Bases celulares del aprendizaje y la

memoria en insectos :
Apis mellifera y Drosophila melanogaster
Condicionamiento olfatorio
Condicionamiento clsico (pavloviano) de la
extensin de proboscis

Provee de una preparacin experimental optima para el

estudio paramtrico del aprendizaje y la memoria,.
accesibilidad al sistema nervioso en animales que aprenden,
recuerdan y evocan respuestas aprendidas,.
Acceso para electrofisiologa , imaging,.
Los sistemas sensoriales involucrados son relativamente
sencillos
Respuesta condicionada de extensin de la probscide
Condicionamiento diferencial
Condicionamiento aversivo: extensin del aguijn

Vergoz 2007 PlosONE

Condicionamiento
apetitivo / aversivo

Wright et al., CurrentBiol 2010

condicionamiento operante en Drosophila
(visual u olfatorio): Simulador de vuelo
Memoria de cortejo (courtship conditioning)
Condicionamiento OPERANTE

Condicionamiento CLASICO

Drosophila son condicionadas de

manera clsica u operante a estmulos
apetitivos o aversivos.
Las herramientas genticas disponibles y la
capacidad de generar mutantes y
transgnicos lo hace un modelo ideal para la
bsqueda de mecanismos celulares
involucrados en aprendizaje y memoria.
Laberinto en T para evaluar memoria olfativa en Drosophila
Figure 1. Pavlovian Olfactory Conditioning
Positions in a behavioral chamber (horizontal dimension) as a function of time (vertical dimension) of 20 Canton-S flies choosing between MCH (blue) and OCT
(orange). The traces are sorted by untrained preference. Bar graphs on the right indicate population averages of decisions in favor of the left and right chamber
halves before and after conditioning (pre and post), in the presence of odors (colored bars) or air (white and gray bars).
(A) Mock conditioning without electric shock preserves individual pretraining preferences.
(B) Pairing the presentation of MCH with electric shock causes conditioned avoidance of MCH.
Aprendizaje asociativo
Estructura en abejas:
del condicionamiento clsico

Condicionamiento del reflejo de extensin de proboscide

1. Solucin Azucarada (US) = Extensin de Proboscide
2. Olor (CS) + Solucin Azucarada (US) = Extensin de Proboscide
3. Olor (CS) = Extensin de Proboscide

Condicionamiento de evitacin al shock

1. Shock elctrico (US) = Evitacin
2. Olor (CS) + Shock elctrico (US) = Evitacin
3. Olor (CS) = Evitacin
 Abeja Apis mellifera > estimulo condicionado OLOR
Cerebro ~ 106 neuronas
60.000 neuronas sensoriales en las antenas que expresan ~160 clases
de proteinas receptoras
800 neuronas de proyeccin que relevan la informacin a centros de
integracin multimodal : Mushroom bodies y Protocerebro Lateral

From: www.neurobiologie.fu-berlin.de/galizia/
Al menos 3 sitios de convergencia de los estmulos condicionado
e incondicionado

Reward pathway: putative

neurotransmitter: Octopamine

Odor pathway: putative

neurotransmitter: ACh

Menzel & Giurfa, 2001

TRENDS in Cognitive Sciences
Dujardin, F. (1850)
Mmoire sur le systme nerveux des
insectes. Ann. Sci. Nat. Zool.
Kenyon F.C. (1896) The brain of the bee
A preliminary contribution to the
morphology of the nervous system of the
Arthropoda. J Comp Neurol.

Huber (1955)

Vowles (1955)
Mushroom bodies = Corpora
pedunculata = cuerpos pedunculados
estructuralmente alejados del procesamiento
sensorial y de centros premotores

convergencias de informacin sensorial multimodal

mas desarrollado y organizado en insectos con

comportamientos mas complejos y evolucionados
como hymenopteros sociales (abejas hormigas)

Aprendizajes que persisten a la metamorphosis y

los MBs son estructuras mas estable durante el
proceso

Ablacin de MBs o desvinculacin del resto del

cerebro provoca mayor descoordinacin motora en
animales con comportamientos mas complejos
Localizacin de la memoria La memoria fue
en el cerebro abeja evaluada 30 min
Menzel, R., J. Erber and T. Masuhr (1974)
despus de un ensayo
de condicionamiento y
como tratamiento
amnsico se enfri
durante 30 seg reas
especificas del cerebro

La formacin de memoria es
dependiente de los L. Antenales
durante 2 minutos luego del
condicionamiento => LAs no son
mera estacin de relevo o
procesamiento pura de la
informacin olfativa => tambin
intervienen activamente en una
fase de la formacin de memoria

La dependencia temporal de los

MBs para la formacion de
memoria es disitnta a la de LAa
Consolidacion de la memoria en Drosophila (Quinn & Dudai 1976)
Memoria de largo termino dependiente de sntesis proteica
Transcripcin de mensajeros y traduccin de protenas muestran
dos fases distintas de la memoria de largo termino.

Memoria inducida por un nico

ensayo ,.decae tras varios das
y es independiente de sntesis
proteica

Emetina: inhibidor de traduccin

Actinomicina: inhibidor de
transcripcin

Friedrich et al., JN 2003

dnc (dunce) codifica para fosfodiestarasa (Byers et al., 1981)

expresin mayoritaria del gen dunce en MBs (Nighorn 1991) => constituye evidencia
del rol de cAMP en aprendizaje y de los MBs

Expresin inducible de transgenes para cAMP-fosfodiestarasa rescata la deficiencia

en aprendizaje (Dauwalder and Davis 1995).
Sistema GAL4 UAS para control de la expresin de transgenes
Restauracin de actividad Adenilato Ciclasa en MBs es suficiente
para restaurar el aprendizaje en la mutante rutabaga

Zars et al., 2000

rut: defecto durante el desarrollo?
Control de la expresin en lugar tiempo

WT WT

rescued

rescued
WT WT

WT WT
rescued

rescued
Enhancer line 247 o 772: expresion en MBs.
Recuperacin del aprendizaje por expresion de
WT WT
rut+ en Kenyon Cells
-20m 3h 1d 2d 3d
TR

-20m 3h 1d 2d
TR TR TR

10m 3h 1d 2d 3d
TR

10m 3h 1d 2d
TR TR TR

Activacin de PKA es necesaria durante el entrenamiento pero solo

se evidencia 1 da despus del entrenamiento Mller. , J. Neurosci. 2000
 PKA activity PKA activity
TR TR TR TR

Entrenamiento mltiple que induce MLT induce activacin

persistente de PKA

Mller. , J. Neurosci. 2000

Activacin de PKA, produce el mismo efecto que
un entrenamiento fuerte e induce MLT?
 Estimulacin prolongada de PKA in los lbulos antenales
induce LTM despus de un nico ensayo de entrenamiento

Mller. , J. Neurosci. 2000

mutante para aprendizaje : rutabaga
rutabaga = codifica para adenilato ciclasa de tipo I: activacin via
calcio/calmodulina y proteina G (Livingstone et al., Cell 1984)

La activacin dual de adenilato ciclasa RUT y el rol de la vida de cAMP sugieren a esta ciclasa como
detector de la coincidencia del estimulo condicionado e incondicionado

expresin mayoritaria de rutabaga en Mushroom Bodies (Han 1992)

 VUMx1 (media el US) (Hammer, 1993) Octopamina (media el US) (Hammer, 1998)

Inyeccin de OA en LAs o MBs imita al US,

aunque con distintas dinmicas de expresin
Trazas independientes de memoria en los LAs y
Estimulacin de VUMx1 imita reemplaza
los MBs se complementan en el comportamiento.
al estimulo incondicionado
 Schwaerzel et al., 2003

rut: mutante AC

247: enhancer trap line en MBs.

Shi: neurotransmision temp-

dependiente

(TbH: mutant tyramine beta-hidroxilase: sntesis de octopamina

afectada)

Octopamina es necesaria para un aprendizaje apetitivo y

NO lo es para uno aversivo

Transmisin dopaminergica es necesaria durante el

aprendizaje aversivo
Detector de coincidencia
Sensor de cAMP

niveles de cAMP en lbulo alfa de MBs

Detector de coincidencia: dependencia temporal
Facilitacin pre-sinaptica
Neuronas
dopaminergicas en
cerebro de Drosophila
 Aprendizaje aversivo
Bloqueo de
neurotransmisin en MBs
bloquea completamente
el aprendizaje

Si se baja la temp, se
restituye la transmisin y
se recupera la respuesta
aprendida

La salida de los MBs es

necesaria solo para la
evocacin:

La memoria se
forma en un sitio
expresin de expresin de
shibire en todas
anterior a la salida
shibire solo en
las neuronas MBs
de los MBs y es
independiente de la
Bloqueo de neurotransmisin en MBs actividad sinptica
no afecta actividad locomotora de las KCs.
Dubnau et al., 2001
1. Durante el entrenamiento un
subgrupo especifico de clulas
de Kenyon son activadas
coincidentemente por el
estmulo condicionado (olor) y
por el refuerzo (shock o comida).
2. La activacin por el estimulo
condicionado y el
incondicionado provocan
activacin de la AC (rutabaga)
que desencadena mecanismos
de facilitacin sinptica.
3. Durante el test, la estimulacin
con el olor es suficiente para
evocar respuesta en la neurona
que salen del MB.