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La cromatografa es una tcnica que permite separar los componentes de una mezcla. Esta
separacin se logra utilizando un sistema bifsico: fase estacionaria donde se retienen los
compuestos a separar y fase mvil que desplaza de forma diferencial los compuestos a travs de
la fase estacionara.
Dependiendo de la naturaleza de las fases, se pueden distinguir distintos tipos de cromatografa:
Fase Fase
mvil mvil
MEZCLA
E
s
t Se retiene ms
F a
a c
s i
e o
n Se eluye primero
a
r
i
a
A) En funcin de la interaccin que se establece entre los componentes de la mezcla y las fases
mvil y estacionaria:
CROMATOGRAFA DE ADSORCIN
R
R'
: H-O-R
Figura 12.- Estructura de la gel de slice e interacciones con algunos compuestos polares
El adsorbente debe ser inerte con las sustancias a cromatografiar. La gel de slice presenta carcter
cido y la almina puede adquirirse con carcter neutro, cido o bsico.
Es un disolvente en el que los componentes de las mezcla son, al menos, parcialmente solubles.
Al aumentar la polaridad del disolvente aumenta la velocidad de elucin de los compuestos de la
mezcla.
Se puede utilizar un nico disolvente o una mezcla de disolventes e incluso llevar a cabo la
elucin con un gradiente de polaridad aumentando progresivamente la proporcin del disolvente
ms polar.
RETENCIN
Las molculas de soluto S se adsorben en los centros polares de la fase estacionaria X y, a medida
que se produce la elucin, van siendo desplazadas por las molculas de disolvente/s que
constituyen la fase mvil M. La retencin de un soluto se puede justificar por la competencia que
se establece entre S y M por adsorberse a los centros polares X, es decir, depende de los valores
de las constantes de los equilibrios:
X + S XS
X + M XM
cidos carboxlicos > Fenoles > Alcoholes y Tioles > Aminas > steres > Aldehdos y
Cetonas > Hc. Aromticos > Hc. Halogenados > teres > Hidrocarburos Insaturados >
Alcanos
Cuanto ms polar sea un compuesto ms se retendr en la fase estacionaria. Por ejemplo, se
retiene ms un alcohol que un hidrocarburo
H2O > CH3-OH > (CH3)2CH-OH > CH3-CN > Dioxano > CH3COOEt > THF > CH2Cl2 (Cloruro
de metileno) > CHCl3 (Cloroformo) > CCl4 (Tetracloruro de carbono) > CH3(CH2)4CH3
Para un mismo compuesto, un aumento en la polaridad de la fase mvil hace que se se desplace
con ms facilidad de la fase estacionaria. Por ejemplo, se eluir ms rapidamente una amina en
acetonitrilo que en hexano
Para compuestos poco polares, que se retienen poco en el adsorbente, se utilizan eluyentes
apolares o poco polares como, por ejemplo, hexano
Para compuestos muy polares, que quedan muy retenidos en el adsorbente, se emplean eluyentes
muy polares como, por ejemplo, metanol o mezclas metanol-diclorometano
Para compuestos de polaridad media se emplean eluyentes de polaridad intermedia y son muy
aconsejables en estos caso las mezclas en distintas proporciones de hexano-acetato de etilo
La fase estacionaria (adsorbente) se encuentra depositada, formando una capa fina de un espesor
uniforme sobre una placa de vidrio, plstico o una lmina metlica. La mezcla a analizar se
deposita con un capilar a una pequea distancia del borde inferior de la placa (Figura 13) y se
introduce en una cubeta donde est la fase mvil (eluyente), que ascender a lo largo de la capa
por capilaridad eluyendo a los componentes de la mezcla a distintas velocidades, lo que provoca
su separacin (Figura 14). Cuando el frente del disolvente se encuentra a 0.5 cm del borde
superior, se saca la placa de la cubeta, se marca hasta donde ha llegado el eluyente y se deja secar
para, a continuacin, proceder al la visualizacin de las manchas correspondientes a los productos
cromatografiados.
Determinacin del Rf
Se conoce como Rf (rate factor) la relacin entre las distancias recorridas por un compuesto y por
el disolvente desde el origen del cromatograma.
Frente del
disolvente
R XA
f(A) =
B Y
R >R B menos polar que A
Y f(B) f(A)
R XB
X f(B) =
A
B
Y
XA Origen
Con luz UV (ultravioleta).- Las placas suelen llevan incorporado un indicador fluorescente que
absorbe luz UV y emite luz visible, generalmente verde. Cuando se cromatografan sustancias que
absorben en el UV donde se encuentra el compuesto no absorbe el indicador y como resultado
vemos una mancha que indica su presencia.
Con un agente revelador.- Se emplea cuando las sustancias no absorben radiacin UV. El
revelador reacciona con los productos absorbidos dando lugar a compuestos coloreados y
por tanto se utilizar uno u otro en funcin del compuesto que se quiera visualizar. Algunos
ejemplos: H2SO4 concentrado en etanol para azcares, ninhidrina para aminocidos y yodo para
compuestos insaturados y aromticos.
Aplicaciones de la CCF
La CCF es una tcnica cualitativa muy utilizada en los laboratorios de Qumica Orgnica para:
Determinar el nmero de componentes de una muestra: Precaucin si solo hay una mancha
muy retenida o aparece junto al frente del disolvente hay que probar otro eluyente (Figura 16).
A+B
A
(a) A+B (b) (c)
X X X
Figura 16.- Separacin de dos componentes A y B de una mezcla. (a) Eluyente poco polar
(b) Eluyente de polaridad adecuada (c) Eluyente muy polar
X X X X X
A B A M B
Seguir la evolucin de una reaccin: cada cierto tiempo se cromatografan en una misma
placa los reactivos y la mezcla de reaccin (Figura 18).
Reaccin: A + B C
X X X X X X
A MR B A MR B
Figura 18.- Evolucin de una reaccin entre dos compuestos A y B (reactivos) para dar
lugar a un compuesto C. Mezcla de reaccin = MR
Determinar el disolvente ms apropiado para llevar a cabo una separacin mediante una
cromatografa preparativa (en columna o en placa)
X X X X X X X X X X
M 1 2 3 4 M 5 6 7 8
Antes de realizar una separacin en cromatografa de columna hay que elegir adecuadamente el
disolvente haciendo ensayos en CCF.
Arena
Algodn
Soporte
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.- Separacin por cromatografa en columna de una mezcla de violeta cristal y naranja
de metilo
Se sujeta la columna, en posicin vertical, a un soporte utilizando dos pinzas: una cerca de la
llave y otra en la parte superior y se introduce un pequeo copo de algodn en su extremo
inferior. Se coloca un erlenmeyer debajo de la columna y un embudo en la parte superior
(Figura 20). En un vaso de precipitados se prepara una suspensin con 5g de gel de slice
(adsorbente) y 50mL de etanol (eluyente).
H3C + H3
-
Cl
H3C
- +
N N SO3 Na
H
3 Naranja de Metilo
H3C CH3
CH3 CH3
Violeta Cristal
2.- Cromatografa en capa fina de Benzhidrol y trans-Estilbeno
Anotar los resultados obtenidos con ambos eluyentes. Cul de los dos es el compuesto ms
polar? Cul es el disolvente ms adecuado para esta separacin? Sera adecuado utilizar
metanol en esta separacin? Cmo se podran nombrar el benzhidrol y el trans-estilbeno
segn las normas IUPAC?
FIGURA 1.
COLORANTES PARA CIEMBRA
COLOR AZUL
FFIGURA2.
COLORANTES PARA
CIEMBRA
FIGURA3.
COLORANTE PARA CIEMBRA
COLOR ROJO
FIGURA4.
COLORANTES PARA CIEMBRA
COLOR
FIGURA 5.
SE INTRODUCE EN UNA CUBETA DONDE LA FASE MOVIL ELUYENTE
SUBIRA ELUYENDO LOS COMPONENTES LA CUAL PROVOCA SU
SEPARACION
CUESTIONARIO
1.- Por qu los derivados halogenados suben ms que los alcoholes en una cromatografa en
capa fina?
R.- Los derivados de halgenos suben ms que los alcoholes porque su punto de ebullicin
son bajos a comparacin del de los alcoholes.
2.- Al cambiar un eluyente menos polar por otro ms polar Cmo se afecta la velocidad de la
elucin de un alcohol? y de una cetona?
R.- Cuando cambiamos un eluyente menos polar a uno ms polar la velocidad de elucin de
un alcohol va a ser ms veloz, pero en el caso de la cetona no ser asi al contrario ira
disminuyendo haciendo ms difcil su elucin.
3.- El valor del Rf depende del adsorbente utilizado? y del eluyente?
R.- El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra estos son:
Tipo de adsorbente, eluyente, as como de las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturacin, etc.
Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que mejor correr duplicados de la misma placa.
4.- Sugerir un ensayo para determinar la pureza con un compuesto por CCF
6.- Sugerir un ensayo, utilizando la CCF, para determinar cual es el disolvente mas adecuado
para separar el cido difenilactico del bencilfenilter por cromatografa en columna
utilizando gel de slice como adsorbente.
R.- El disolvente ms apropiado para este ensayo es el tiner. Segn a lo que se pudo averiguar
es el nico disolvente que es efectivo en este ensayo.
OBSERVACIONES
1. Tener cuidado con los sembradores ya que nos podemos lastimar al partirlos.
2. Tener cuidado al cortar la placa recubierta con capa delgada de la fase estacionaria
adsorbente.
3. Tapar la cubeta de vidrio ( cubeta cromatografica).
CONCLUSIONES
Bueno la cromatografa de adsorcin es un sistema el cual sirve para separar los componentes
de una mezcla y medir las proporciones de los componentes el cual se tiene un sistema bsico
como fase estacionaria y la fase mvil.
BIBLIOGRAFIA
WIKIPEDIA
RINCON DEL VAGO