UNIVERSIDAD DE LAS AMRICAS

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE MEDICINA

Biologa Molecular

Jos Javier Camacho

Carlos de la Torre
Gian Carlo Mossquera

Fecha de realizacin

4 de Junio del 2017

Enzimas de Restriccin

Quito Ecuador
OBJETIVOS.
Realizar el montaje experimental de una digestin por RFLPs.
Conocer el fundamento terico y las aplicaciones del anlisis de RFLPs

INTRODUCCIN.

ENZIMAS DE RESTRICCION

QUE SON?

Los enzimas de restriccin, son marcadores moleculares que hidrolizan

enlaces fosfodister en el ADN y se caracterizan por cortar las dos cadenas del
ADN de forma especfica tras reconocer una secuencia diana. La frecuencia
con la cual un enzima corta un DNA depende del tamao de la secuencia de
reconocimiento. Estas enzimas son extradas de diferentes tipos de bacterias,
donde actan como mecanismo de defensa para degradar material gentico
extrao que entre en la clula. Existen tres tipos de enzimas de restriccin (I, II y
III) que estn clasificadas segn su funcin independiente y la alta especificidad
es su propiedad principal.

Tipos de enzimas y su funcin:

TIPO I: Una sola enzima (multimrica que posee 3 subunidades) reconoce

la secuencia especfica de ADN, metila y restringe. Pero la restriccin no
ocurre en el sitio de reconocimiento, sino que es al azar y en sitios
distantes del reconocimiento.
Reconoce secuencias especificas y cortan el DNA en sitios no especficos
> de 1,000 pb
TIPO II: La restriccin ocurre en el sitio de reconocimiento. Las enzimas tipo
dos son las usadas en gentica molecular puesto que permiten romper
ADN en sitios especficos y as recuperar secuencias conocidas.
Reconoce secuencias palindrmicas y cortan dentro de la secuencia
TIPO III: Similar al sistema tipo I, utilizan una encima oligomrica que realiza
todas las actividades enzimticas, y rompen el ADN 25-27bp, mas alla del
sitio de reconocimiento. Reconocen secuencias especificas de 5-7 pb y
cortan de 24-27 pb down stream del sitio
 Las enzimas de restriccin Tipo II son las ms utilizadas en la biotecnologa ya
que reconocen y cortan dentro de las secuencias especficas.

Esta reaccin de digestin de RFLPs tiene varias aplicaciones en la ciencia,

las cuales pueden ser de gran utilidad en diferentes reas. Dichas aplicaciones
son:

Desarrollo de ADN recombinante y biotecnologa.

Mecanismos de regulacin y expresin gnica.
Mapeo y cartografa de genes.
Diagnostico enfermedades genticas con cambio en la secuencia de
ADN.
Desarrollo de protenas recombinantes.
Pruebas de paternidad.
Criminalstica.

RESULTADOS.

Como resultados obtenidos de la practica tuvimos el haber adquirido la

habilidad de calcular la cantidad de cada reactivo y componente necesario
para montar la reaccin de digestin de RFLPs.

Una vez montada la reaccin antes mencionada se logr durante la

practica el analizar e interpretar los resultados obtenidos durante el proceso.
MAPA DE RESTRICCIN.

CUESTIONARIO.

1. Que significa la signatura propia de las enzimas de Restriccin.

Existen 3 tipos de enzimas de restriccin, las cuales pueden ser

BamHl, Hindlll, EcoRl, y Kpnl. Las siglas de dichos nombres provienen del
gnero de las bacterias que la producen, la especie de la misma, el tipo
de cepa y el nmero de endonucleasa aislada de dicha cepa. Por
ejemplo, en el caso de EcoRl, se trata de una bacteria Escherichia Coli,
con cepa tipo RV 13 y es la primera endonucleasa aislada

2. Cmo se protege el ADN endgeno (propio) del ataque de las enzimas

de Restriccin en Bacterias?

Ya que este presenta un sistema de defensa con la accin de

metilasa, en donde reconoce el material gentico de la bacteria, y
metila la cadena de ADN, ya que las enzimas de restriccin solo son
capaces de reconocer a cadenas no metiladas.
 3. Qu tipo de corte pueden generar estas enzimas, existe alguna
aplicacin basada en ellos?

Son 3 tipos de enzimas de restriccin que pueden realizar 3 tipos

de cortes diferentes. El primero corta enzimas en regiones no especficas.
El segundo lo hace dentro de la secuencia y reconoce ambos lados de
la misma. Y finalmente el tercer corte se realiza en secuencias especficas
de 5 -7 pb y corta 24 27 pb down stream. Aunque ms se utiliza el tipo
de corte ll, esto puede ser til para pruebas de paternidad,
reconocimiento de secuencias especficas de material gentico en
criminalstica, identificacin y diagnstico de enfermedades y mapeo de
genoma.

4. Describa brevemente un artculo cientfico en donde se utiliz RFLPs en la

metodologa

Una investigacin realizada en 2006 por parte del instituto de

medicina tropical llevada a cabo por Pedro Kour, tena como
intencin el amplificar muestras de Leishmania de la regin
neotroprical de Mxico para identificar y diferenciar de otras
especies. Se utiliz reaccin en cadena de polimerasa (PCR) para
una amplificacin del gen que codifica la protena 70 kDa (Hsp70).
Se utilizaron muestras de leishmania mexicana, amazonensis,
guyanensis, y liasoni. Medinate el uso de anlisis de longitud de
fragmentos de restriccin, y el uso de la enzima de restriccin
Haelll, se pudo obtener patrones de bandas, gracias a los cuales
se establecieron diferencias entre todas las especies estudiadas.

REFERENCIAS.

Montalvo, L. A. (2006). PCR-RFLP/Hsp70 para identificar y tipificar Leishmania de

la regin neotropical. Obtenido de Scielo:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375-
07602006000300009