UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

TEMA: ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA

CURSO: INMUNOLOGA CLNICA Y SU INSTRUMENTACIN

DOCENTE: DR. EDGARD ROMERO ESPINOZA

INTEGRANTES: Blgo. MSc WALTER CHVEZ RINON

Blgo VCTOR ELAS CHVEZ MONTENEGRO

Blgo. EISSEN GUERRERO SEMINARIO

CICLO: I

2017
1
 INDICE

INTRODUCCIN 3

QU ES LA ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA? 4

PRINCIPIOS DE LA MEDICIN POR ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA (ECL) 5

REACCION DE ECL EN LA SUPERFICIE DEL ELECTRODO 6

GENERACIN DE LA SEAL DE ECL 8

MECANISMOS GENERALES DE REACCIN 8

POTENCIALIDAD EQL 11

PRINCIPIOS DE LOS TESTS 12

MECANICA DEL EQUIPO 15

IMPORTANCIA DE LA ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA 18

VENTAJAS Y LIMITACIONES 19

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 21

1. INTRODUCCIN

Electroquimioluminiscencia (EQL/ECL) se identific por primera vez en la dcada de 1960 a

travs del uso de rubreno, 9,10 - difenilantraceno (DPA), y compuestos relacionados. Luego, en
los aos setenta, se observ ECL reaccionando electrogenerado con tris-2,2-bipiridil-rutenio (III)
[Ru (bpy) 3] 3+ (donde bpy se refiere a 2,2-bipiridina) con tripropilamina (TPA) para crear un
estado electrnicamente Excitado que emite a aproximadamente 610 nm 1.

2
ECL tiene varias caractersticas atractivas, incluyendo ausencia de una seal ptica de fondo,
control preciso de la cintica de reaccin ofrecida por el control del potencial aplicado,
compatibilidad con formatos de fase de solucin y de pelcula delgada y oportunidades para
intensificar la intensidad con nanomateriales como nanopartculas y nanotubos metlicos 1.

En conjunto, estas caractersticas convierten a ECL en un mtodo analtico altamente sensible y

selectivo. Por ejemplo, las especies generadoras de ECL se han usado ampliamente como
marcadores en molculas biolgicas, permitiendo que se determinen muchos analitos clnicamente
relevantes en concentraciones subpicomolares a travs de aproximaciones convencionales de
ensayo de anticuerpo o cido nucleico. Actualmente, se estn realizando intensas investigaciones
para identificar nuevos luminforos, formaciones cinematogrficas, estudios mecnicos y
aplicaciones analticas 1.

La primera instrumentacin comercial EQL fue producida en 1994 por IGEN International. Hoy
en da, un desarrollo de este instrumento por Roche, llamado Elecsys, se basa en la combinacin
entre la tecnologa de microesferas magnticas, sistema fludico y EQL seal de salida. El
resultado es ser Equipo para EQL ms utilizada para el anlisis clnico. Otro importante
analizador EQL que se centra en el anlisis de multiplexacin, es comercializado por Meso Scale
Discovery. Dropsens recientemente inici la comercializacin de herramientas analticas
prometedoras basadas en ECL para la aplicacin de electrodos de serigrafa 2.

2. QU ES LA ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA?

En la quimioluminiscencia electrogenerada, tambin conocida como electroquimioluminiscencia

(EQL), los productos intermedios generados electroqumicamente experimentan una reaccin
altamente exergnica para producir un estado excitado electrnicamente que emite luz. Estas
reacciones de transferencia de electrones son suficientemente exergnicas para permitir que los
estados excitados de luminforos, incluyendo hidrocarburos aromticos policclicos y complejos

3
metlicos, se creen sin fotoexcitacin. Por ejemplo, la oxidacin de [Ru (bpy) 3] 2+ en presencia
de tripropilamina da como resultado una emisin de luz que es anloga a la emisin producida por
fotoexcitacin 3.

Las reacciones de Electroquimioluminiscencia (ECL), es un proceso en el cual especies generadas

en electrodos se someten a reacciones altamente energticas de transferencia de electrones para
formar estados excitados que emitan luz. La emisin de ECL ocurre en la parte visible del espectro
como consecuencia de una rpida y alta reaccin exoenergtica de transferencia de electrones
entre un electrn donador y otro receptor el cual a su vez resulta en la generacin de estados
excitados 3.

Electroquimioluminiscencia es un fenmeno que consiste en la emisin de luz producida como

resultado de reacciones electroqumicas. Generalmente, los reactivos son generados en uno o ms
electrodos, mediante reacciones de transferencia de electrones con uno o ms reactivos qumicos
en solucin. El proceso origina molculas excitadas y la emisin quimioluminiscente se produce
en zonas muy prximas al electrodo 4.

La primera observacin del fenmeno fue realizada por Bancroft en 1914 .En 1929 Harvey
observa QL en el nodo producida por electrolisis de luminol en medio bsico. Entre 1963-1980 se
incrementa el inters por el fenmeno con especial nfasis en el estudio de mecanismos de las
reacciones, eficiencia de estados excitados, naturaleza del emisor, todos auxiliados por medidas
espectroscpicas. Estos estudios han permitido conocer las propiedades fotoqumicas y
electroqumicas de nuevos compuestos y complejos, estudiar el mecanismo de reacciones
orgnicas en las que se producen como productos intermedios radicales de vida corta 4.

El desarrollo de los inmunoensayos EQL/Origen se basa en el uso de un complejo de

2+
tris(bipiridil)-rutenio(II) [Ru(bpy)] y tripropilamina (TPA). El producto quimioluminiscente
final se forma durante el paso de deteccin 3.

Las reacciones quimioluminiscentes que conducen a la emisin de luz desde el complejo de

rutenio se inician por un proceso elctrico en lugar de qumico. Esto se consigue aplicando un
voltaje a los complejos inmunolgicos (incluido el complejo de rutenio) que estn unidos a
micropartculas recubiertas de estreptavidina. La ventaja de la iniciacin elctrica de la reaccin
quimioluminiscente es que se puede controlar de forma precisa toda la reaccin 4.
4
 3. PRINCIPIOS DE LA MEDICIN POR
ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA (ECL)
Se sabe que ocurren procesos de electroquimioluminiscencia (ECL) con numerosas molculas,
5
incluidos compuestos de rutenio, osmio, renio y otros elementos en donde se generan especies
muy reactivas a partir de precursores estables en la superficie de un electrod, stos productos
intermedios generados electroqumicamente experimentan una reaccin altamente exergnica para
producir un estado excitado electrnicamente que emite luz. Estas reacciones de transferencia de
electrones son suficientemente exergnicas para permitir que los estados excitados de
luminforos, incluyendo hidrocarburos aromticos policclicos y complejos metlicos, se creen sin
2+
fotoexcitacin. Por ejemplo, la oxidacin de [Ru (bpy) 3] en presencia de tripropilamina da
como resultado una emisin de luz que es anloga a la emisin producida por fotoexcitacin 6.
Para el desarrollo de los inmunoensayos ECL, se utiliza un ster N-hidroxisuccinimida (NHS) de
un complejo Ru(bpy)3 modificado porque se puede acoplar fcilmente con los grupos aminos de
protenas, haptenos y cidos nucleicos. Esto permite aplicar la tecnologa de deteccin a una gran
variedad de analitos 4.

Fig 01 : El complejo de rutenio

El origen del desarrollo de la inmunofluorescencia se basa en el uso de un complejo de
2+
tris(bipiridil)-rutenio(II) [Ru(bpy)] y tripropilamina (TPA), los productos intermedio generados
electroqumicamente experimentan una reaccin altamente exergnica para producir un estado
electrnicamente que luego emite luz 5.

Las reacciones quimioluminiscentes que conducen a la emisin de luz desde el complejo de

rutenio se inician por un proceso elctrico en lugar de qumico. Esto se consigue aplicando un
voltaje a los complejos inmunolgicos (incluido el complejo de rutenio) que estn unidos a

5
micropartculas recubiertas de estreptavidina. La ventaja de la iniciacin elctrica de la reaccin
quimioluminiscente es que se puede controlar de forma precisa toda la reaccin.

4. REACCION DE ECL EN LA SUPERFICIE DEL ELECTRODO

En las reacciones que conducen a la emisin de luz participan dos sustancias electroqumicamente
activas: el complejo de rutenio y la tripropilamina (TPA). Ambas sustancias permanecen estables
mientras no se aplique un voltaje. La reaccin ECL del tris(bipiridil)-rutenio 2+ y la TPA tiene lugar
en la superficie del electrodo de platino. El voltaje aplicado crea un campo elctrico que provoca
que reaccionen todos los materiales presentes en el mismo. La TPA se oxida en el electrodo, libera
un electrn y forma un radical-catin de TPA intermedio que a su vez reacciona liberando un
4,8
protn (H+) para formar un radical de TPA (TPAo) . A su vez, el complejo de rutenio tambin
libera un electrn en la superficie del electrodo, oxidndose as para formar el catin Ru(bpy)3
3+.
.Este catin de rutenio es el segundo componente, junto con el radical de TPA, de la reaccin
quimioluminiscente siguiente.

Fig. 02 Deteccin de un complejo inmune marcado con rutenio

3+ 3+
El radical TPAo y el catin Ru(bpy)3 reaccionan entre s, con lo que el Ru(bpy)3 se reduce a
2+
Ru(bpy)3 pasando al mismo tiempo a un estado excitado mediante la transferencia de energa.
Este estado excitado es inestable y decae con la emisin de un fotn de 620 nm hasta el estado
original. El ciclo de reaccin comienza entonces otra vez. El radical de tripropilamina se reduce a
subproductos que no interfieren en el proceso quimioluminiscente. La TPA se consume en el
proceso y, por lo tanto, debe estar presente en exceso. La reaccin est controlada por la difusin
de la TPA y la cantidad de complejo de rutenio presente. Puesto que la TPA presente en el campo
elctrico se agota, la intensidad de la seal (luz) disminuye lentamente tras alcanzarse

6
el mximo 9.

Si bien la TPA se consume durante la medicin, el complejo de rutenio en estado fundamental se

regenera continuamente. Eso significa que el complejo de rutenio puede participar en muchos
ciclos generadores de luz durante el proceso de medicin, lo cual tiene un efecto amplificador
inherente que contribuye a la sensibilidad de la tecnologa. A partir de un complejo antgeno-
anticuerpo, se pueden crear muchos fotones 10.

Fig. 03: Reaccin de la ELC en la superficie del electrodo

5. GENERACIN DE LA SEAL DE ECL

Desde una perspectiva elctrica, la reaccin se puede explicar de la siguiente forma: Cuando se
aplica un voltaje al electrodo de la clula de medicin, se produce un breve pico de emisin de luz
que se puede detectar como la seal de ECL resultante. Se mide entonces un rea definida bajo la
curva en torno al mximo de intensidad 10.

7
 Fig. 04 : Generacin de la seal de ECL

La lnea punteada indica el voltaje en el electrodo utilizado para generar la seal de ECL. La lnea
slida es la emisin de luz real medida por el detector fotomultiplicador 10.

6. MECANISMOS GENERALES DE REACCIN

Existen diversos mecanismos generales de produccin de EQL 11:

Aniquilacin: Supone la reaccin de transferencia electrnica entre iones radicales de
carga opuesta generados en un electrodo por empleo de un potencial pulsado
alternativamente, o mediante dos electrodos prximos, en presencia de una sustancia que
sea emisora de EQL (Fig. 5).

Un ejemplo tpico son los hidrocarburos aromticos policclicos donde se involucran iones
radicales aromticos que pueden pertenecer a uno o dos precursores distintos a travs de
diferentes mecanismos dependiendo de que el sistema sea de energa suficiente o de
energa deficiente.

Fig. 5: Mecanismo de aniquilacin EQL.

8
 Los primeros estudios detallados sobre ECL involucraron reacciones de transferencia
3+
electrnica entre especies oxidadas y reducidas (Ru(bpy)3 y Ru(bpy)3+ ), generadas en
un electrodo de platino, por pulsos alternos de potencial (0,2 Hz), a partir de
disoluciones de Ru(bpy)3 2+ en acetonitrilo. Un mecanismo general de aniquilacin es el
siguiente:
A O + e- (Oxidacin en el electrodo) (1)
B + e- R (Reduccin en el electrodo) (2)
O + R A* + B ( A + B*) (Formacin del estado excitado) (3)
A* ( B*) A ( B) + h (Emisin de luz) (4)

El potencial del electrodo de trabajo oscila rpidamente entre dos valores diferentes para
generar la especies oxidada, O, y reducida, R, (Ecs 1 y 2, respectivamente, donde O y R
podran eventualmente representar especies radicalarias), que reaccionarn en las
proximidades de la superficie del electrodo para formar el estado emisor (Ec 3). En
relacin al complejo de rutenio, A = B y la especie excitada representado por Ru(bpy)3
2+* emite un fotn, h, al decaer a su estado basal. El estado excitado formado en esta
reaccin ECL es similar al que se obtiene en experimentos de fotoluminiscencia (PL). En
PL un electrn es fotoexcitado producindose una transicin por transferencia de carga del
metal al ligando ( *). Si la energa de excitacin no es disipada o transferida, cruce
intersistema puede ocurrir para formar el estado triplete ms bajo del Ru(bpy)3 2+* el cual
emitir. La transicin por transferencia de carga puede ser provocada en ECL si un electrn
es transferido a un orbital * de uno de los ligantes bipyridine.
Ru(bpy)3 2+* puede, entonces, decaer al estado basal produciendo la misma luminiscencia
que en PL.

EQL CON CORREACTANTE: El correactante es una especie que por oxidacin o

reduccin produce un compuesto intermedio que puede reaccionar con un luminforo EQL
como es el complejo tris(2,2-bipiridil)rutenio(II) para producir una especie excitada. Esto
suele ocurrir por ruptura de enlaces de los correactantes que dan lugar a oxidantes o
reductores fuertes (Fig. 6). Una tpica reaccin de este grupo es la que ocurre con el
luminol que sufre una electro oxidacin monoelectrnica a diazaquinona que a
continuacin se oxida por H2O2 o in superxido emitiendo EQL. Este mecanismo es til
cuando los iones radicales no son suficientemente estables para la reaccin de aniquilacin
o cuando el disolvente tiene una ventana de potencial tan estrecha que no se pueden formar
los iones radicales. Con correactante, la EQL se genera aplicando un potencial en una
direccin y dependiendo de la reaccin que origine el emisor EQL podemos encontrar dos
mecanismos, el de reduccin oxidativa y el de oxidacin reductiva.

9
 Fig. 6: Mecanismo EQL con correactante (C).

EQL CATDICA: Se observa emisin a partir de electrodos de metal (Al, Ta) recubiertos
de xidos durante la reduccin de sustancias como H2O2, persulfato u oxalato, habindose
sugerido que la EQL proviene de la inyeccin de hot electrons (electrones que no estn
en equilibrio trmico con la red en la que se encuentran) en la disolucin acuosa de
electrolito con la posible formacin de electrones hidratados.

7. POTENCIALIDAD EQL

La EQL presenta una serie de caractersticas que la hace ms atractiva frente a otras tcnicas,
como son:

1) Electro-iniciacin de reacciones.

La estimulacin electroqumica de reacciones permite mejorar el control de la velocidad de

reaccin, pudiendo incluso pararse y seguidamente realizar la deteccin, efectuando una
correccin efectiva del fondo y posibilitando la lectura automtica mediante control por
ordenador. Podemos adems seleccionar el material del electrodo, el tratamiento de la
superficie, el potencial aplicado y otras mejoras de la selectividad.

10
 Los reactivos pueden ser mezclados en origen, antes o en la clula de flujo para un
sistema FIA. Puesto que la reaccin comienza cuando se inicia la reaccin
electroqumica.

2) Electro-manipulacin de reacciones.

Podemos generar reactivos electroqumicamente a partir de precursores en aquellos casos

donde el reactivo es inestable podemos generar derivados que originan QL, cuando sus
precursores no lo sean, aumentando as las aplicaciones analticas. Al generar reactivos
electroqumicamente se evita la presencia de productos de reaccin que se hubieran
debido formar si medimos QL.

3) Combinacin de tcnicas.

Obtencin de informacin combinada de espectroscopa y electroqumica. Oportunidad

de obtener ganancia adicional de informacin analtica moni- torizando la actividad
electroqumica del analito por tcnicas electroqumicas y realizando el registro
simultneo de la emisin QL. De igual manera la QL puede usarse para seguir el curso
de reacciones electroqumicas.

8. PRINCIPIOS DE LOS TESTS:

Los principios de test disponibles en el analizador cobas e 411 son tres:

o El principio competitivo para analitos extremadamente pequeos
o El principio de tipo sndwich (uno o dos pasos) para analitos ms grandes
o El principio de formacin de puentes para detectar anticuerpos en la muestra

PRINCIPIO COMPETITIVO:
Este principio se aplica a analitos de bajo peso molecular, tales como la triyodotironina libre
(FT3).
11
- En el primer paso (ver Figura 7), se combinan en una cubeta de ensayo la muestra y un
anticuerpo especfico anti-T3 marcado con un complejo de rutenio.

Fig. 07: Principio Competitivo

- Tras la primera incubacin, se aaden micropartculas paramagnticas recubiertas de

estreptavidina y T3 biotinilada. Los sitios de unin an libres del anticuerpo marcado se
ocupan as formndose un complejo anticuerpo-hapteno. Todo el complejo se une a las
micropartculas mediante la interaccin de la biotina y la estreptavidina.
- Tras la segunda incubacin, la mezcla de reaccin que contiene los complejos inmunes se
transporta hasta la clula de medicin. Los complejos inmunes quedan atrapados
magnticamente sobre el electrodo de trabajo, mientras que el reactivo y la muestra libres se
eliminan con ProCell.
- En la reaccin de ECL, el conjugado es un derivado basado en rutenio y la reaccin
quimioluminiscente se estimula elctricamente para producir luz. La cantidad de luz producida
es inversamente proporcional a la cantidad de antgeno presente en la muestra del paciente. La
evaluacin y el clculo de la concentracin de antgeno se realiza mediante una curva de
calibracin creada a partir de estndares con concentraciones de antgeno conocidas 4,11.

PRINCIPIO DE TIPO SNDWICH:

12
 El principio de tipo sndwich se aplica a analitos con mayor peso molecular, como por
ejemplo la hormona estimulante de la tiroides (TSH).

Fig. 08: Principio de Sandwich

- En el primer paso (ver Figura 8), la muestra del paciente se combina en una cubeta de ensayo
con un reactivo que contiene anticuerpo de la TSH biotinilado y un anticuerpo especfico para
TSH marcado con rutenio. Durante un paso de incubacin de 9 minutos, los anticuerpos
capturan la TSH presente en la muestra.
- En el segundo paso, se aaden micropartculas paramagnticas recubiertas de estreptavidina.
Durante una segunda incubacin de 9 minutos, el anticuerpo biotinilado se adhiere a la
superficie recubierta de estreptavidina de las micropartculas.
- Tras la segunda incubacin, la mezcla de reaccin que contiene los complejos inmunes se
transporta hasta la clula de medicin; los complejos inmunes quedan atrapados
magnticamente sobre el electrodo de trabajo, mientras que el reactivo y la muestra libres se
eliminan con la solucin de limpieza ProCell 12.
- En la reaccin de ECL, el conjugado es un derivado basado en rutenio y la reaccin
quimioluminiscente se estimula elctricamente para producir luz. La cantidad de luz producida
es directamente proporcional a la cantidad de TSH presente en la muestra. La evaluacin y el
clculo de la concentracin del antgeno

13
 - Analito se realiza mediante una curva de calibracin creada a partir de estndares con
concentraciones de antgeno conocidas.

PRINCIPIO DE FORMACIN DE PUENTES:

El principio de formacin de puentes es similar al principio de tipo sndwich, con la
diferencia de que el ensayo est diseado para detectar anticuerpos (por ejemplo IgG, IgM e
IgA) y no antgenos. Esto se logra incluyendo antgenos biotinilados y marcados con rutenio
en los reactivos por los que el anticuerpo que se presente analizar presenta afinidad.
- En el primer paso (ver Figura 09), los anticuerpos sricos se unen a los antgenos biotinilados
y marcados con rutenio para formar un complejo inmune 13.

Fig. 09: Principio de formacin de puentes

- El complejo inmune reacciona entonces con las micropartculas recubiertas de estreptavidina
a travs del antgeno biotinilado.
- Tras la segunda incubacin, la mezcla de reaccin que contiene los complejos inmunes se
transporta hasta la clula de medicin; los complejos inmunes quedan atrapados
magnticamente sobre el electrodo de trabajo, mientras que el reactivo y la muestra libres se
eliminan con la solucin de limpieza ProCell.
- En la reaccin de ECL, el conjugado es un derivado basado en rutenio y la reaccin
quimioluminiscente se estimula elctricamente para producir luz. La cantidad de luz producida
es directamente proporcional a la cantidad de analito presente en la muestra. La evaluacin y
el clculo de la concentracin del anticuerpo se realiza mediante una curva de calibracin
creada a partir de estndares con concentraciones de anticuerpo conocidas.
14
 9. MECNICA DEL EQUIPO
Concepto de reactivo:
Introduccin Los packs de reactivo Elecsys (packs cobas e) tienen un cdigo de barras 2D
(bidimensional) especial que permite registrar y gestionar de forma totalmente automatizada la
informacin relativa a los reactivos. Su principal ventaja radica en que no es necesario efectuar
14
entradas manuales ni una llevar a cabo una monitorizacin adicional . Los reactivos, en
formato lquido y listos para su uso, se cargan en una de las 18 posiciones del rotor de
reactivos y estarn disponibles para los anlisis en cuanto se hayan escaneado sus cdigos de
barras. La gestin de calibradores y controles de Roche Diagnostics es similar a la de los
reactivos. Algunos calibradores vienen ya listos para su uso. Los controles liofilizados y otros
calibradores deben prepararse y transferirse a un contenedor apropiado. Para ensayos
cuantitativos, la informacin de los calibradores y controles se almacena en tarjetas de cdigos
de barras 2D. Para ensayos cualitativos, toda la informacin necesaria para la calibracin viene
codificada en las etiquetas de las botellas.

MEDIOS DE TRANSFERENCIA DE DATOS ESTN DISPONIBLES LAS FUENTES DE

DATOS SIGUIENTES 15,16:
1. Cdigos de barras en packs de reactivo (cdigo de barras 2D, matricial) o Pack de
reactivo o Pack de reactivo de diluyente o Pack de reactivo de pretratamiento o BlankCell
(blanco de cubeta)
2. Cdigos de barras en viales de calibrador y control (cdigo de barras 1D) o Vial
primario de calibrador o Vial primario de control.

3. cobas Link y base de datos del sistema (creada durante la instalacin) o Ensayo o Tarjeta
de cdigos de barras de calibrador o Tarjeta de cdigos de barras de control Los cdigos de
barras de los viales de calibradores y controles llevan informacin tal como la identificacin
del calibrador o control, su nivel y el identificador del lote. En los cdigos de barras de los
packs de reactivo y los datos descargados de sistemas electrnicos se codifica mucha ms
informacin, incluyendo cdigos de aplicacin, criterios de validacin de la calibracin o
fechas de caducidad.

REGLAS PARA LA TRANSFERENCIA DE DATOS 17,18:

15
Fuente de datos de calibradores Los datos de los calibradores vienen codificados en el cdigo
de barras 2D del pack de reactivo.
- Si la fabricacin del pack de reactivo es posterior a la del CalSet (juego de calibradores), los
valores asignados de referencia incluidos en el pack de reactivo tienen prioridad y son los que
se utilizan para generar la curva de calibracin.
- Si la fabricacin del pack de reactivo es anterior a la del CalSet, en la generacin de la curva
de calibracin se utilizan los valores asignados obtenidos de la tarjeta de calibradores. Valores
asignados de control obtenidos de distintas fuentes de datos Hay distintas fuentes de datos que
proporcionan valores asignados de control. Si se ha asignado manualmente un valor de
referencia de control para una determinada combinacin de lote de PreciControl/lote de
reactivo, el analizador utiliza ese valor en lugar del ledo de la tarjeta de cdigos de barras de
control o el cdigo de barras del reactivo. Para determinar el valor de referencia de control que
va a utilizar, el analizador aplica las reglas de prioridad siguientes:

Prioridad 1: Valores asignados introducidos manualmente para un determinado lote de reactivo

Prioridad 2: Valores asignados obtenidos del cdigo de barras de reactivo
Prioridad 3: Valores asignados obtenidos de la tarjeta de cdigos de barras de control (o datos
descargados de cobas Link; en desarrollo) Si seguidamente se coloca un nuevo lote de reactivo
o control en el analizador, se utilizan los valores de control incluidos en los cdigos de barras
para esos nuevos lotes

REACTIVOS PARA TESTS DEL ANALIZADOR:

Esta seccin describe todos los reactivos necesarios para el funcionamiento del analizador y
los reactivos especficos de cada uno de los tests disponibles. Los tests disponibles en el
sistema se clasifican en distintos grupos:
- Tiroideos
- Fertilidad
- Cardacos
- Oncolgicos
- Enfermedades infecciosas
- Anemia
- Diabetes
- seos
- Otros
16
 Diluyentes En la mayora de los tests que puedan requieren dilucin se emplea un diluyente
universal o multiensayo. Algunos tests, no obstante, entre los que se incluyen los de Anti-HAV,
Estradiol, Progesterona y NSE (enolasa especfica de las neuronas), requieren diluyentes
especficos.

10. IMPORTANCIA DE LA ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA

Electroquimioluminiscencia es una tcnica analtica muy potente con una comercializacin y

propagacin de inmunoensayos y muchas aplicaciones en biosensores 4.

EQL demostr ser muy til en aplicaciones analticas como un mtodo altamente sensible y
selectivo. Combina las ventajas analticas del anlisis quimioluminiscente (ausencia de seal
ptica de fondo) con facilidad de control de la reaccin mediante la aplicacin del potencial del
electrodo.

Como tcnica analtica presenta ventajas sobresalientes sobre otros mtodos analticos comunes
debido a su versatilidad, configuracin ptica simplificada comparada con fotoluminiscencia y
buen control temporal y espacial comparado con quimioluminiscencia. La selectividad mejorada

17
del anlisis EQL se alcanza mediante la variacin del potencial del electrodo controlando as
especies que se oxidan / reducen en el electrodo y participan en la reaccin EQL 7.

En general, utiliza complejos de rutenio, especialmente [Ru (Bpy) 3] 2+ (que libera un fotn a ~
620 nm) regenerndose con TPrA (tripropilamina) en fase lquida o interfaz lquido-slido. Puede
utilizarse como una monocapa inmovilizada sobre una superficie de electrodo (hecha, por
ejemplo, de nafin , o pelculas delgadas especiales hechas por tcnica Langmuir-Blogett o tcnica
de autoensamblaje) o como un co-agente o ms comnmente como una etiqueta y usado en
HPLC , inmunoensayos basados en anticuerpos, sondas de ADN de Ru para PCR etc., NADH o
H2O2 Biosensores basados en la generacin, deteccin de oxalato y aminas orgnicas y muchas
otras aplicaciones y pueden detectarse desde la sensibilidad picomolar hasta un rango dinmico de
ms de seis rdenes de magnitud. La deteccin de fotones se realiza con tubos fotomultiplicadores
(PMT) o fotodiodos de silicio o sensores de fibra ptica recubiertos de oro.

La importancia de la deteccin de tcnicas EQL para aplicaciones relacionadas con la biologa ha

sido bien establecida. EQL es muy utilizado comercialmente para muchas aplicaciones de
laboratorio clnico como la Tecnologa de (ECLIA) Electro- Quimioluminiscencia, considerado
actualmente, como el mtodo disponible ms sensible (FIG. 7); ya que la EQL se basan en la gran
capacidad de amplificacin de la seal a partir de una molcula marcadora que puede ser excitada
repetidas veces; lo cual permite obtener lmites de deteccin muy bajos y amplios intervalos de
medicin en rpidos procesos con cortos tiempos de reaccin 9.

18
 INCLUDEPICTURE "http://www.gedesa-bo.com/images/Quimica
Seca/comparasion2.jpg" \* MERGEFORMATINET

FIG. 7: Comparacin de Sensibilidad de las tcnicas de Inmunoanlisis

11. VENTAJAS Y LIMITACIONES

VENTAJAS

El empleo tanto de QL como de EQL presenta ventajas ya que no requiere de la etapa de

excitacin por irradiacin de la muestra, como es necesario en la foto- luminiscencia, por ello no
hay problemas de luz dispersa o de inestabilidad de la fuente, ni es necesario el uso de
instrumentacin compleja. Tampoco hay problemas de altas seales de fondo por fotoexcitacin
no selectiva, pudiendo lograrse alta sensibilidad con instrumentacin simple.

La emisin QL generada se inicia y controla por mezcla de reactivos o por adecuado control del
flujo de reactivos. En este punto es donde se encuentra la diferencia fundamental, y la gran ventaja
del empleo de EQL, especialmente en formato de un solo uso o desechable como luego veremos,
pues la luminiscencia en EQL se inicia y controla estableciendo un valor de potencial de electrodo
o modificando el potencial entre valores preestablecidos. De esta manera los reactivos para
generar QL son producidos in situ en la vecindad de la superficie del electrodo al que se ha
aplicado el potencial y no por mezcla de reactivos, lo que permite un control preciso de la emisin.
19
Por lo tanto, la EQL con respecto a la QL tradicional, permite generar reactivos in situ cuando es
necesario en un electrodo.

LIMITACIONES 6

Existe la posibilidad de generar electroqumicamente interferentes que pueden originar

reacciones alternativas que pueden llegar a atenuar las especies excitadas. Por ello, a veces es
necesaria la separacin previa del analito antes de la deteccin.

Es difcil obtener valores reproducibles de las condiciones ptimas de los parmetros que
controlan ambos procesos, electroqumico y quimioluminiscente, resultando finalmente unas
condiciones de compromiso.

El empleo de EQL en Qumica Analtica es creciente y su uso se centra fundamentalmente en

tcnicas como HPLC, CE, LC y Bioensayos.

20
 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Robert J. Forster, Paolo Bertoncello, and Tia E. Keyes.. "Electrogenerated

Chemiluminescence". Annual Review of Analytical Chemistry. 2: 35985. 2009
[Consultado 14 de agosto del 2017]. Disponible en:
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