que se examine una especie a
la vez, el mtodo analtico no se puede aplicar cuando se trata de una mezcla de varias
especies a la vez. Uno de los problemas ms frecuentes en microbiologa es el aislamiento
de un cultivo puro de una especie bacteriana dada.
Sin duda la tcnica ms comnmente usada es la de estra cruzada, empleada para lograr un
cultivo puro, mtodo llamado tambin sembrado en estra. El material que se recomienda
para la siembra es un alambre de nicromo o platino en forma recta en forma de asa, un
extremo del alambre se inserta a un mango cilndrico para facilitar su manejo. Esta tcnica
incluye la diseminacin de una azada de material con los microorganismos sobre la
superficie de un medio de agar que se ha solidificado.
El propsito de esta tcnica es diluir el inoculo sobre la superficie del agar como para poder
obtener colonias bacterianas bien aisladas a partir de Unidades Formadoras de Colonias
(UFC). Las colonias aisladas se pueden luego subcultivar individualmente transfirindolas a
otros medios a fin de obtener cultivos puros que pueden ser estudiados.
Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible
diferenciarlas solo con el uso de microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de
bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo
especiales.
En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los
nutrientes del medio es fermentado y se generan catablicos cidos.
Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser
apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado.
Material.
Franela
Masking tape
Marcador indeleble
Encendedor
Asa bacteriolgica de 1 en 100
Hisopos estriles
Abate lenguas
Guantes
Gasas
Cepas bacterianas
Procedimiento
Aislamiento de un cultivo bacteriano en placa por el Mtodo de estra cruzada
1) Desinfectar perfectamente el rea de trabajo con el desinfectante que se utiliza
rutinariamente y en seguida prenda el mechero y espere ente 3-5 minutos para
trabajar dentro del rea de seguridad que proporciona la flama del mechero (no mayor
de 30 cm de dimetro).
2) Realizar el trabajo sentado, cerca del mechero, esterilizar el asa por mtodo de flameo
correspondiente hasta llevar al rojo vivo.
3) Enfriar el asa contando de 20 o 30 segundos o bien en uno de los extremos de la
placa de agar que podr servir como punto inicial cuando se desarrolle la tcnica de
estra cruzada en cada uno de los extremos de la placa.
4) Despus tomar una azada de la muestra (cultivo bacteriano en caja de Petri, en tubo
de ensaye, cultivo bacteriano mixto en caldo o muestra biolgica).
5) A continuacin tomar con la mano izquierda la caja de Petri si es diestro, o con la
derecha si es surdo, de manera que la base de la caja repose sobre la palma de la
mano y la tapa pueda manipularse hacia arriba y hacia abajo con el dedo pulgar y el
dedo medio.
6) Levantar la cubierta de la caja de Petri y colocar en la superficie del agar el inoculo de
lado a lado, trazando 5 lneas paralelas continuas como se muestra en la figura 1.
7) Bajar la cubierta de la caja y flamear el asa de inocular.
8) Hacer girar la caja de Petri un cuarto de vuelta, levantar la cubierta y enfriar el asa de
inocular nuevamente contando de 20 a 30 segundos o bien tocando el agar del medio
de cultivo lejos del conjunto de estras recin hechas.
9) Realizar 5 lneas paralelas continuas de lado a lado tocando la superficie del conjunto
original de estras con el asa de inocular, formado de esta manera el segundo
conjunto de estras (ver figura 2).
10)Bajar la tapa de la caja y repetir los pasos 6, 7,8 y 9), formando el tercer (ver figura 3).
11)Nuevamente bajar la tapar y repetir los pasos del 6 al 10, solamente que para formar
el cuarto grupos de estras estas sern ms amplias y abiertas sin tocar ningn grupo
de estras que ya esta hechas, ver figura 4.
12)Finalmente flamear el asa de inocular.
13)Colocar las cajas de Petri boca abajo y etiqutelas con su nombre, grupo y equipo.
14)Incubar las cajas de Petri a 37 0C durante 24 - 48 horas en la estufa bacteriolgica.
15)Tome fotografas frente al mechero para ver el estriado realizado y anexar a sus resultados.
Tcnica de estra masiva
Con el asa previamente esterilizada, tomar una azada de una muestra y trazar una cruz en la
caja con el medio de cultivo a utilizar, posteriormente esterilizar el asa y estriar en toda la
caja procurando que las estras sean lo ms cercanas una de otra en toda la caja.(este
mtodo se puede realizar con asa o con hisopo), como se muestra en la siguiente figura:

Ruta de trabajo:
Representar con dibujos o tomar fotografas del procedimiento realizado. Anexarlo a tus
resultados
RESULTADOS.
DISCUSIN.
CONCLUSIN.
BIBLIOGRAFA.

Publicado por Alain en 15:04 1 comentario:

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Practica 8
Practica No. 8
SELECCIN DE COLONIAS Y MORFOLOGA COLONIAL DE MICROORGANISMOS

Objetivo general
Que el alumno aprenda a describir la morfologa colonial bacteriana.
Objetivos especficos.
1.- Identificar cada tipo de elevacin de la colonia que se presente
2.- Identificar la morfologa sin que el medio de cultivo se contamine
3.- Conocer la morfologa de bacterias mas comunes
Introduccin.
Una de las caractersticas principales de las bacterias es su apariencia (caractersticas de su
desarrollo) seguida del crecimiento en los diferentes medios de cultivo.
Los microorganismos que crecen sobre la superficie solida, tienden a formar agrupaciones
que se denominan colonias, las colonias suelen ser de caractersticas constantes para el
medio de cultivo usado, la temperatura de incubacin y el microorganismo del que se trate,
por lo que su estudio es de gran utilidad tanto en la clasificacin como en la identificacin.
Una colonia microbiana est constituida por individuos de la misma especie provenientes de
una clula y de un grupo de ellas, llamadas Unidades Formadoras de Colonias (UFC).
Las colonias aisladas se pueden subcultivar individualmente transfirindolas a otros medios
de cultivo a fin de obtener cultivos puros y pueden ser estudiadas en medios diferenciales. Y
la evaluacin de las caractersticas macroscpicas de las colonias se lleva a cabo
usualmente mediante el examen visual del desarrollo en la superficie de las placas de agar.
La inspeccin de los cultivos se lleva a cabo sosteniendo la placa con una mano y
observando la superficie del agar para comprobar la presencia del desarrollo bacteriano. Las
placas de cultivo comunes tienen 100 mm de dimetro y son adecuadas y pueden
sostenerse en una mano. Se debe estudiar con cuidado a cada placa debido a que las
bacterias aisladas inicialmente a partir de la muestra, constituyen a menudo cultivos mixtos y
pueden haber una gran variedad de tipos de colonias.
La evaluacin macroscpica de las colonias se lleva acabo usualmente mediante el examen
visual del desarrollo en la superficie de las placas de agar.
Los tubos que contienen los medios primarios no se utilizan comnmente para evaluar la
morfologa colonial pero una excepcin a esto es el tubo rotatorio con estra utilizado por el
laboratorio, este sistema sirve para el estudio de anaerobios ya que la evaluacin de la
morfologa de las colonias se puede efectuar directamente a travs del vidrio de los tubos sin
exponer los organismos al aire durante el examen.
La interpretacin de cultivos primarios es una habilidad que se debe adquirir trabajando con
un microbilogo, bien capacitado y generalmente se logra dominar solo luego de muchos
aos de experiencia, la inspeccin de los cultivos se lleva acabo sosteniendo la placa con
una mano y observando la superficie de agar puro comprobar el desarrollo bacteriano.
Las caractersticas consideradas para la descripcin de la morfologa colonial de las
bacterias se describen a continuacin:
Trminos utilizados en la caracterizacin colonial
Tamao: Dimetro en mm.
Forma: Puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide, fusiforme.
Elevacin: Plana, elevada, convexa, pulvinada, embonada, umbilicada.
Borde o Margen: Entero, ondulado, lobulado, erosionado o lacerado, filamentoso, rizado.
Color: Blanco, amarillo, negro, marrn, anaranjado, beige, otros.
Superficie: Lisa, rugosa o granular, brillante, opaca.
Densidad: Opaca, translucida, transparente, etc.
Consistencia:
Suave: Butirosa (mantequillosa, grasosa), mucoide o membranosa,
Dura: Quebradiza o friable( que se rompe con facilidad), seca
NOTA: Esta caracterstica se determina tocando la colonia con el asa de siembra o aguja de inocular
por lo tanto debe ser la ltima en describirse.
Luz reflejada: Brillante o mate (que no brilla).
Luz transmitida: Translucida (Transparente) u opaca.
Material.
Bata
Guantes
Cubre bocas
Asa bacteriolgica
Mechero
Cinta testigo
Procedimiento.
1.- Preparar los siguientes medios de cultivo (EMB, Sal y Manitol) de acuerdo al
procedimiento visto en la prctica No 4.
2.-Dejar solidificar los medios y se envuelve en papel estraza y dejar reposar unos das,
antes someterlos a prueba de esterilidad..
3.-Sembrar en la caja que contengan el medio de cultivo EMB se hace por estra
cruzada.
4.-Sembrar en la caja con medio de Sal y Manitol, por estra cruzada.
5.-Se incuban de 24 48 horas.
6.-Identificar las colonias y describir de acuerdo a las siguientes caractersticas:
Tamao, forma, color, superficie, aspecto, consistencia, elevacin, margen, luz traslucida
y luz reflejada. Anotar sus observaciones.
SEGUNDA PARTE:
Trabajo a desarrollar:
Examinar los diferentes cultivos proporcionados, utilizando los diagramas que acompaan a
esta prctica, mencionando las caractersticas correspondientes de cada cultivo bacteriano.
Morfologa colonial:
Describir las colonias aisladas en cada medio de cultivo, indicando las caractersticas
de la morfologa colonial antes descritas.
En su cuaderno de reportes de laboratorio, en la seccin de resultados hacer y llenar
la tabla que muestra a continuacin:

CARACTERISTICAS COLONIA 1 COLONIA 2 COLONIA 3

MICROORGANISMO
MEDIO DE CULTIVO
TAMAO (mm)
FORMA
ELEVACION
BORDE O MARGEN
DENSIDAD
COLOR
SUPERFICIE
ASPECTO
LUZ REFLEJADA
LUZ TRANSMITIDA
CONSISTENCIA

Si identifican otras caractersticas diferentes a las que se mencionaron antes,

anotarlas en la tabla.
INDICACIONES:
La inspeccin de cultivos se llevan a cabo sosteniendo la placa con una mano y
observando la superficie del agar para comprobar la presencia del desarrollo
bacteriano. Se deben estudiar con cuidado cada una de las placas, debido a que las
bacterias aisladas inicialmente a partir de muestras, constituyen a menudo cultivos
mixtos y puede haber una variedad de diferentes tipos de colonias.
Las colonias puntiformes pueden pasar inadvertidas entre las de mayor tamao. Se
debe inclinar la placa en distintas direcciones con iluminacin brillante directa. Se
pueden ayudar con una lupa de mano de gran aumento, para detectar colonias
pequeas, el asa de siembra y la aguja de inoculacin nos ayuda a conocer la
consistencia de las colonias. Siempre reporte el medio de cultivo y el tiempo de
incubacin.
Ruta de trabajo.
Resultados.-
Dibujar la morfologia colonial del crecimiento bacteriano en los siguientes
medios:
1.-EMB
2.-Sal y Manitol
Discusin.
Conclusin.