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Tabla I. Propiedades bioqumicas de las ADN polimerasas en eucariotas 3.1 Replicacin de los
Polimerasa Polimerasa Polimerasa Polimerasa Polimerasa extremos de un cromosoma
Localizacin Nuclear Nuclear Nuclear Nuclear Mitocondrial (telmeros)
Actividad 3-5
exonucleasa No S S No S En el mecanismo anteriormente descri-
Actividad primasa S No No No No to, la necesidad de cebadores impide repli-
Procesividad Baja Alta Alta Baja Alta car los extremos de molculas de ADN
Fidelidad Alta Alta Alta Baja Alta lineales. Inevitablemente, en cada ciclo de
Replicacin S S S No S duplicacin los cromosomas se acortan,
Reparacin No ? S S No producindose prdidas del orden de 50 a
200 pares de bases por divisin celular.
Tabla II. Funciones de las ADN polimerasas implicadas en la replicacin de Para compensar esta prdida existen las
eucariotas estructuras telomricas y la enzima
ADN polimerasa Est involucrada en la iniciacin de la replicacin telomerasa.
Esta enzima est compuesta por cuatro subunidades. Las subunidades 50-KD Los extremos de los cromosomas
y 60-KD tienen actividad primasa (sintetizan cebadores de ARN de 8-10 eucariticos, denominados telmeros, son
nucletidos y luego aade sobre este ARN unos 20 nucletidos de ADN) estructuras altamente especializadas for-
La subunidad de 180-KD posee la actividad polimerasa. Esta enzima tiene
madas por ADN y protenas. El ADN
una baja procesividad de sntesis del ADN (aproximadamente 200
nucletidos) telomrico est constituido por miles de
Carece de actividad 3-5 exonucleasa aunque tiene una alta fidelidad repeticiones en tndem de secuencias cor-
ADN polimerasa Es la principal polimerasa en el proceso la replicacin del ADN tas ricas en guanina. En el caso de los
Tiene actividad exonucleasa 3-5, pero carece de actividad primasa humanos y todos los vertebrados estudia-
Interacciona con PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) consiguiendo dos, la secuencia repetitiva es TTAGGG.
de este modo una alta procesividad La longitud de los telmeros es especfica
ADN Polimerasa Participa en procesos de reparacin aunque su papel no est claro. Puede
de especie y en el caso humano oscila entre
sustituir a la ADN polimerasa en la sntesis de la hebra retrasada
ADN Polimerasa Participa en procesos de reparacin del ADN (no participa en la replicacin) 5 y 15 Kilobases. El nmero exacto de
ADN Polimerasa Replica el ADN mitocondrial repeticiones en tndem vara en funcin
del individuo, el tipo celular y el cromosoma
concreto. El extremo 3 del ADN telomrico
finaliza en una cadena sencilla rica en guaninas denominada G-
La replicacin se inicia en secuencias especficas del ADN, denominadas strand overhang, que en el caso de los humanos tiene una longitud
orgenes de replicacin (ORIs). En estas secuencias de ADN se ensambla de de 130 a 210 nucletidos. Esta estructura es esencial para la
forma secuencial el complejo multiproteico que constituye la maquinaria de estabilidad de los telmeros. La telomerasac es la enzima que
replicacin. En primer lugar, las helicasas rompen los puentes de hidrgeno utilizan la mayora de los organismos eucariotas para el manteni-
contribuyendo a la apertura de la hlice. La protena RPA Replication miento de sus telmeros. Se trata de una ADN polimerasa con
Protein A se une a las cadenas individuales del ADN mantenindolas actividad transcriptasa inversa, que utiliza su componente ARN
separadas. De este modo, se forman las dos horquillas de replicacin, una a como molde para elongar las extensiones 3 de cadena sencilla de
cada lado de la burbuja de replicacin. los extremos cromosmicos, mediante la sntesis de novo de ADN
La hebra conductora se sintetiza de forma continua. En primer lugar, telomrico. Este mecanismo se divide convencionalmente en tres
la ADN polimerasa con actividad primasa sintetiza un cebador de RNA. pasos: reconocimiento del sustrato, elongacin y translocacin
Sobre este cebador de RNA, la ADN polimerasa con actividad polimerasa (figura 2). Tras la actuacin de la telomerasa, la ADN polimerasa
aade unos nucletidos de ADN (creando un cebador de 10 nucletidos de sintetiza la cadena complementaria (3).
RNA + 10-20 nucletidos de ADN). Posteriormente, RFC Replication
Factor C une PCNA Proliferating Cell Nuclear Antigen al final del
4. TRANSCRIPCIN DEL ADN
cebador y PCNA desplaza a la ADN polimerasa . Como ltimo paso, la
ADN polimerasa se une a PCNA en el extremo 3 consiguiendo de este El primer paso de la expresin gnica es la transcripcin,
modo una alta procesividad en la sntesis del ADN. proceso por el cual se sintetiza una molcula de ARN complemen-
La hebra retardada se sintetiza de forma discontinua en fragmentos taria a una de las cadenas del ADN. Los genes pueden estar
cortos de ADN (fragmentos de Okazaki). Al principio comienza de igual orientados tanto en sentido de centrmero a telmero como en el
modo que la hebra conductora, excepto que los cebadores de RNA son inverso, por lo que las dos cadenas de ADN son codificantes. Por
sintetizados por la ADN polimerasa cada 50 nucletidos y consisten en 10 otro lado, hay que tener en cuenta que distintos genes pueden estar
nucletidos de RNA +10-20 nucletidos de ADN. Posteriormente, RFC une parcialmente solapados en la secuencia de ADN, ya sea en la
PCNA al final del cebador y PCNA desplaza a la ADN polimerasa . La misma orientacin o en orientaciones inversas.
ADN Polimerasa se une a PCNA y produce la elongacin de los fragmentos De forma anloga al ADN, el ARN es un polmero lineal de
hasta que hace contacto con el extremo de otro fragmento de Okazaki. RNasa nucletidos unidos por enlaces fosfodister entre carbonos 5 y 3.
H1 elimina todos los nucletidos de RNA del cebador, excepto el ltimo. Y Sin embargo, existen diferencias estructurales importantes. En
es el complejo FEN1/RTH1 exonucleasa el que elimina el ltimo
ribonucletido. La ADN polimerasa rellena con ADN el hueco que se ha
producido al eliminarse el cebador de RNA. Como paso final, la ADN ligasa c
La actividad telomerasa es mxima en clulas pluripotenciales y es indetectable en clulas
une los distintos fragmentos de Okazaki (figura 1). diferenciadas. Uno de los requisitos para la inmortalizacin celular es la reactivacin de la
telomerasa.
primer lugar, el azcar (pentosa) que contiene cada nucletido es 4.1 Etapas de la transcripcin
ribosa en lugar de 2-desoxirribosa. Adems, la base nitrogenada
Iniciacin
timina no est presente, y en su lugar aparece el uracilo. Finalmen-
te, las molculas de ARN son generalmente monocatenarias y de Donde mejor esta caracterizada la bioqumica de este proceso
tamaos muy variables. es en el caso de los promotores de clase II, que son los promotores
Clsicamente, los principales productos de la transcripcin son: dependientes de la ARN polimerasa II, con secuencia consenso
ARN transferente (ARNt) que activa a los aminocidos y los TATAAAA (denominada caja TATA). En estos promotores,
transporta al ribosoma para la sntesis de protenas, ARN ribosmico los complejos de preiniciacin se forman a partir de mltiples
(ARNr) que constituye la mayor parte del ribosoma y, ARN interacciones entre la holoenzima ARN polimerasa II y los
mensajero (ARNm) que codifica la secuencia de los aminocidos denominados general transcription factors (GTFs) TFIIA,-B, -
en las protenas. En la actualidad, esto debe considerarse una D, -E, -F, -H y -J. El proceso de formacin del complejo se
simplificacin de la realidad, ya que cada vez existen ms datos que considera secuencial. Se iniciara con la unin de TFIID al
demuestran la presencia de un nmero elevado de genes que promotor. Una vez unido TFIID al promotor, se incorporan al
codifican ARNs con diferentes actividades biolgicas per se. El complejo de forma secuencial en primer lugar TIIA y B, a
ARNr supone ms del 80% del total de los ARNs. Las molculas continuacin TIIF y la propia ARN polimerasa II y finalmente
de ARNr y ARNt son extremadamente estables, mientras que las TIIE, -H y J. Hay que tener presente que TFIID es en s mismo
de ARNm son degradadas tras su traduccin por la maquinaria de un complejo multiproteico compuesto por la protena TBP (TATA
la sntesis de protenas. binding protein), que se une directamente al ADN, y al menos
La transcripcin de los genes nucleares est catalizada principal- otras 14 protenas conocidas generalmente como TAFs (TBP
mente por tres ARN polimerasas. La ARN polimerasa I transcribe associated factors) (Figura 3) (4), (5).
los numerosos genes que codifican el ARN precursor policistrnico
ARNr. En humanos existen regiones ricas en genes ARNr en los Elongacin
cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22. Cada una de estas regiones Una vez formado el complejo de preiniciacin, el extremo C-
contiene un nmero aproximado de 300 a 400 genes ARNr dispues- terminal de la ARN polimerasa II (dominio CTD) es fosforilado en
tos en tndem. La ARN polimerasa II transcribe todos aquellos numerosos residuos. Esto provoca un cambio conformacional en la
genes cuyos productos sern traducidos en protenas, as como polimerasa, de modo que se libera del complejo de preiniciacin y
varios genes que codifican molculas pequeas de ARN involucradas comienza la sntesis del transcrito primario (figura 4). Existen
en el procesamiento del ARN. La ARN polimerasa III transcribe distintos factores de elongacin que regulan la velocidad de
genes que codifican a varias molculas de ARN pequeo (tabla III). sntesis y la procesividad de la enzima (5).
La transcripcin se inicia en las regiones promotoras
proximalesd. Para poder unirse al ADN, las ARN polimerasas Terminacin
necesitan interaccionar con los factores de transcripcine gene- No se han identificado las secuencias consenso de termina-
rales (tambin llamados basales) y otras numerosas protenas cin de la transcripcin. Se supone que la terminacin depen-
asociadas. Tanto la estructura de los promotores proximales como de de las mismas seales que son responsables del procesa-
los factores de trascripcin generales son especficos para cada miento del extremo 3 del ARN. En el caso de los ARNs
ARN polimerasa. Adems de secuencias promotoras proximales, poliadenilados, las mismas seales que determinan con preci-
existen las denominadas secuencias promotoras distales (que se sin el nucletido donde debe cortarse el ARN y aadirse la
pueden extender cientos de nucletidos en 5 del promotor proximal) cola de poliA son las que dirigen el proceso de terminacin.
y otras secuencias reguladoras (potenciadores/enhancers y silen- Las seales de poliadenilacin estn bien caracterizadas en
ciadores) que pueden localizarse a gran distancia (del orden de humanos. Los elementos esenciales son una secuencia de seis
kilobases) del promotor proximal, tanto en direccin 5 como en nucletidos altamente conservada (AAUAAA) localizada a
direccin 3 (incluyendo regiones intragnicas). La accin coordi- 10-30 nucletidos en 5 del sitio de corte y una secuencia
nada de todos estos elementos regula de manera fina los niveles de menos conservada pero rica en Us o Gs y Us en posicin 3 del
expresin de cada gen (1). sitio de corte (figura 5) (6).
Tabla III. ARN polimerasas que catalizan la transcripcin de los genes en eucariotas
ARN polimerasa Localizacin Copias por clula Tipo de transcritos
ARN polimerasa I nucleolo 40.000 Pre-ARNr 35-47S
ARN polimerasa II nucleoplasma 40.000 hnARN o pre-ARNm
snARN U1, U2, U4, U5
ARN polimerasa III nucleoplasma 20.000 ARNr 5S
ARNt
snARN U6
ARN 7S
Otras molculas de ARN pequeo d
El promotor es una secuencia de ADN que permite
ARN polimerasa mitocondrias ? Genes mitocondriales que un gen sea transcrito, sirve para dar la seal de
comienzo a la RNA polimerasa.
mitocondrial e
Los factores de transcripcin son protenas que
ARN polimerasa cloroplastos ? Genes de los cloroplastos deben unirse al ADN en zonas promotoras para que
de cloroplastos pueda unirse la RNA polimersa.
Figura 9. Es-
tructura secun-
daria en forma de
trbol del ARNt.
Figura 3. Promotor y complejo de preiniciacin de la ARN polimerasa II.
La estructura se-
cundariadelARNt
recuerda a una
hoja de trbol.
Aparecen cuatro
brazos, que con-
tienen empareja-
miento de bases
Figura 4. Componentes de la holoenzima ARN polimerasa II. por enlaces de
hidrgeno del tipo
Watson-Crick, y
cuatro lazos. Los
ARNt constan de
dos partes esen-
ciales: (1) Brazo aceptor que se une covalentemente al aminocido, y (2) Lazo
Figura 5. Representacin esquemtica de las seales de poliadenilacin en anticodn que interacciona con el codn del ARNm. Todos los ARNt tienen la
humanos. secuencia CCA en el extremo 3 y la mayor parte tiene cido guanlico en el
extremo 5, adems contiene bases modificadas. La estructura terciaria del ARNt
tiene forma de L, donde el brazo y el lazo anticodn ocupan los extremos opuestos
de la molcula. Interacciones distintas de las de Watson Crick colaboran en el
establecimiento de la estructura terciaria.