Sunteți pe pagina 1din 2

Bacteriofagul lambda. Biblioteci de gene.

Cromozomi bacterieni artificiali

Biblioteca de gene reprezinta o colectie de fragmente de restrictie care au fost introduse


in vectori de clonare ( plasmide, bacteriofagi, cosmide). ADN-ul acestor vectori a fost sectionat
cu aceeasi enzima de restrictie pentru ca recombinarea sa fie posibila. Vectorii sunt introdusi in
mediul unei culturi bacteriene, iar bacteriile transfectate se multiplica formand colonii.
Exista 3 categorii de bibliotecti de gene: genomice (alcatuite din ADN-ul genomic total al
unui organism), ADNc (colectie de clone obtinute pe baza AND complementar) si cromozomiale
(specific fiecarui cromozom in parte).
O biblioteca genomica, de exemplu, este utila pentru a gasi o gena de interes prin screening
cu sonde specifice. Aceasta contine toate secventele prezente in genomul unui organism. Exista
doua posibilitati prin care bibliotecile genomice se pot obtine :
a) ADN genomic este digerat complet cu o enzima de restrictie, iar fragmentele obtinute
sunt clonate fie printr-un vector derivat din bacteriofagul lambda, fie intr-un vector
cosmidic.
b) Digestia partiala cu enzime de restrictiv, ce recunosc secvente de 4pb.
Colecia de clone obinute pe baza ADN complementar se numete bibliotec ADNc.
Aceasta nu reprezint doar colectarea de secvene exprimate, ci si acele secvene de dup orice
modificare post-transcripional. Fiind sintetizat pe matria moleculelor de ARNm, ADNc va
corespunde numai genelor aflate n stare de activitate transcripional, reproducnd doar genele
funcionale specifice celulei respective. ADNc este clonat n vectori plasmidici sau n vectori
derivai din bacteriofagul lambda.
Spre deosebire de fragmentele obinute prin digestie cu enzime de restrictie, moleculele de
ADNc nu posed capete adezive, de aceea pentru introducerea n vector, la moleculele de ADNc
se adauga adaptori care conin capete adezive.
Biblioteci cromozomiale: Dimensiunea genomului uman este att de mare, nct sunt
necesare mii de clone pentru a reprezenta ntregul genom. Dac o gen este localizat pe un
cromozom cunoscut prin metode genetice, cercetarea va fi limitat la biblioteca acelui
cromozom. Izolarea cromozomilor este posibila datorita dimensiunii i morfologiei diferite ale
cromozomilor, care pot fi separai cu ajutorul citometriei n flux. In prezent sunt disponibile
biblioteci preparate din toi cromozomii umani.
Cromozomii bacterieni artificiali (BAC) reprezinta clone de dimensiuni mari, mentinute in E.
coli. Datorita dimensiunilor mari si capacitatii de a contine o gena impreuna cu elementele sale
reglatorii, BAC pot avea rol de secventa promotor gena-specifica (C. Lai, in Encyclopedia of
Neuroscience, 2009). BAC reprezinta plasmide utilizate in clonare dar si mentinerea stabilitatii
unor segmente ADN de dimensiuni mari in E. coli.