Antiinflmatorio Antioxidante Verdolaga Milenrama (BN)

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGA
EVALUACIN FITOQUMICA Y PROPIEDADES NUTRACUTICAS DE

Portulaca oleracea Y Achillea millefolium.
INFORME TCNICO DE LA OPCIN CURRICULAR EN LA MODALIDAD

DE:
PROYECTO DE INVESTIGACIN
QUE PARA OBTENER EL TTULO DE:
INGENIERO FARMACUTICO
PRESENTA:
ALEJANDRA GARCA RODRGUEZ
DIRECTOR DEL PROYECTO
DRA. YOLANDA DE LAS MERCEDES GMEZ Y GMEZ
EVALUADOR
M. en C. MNICA IRLANDA GARCA ARANDA
EVALUADOR
M. en E. REFUGIA PREZ SNCHEZ
MXICO D.F. MARZO 2015

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGA
SUBDIRECCIN ACADMICA
ACTA DE TRABAJO ESCRITO
La Comisin de Evaluacin para Opcin Curricular ha revisado el trabajo escrito

titulado: Evaluacin fitoqumica y propiedades nutracuticas de Portulaca
oleracea Y Achillea millefolium que presenta el alumno Alejandra Garca
Rodrguez con nmero de boleta 2009620119 de la carrera de Ingeniera
Farmacutica.
Despus de revisar los integrantes de la Comisin de Evaluacin manifiestan

APROBAR EL TRABAJO ESCRITO, en virtud de que satisface los requisitos
sealados por las disposiciones reglamentarias vigentes para la opcin curricular
de titulacin.
COMISIN DE EVALUACIN
Mxico D.F, a 19 de Febrero del 2015
Nombre y firma Nombre y firma

Dra. Yolanda de las M. Gmez y Gmez M. en C. Mnica Irlanda Garca Aranda
Nombre y firma Nombre y firma

M. en E. Refugia Prez Snchez
a
Autorizacin de uso de obra
Instituto Politcnico Nacional

Presente
Bajo protesta de decir verdad el que suscribe Alejandra Garca Rodrguez,

manifiesto ser autor y titular de los derechos morales y patrimoniales de la obra
titulada Evaluacin fitoqumica y propiedades nutracuticas de Portulaca oleracea
y Achillea millefolium en adelante La Tesina y de la cual se adjunta copia, por lo
que por medio del presente y con fundamento en el artculo 27 fraccin II, inciso b)
de la Ley Federal del Derecho de Autor, otorgo a el Instituto Politcnico Nacional,
en adelante El IPN, autorizacin no exclusiva para comunicar y exhibir
pblicamente total o parcialmente en medios digitales como buscadores, revistas
y bibliotecas La Tesina por un periodo de un ao contado a partir de la fecha de
la presente autorizacin, dicho periodo se renovar automticamente en caso de
no dar aviso expreso a El IPN de su terminacin.
En virtud de lo anterior, El IPN deber reconocer en todo momento mi calidad de

autor de La Tesina.
Adicionalmente, y en mi calidad de autor y titular de los derechos morales y

patrimoniales de La Tesina, manifiesto que la misma es original y que la presente
autorizacin no contraviene ninguna otorgada por el suscrito respecto de La
Tesina, por lo que deslindo de toda responsabilidad a El IPN en caso de que el
contenido de La Tesina o la autorizacin concedida afecte o viole derechos
autorales, industriales, secretos industriales, convenios o contratos de
confidencialidad o en general cualquier derecho de propiedad intelectual de
terceros y asumo las consecuencias legales y econmicas de cualquier demanda
o reclamacin que puedan derivarse del caso.
Mxico, D. F., a 19 de Febrero del 2015.
Atentamente
Alejandra Garca Rodrguez
b
AGRADECIMIENTOS
Antes que nada quiero agradecer a Dios por darme la

bendicin de la vida y llegar hasta esta etapa donde hoy
culmino una meta ms pese a todos los obstculos y
pruebas que l dispuso para m.
A mis padres que han sido un gran apoyo para m que

nunca me dejaron sola y que aunque como todo ser
humano tengo errores nunca me dieron la espalda sino
todo lo contrario me dieron la mano para apoyarme de
ellos y seguir adelante.
A la doctora Yolanda de las M. Gmez y Gmez por darme

la oportunidad de ser partcipe de su equipo de trabajo
brindarme sus conocimientos y todo su apoyo que tuvo para
m a lo largo de este proyecto.
A la M. en C. Mnica Irlanda y a la M. en E. Refugia Prez

Snchez por haber aceptado formar parte de esta ltima
etapa apoyndome en la evaluacin de mi trabajo y
compartiendo sus conocimientos para poder entregar un
mejor trabajo.
A mis amigos inseparables Marco y Jonathan que nunca

me dejaron sola siempre fueron mi apoyo en todos los
sentidos y en los momentos ms difciles, gracias espero que
esta amistad dure por muchos aos.
A mis dems amigos como Uriel, Jessica y todos los que de

alguna manera formaron parte de este camino, gracias
por todo su apoyo.
c
DEDICATORIAS
Antes que nada con todo mi corazn le dedico este triunfo

a mi hija Hannia que al inicio de este sueo lleg a mi
vida y fue mi motor a salir adelante, mis ganas de no
dejarme caer y ser siempre mi fuerza para dar lo mejor de
mi da con da. Te amo mucho mi nia hermosa!
A mis padres por todos los aos de trabajo, por la gran

ayuda que me dan con mi hija y que nunca me dejaron
sola, no alcanzar la vida para pagar todo lo que
hicieron y hacen por nosotras.
A mi familia les dedico este logro ya que siempre creyeron y

confiaron en que este da llegara y as fue hoy son testigos
de que pude salir adelante y que de verdad esto es para
ustedes tambin.
A mis ngeles que se fueron al cielo y que yo s que estaran

contentos de estar aqu, Rolando (Chiquito) no sabes cmo
te extrao, pero esto va para ti tambin, ta Concha usted
siempre me demostr su cario y lo orgullosa que estaba de
m y aunque yo nunca se lo expres yo la admiro mucho y
es un ejemplo de fortaleza para salir adelante, a mi
abuelita Elpidia, a mi abuelito Pedro y a todos los que Dios
llamo a su lado.
d
EVALUACIN FITOQUMICA Y PROPIEDADES NUTRACUTICAS DE Portulaca oleracea Y
Achillea millefolium.
Alejandra Garca Rodrguez, Yolanda de las Mercedes Gmez y Gmez*,

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnologa- IPN, Departamento de Bioprocesos, Laboratorio de Farmacologa,
ygomezipn@hotmail.com , tel. 75296000 ext. 56342.
FECHA: 19 de Febrero Del 2015.
Palabras clave: Antiinflamatorio, inflamacin, extracto, plantas medicinales
Introduccin. Cuando un tejido presenta una lesin tisular ya sea 70 64.61

por efecto de patgenos, abrasiones, irritaciones qumicas,
deformaciones o trastornos celulares y exposicin a temperaturas 60 49.76 51.97
extremas, se genera una inflamacin en dicho tejido como respuesta 36.49 39.02
50 44.87
% de inhibicin
defensiva e inespecfica del organismo (Tortora; Derrickson, 2002).
Hoy en da se hace la administracin de medicamentos anti- 40
inflamatorios no esteroideos (AINE`s) pero despus de una 30
administracin prolongada o dosis elevadas causan daos en el
tracto gastrointestinal, es por ello que el uso de fitofrmacos 20
provenientes de plantas medicinales ya que no causan estos daos. 10
Metodologa. Tamiz fitoqumico. Se obtiene las plantas
posteriormente se someten a un proceso de secado a 40C, 0
despus se hace la extraccin con 25 mL de ter de petrleo y TP HP HA FA FP I
metanol-agua. Actividad anti-inflamatoria por el mtodo de edema
inducido por aceite de crotn. Se obtienen extractos cetnicos del Figura 1. Representacin grfica del porciento de inhibicin de la
tallo, hoja y flor de Portulaca oleracea y hoja y flor de Achillea inflamacin donde (TP) tallo de Portulaca, (HP) hoja de Portulaca,
millefolium, se administran los extractos va oral a ratones CD1; (HA) hoja de Achillea, (FA) flor de Achillea, (FP) flor Portulaca e (I)
transcurrida una hora se induce el edema con una solucin de aceite Indometacina.
de croton al 5%; 3 hora despus de la induccin se sacrifica a los
ratones obteniendo discos auriculares y mediante ecuaciones se Cuadro 1. Porcientos de actividad antioxidante (%AAO) de extractos
determina el % de inhibicin de la inflamacin. La determinacin del cetnicos de Achillea millefolium y Portulaca oleracea.
porciento de actividad antioxidante se realiza mediante el mtodo del ABTS
2,2-Azinobis-3 Etilbenzotiazolin-6-cido Sulfnico (ABTS) para ello Extracto
se toma en un tubo de ensaye 980L del radical ABTS con %AAO
absorbancia de 0.7 (0.01) y 20L de la muestra, se agita con
vortex y se mide su absorbancia a longitud de 754nm. Hoja de Achillea millefolium 62.4520.685
Resultados y discusin. En la prueba de tamiz fitoqumico se Flor de Achillea millefolium 38.0760.735
obtuvo que la planta de Achillea millefolium y Portulaca oleracea
dieron positivo a presencia de Alcaloides, flavonoides, azcares Hoja de Portulaca oleracea 13.4360.133
reductores, saponinas, taninos, cumarinas, glicsidos cardiacos y Tallo de Portulaca oleracea 15.9910.177
esteroides. Los resultados de la actividad anti-inflamatoria se
muestran en la figura 1 en la cual se observa que la flor de Achillea Flor de Portulaca oleracea 8.5150.049
millefolium presento el mayor porciento de inhibicin de 64 .61%
mientras que la flor de Portulaca oleracea tuvo el menor Conclusiones y perspectivas. Los extractos cetnicos de ambas
porcentaje36.49%, pero de manera general todos los extractos plantas de estudio presentaron una buena actividad anti-inflamatoria
tienen efecto antiinflamatorio comparado con el frmaco comparada con Indometacina y de igual manera poseen
(Indometacina). En la determinacin de la capacidad antioxidante los propiedades antioxidantes debido a los compuestos fenlicos que
mejores resultados fueron hoja de Achillea millefolium con un poseen. Los flavonoides estn relacionados con la actividad anti-
62.45% y tallo de Portulaca oleracea con 15.99% esto quiere decir inflamatoria y estas plantas presentan cantidades significativas.
que tienen la funcin de estabilizar radicales libres y evitar daos Referencias.
celulares. 1. Santamara, L. (2011). Evaluacin de la actividad
antiinflamatoria de los extractos de verdolaga (Portulaca
oleracea) en ratas (Rattus Novergicus) con edema
inducido con carragenina. Escuela Superior Politcnica de
Chimborazo.
2. Tortora, G. J.; Grabowski, S.R. (2002). Principios de
Anatoma y Fisiologa. Mxico. Editorial OXFORD
UNIVERSITY PRESS.
e
NDICE GENERAL
CAPTULO I ............................................................................................................ 1
1.1 INTRODUCCIN ........................................................................................... 1
1.2 PROBLEMATIZACIN .................................................................................. 2
1.3 JUSTIFICACIN ............................................................................................ 4
1.4 OBJETIVOS ................................................................................................... 5
General ............................................................................................................. 5
Especficos ....................................................................................................... 5
1.5 HIPTESIS .................................................................................................... 6
1.6 ALCANCE ...................................................................................................... 6
CAPTULO II. ANTECEDENTES ............................................................................ 7
2.1 Portulaca oleracea (verdolaga) ...................................................................... 7
2.2 Achillea millefolium (milenrama)................................................................... 10
CAPTULO III. REVISIN LITERARIA .................................................................. 13
3.1 Tamz fitoqumico ......................................................................................... 13
a) Definicin de tamz fitoqumico (anlisis fitoqumico) ................................. 13
b) Preparacin de la muestra.......................................................................... 13
3.2 Evaluacin de la actividad antiinflamatoria .................................................. 14
a) Inflamacin ................................................................................................. 14
b) Mediadores qumicos de la inflamacin ...................................................... 15
c) Mtodos para evaluar la actividad antiinflamatoria ..................................... 16
3.3 Evaluacin de la actividad antioxidante ....................................................... 17
a) Radicales libres .......................................................................................... 17
b) Capacidad antioxidante .............................................................................. 17
c) Mtodos para evaluar la actividad antioxidante .......................................... 18
3.4 Evaluacin de la actividad antimicrobiana ................................................... 19
a) Capacidad antimicrobiana ........................................................................ 19
c) Mtodos para evaluacin antimicrobiana .................................................... 19
3.5 Producto Nutracutico y alimento funcional ................................................. 20
CAPTULO IV. MATERIALES Y METODOLOGA ................................................ 21
a) Reactivos, materiales y equipos .................................................................... 21
b) Cepas ............................................................................................................ 21
i
c) Metodologa ................................................................................................... 22
4.1 Preparacin de la muestra ........................................................................... 22
4.2 Pruebas cualitativas ..................................................................................... 22
4.2.1. Alcaloides ............................................................................................. 22
4.2.2. Flavonoides .......................................................................................... 22
4.2.3. Glicsidos cianognicos ....................................................................... 23
4.2.4. Azcares reductores ............................................................................. 23
4.2.5. Saponinas ............................................................................................. 23
4.2.6. Taninos ................................................................................................. 24
4.2.7. Quinonas .............................................................................................. 24
4.2.8. Cumarinas ............................................................................................ 25
4.2.9. Glucsidos cardiacos ............................................................................ 25
4.2.10. Sesquiterpenlactonas ......................................................................... 26
4.2.11. Esteroides ........................................................................................... 26
4.3 Pruebas cuantitativas ................................................................................... 26
4.3.1. Preparacin de la curva de calibracin de fenoles con cido glico ..... 26
Cuantificacin de fenoles en la muestra con cido glico .............................. 27
4.3.2. Preparacin de la curva de calibracin de fenoles con cido cafeco ... 27
Cuantificacin de fenoles totales con cido cafeco ....................................... 27
4.4 Cuantificacin de flavonoides totales con rutina .......................................... 28
4.4.1. Preparacin de la curva de calibracin de flavonoides con rutina ........ 28
Cuantificacin de flavonoides en una muestra ............................................... 28
4.5 Cuantificacin de taninos ............................................................................. 28
4.5.1 Preparacin de la curva de calibracin de taninos con cido tnico ...... 28
Cuantificacin de taninos en la muestra ......................................................... 29
4.6 Evaluacin antimicrobiana ........................................................................... 29
4.7 Evaluacin anti-inflamatoria ...................................................................... 30
4.7.1. Preparacin de la muestra .................................................................... 30
4.7.2. Edema auricular inducido con aceite de crotn .................................... 30
4.8 Determinacin de la actividad antioxidante por el mtodo 2,2-Azinobis-3
Etilbenzotiazolin-6-cido Sulfnico (ABTS) ....................................................... 31
4.8.1 Preparacin de la muestra ..................................................................... 31
ii
4.8.2. Preparacin del radical ABTS ............................................................... 31
4.8.3. Realizacin de la curva tipo con vitamina C ......................................... 31
4.8.4. Preparacin de la prueba ...................................................................... 31
4.9 Determinacin de la actividad antioxidante por el mtodo 2,2-Difenil-1-
picrilhidrazilo (DPPH) ......................................................................................... 32
4.9.1 Preparacin de la muestra ..................................................................... 32
4.9.2. Preparacin del radical DPPH .............................................................. 32
4.9.3. Realizacin de la curva tipo con vitamina C ......................................... 32
4.9.4. Preparacin de la prueba ...................................................................... 32
CAPTULO V. RESULTADOS Y DISCUSIN....................................................... 33
5.1. RESULTADOS Y DISCUSIN DE PRUEBAS CUALITATIVAS ................ 33
Alcaloides ....................................................................................................... 35
Flavonoides .................................................................................................... 36
Azcares reductores ....................................................................................... 37
Saponinas ....................................................................................................... 38
Taninos ........................................................................................................... 39
Cumarinas ...................................................................................................... 40
Glicsidos cardiacos ....................................................................................... 41
Esteroides ....................................................................................................... 42
5.2 RESULTADOS Y DISCUSIN DE PRUEBAS CUANTITATIVAS ............... 43
5.2.1. Cuantificacin de fenoles con cido glico ........................................... 43
5.2.2. Cuantificacin de fenoles con cido cafeco ......................................... 45
5.2.3. Cuantificacin de flavonoides con rutina ............................................... 47
5.2.4. Cuantificacin de taninos con cido tnico ........................................... 49
5.2.4. Cuantificacin de esteroides con colesterol .......................................... 51
5.3. RESULTADOS Y DISCUSIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA ... 53
5.4. RESULTADOS Y DISCUSIN DE LA ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA . 54
Mtodo de edema inducido por aceite de croton ............................................ 54
Porcentaje de inflamacin............................................................................... 55
Porcentaje de inhibicin de la inflamacin ...................................................... 56
5.5 RESULTADOS Y DISCUSIN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE ...... 59
5.5.1. Actividad antioxidante por el mtodo 2,2-Azinobis-3 Etilbenzotiazolin-6-
cido Sulfnico (ABTS) .................................................................................. 59
iii
5.5.2. Actividad antioxidante por el mtodo 2,2-Difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH)
........................................................................................................................ 61
CAPTULO VII. CONCLUSIONES ........................................................................ 63
CAPTULO VIII. RECOMENDACIONES FUTURAS ............................................. 64
ANEXOS ............................................................................................................... 65
1) Preparacin de reactivos usados en el tamiz fitoqumico .............................. 65
2) Preparacin de radicales para evaluacin antioxidante. ................................ 66
REFERENCIAS ..................................................................................................... 67
NDICE DE TABLAS
Tabla 1.Reacciones utilizadas en el anlisis fitoqumico ....................................... 13
Tabla 2.Cantidades de soluciones utilizadas para curva estndar de fenoles ...... 27
Tabla 3. Cantidades de soluciones utilizadas para curva estndar de flavonoides28
Tabla 4. Cantidades de soluciones utilizadas para curva estndar de taninos ..... 29
Tabla 5.Resultados generales del tamiz fitoqumico ............................................. 33
Tabla 6.Resultado de prueba de alcaloides .......................................................... 35
Tabla 7.Resultados de flavonoides ....................................................................... 36
Tabla 8.Resultado de azcares reductores ........................................................... 37
Tabla 9.Resultado de saponinas ........................................................................... 38
Tabla 10.Resultado de taninos .............................................................................. 39
Tabla 11.Resultado de cumarinas ......................................................................... 40
Tabla 12.Resultado de glicsidos cardiacos ......................................................... 41
Tabla 13.Resultado de esteroides ......................................................................... 42
Tabla 14. Concentracin de fenoles en extractos cetnicos de Achillea millefolium
y Portulaca oleracea (cido glico) ................................................................. 44
Tabla 15. Concentracin de fenoles en extractos cetnicos de Achillea millefolium
y Portulaca oleracea (cido cafeco) ............................................................... 46
Tabla 16. Concentracin de flavonoides en extractos cetnicos de Achillea
millefolium y Portulaca oleracea ..................................................................... 48
Tabla 17. Concentracin de taninos en extractos cetnicos de Achillea millefolium
y Portulaca oleracea ....................................................................................... 50
Tabla 18.Concentracin de esteroides en extractos cetnicos de Achillea
Tabla 19. Halos de inhibicin obtenidos de los extractos ...................................... 53
Tabla 20. Pesos de los discos auriculares sin tratamiento .................................... 54
Tabla 21. Peso de los discos auriculares tratados (inflamados)............................ 55
Tabla 22. Porcentaje de inflamacin de extractos e Indometacina ....................... 55
Tabla 23. Porcentaje de inhibicin de la inflamacin de extractos e indometacina 57
iv
Tabla 24. Porcentaje de actividad antioxidante (ABTS) ........................................ 60
Tabla 25. Porcentaje de actividad antioxidante (DPPH) ........................................ 62
NDICE DE FIGURAS
Figura 1. Planta verdolaga. ..................................................................................... 7

Figura 2. Planta mil en rama ................................................................................. 10
Figura 3. Grfica de curva tipo para cuantificacin de fenoles con cido glico ... 43
Figura 4.Grfica de curva tipo para cuantificacin de fenoles con cido cafeco .. 45
Figura 5. Grfica de curva tipo para cuantificacin de flavonoides con rutina ....... 47
Figura 6. Grfica de curva tipo para cuantificacin de taninos con cido tnico ... 49
Figura 7. Grfica de curva tipo para cuantificacin de esteroides con colesterol .. 51
Figura 8. Grfica del porciento de inflamacin de Achillea millefolium y Portulaca
oleracea. ......................................................................................................... 56
Figura 9. Grfica del porciento de inhibicin de la inflamacin de Achillea
Figura 10. Grfica de curva tipo utilizando Trolox, para determinar concentracin
equivalente a estndar contenida en extractos. .............................................. 60
Figura 11. Grfica de curva tipo utilizando Vitamina C, para determinar
concentracin equivalente a estndar contenida en extractos. ...................... 61
v
CAPTULO I
1.1 INTRODUCCIN
Es importante sealar que las plantas medicinales han formado parte importante
en el tratamiento y prevencin de enfermedades desde hace miles de aos,
debido al tipo de vida nmada que tenan los antepasados se vean en la
necesidad de buscar plantas para alimentarse debido a esto fueron descubriendo
que algunas de ellas posean propiedades benficas como aliviar dolores, curar
heridas; y otras tenan como consecuencia intoxicaciones, causaban vmito o mal
estar, hoy en da se sabe esto por los escritos hallados de cada cultura.
Posteriormente se realizaron estudios para determinar el motivo de las
propiedades farmacolgicas de estas plantas y de ah se descubrieron que poseen
ciertas molculas o metabolitos secundarios que son los encargados de las
mltiples funciones como anti-inflamatorio, antioxidante, antimicrobiana, entre
otras.
Posteriormente a esto surgi la medicina aloptica basada en la administracin de

sustancias provenientes de sntesis qumicas las cuales se formulan con otros
aditivos y se les da una forma farmacutica ya sea slida, lquida o semislida
para que su dosificacin sea fcil para los individuos; pero estos tratamientos en
algunas enfermedades pueden llegar a provocar daos adversos, un ejemplo de
ello son los medicamentos anti-inflamatorios no esteroides (AINE`s) que como su
nombre lo indica ayudan a disminuir la inflamacin en enfermedades como artritis
reumatoide, esclerosis, entre otras pero tras una administracin prolongada o
dosis elevadas de estos ocasionan daos gstrico o renal.
Es por ello que hoy en da se ha retomado el uso de plantas medicinales lo que

hoy se conoce como fitofrmacos y el presente trabajo analiza el efecto anti-
inflamatorio, antioxidante y antimicrobiano de Achillea millefolium y Portulaca
oleracea, para este estudio se utiliz el mtodo de edema inducido por aceite de
croton, mtodo de ABTS y DPPH para actividad antioxidante y por ltimo el
mtodo de discos sensitivos para determinar la capacidad antimicrobiana.
1
1.2 PROBLEMATIZACIN
Debido al ritmo de vida a diario que conllevan estrs, fatiga, desgaste fsico entre
otros, es frecuente presentar problemas de inflamacin en diversas partes del
cuerpo o como consecuencia de alguna enfermedad; este proceso consiste
bsicamente en una serie de eventos inespecficos que pueden ser provocados
por numerosos estmulos o agresiones del medio (ej.: agentes biolgicos,
isquemia, interacciones antgeno - anticuerpo, traumatismos, lesiones trmicas o
fisicoqumicas de otra ndole, etc.). Cada tipo de estmulo provoca una respuesta
caracterstica que constituye una variante relativamente menor del mismo
fenmeno. A nivel macroscpico, la respuesta est usualmente acompaada por
conocidos signos clnicos como tumefaccin (edema), rubor, calor, dolor
espontneo a la palpacin y desorden de la funcin tisular.
Durante los ltimos aos se han realizado estudios donde se identific que existen
efectos adversos derivados de la administracin de medicamentos anti-
inflamatorios no esteroides (AINEs) el cido acetil-saliclico, ibuprofeno,
indometacina, diclofenaco, piroxicam, etc. Dentro de estos efectos se encuentran
ejemplos como la toxicidad gastrointestinal y renal, debido en parte, a la inhibicin
de la sntesis de prostaglandinas PGs1 en el estmago o en la mdula renal. El
hecho de la existencia de las dos isoenzimas de la COX 2 en el organismo, podra
explicar los efectos antiinflamatorios a travs de la inhibicin de la COX-23 y los
efectos indeseables (como los gastrointestinales y renales), por la inhibicin de la
COX-14.
Principalmente la parte ms afectada al consumir AINEs es el tracto

gastrointestinal debido a la administracin prolongada, crnica, dosis elevadas o
1
PGs. Prostaglandinas conjunto de sustancias de carcter lipdico derivado de cidos grasos.
2
COX. Ciclooxigenasa es una enzima responsable de la formacin de mediadores biolgicos importantes. La
inhibicin farmacolgica de la ciclooxigenasa alivia los sntomas de la inflamacin.
3
COX-2. Ciclooxigenasa 2 encargada de mediar en los procesos de inflamacin y en la sealizacin.
4
COX-1. Ciclooxigenasa 1 presente en todos los tejidos especialmente en el rin y el tubo gastrointestinal y
participa en la produccin de prostaglandinas que intervienen en procesos fisiolgicos tales como:
proteccin del epitelio gstrico, mantenimiento del flujo renal, la agregacin plaquetaria.
2
no tener un tipo de gastroproteccin y estos casos se presentan a menudo en
personad adultas (65 aos o ms) ya que presentan enfermedades como
osteoartritis y artritis reumatoide, en las cuales el tratamiento est enfocado al uso
de antiinflamatorios.
Como ya se haba mencionado estas lesiones dependen de la inhibicin de las

prostaglandinas, molculas que juegan un papel importante en la proteccin de la
mucosa gstrica y estimulan la formacin de mucus. Los AINEs adems de
producir lesiones locales, reducen el flujo sanguneo y dificultan el funcionamiento
de las defensas de la mucosa del tubo digestivo.
Aproximadamente un 20% de las personas que consumen este tipo de

antiinflamatorios presenta problemas como ardor o dolor en el estmago; pero no
requiere una intervencin clnica. Otro porcentaje de los consumidores entre 15-
30% pueden presentar erosiones en mucosa ocasionada por elevadas dosis, pero
al momento de concluir el tratamiento estos daos comienzan a cicatrizar; y solo
aproximadamente del 2-3% de los consumidores presentan serios problemas a
causa de este tipo de medicamentos como ulceras en duodeno o estmago, una
hemorragia o una perforacin que requieren por lo tanto de un tratamiento clnico.
Cabe mencionar que no todas las personas presentan estos problemas, ya que,
cada organismo tiene diferentes reacciones ante los AINEs, esta diferencia
depende de la edad del individuo, la frecuencia de la administracin, dosis de los
medicamentos, si el paciente presenta alguna enfermedad heptica, renal,
cardiovascular o metablica.
Otro aspecto importante es la falta de caracterizacin y evaluacin de actividad

anti-inflamatoria de plantas medicinales lo que provoca el desconocimiento de los
metabolitos secundarios que tiene cada parte (hoja, tallo, flor) y por lo tanto esto
limita el conocer cuantitativamente cual es la concentracin adecuada y la
cantidad de extracto a administrar. En Mxico existe un amplio campo de
investigacin ya que de todas las plantas medicinales registradas, slo se han
estudiado aproximadamente 500. Ahora bien hablando en cuestin econmica
existe un determinado sector de la poblacin para la cual el uso de plantas
3
medicinales es su nico recurso con el que cuenta, ya que debido sus bajos
ingresos no tiene acceso a medicamentos sintetizados, existen poblaciones donde
debido a creencias religiosa no se les permite utilizar medicamentos para el
tratamiento de sus padecimientos, por tradicin o costumbres o porque en el lugar
donde habitan es difcil encontrar establecimientos del sector salud donde se
comercialicen medicamentos.
1.3 JUSTIFICACIN
Dentro del contexto de los productos naturales anti-inflamatorios, la medicina

tradicional se ha utilizado para tratar y cuidar a pacientes con enfermedades que
conllevan a procesos inflamatorios. En este sentido, la medicina tradicional en la
actualidad, es ampliamente usada en el mundo; por ejemplo, en frica su uso est
por encima de 80%, en China alrededor del 40%, mientras que en Asia y Amrica
Latina las poblaciones continan usando la medicina tradicional como resultado de
circunstancias histricas y creencias culturales, incluso muchos pases
desarrollados utilizan ms que la medicina tradicional, la medicina complementaria
y alternativa as: 75% en Francia, 70% en Canad, 48% en Australia, 42% en USA
y 38% en Blgica (OMS,2002).
Mxico ocupa el segundo lugar a nivel mundial en el nmero de plantas

medicinales registradas con 4500 plantas, despus de china que tiene registradas
5000 y en tercer lugar est Colombia con 2600 plantas.
Actualmente se recomienda la administracin de fitofrmacos a la par de un

tratamiento aloptico para que el efecto teraputico sea mejor con un menor
nmero de administraciones y con una disminucin de efectos adversos, para ello
es importante hacer una caracterizacin de la planta y evaluar cules son los
metabolitos secundarios identificados, posteriormente la cuantificacin de los
mismos, la purificacin y su evaluacin en animales de prueba.
Es por ello que el presente trabajo tiene como finalidad realizar la caracterizacin
Achillea millefolium y Portulaca oleracea y dar a conocer mediante la
experimentacin en un animal de prueba qu tan eficientes son los extractos
4
cetnicos de ambas plantas, conocer las concentraciones ptimas comparadas
con un medicamento comercial (Indometacina) y mediante la realizacin del tamiz
fitoqumico determinar que metabolitos secundarios presenta cada parte de las
plantas.
Mediante esta investigacin se puede sugerir como alternativa el uso de

fitofrmacos de estas especies como los flavonoides, taninos, cumarinas, entre
otros para inhibir el proceso de inflamacin de manera natural y asimismo
disminuir los efectos adversos que como ya se mencion ocasionan los
medicamentos AINEs, o como alternativa para la elaboracin de nuevos
medicamentos elaborados con base en los extractos de dichas plantas.
Finalmente el estudio de estos extractos permitir un uso ms apropiado de los

mismos y con ello contribuir en la economa de las personas con niveles
econmicos bajos sin tener una repercusin en sus ingresos, o para personas de
edad adulta que a consecuencia de la etapa de su vida presentan mayores
complicaciones y por lo tanto el uso ms frecuente de los anti-inflamatorios y en
algunos caso como ya se coment un uso crnico lo que provoca daos en el
tracto gastrointestinal.
1.4 OBJETIVOS
General
Evaluar mediante tamiz fitoqumico los metabolitos secundarios que poseen las
plantas Achillea millefolium y Portulaca oleracea y determinar su actividad anti-
inflamatoria.
Especficos
Determinar si la concentracin administrada de los extractos de las plantas
Achillea millefolium y Portulaca oleracea tienen efecto anti-inflamatorio.
Evaluar si los extractos de las plantas Achillea millefolium y Portulaca
oleracea tienen actividad antioxidante y/o antimicrobiana.
Determinar si las plantas Achillea millefolium y Portulaca oleracea tienen
propiedades para ser un producto nutracutico.
5
1.5 HIPTESIS
Hi: La concentracin administrada por va oral a los ratones CD1 de los extractos
de las plantas Achillea millefolium y Portulaca oleracea tienen relacin con la
actividad anti-inflamatoria.
H0: La concentracin administrada a los ratones CD1 no tiene relacin con el

efecto anti-inflamatorio de los extractos de Achillea millefolium y Portulaca
oleracea.
1.6 ALCANCE
El presente trabajo de investigacin se realiz en el laboratorio de farmacologa de

la Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnologa en el periodo de agosto
2013 a junio 2014, con dos tipos de alcances:
Alcance descriptivo: el cual pretende identificar que metabolitos secundarios

poseen las plantas de estudio Achillea millefolium y Portulaca oleracea.
Alcance correlacional: en el que se busca determinar cmo es la relacin de la

concentracin de extracto administrada en funcin de la actividad anti-inflamatoria.
6
CAPTULO II. ANTECEDENTES
2.1 Portulaca oleracea (verdolaga)
Figura 1. Planta verdolaga.
Fuente: Tenorio Lezama, P. (2009)
Nombre comunes usados en espaol
Uadela, Verdolaga.
Taxonoma
Reino: Plantae; Subreino: Traqueobionta (plantas vasculares); Superdivisin:

Spermatophyta (plantas con semillas); Divisin: Magnoliophyta (plantas con flor);
Clase: Magnoliopsida (dicotiledneas); Subclase: Caryophyllidae; Orden:
Caryophyllales.
Distribucin en Mxico
Se encuentra en Chiapas, Durango, Guanajuato, Guerrero, Hidalgo, Jalisco,

Estado de Mxico, Michoacn, Morelos, Nuevo Len, Oaxaca, Puebla, Quertaro,
Quintana Roo, San Lus Potos, Sinaloa, Tabasco, Tamaulipas, Tlaxcala,
Veracruz, Yucatn, Zacatecas (Villaseor y Espinosa, 1998).
7
Descripcin tcnica
De acuerdo con estudios realizados por Rzedowski & Rzedowski, (2001),

Portulaca oleracea presenta las siguientes caractersticas.
a) Hbito y forma de vida: Hierba carnosa, rastrera, a veces algo ascendente,

con pocos pelos o sin ellos.
b) Tamao: De 5 a 40 cm de largo.
c) Tallo: A veces rojizo, ramificado, con las ramas extendidas radialmente.
d) Hojas: Alternas, obovado-cuneadas a espatuladas, de 0.5 a 3 (5) cm de
largo, por 0.2 a 1.5 cm de ancho, pice redondeado o truncado, base
cuneada.
e) Flores: Flores ssiles, solitarias o agrupadas por pocas, rodeadas por
escasos (a veces ningunos) pelos inconspicuos; spalos ovados a
orbiculares, de 2.5 a 4.5 mm de largo y de ancho, algo aquillados; ptalos
amarillos, de 3 a 5 mm de largo; estambres 6 a 10, estilo 4 a 6-lobado.
f) Frutos y semillas: El fruto es una cpsula de 5 a 9 mm de largo, circuncsil
cerca de la mitad; semillas circulares, rara vez triangulares, comprimidas,
color caf o negro, granular-tuberculadas, de casi 1 mm de ancho.
Propagacin, dispersin y germinacin
Se propaga por semillas.
Ciclo de vida
Planta anual.
Fenologa
Crece en primavera y florece desde mediados de esta estacin o principios de

verano. Fructifica de junio a diciembre.
Usos
Comestible y medicinal (diurtica, refrescante, purgante, contra enfermedades de

la vejiga e hgado y para calmar dolores renales).
8
Estudios previos reportados de Portulaca oleracea
Anteriormente se han realizado estudios relacionados con esta planta algunos de

ellos se mencionan en la siguiente lista:
En la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo, (Ecuador-2011). Se

realiz el estudio de la actividad antiinflamatoria de verdolaga, la tcnica
para hacer el estudio fue edema plantar inducido por carragenina.
En el Laboratorio de histopatologa, Facultad de Medicina, Universidad
Autnoma de Quertaro, (Quertaro-2011). El estudio fue efecto de plantas
comestibles mexicanas sobre el desarrollo de cncer de colon inducido con
1,2-dimetilhidrazina en ratas sprague-dawley, en el cul se evalu la
capacidad antioxidante de la verdolaga.
En la Unidad Acadmica Multidisciplinaria Zona Huasteca, Universidad
Autnoma de San Luis Potos, (Mxico-2008). Reportan un artculo donde
se menciona a la verdolaga como una de las plantas comestibles con
efectos antioxidantes, pero no se hace mencin de estudios realizados o
mediante que procedimiento lo determinan, solo es un artculo hecho a
base de lo reportado en bibliografa.
En las Normas para medicamentos naturales, tradicionales y
homeopticos, (Bolivia-2001). Hace mencin dentro de una de sus tablas
reportadas que la verdolaga posee efectos antiinflamatorios, no se hace
mencin de mtodo de estudio.
En la Universidad de San Carlos de Guatemala, Facultad de Ciencias
Qumicas y Farmacia, (Guatemala-2012). Se hace referencia de que la
verdolaga es apropiada para combatir anemia, no se hace mencin de
mtodos de estudio.
En la Universidad San Carlos de Guatemala, Centro Universitario de
Oriente, (Guatemala-2008). Se llev a cabo una investigacin en tres
poblados de Guatemala y se identific a la verdolaga como una planta con
propiedades medicinales, pero en los estudios posteriores que realizaron
no utilizaron a sta para su anlisis.
9
2.2 Achillea millefolium (milenrama)
Figura 2. Planta mil en rama
Fuente: Tenorio Lezama, P. (2009)
Nombres comunes usados en espaol
Mil hojas, ciento en rama, plumajillo, plumajo, alcanfor.
Taxonoma
Reino: Plantae; Subreino: Traqueobionta (plantas vasculares); Superdivisin:

Spermatophyta (plantas con semillas); Divisin: Magnoliophyta (plantas con flor);
Clase: Magnoliopsida (dicotiledneas); Subclase: Asteridae; Orden: Asterales.
Distribucin en Mxico
Se reporta de prcticamente todo el pas de regiones templadas: Baja California

Norte, Chiapas, Chihuahua, Coahuila, Distrito Federal, Durango, Guanajuato,
Guerrero, Hidalgo, Estado de Mxico, Michoacn, Morelos, Nayarit, Nuevo Len,
Oaxaca, Puebla, Quertaro, San Lus Potos, Sonora, Tamaulipas, Tlaxcala,
Veracruz y Zacatecas (Villaseor y Espinosa, 1998).
Descripcin tcnica
De acuerdo con estudios realizados por Rzedowski & Rzedowski, (2001), Achillea
millefolium presenta las siguientes caractersticas.
10
a) Hbito y forma de vida: Planta herbcea y perenne.
b) Tamao: Hasta un metro de alto.
c) Tallo: Erguido, simple o a veces ramificado superiormente, ms o menos
viloso (con pelos cortos).
d) Hojas: Alternas, hasta 20 cm de largo, divididas en segmentos finos, linear-
oblongas a lanceoladas en contorno general, las inferiores lanceoladas y
cortamente pecioladas, el resto ssiles.
e) Inflorescencia: Cabezuelas numerosas agrupadas en panculas
corimbiformes (con las flores ms o menos en un plano), densas,
pednculos de hasta 5 mm de largo.
f) Cabezuela/flores: Involucro campanulado de 3 a 5 mm de largo por 3 mm
de ancho, brcteas 15 a 20, graduadas en 4 series, las ms largas de 4 a 5
mm de largo, glabras o vilosas, con la nervadura central verde y los
mrgenes por lo general de color caf; receptculo cnico, pleas
oblongas, de 3 mm de largo; flores de dos formas: flores liguladas 5,
sus corolas por lo general blancas, femeninas, sus lminas orbiculares a
cuadrngulares, de 2 a 3 (4) mm de largo; flores del disco 20, sus corolas
amarillentas o blanquecinas, hermafroditas, tubulosas, o bien, con la
garganta campanulada, de 2 a 3 mm de largo.
g) Frutos y semillas: Fruto un aquenio oblongo a obovado, comprimido, de 2 a
3 mm de largo, glabro, blanco a gris, finamente estriado en forma
longitudinal.
Propagacin
Por semillas y rizomas.
Fenologa
Fructifica en verano y principios de otoo (julio y octubre).
Usos
Medicinal y ornamental.
11
Estudios previos reportados de Achillea millefolium
Anteriormente se han realizado estudios relacionados con esta planta algunos de

ellos se mencionan en la siguiente lista:
En la Universidad de el Salvador, Facultad de Qumica y Farmacia, (El

Salvador-2013). El estudio lleva por ttulo Recopilacin de informacin
cientfica de treinta y una plantas medicinales utilizadas en la fabricacin de
productos naturales y elaboracin de un herbario. En este proyecto solo se
describe la taxonoma de milenrama y hace mencin a su actividad
antiinflamatoria pero no se hace mencin de tcnicas ni se reportan datos
que comprueben esto.
En las Normas para medicamentos naturales, tradicionales y homeopticos,
(Bolivia-2001). Hace mencin dentro de una de sus tablas reportadas que la
planta milenrama posee efectos antiinflamatorios, no se hace mencin de
mtodo de estudio.
En la Revista Cubana, (Cuba-1998). Publica un artculo del Instituto de
Investigaciones Fundamentales en Agricultura Tropical Alejandro de
Humboldt. El nombre del estudio fue estudios fenolgicos en plantas
medicinales, en este solo se hace mencin de las caractersticas de la
planta describiendo la flor, tallo, hojas, temporada donde florece y entre
otras caractersticas taxonmicas.
12
CAPTULO III. REVISIN LITERARIA
3.1 Tamz fitoqumico
a) Definicin de tamz fitoqumico (anlisis fitoqumico)
El anlisis fitoqumico es un estudio cualitativo que se le realiza a los extractos de

las plantas medicinales con la finalidad de identificar mediante reacciones de
coloracin y/o precipitacin la presencia o ausencia de metabolitos secundarios;
dichos metabolitos son los que estn relacionados con las distintas actividades
biolgicas que poseen las plantas medicinales.
b) Preparacin de la muestra
Tomar 10 g de la muestra a analizar en un mortero y se aaden 30 mL de ter de

petrleo y 30 mL de una mezcla de 9:1 de metanol-agua. Se macera la muestra.
Posteriormente en un embudo de separacin se deja en reposo hasta la formacin
de dos capas. La capa del fondo es la formada por metanol-agua y es la fraccin
polar. La capa superior es la conformada por el ter de petrleo y es la fraccin no
polar.
En la siguiente tabla se muestran los metabolitos que se pueden identificar en este

tipo de anlisis as como los nombres de algunas reacciones reportadas en la
literatura.
Tabla 1.Reacciones utilizadas en el anlisis fitoqumico
Metabolitos/Reaccin Metabolitos/Reaccin
Flavonoides Quinonas
Reaccin de Shinoda Reaccin con hidrxido de amonio
Reaccin con hidrxido de sodio al 10% Reaccin de cido sulfrico
Cumarinas
Glicsidos cianognicos Reaccin de Erlich
13
Azcares reductores Glicsidos cardiacos
Reaccin de Fehling Reaccin Legal
Reaccin de Benedic Reaccin de Baljet
Taninos
Alcaloides
Reaccin de cloruro frrico
Reaccin de Dragendorff
Reaccin con gelatina
Reaccin de Sonneschain
Reaccin con ferrocianuro de potasio
Sesquiterpenlactonas Esteroides
Saponinas
Reaccin de Rosenthaler
Fuente: Elaboracin propia. Nota: Los nombres mostrados en negritas son los metabolitos
secundarios que se identifican y luego de ellos el nombre de las reacciones para su identificacin.
3.2 Evaluacin de la actividad antiinflamatoria
a) Inflamacin
Cuando un tejido presenta una lesin tisular ya sea por efecto de patgenos,
abrasiones, irritaciones qumicas, deformaciones o trastornos celulares y
exposicin a temperaturas extremas, se genera una inflamacin en dicho tejido
como respuesta defensiva e inespecfica del organismo. Existen cuatro sntomas o
signos que caracterizan al proceso de inflamatorio son: rubor, dolor, calor y
tumefaccin (Tortora; Derrickson, 2002).
Con base a lo reportado por Guyton y Hall la inflamacin presenta las siguientes
caractersticas:
1. Dilatacin de los bazos sanguneos locales, exceso del flujo sanguneo

local.
2. Aumento de permeabilidad en capilares.
3. Coagulacin del lquido en los espacios intersticiales ocasionado por
exceso de fibringeno y otras protenas.
4. Migracin de gran cantidad de granulocitos y monocitos al tejido lesionado.
5. Tumefaccin de las clulas tisulares.
14
b) Mediadores qumicos de la inflamacin
Histamina
Es un mediador ampliamente distribuido por el organismo aunque se detecta

principalmente en el mastocito y basfilo. Deriva, por descarboxilacin, del
aminocido histidina. Su accin es mediada por tres tipos de receptores (H1, H2 y
H3) y como mediador qumico del proceso infamatorio estimula la vasodilatacin,
la permeabilidad vascular y la adhesin leucocitaria (Choyillas, 2000).
Citoquinas
Son mediadores de tipo proteico que funcionan como reguladores de la

inflamacin, reparacin y de la respuesta inmune. Son producidas por muchas
clulas, pero no se detectan en el suero; actan en las cercanas de las clulas
que las produjeron. Funcionan como seales intercelulares, su funcin es actuar
sobre la clula blanco a travs de un receptor especfico (Choyillas, 2000).
Serotonina
Es producida por las plaquetas y tiene por funcin aumentar la permeabilidad

vascular, siendo en parte responsable de la formacin de edema. Su liberacin de
las plaquetas se estimula cuando estas se agregan tras su contacto con el
colgeno, la trombina, el adenosin difosfato (ADP) y los complejos antgeno-
anticuerpo (Choyillas, 2000).
Prostaglandinas
Las prostaglandinas son eicosanoides derivados de lpidos de membrana.

Proceden del cido araquidnico por accin de la enzima ciclooxigenasa. El cido
araquidnico procede de un fosfolpido de membrana. La ciclooxigenasa es la
enzima que acta sobre el cido araquidnico de la cual se conocen dos formas
denominadas 1y2 (Cox-1 y Cox-2). La Cox-1 es constitutiva y la Cox 2 es inducida
por citoquinas y factores de crecimiento (Choyillas. T., 2000).
15
c) Mtodos para evaluar la actividad antiinflamatoria
De acuerdo a lo reportado por Nez, Mateo, Agero, et al. (2007) algunos
mtodos empleados para determinar la actividad anti-inflamatoria son los
siguientes:
Inflamacin aguda inducida por agentes flogsticos
El edema es inducido en la pata derecha trasera de los ratones por la inyeccin de

un volumen de 0.1 mL de soluciones de los diferentes agentes flogsticos:
carragenina 1%, dextrn 1%, histamina 1% y serotonina 0.01% en solucin salina.
La pata contralateral recibe igual volumen de solucin salina. Los volmenes de

ambas patas son medidos con ayuda de un pletismmetro 4 horas despus de
inducido el edema y a la hora del resto de los edemas. El volumen del edema se
determina a partir de la diferencia entre los volmenes de la pata derecha e
izquierda. La actividad antiinflamatoria se expresa a travs del porciento de
inhibicin del edema con respecto al grupo control.
Edema auricular inducido por aceite de crotn
Una hora despus de administrar los extractos se provoca el edema auricular

administrando 50 L de aceite de crotn 5% en etanol 95% en la oreja derecha y
50 L de etanol 95% en la oreja izquierda de los animales. Transcurridas 3 horas
de la induccin de la inflamacin, los animales son sacrificados por dislocacin
cervical y se obtiene discos de 5 mm de dimetro de cada oreja. Los mismos son
pesados en una balanza analtica y posteriormente se calcula la diferencia entre el
peso de la oreja tratada y el de la oreja control. La actividad antiinflamatoria se
expresa a travs del porciento de inhibicin del edema con respecto al grupo
control.
16
Granuloma inducido por pellets de algodn
Cuatro discos de algodn de 50 mg de peso son implantados bajo la regin

escapular de cada animal. Veinticuatro horas despus de la ltima administracin
se sacrifican todos los animales y se extraen los granulomas, el timo y las
glndulas suprarrenales de cada animal para determinar sus pesos.
Procesamiento estadstico: se calcula la media desviacin estndar de los

parmetros analizados en cada ensayo para cada grupo. Los datos se procesan
mediante un anlisis de varianza de una va (ANOVA) y posteriormente se realiza
un test de Ducan considerando diferencias significativas de al menos p>0.05.
3.3 Evaluacin de la actividad antioxidante
a) Radicales libres
El oxgeno est en la superficie terrestre aproximadamente en un porcentaje del

21% y los seres vivos requieren de el para diversos procesos metablicos, pero
tambin este elemento puede ser txico ya que algunas molculas (radicales
libres) presentan estado inestable, tienen uno o ms electrones libres y por ello
estn en constante bsqueda de otras molculas para adherirse y esta unin da
como resultado la degradacin de las clulas; cuando estos radicales se
encuentran en dosis elevadas en el organismo pueden ocasionar, (Dalla, 2008):
Envejecimiento
Ateroesclerosis
Lesiones en mucosas y estructuras celulares
Lesiones en cadena gentica
b) Capacidad antioxidante
Algunos extractos vegetales presentan dentro de su estructura molculas como

polifenoles y flavonoides que al ser consumidas colaboran con el metabolismo
para retrasar o inhibir la oxidacin, estas molculas pueden actuar mediante
17
diferentes mecanismos como es transformando los perxidos en especies menos
reactivas, disminuyendo la concentracin de oxidantes, disminuyendo la
propagacin, etc.
c) Mtodos para evaluar la actividad antioxidante

De acuerdo a lo reportado por Kuskoski, Asuero, Troncoso, et al. (2005) algunos
mtodos empleados para determinar la actividad antioxidante son los siguientes:
Mtodo ABTS
El radical ABTS se obtiene tras la reaccin de ABTS (7 mM) con persulfato

potsico (2.45 mM, concentracin final) incubados a temperatura ambiente (25
C) y en la oscuridad durante 16 h. Una vez formado el radical ABTS + se diluye
con etanol hasta obtener un valor de absorbancia comprendido entre 0.70 (0.1) a
754 nm (longitud de onda de mxima absorcin). Las muestras filtradas se diluyen
con etanol hasta que se produce una inhibicin del 20 al 80%, en comparacin con
la absorbancia del blanco, tras aadir 20 L de la muestra. A 980 L de dilucin
del radical ABTS+ as generado se le determina la absorbancia 754 a 30C, se
aade 20 L de la muestra (extracto) y se mide nuevamente la absorbancia
pasado 1 minuto. La absorbancia se mide de forma continua transcurridos 7
minutos. El antioxidante sinttico de referencia, Trolox, se ensaya a una
concentracin de 0-15 M (concentracin final) en etanol, en las mismas
condiciones, lo que se hace tambin con cido ascrbico (0-20 mg/100 mL).
Mtodo DPPH
Se basa en la reduccin de la absorbancia medida a 515 nm del radical DPPH+,

por antioxidantes. El mtodo descrito por KIM et al., se basa en la medida de la
absorbancia del radical DPPH+ disuelto en metanol al 80%, a la longitud de onda
de 517 nm. Se aade 0.1 mL de la muestra (extracto) o patrn, la mezcla se
homogeniza cuidadosamente, y se mantiene en la oscuridad durante 30 minutos.
Las medidas de absorbancia a 517 nm se realizan antes de aadir la muestra y
pasados los 30 y 60 minutos. La concentracin de DPPH+ en el medio de reaccin
se calcula a partir de una curva de calibracin obtenida por regresin lineal. Los
18
resultados se expresan en actividad equivalente a Trolox. El antioxidante sinttico
de referencia Trolox, a una concentracin de 0,08-1,28 mM en disolucin de
metanol al 80%, se ensaya en las mismas condiciones.
3.4 Evaluacin de la actividad antimicrobiana
Esta actividad se realiza con la finalidad de identificar si los extractos poseen

molculas capaces de inhibir el crecimiento de B. cereus, B. subtillis, E.
agglomerans, K. pneumoniae, L. monocytogenes, Y. enterocolitica mediante
bioensayos.
a) Capacidad antimicrobiana
La capacidad antimicrobiana de un extracto vegetal se define como una

caracterstica de stos para inhibir el crecimiento de ciertos microorganismos
mediante la produccin de antibitico como producto de su metabolismo, esta
capacidad vara dependiendo de la cepa con la que se analizan los extractos,
debido a esto se recomienda realizar las pruebas en microorganismos Gram (+),
Gram (-).
Esta inhibicin puede ser ocasionada por los siguientes factores: inhibicin de la
sntesis de la pared celular, inhibicin de la traduccin de material gentico,
inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos, etc.
c) Mtodos para evaluacin antimicrobiana
De acuerdo a lo reportado por Prez, Rojas, Doncel, et al. (2011) algunos mtodos
empleados para determinar la actividad antimicrobiana son los siguientes:
Mtodo de orificio sobre agar
Consiste en realizar orificios con la ayuda de un barrenador estril de 8 mm de

dimetro sobre la superficie del agar, dentro de los cuales se depositan 70l de los
diferentes extractos y se sellan con el mismo agar. Las placas se incuban durante
19
24 horas a 37 C. Para cada microorganismo, se utilizan controles positivos de
Gentamicina 80 mg/ mL y negativos agua destilada. Los ensayos se realizan por
triplicado y la evaluacin se hace por medicin del dimetro de las zonas de
inhibicin de crecimiento alrededor de los orificios. El efecto inhibitorio de los
extractos vegetales son obtenidos por la diferencia con el etanol y su eficiencia se
compara con el control positivo.
Mtodo de discos sensitivos
Se obtienen discos estriles de papel filtro y se sumergen por un tiempo de 24

horas en cada extracto, posteriormente y en condiciones aspticas se depositan
sobre la superficie de una placa de agar. El periodo y la temperatura de incubacin
son 24 horas a 37 C. Los ensayos se realizan por triplicado y la evaluacin se
hace por medicin del dimetro de las zonas de inhibicin de crecimiento
alrededor de los discos.
3.5 Producto Nutracutico y alimento funcional
Existen distintas expresiones para nombrar a un alimento que adems de sus

nutrientes posee molculas que aportan beneficios a la salud al ser consumidas.
Un alimento funcional tiene una apariencia similar a la de un alimento

convencional, se consume como parte de una dieta normal y, adems de su
funcin nutritiva bsica, se ha demostrado que presenta propiedades fisiolgicas
beneficiosas y/o reduce el riesgo de contraer enfermedades crnicas(Mazza,
2000).
Un producto nutracutico es elaborado a partir de un alimento, pero que se vende

en forma de pldoras, polvos (porciones) y otras presentaciones farmacuticas no
asociadas generalmente con los alimentos y que han demostrado tener
propiedades fisiolgicas beneficiosas o protege contra enfermedades crnicas
(Mazza, 2000).
20
CAPTULO IV. MATERIALES Y METODOLOGA
a) Reactivos, materiales y equipos
Acetona Cloroformo Medio antibitico 1

cido cafeco Actico anhidro Medio antibitico 2
Agua destilada H2SO4 concentrado Caldo nutritivo
CCarbonato de sodio 20% Cloruro frrico 1% Asa bacteriolgica
Reactivo de Dragendorff Ferrocianuro de potasio 1% Mechero
Solucin de Fehling B Reactivo de Sonneschain Incubadora
Reactivo de Rosenthaler Reactivo de Grignard Campana de extraccin
Capsula de porcelana Reactivo de gelatina Campana de flujo laminar
Cloruro de aluminio 10% ter de petrleo Autoclave
Folin-Ciocalteu Etanol Sonicador
Nitrato de sodio 5% NaCl 2% Mortero
Radical ABTS* NaOH 1M Matraces aforados
Radical DDPH Solucin de Fehling A Espectrofotmetro
Reactivo de Lieberman-B. Reactivo de Benedict Celdas
Vitamina C Tubos de ensaye Micropipetas
HCl Matraces Vasos de precipitado
HCl al 10% Vortex Embudo de separacin
NaOH al 10% Cajas petri Rejilla
Tabletas ketoconazol 200mg Cefalosporinas Papel filtro
b) Cepas
B. cereus E. agglomerans L. monocytogenes

B. subtillis K. pneumoniae Y. enterocolitica
C. albicans S. aureus
21
c) Metodologa
4.1 Preparacin de la muestra

Se pesaron 5 g de la muestra y se coloc en un matraz de 150 mL, se le
agregaron 15 mL de una solucin de metanol-agua 9:1 y 15 mL de ter de
petrleo, posteriormente se snico 15 minutos. La muestra se filtr y se coloc en
un embudo de separacin, de la cual se obtuvo la fase polar y la no polar.
4.2 Pruebas cualitativas
4.2.1. Alcaloides
Se tom una porcin del extracto y se adicionaron entre 5 mL a 10 mL de cido
clorhdrico al 10%, se calent a ebullicin por cinco minutos, se enfri y filtro.
Posteriormente se dividi el filtrado en 3 tubos de ensaye, uno de los cuales fue el
tubo testigo.
a) Reaccin de Dragendorff
Se adicion una gota del reactivo de Dragendorff, la prueba se considera positiva
si se forma un precipitado naranja o blanco.
b) Reaccin de Sonneschain
Se adicion una gota del reactivo de Sonneschain, la prueba se considera positiva
si se forma un precipitado naranja.
4.2.2. Flavonoides
Se disolvieron 0.5 mL del extracto en 2 mL de etanol absoluto y se dividi en tres
tubos. El tercer tubo se utiliz como testigo.
a) Reaccin de Shinoda
Se adicionaron 2 gotas de cido clorhdrico concentrado, si se obtiene una
coloracin roja indica la presencia de auronas o chalconas.
En caso de haber cambio, colocar un trozo de magnesio metlico, si se forma una

coloracin naranja o rojo, indica la presencia de flavonas; si es rojo flavonoles y si
es magenta flavononas.
22
b) Reaccin de hidrxido de sodio al 10%
Se adicionaron 3 gotas de hidrxido de sodio, si se forma una coloracin de
amarillo a rojo, indica la presencia de xantonas y flavonas; de caf a naranja de
flavonoles; de purpura a rojizo de chalconas y de azul de antocianinas.
4.2.3. Glicsidos cianognicos

En un tubo de ensaye con 0.5 mL de extracto, se adicion 1 mL de cido
clorhdrico concentrado al 10% y 1 mL de cloroformo. Se calent el tubo en bao
Mara y se coloc en la boca del tubo una tira de papel filtro impregnado con el
reactivo de Grignard. La formacin de una mancha rosa a rojo indica la prueba
positiva.
4.2.4. Azcares reductores

Se tomaron 2 mL del extracto, midiendo el pH y se adicion hidrxido de sodio al
10% (si es necesario) hasta obtener un pH de 11. Se dividi el extracto en dos
tubos de ensaye para las siguientes pruebas.
a) Reaccin de Fehling
Se adicionaron 0.5 mL de solucin de Fehling A y 0.5mL de solucin de Fehling B
y 1 mL de agua destilada.
b) Reaccin de Benedict
Se adicionaron 0.5 mL del reactivo de Benedict y 1 mL de agua destilada.
Se prepar un blanco para cada tubo, sin extracto. Se colocaron los tubos en bao
Mara por 15 minutos. Cuando hay azucares en los tubos que contienen el
extracto se forma un precipitado de color naranja o rojo.
4.2.5. Saponinas
a) Prueba de altura y estabilidad de espuma

En un tubo de ensaye se coloc 1 mL del extracto, se agit vigorosamente y se
tom la altura de la espuma, en caso de que se presentara.
La prueba se considera positiva si la espuma alcanza una altura de 8 mm a 10 mm
y se mantena estable por 30 minutos.
23
b) Reaccin de Lieberman Bouchard
Se concentraron 0.5 mL de extracto hasta 0.2 mL; despus se agregaron 2 gotas
de cido actico anhidro y se estratific con 2 gotas de cido sulfrico
concentrado. Al formarse una coloracin azul o verde en la interfase, se indica
presencia de saponinas esteroidales; si la coloracin es rosa, roja, magenta o
violeta indica presencia de saponinas triterpenoides.
c) Reaccin de Rosenthaler
A una porcin del extracto concentrado se adicionaron dos gotas del reactivo
Rosenthaler y se estratifico con dos gotas de cido sulfrico concentrado.
La formacin de una coloracin violeta, se considera positiva para saponinas
triterpenoides.
4.2.6. Taninos
A 1 mL del extracto se adicionaron 2 mL de agua destilada y 3 gotas de cloruro de
sodio al 2%, se calent el tubo a ebullicin por 1 minuto, se enfri y filtro.
Se dividi el filtrado en cuatro tubos de ensaye, el cuarto tubo se utiliz como
testigo.
a) Reaccin con gelatina

A uno de los tubos de ensaye se le adicionaron 2 gotas del reactivo de Gelatina.
La formacin de un precipitado blanco indica presencia de taninos.
b) Reaccin de cloruro frrico

A un tubo de ensaye se le adicion una gota de cloruro frrico al 1%, la formacin
de coloraciones de azul a negro indica la presencia de derivados del cido glico y
coloraciones verdes de derivados del catecol.
c) Reaccin con ferrocianuro de potasio

Al tercer tubo se le agreg una gota de ferrocianuro de potasio al 1%.
La formacin de una coloracin azul, indica la presencia de compuestos fenlicos.
4.2.7. Quinonas
Se colocaron 2 mL del extracto en una capsula de porcelana y se concentr a
sequedad, posterior a ello se dividi el extracto en tres porciones.
24
a) Reaccin de hidrxido de amonio
Se adicion una gota de hidrxido de amonio concentrado al extracto.
Se considera la prueba positiva para antraquinonas al tener la presencia de una
coloracin roja que aparece en los dos primeros minutos.
b) Reaccin con cido sulfrico

Se agreg una gota de cido sulfrico concentrado a otra porcin del extracto. La
formacin de una coloracin roja indica la presencia de antraquinonas.
4.2.8. Cumarinas
a) Reaccin de Erlich
Se colocaron 0.5 mL de extracto en una capsula de porcelana, se concentr y se
agregaron dos gotas del reactivo de Erlich y una gota de cido clorhdrico
concentrado. La coloracin naranja indic presencia de cumarinas.
b) Reaccin con hidrxido de amonio

Se concentr otra porcin del extracto y se le adicionaron 0.5 mL de etanol y dos
gotas de hidrxido de amonio concentrado. Se considera positiva la prueba si se
presenta una fluorescencia azul-violeta.
4.2.9. Glucsidos cardiacos

Se transfirieron 2 mL del extracto a una capsula de porcelana y se concentr a la
tercera parte de su volumen original. Se dividi el extracto en tres porciones en
una placa de porcelana con muescas.
a) Reaccin de Legal
Se dej evaporar el disolvente y se adicionaron 2 o 3 gotas de piridina, se agrega
una gota de nitroprusiato de sodio al 5% y cuatro gotas de hidrxido de potasio,
una coloracin roja poco estable indica la presencia de glucsidos cardiacos.
b) Reaccin de Baljet
Se adicionaron 3 gotas del reactivo de Baljet. Una coloracin de naranja a rojo
obscuro indica presencia de Glucsidos cardiacos.
25
4.2.10. Sesquiterpenlactonas
a) Reaccin con hidrximato frrico

Se agreg una porcin del extracto a una capsula de porcelana, se le adicionaron
dos gotas de clorhidrato de hidroxilamina 2 N y una gota de hidrxido de potasio 2
N en metanol. Se calent la mezcla a ebullicin a 1 a 2 minutos, se enfri y se
llev a un pH de 1 con cido clorhdrico 0.5 N. Se adicion una gota de cloruro
frrico al 1%. Las coloraciones roja, violeta o rosa indican que la prueba es
positiva para este metabolito.
4.2.11. Esteroides
a) Prueba de Lieberman-Bouchard
Se coloc aproximadamente 1 mL de la fraccin no polar en un crisol; se evapor

casi hasta sequedad y se adicionaron 3 a 4 gotas de cloroformo. Se reparti la
mezcla en el platillo de pruebas, se sec al aire y se adicionaron gotas de anhidro
actico seguido por una gota de cido sulfrico concentrado. Una coloracin azul
o verde indica presencia de esteroides, la coloracin roja, rosa o violeta indica
triterpenos y un color amarillo plido indica esteroides o triterpenos saturados.
4.3 Pruebas cuantitativas
4.3.1. Preparacin de la curva de calibracin de fenoles con cido glico

Se utiliz una solucin estndar de cido glico (0.1 mg/mL) de la cual se tomaron
volmenes de 20 L a 160 L en intervalos de 20 L y se complet el volumen de
cada uno a 500 L con agua destilada.
En la tabla 2 se observan las sustancias utilizadas y la secuencia de aadir cada

una para realizar la curva tipo, que posteriormente ser utilizada para hacer la
cuantificacin.
26
Tabla 2.Cantidades de soluciones utilizadas para curva estndar de fenoles
Solucin de
Agua
cido glico Folin 1N S Na2CO3 20% R
Tubo destilada
(0.1mg/mL) L O L E
L
L N P
Blanco 0 500 250 I 1250 O
1 20 500 250 C 1250 S
2 40 500 250 A 1250 A
3 60 500 250 R 1250 R
4 80 500 250 5 1250 2
5 100 500 250 M 1250 0
6 120 I M
500 250 1250
7 140 N I
500 250 1250
8 160 N
500 250 1250
Cuantificacin de fenoles en la muestra con cido glico

Se pesaron 2 mg de la muestra y se disolvieron en acetona. Se diluyo 1:10 en
agua destilada y de esta solucin se tomaron 100 L para completarse a 500 L
con agua destilada.
A cada uno de los estndares y muestras previamente preparados se le

adicionaron 250 L del reactivo de Folin-Ciocalteu 1 N y se sonic por 5 minutos.
Posteriormente se adicionaron 1250 L de carbonato de sodio al 20% y se dej
reposar por 20 minutos. La absorbancia fue medida a 760 nm.
4.3.2. Preparacin de la curva de calibracin de fenoles con cido cafeco

Para la realizacin de la curva tipo se manej como estndar cido cafeco a las
concentraciones de 10, 20, 30, 40, 75 y 100 L/mL.
Cuantificacin de fenoles totales con cido cafeco

Se diluy el extracto 1:10 en agua destilada, se tomaron 200 L de la muestra y se
aadieron 50 L del reactivo de Folin-Ciocalteu 2 N y 1 mL de carbonato de sodio
al 7.5%. Se mezcl y agito dejndose reaccionar 30 minutos. Finalmente se
determin la absorbancia a 765 nm.
27
4.4 Cuantificacin de flavonoides totales con rutina
4.4.1. Preparacin de la curva de calibracin de flavonoides con rutina

Se utiliz una solucin estndar de rutina (0.1 mg/mL) de la cual se tomaron
volmenes de 20 L a 100 L en intervalos de 20 L.
Tabla 3. Cantidades de soluciones utilizadas para curva estndar de

flavonoides
Solucin de rutina
Agua destilada NaNO2 5% AlCl3 10% NaOH 1M
Tubo (0.1mg/mL)
L L L L
L
Blanco 0 1250 75 150 500
1 20 1250 75 150 500
2 40 1250 75 150 500
3 60 1250 75 150 500
4 80 1250 75 150 500
5 100 1250 75 150
Fuente: Elaboracin propia.
Cuantificacin de flavonoides en una muestra

Se pesaron 2 mg de extracto y se disolvieron acetona. Se diluy 1: 10 en agua
destilada.
De acuerdo a la metodologa de Liu y col. 2002, a cada uno de los estndares y

muestras previamente preparados se le adicionaron 1250 L de agua destilada y
despus de adicionar 75 L de carbonato de sodio al 5% se dejaron reposar 6
minutos. Se adicionaron 150 L de cloruro de aluminio al 10% y se dej reposar 5
minutos. Despus de esto se adicionaron 500 L de hidrxido de sodio 1M. La
absorbancia fue medida a 510 nm antes de 30 minutos.
4.5 Cuantificacin de taninos
4.5.1 Preparacin de la curva de calibracin de taninos con cido tnico

Se realiz una curva tipo segn se muestra en la Tabla 2 para llegar a la
concentracin de cido tnico requerida. Se agit cada tubo con el Vortex y
determin la absorbancia a 725 nm despus de 40 minutos en reposo.
28
Tabla 4. Cantidades de soluciones utilizadas para curva estndar de taninos
Reactivo de Solucin de
Solucin de cido Agua Concentracin de
Folin- carbonato de
Tubo tnico (0.1mg/mL) destilada cido tnico
Ciocalteu sodio
L L g
L L
Blanco 0 500 250 1250 0
1 20 480 250 1250 2
2 40 460 250 1250 4
3 60 440 250 1250 6
4 80 420 250 1250 8
5 100 400 250 1250 10
Cuantificacin de taninos en la muestra

Se tom inicialmente 100 L del extracto cetnico, se agreg agua destilada para
llevar a un volumen de 500 L, adicionar 250 L del reactivo de Folin-Ciocalteu y
posteriormente 1250 L de solucin de carbonato de sodio al 20%.
Se agitaron los tubos con el Vortex y se determin la absorbancia a 725 nm

despus de 40 minutos de reposo a temperatura ambiente.
4.6 Evaluacin antimicrobiana

Se analiz con un bioensayo in vitro, utilizando el mtodo de disco-placa-cultivo,
con discos de papel filtro de 6mm de dimetro y 0.6 mm de espesor. Los
microorganismos utilizados para probar los extractos fueron: B. cereus, B.
subtillis, E. agglomerans, K. pneumoniae, L. monocytogenes, Y. enterocolitica C.
albicans y S. aureus, con una concentracin de 1X106microorganismo/mL.
Los discos fueron preparados con 100 L de extractos para despus incubarlos a
37C durante 24 horas. Pasando este tiempo se midi los halos de inhibicin.
29
4.7 Evaluacin anti-inflamatoria
4.7.1. Preparacin de la muestra

Se pesaron 2 g de muestra y posteriormente se agreg acetona hasta cubrir la
muestra, se sonic por 15 minutos, se concentr la muestra hasta sequedad, el
extracto concentrado se pes y se agreg 500 L de agua destilada.
4.7.2. Edema auricular inducido con aceite de crotn

Se hicieron 7 grupos de ratones CD1 de 3 ratones cada uno, uno de los grupos
fue el control, otro el del frmaco (Indometacina) y los 5 restantes se utilizaron
para administrarles el extracto preparado de hoja y tallo de Portulaca oleracea y
flor y tallo de Achillea millefolium.
Administracin del extracto
Al grupo control se le administr 100 L de agua destilada, al grupo del frmaco se

le administr 100 L de Indometacina y a los grupos restantes se les administr
150 L del extracto disueltos en agua destilada por va oral.
Se dej transcurrir 1 hora y se aplicaron va tpica 50 L de aceite de croton al

5%, en etanol al 95% o acetona en la oreja derecha.
Despus de 3 horas y se sacrific a los animales, obteniendo discos de 5 mm de

cada oreja, posteriormente se pesaron ambos discos.
( )
Donde:
T: oreja tratada
ST: oreja sin tratamiento
30
( )
Donde:
T: oreja tratada
C: control
4.8 Determinacin de la actividad antioxidante por el mtodo 2,2-Azinobis-3

Etilbenzotiazolin-6-cido Sulfnico (ABTS)
4.8.1 Preparacin de la muestra

Se pesaron 5 g de muestra y se le adicionaron 25 mL de acetona al 70%, se
concentr la muestra mediante la evaporacin del disolvente hasta la mitad del
volumen.
4.8.2. Preparacin del radical ABTS

Mezclar 1:1 5mL del radical ABTS 7mM con agua destilada con 5mL de persulfato
de potasio 2.45mM, dejar reposar durante 16h en la oscuridad y a temperatura
ambiente.
Tomar 2 mL del radical transcurrido el tiempo y medir su absorbancia a 754 nm,

diluir con alcohol hasta obtener una absorbancia de 0.7 (0.01).
4.8.3. Realizacin de la curva tipo con vitamina C

Realizar la curva tipo con vitamina C a las concentraciones de 0.02, 0.04, 0.08,
0.12, 0.16 y 0.2mg/mL.
4.8.4. Preparacin de la prueba

Tomar en un tubo de ensaye 980L del radical ABTS con absorbancia de 0.7
(0.01) y 20L de la muestra, agitar con vortex y medir su absorbancia a longitud
de 754nm.
Si el valor de la absorbancia de la muestra es mayor al valor del radical (mayor a

0.7 (0.01), realizar la dilucin correspondiente.
31
4.9 Determinacin de la actividad antioxidante por el mtodo 2,2-Difenil-1-
picrilhidrazilo (DPPH)
4.9.1 Preparacin de la muestra

Captulo 2 Se pesaron 5 g de muestra y se le adicionaron 25 mL de acetona al
70%, se concentr la muestra mediante la evaporacin del disolvente hasta la
mitad del volumen.
4.9.2. Preparacin del radical DPPH

Pesar 0.01182g del radical DPPH para tener una concentracin de 6x10 -5 M y
disolver en 500mL de metanol.
Esta mezcla se debe conserva en un recipiente que impida el paso de la luz al

radical y as evitar alteraciones.
4.9.3. Realizacin de la curva tipo con vitamina C

Realizar la curva tipo con vitamina C a las concentraciones de 0.02, 0.04, 0.08,
0.12, 0.16 y 0.2mg/mL.
4.9.4. Preparacin de la prueba

Tomar en un tubo de ensaye 50L de la muestra y 2mL del radical DPPH, medir
su absorbancia a 517nm.
Si el valor de la absorbancia es mayor al valor del radical realizar la dilucin

correspondiente.
32
CAPTULO V. RESULTADOS Y DISCUSIN
5.1. RESULTADOS Y DISCUSIN DE PRUEBAS CUALITATIVAS
Tabla 5.Resultados generales del tamiz fitoqumico
PLANTAS
METABOLITOS
Hoja Flor Hoja Tallo Flor
Achillea Achillea Portulaca Portulaca Portulaca
millefolium millefolium oleracea oleracea oleracea
Alcaloides
Reaccin de Dragendorff - - + + -
Reaccin de Wagner - - + ++ -
Reaccin de Mayer - - - - -
Flavonoides
Reaccin de Shinoda + + - - -
Reaccin con NaOH al 10% ++ + + + -

Glicsidos cianognicos - - - - +
Azcares reductores
Reaccin de Fehling - - + -
Reaccin de Benedic - + - + -
Saponinas
Prueba de altura y estabilidad - - - - -
Reaccin de Liberman
+ + - + +
Bouchard
Reaccin de Rosenthaler + + - + +
Taninos
Reaccin con gelatina - + - - -
Reaccin cloruro frrico + + + - -
Reaccin con ferrocianuro de
- - - -
potasio
33
Quinonas
Reaccin con Hidrxido de
- - - - -
amonio
Reaccin con cido sulfrico - - - - -
Cumarinas
Reaccin Erlich _ _ _
Hidrxido de amonio _
Glicsidos cardiacos
Reaccin Legal - + + - -
Reaccin de Baljet - + + + +
Sesquiterpenlactonas - - - - -
Esteroides + + + + +
NOTA: +- poco presencia, + presencia, ++ elevada presencia y no hay presencia.
Como se puede observar en la tabla 3 los metabolitos que posee la planta

Portulaca oleracea son: alcaloides, flavonoides, azcares reductores saponinas,
taninos, cumarinas, glicsidos cardiacos y esteroides mientas que Achillea
millefolium posee flavonoides, azcares reductores saponinas, taninos, cumarinas,
glicsidos cardiacos y esteroides; en conjunto todas estas molculas tienden a
participar como agentes anti-inflamatorios.
A continuacin se analizar cada metabolito y su relacin con las propiedades

anti-inflamatorias, antioxidantes y antimicrobianas y de esta manera tener un
mejor panorama de la composicin qumica de cada una de las plantas.
Cabe sealar que los metabolitos secundarios que tienen mayor influencia en los
procesos inflamatorios son derivados de compuestos fenlicos, entre ellos las
cumarinas, fenoles, flavonoides y taninos; y como se observ en la tabla anterior
las plantas de estudios para este proyecto mostraron presencia de dichos
compuestos y esta podra la razn por la que se presenta la propiedad anti-
inflamatoria.
34
Alcaloides
Tabla 6.Resultado de prueba de alcaloides
PLANTAS
METABOLITOS Hoja Flor Hoja Tallo Flor
Alcaloides
Reaccin de Dragendorff - - + + -
Reaccin de Wagner - - + ++ -
Reaccin de Mayer - - - - -
NOTA: poco presencia, + presencia, ++ elevada presencia y no hay presencia.
Los alcaloides formar el grupo ms grande y heterogneo de los metabolitos

secundarios que las plantas producen, estos compuestos generalmente contienen
uno o ms tomos de nitrgeno que los hace farmacolgicamente activos.
Como se puede observar en la tabla 4 la planta Achillea millefolium no posee este

tipo de metabolitos y en cambio Portulaca oleracea dio positivo para la hoja y el
tallo y en la flor no se observ presencia de alcaloides; en las plantas, los
alcaloides funcionan como reguladores del crecimiento, almacenamientos de
nitrgeno y repelentes o atrayentes de insectos por lo que sirven como agentes
protectores contra animales ya que poseen un sabor amargo (Valencia, 1995).
De acuerdo a los resultados del tamiz realizado en la escuela superior politcnica

de Chimborazo, Ecuador (2011) tambin dio positivo a este metabolito para los
extractos pero incluyen toda la planta y no realizan la separacin en hoja, flor y
tallo.
35
Flavonoides
Tabla 7.Resultados de flavonoides
PLANTAS
METABOLITOS
Flavonoides
Reaccin de Shinoda
+ + - -
Reaccin con NaOH al 10% ++ + + + +

Xantonas Xantonas Xantonas Xantonas Xantonas
Los flavonoides son un grupo de sustancias, que su estructura deriva del ncleo
aromtico flavano, pertenecen a la serie C6-C3-C6, consisten en dos grupos C6
(anillos de benceno) sustituidos por una cadena aliftica de tres carbonos
(Valencia, 1995).
Uno de los mecanismos de la accin antiinflamatoria en el cual participan los

flavonoides, es en la liberacin de histamina y la inhibicin de la migracin celular,
debido a esto los flavonoides tienen un efecto antiinflamatorio mediante la
inhibicin de la produccin de prostaglandinas y la 12-lipooxigenasa (Garca,
2002).
En la tabla 5 podemos observar que en la reaccin con NaOH al 10% mostr un

resultado positivo y presencia de xantonas en la flor de Achillea millefolium y de
acuerdo a la coloracin la hoja de esta planta tuvo mayor intensidad por eso en la
tabla se observan dos cruces y Portulaca oleracea dio positivo y se detect
xantonas en hoja, flor y tallo.
De acuerdo a estudios previos realizados de tamiz fitoqumico para ambas plantas

se sabe que existe la presencia de flavonoides, por tanto el resultado positivo era
el esperado para esta reaccin.
36
Azcares reductores
Tabla 8.Resultado de azcares reductores
PLANTAS
METABOLITOS
Azcares reductores
Reaccin de Fehling
- - + -
Reaccin de Benedic - + - + -
Los carbohidratos tambin son llamados azcares y son molculas que se

encuentran en gran proporcin en las plantas, los azcares pueden detectarse por
medio de reactivos cromgenos; los reductores como glucosa se detectan con la
solucin de Fehling, en la tabla 6 se puede observar que sta fue una de las
reacciones la cual en el caso de Achillea millefolium mostr poca presencia en la
hoja y en Portulaca oleracea se obtuvo el mismo resultado para el tallo, pero con
una presencia mayor de acuerdo a la prueba cualitativa; en cuanto a la reaccin
de Benedic en la flor de Achillea millefolium y el tallo de Portulaca oleracea se
detect la presencia de este tipo de metabolitos, por ltimo para la flor de
Portulaca oleracea en ninguna de las reacciones se observ presencia de
azcares reductores.
En las plantas los azcares funcionan como fuente de energa, almacenan energa
en forma de almidones y apoyan al transporte de dicha energa en forma de
sacarosa, entre otras funciones (Valencia, 1995).
37
Saponinas
Tabla 9.Resultado de saponinas
PLANTAS
METABOLITOS
Saponinas
Reaccin de Liberman + + + +
-
Bouchard triterpenoides triterpenoides triterpenoides triterpenoides
Reaccin de Rosenthaler + + + +
-
triterpenoides triterpenoides triterpenoides triterpenoides
NOTA: poco presencia, + presencia, ++ elevada presencia y - no hay presencia.
Las saponinas son glicsidos de alcoholes triterpenoides como esteroides, son

solubles en agua y en etano. Funcionan como tensoactivos con propiedades
similares a jabones por lo tanto generan espuma.
En el mbito de la fitoterapia funcionan como expectorantes y se dice que aportan

resistencia a infecciones y tambin producen aumento en la liberacin de glbulos
rojos, por lo cual a concentraciones elevadas puede generar toxicidad (Valencia,
1995).
En la tabla 7 podemos ver que tanto la hoja como flor de Achillea millefolium en la
reaccin de Liberman y Rosenthaler hay presencia de triterpenoides y en la planta
Portulaca oleracea hubo presencia en el tallo y en la flor. Los triterpenoides son
compuestos que derivan del escualeno, considerado como intermediario de la
biosntesis de esteroides (Valencia, 1995).
En el caso de ambas plantas se reporta la presencia de estos compuestos en

estudios realizados en otras instituciones, y por lo tanto coincide con el resultado
positivo obtenido en este proyecto.
38
Taninos
Tabla 10.Resultado de taninos
PLANTAS
METABOLITOS
Taninos
Reaccin con gelatina
- + - - -
Reaccin cloruro frrico + + +

- -
catecol c. glico catecol
Reaccin con ferrocianuro de
- - - -
potasio
Son un grupo de constituyentes fenlicos, que poseen sabor astringente. Estos

metabolitos pueden dividirse en dos grupos: taninos condensados o catequinas y
los hidrolizables.
Los taninos son empleados en el rea de medicina como astringentes en tracto

gastrointestinal como en quemaduras, en este caso actan formando una capa
ligeramente antisptica debajo de la cual se generan los nuevos tejidos (Valencia,
1995).
En la tabla 8 como se puede apreciar que la hoja de Achillea millefolium y la hoja

de Portulaca oleracea dio positivo a catecol en la reaccin de cloruro frrico y en
la flor de Achillea millefolium en la misma reaccin mostr presencia de cido
glico y mientras que en la reaccin con gelatina slo la flor de Achillea millefolium
dio positivo y por ltimo el tallo de Portulaca oleracea en la reaccin con
ferrocianuro de potasio se observ una presencia baja de taninos y en el caso de
la flor no se not presencia de estos metabolitos.
39
Cumarinas
Tabla 11.Resultado de cumarinas
PLANTAS
METABOLITOS
Cumarinas
Reaccin Erlich
_ _ _ _
Hidrxido de amonio
_ _
Las cumarinas son compuestos que se les consideran derivados del cido o-
hidroxicinmico y tienen en comn una estructura qumica de 2H-1-benzopiran-2-
ona ; fueron aisladas y purificadas por primera vez por Voleg, en 1822, a partir del
haba tonka (Dypteryx odorata), y deben su denominacin a la palabra coumarou,
nombre vernculo de esta haba (Valencia, 1995).
Las cumarinas tienen propiedades vitamnicas, anticoagulantes y antitrombticas

(disminuyen la permeabilidad capilar y aumentan la resistencia de las paredes de
capilares, protegen la fragilidad capilar y actan como tnico venoso); adems
actividad anticancergena, antioxidante, insecticida, entre otras (OKnnedy,
Thomes, 1997).
Se puede observar en la tabla 11 que se realizaron dos pruebas para la deteccin

de cumarinas, en la reaccin de Erlich la planta de Achillea millefolium no tuvo
presencia y en el caso de Portulaca oleracea el tallo mostr poca presencia; en la
reaccin con hidrxido de amonio tanto en la hoja como flor de Achillea millefolium
al igual que la hoja y tallo de Portulaca oleracea se visualiz poca presencia de
cumarinas.
40
Estudios anteriores mencionan que la planta de Achillea millefolium tiene dentro
de su composicin de metabolitos secundarios a las cumarinas y coincide con los
resultados obtenidos en el presente trabajo, mientras que en el caso de Portulaca
oleracea se han reportado resultados negativos de este tipo de compuestos, y en
este caso se not una presencia de cumarinas pero muy baja.
Glicsidos cardiacos
Tabla 12.Resultado de glicsidos cardiacos
PLANTAS
METABOLITOS
Glicsidos cardiacos
Reaccin Legal
- + + - -
Reaccin de Baljet - + + + +
Son compuestos que en el pasado fueron usados como veneno para flechas y en
ceremonias religiosas, actualmente se son sustancias de gran importancia en la
regulacin de la actividad cardiaca.
En la tabla 12 podemos observar que para la identificacin de glicsidos cardiaco

se llevaron a cabo dos reacciones; para la reaccin Legal en la flor de Achillea
millefolium y hoja de Portulaca oleracea dio positivo a estos metabolitos; mientras
que la reaccin de Baljet tanto la flor de Achillea millefolium como el tallo, hoja y
flor de Portulaca oleracea dieron positivo a presencia de glicsidos cardiacos.
Estudios antes realizados muestran la existencia de este grupo en los dos tipos de
plantas estudiadas.
41
Esteroides
Tabla 13.Resultado de esteroides
PLANTAS
METABOLITOS
+ + + + +
Esteroides
triterpenos esteroides esteroides esteroides triterpenos
Los esteroides representan la base fundamental de su uso en la clnica. Inhiben la

vasodilatacin, incremento de permeabilidad vascular, exudacin y proliferacin
celular que aparece en los procesos inflamatorios (Castilla, 2009).
Se consideraba que estos compuestos solo se podan encontrar en muestras de

origen animal, sin embargo, al paso del tiempo y tras varios estudios realizados a
material vegetal se encontr la presencia de esteroides y con ello la certeza de
que formar parte de su composicin qumica.
Como se puede observar en la tabla 13 en la hoja de Achillea millefolium y flor de

Portulaca oleracea hubo presencia de triterpenos y en la misma reaccin en la flor
de Achillea millefolium, hoja y tallo de Portulaca oleracea dio positiva la prueba a
esteroides, por lo tanto se determina que son compuestos que en conjunto con los
dems metabolitos son los que dan las propiedades farmacolgicas a las plantas
de estudio.
Estudios previos han reportado la presencia de estos metabolitos secundarios en

ambas plantas, por lo tanto se corrobora que el resultado obtenido fue el
esperado.
42
5.2 RESULTADOS Y DISCUSIN DE PRUEBAS CUANTITATIVAS
5.2.1. Cuantificacin de fenoles con cido glico
En la cuantificacin de fenoles con cido glico se realiz la curva tipo como se

muestra en la figura 3 con concentraciones que van de 20 a 160 g de cido
glico, se grafic vs la absorbancia y se obtuvo un coeficiente de correlacin
aceptable de 0.9979.
1
0.9
0.8
Absorbancia (nm)
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3 y = 0.0054x + 0.0069
R = 0.9979
0.2
0.1
0
0 50 100 150 200
Concentracin cido glico (g/mL)
Figura 3. Grfica de curva tipo para cuantificacin de fenoles con cido

glico
A partir de la ecuacin 1 que se obtuvo de la grfica, se determin el valor de la

concentracin (x).
Despejando de la ecuacin 1 a x se obtuvo:
43
Tabla 14. Concentracin de fenoles en extractos cetnicos de Achillea
millefolium y Portulaca oleracea (cido glico)
Concentracin
Absorbancia Concentracin[g
Planta Dilucin [mL] real[g cido
765nm cido glico/mL]
glico/mL]
Hoja
0.518 94.648 1:10 946.481
Achillea millefolium
Flor
0.194 34.648 1:10 346.481
Achillea millefolium
Hoja
0.188 33.537 1:10 335.370
Portulaca oleracea
Tallo
0.413 75.203 - 75.203
Portulaca oleracea
Flor
0.568 103.907 - 103.907
Portulaca oleracea
Los resultados obtenidos de la cuantificacin de fenoles cido glico se muestran

en la tabla 14 en la cual se observa que los extractos de Achillea millefolium
fueron los que mostraron mayor concentracin de fenoles, la hoja con un valor
obtenido de 946.481 g/mL, seguido de la flor con 346.481 g/mL y
posteriormente la hoja de Portulaca oleracea con 335.370 g/mL seguido de la flor
con 103.907 g/mL y el tallo present la concentracin ms baja con 75.203
g/mL.
De acuerdo a las propiedades farmacolgicas, estos compuestos son los que

tienen gran impacto en la capacidad anti-inflamatoria y antioxidante de las plantas
medicinales y de acuerdo a los resultados de la prueba anti-inflamatoria la planta
Achillea millefolium mostr mejores % de inhibicin de la inflamacin y la planta
Portulaca oleracea tuvo valores menores en este parmetro, pero sin embargo no
son los nicos compuestos de este tipo que poseen los extractos as que la
capacidad o poder anti-inflamatorio y antioxidante va relacionado con el conjunto
de compuestos con esta propiedad.
44
5.2.2. Cuantificacin de fenoles con cido cafeco
Para la cuantificacin de fenoles con cido cafeco se realiz un curva tipo para
determinar la concentracin equivalente que se encuentra en cada extracto, la
cual se muestra en la figura 4 en la que se grafic la concentracin que va desde
un valor de 10 a 100 g de cido cafeco vs la absorbancia y se observa que tiene
un coeficiente de correlacin aceptable de 0.995.
0.9
0.8
0.7
Absorbancia (nm)
0.6
0.5
0.4
y = 0.0048x + 0.0512
0.3
R = 0.995
0.2
0.1
0
0 50 100 150 200
Concentracin cido cafeco (g/mL)
Figura 4.Grfica de curva tipo para cuantificacin de fenoles con cido

cafeco
A partir de la ecuacin que se obtuvo de la grfica se determin el valor de la
concentracin de los extractos (x).
45
Tabla 15. Concentracin de fenoles en extractos cetnicos de Achillea
millefolium y Portulaca oleracea (cido cafeco)
Concentracin
765nm cido cafeco/mL]
cafeco/mL]
Hoja
Achillea 0.291 49.958 1:3 149.874
millefolium
Flor
Achillea 0.975 192.458 1:3 577.374
millefolium
Hoja
Portulaca 0.274 46.416 1:10 464.160
oleracea
Tallo
Portulaca 0.523 98.291 1:10 982.916
oleracea
Flor
Portulaca 0.868 170.166 - 170.166
oleracea
En la tabla 15 podemos observar los resultados de la cuantificacin de fenoles

pero ahora utilizando como estndar cido cafeco, de manera general se
esperara que los resultados fueran similares a los de la tabla 14 hablando en el
orden de los extractos sin embargo no fue as.
Si hacemos un anlisis de cada planta en el caso de la flor de Achillea millefolium

present un valor de 577.374 g/mL y tuvo mayor poder anti-inflamatorio, mientras
que el resultado para la hoja de la misma planta fue de 149.874 g/mL; para el
caso de Portulaca oleracea el extracto del tallo fue el que tuvo mayor
concentracin con un valor de 982.916 g/mL, posteriormente la hoja con 464.160
g/mL y finalmente la flor con 170.166 g/mL y en este caso es importante sealar
que este extracto fue el que presento la actividad anti-inflamatoria ms baja y el
menor poder antimicrobiano.
46
5.2.3. Cuantificacin de flavonoides con rutina
Para la cuantificacin de flavonoides se realiz una curva tipo con rutina que se
muestra en la figura 5 con una concentracin que va de 20 a 100 g, el coeficiente
de correlacin obtenido en la grfica es aceptable de 0.997 la ecuacin dada en la
grfica se utiliz para obtener la concentracin de las muestras.
0.4
0.35
0.3
Absorbancia (nm)
0.25
0.2
y = 0.0035x + 0.0054
0.15 R = 0.9972
0.1
0.05
0
0 20 40 60 80 100 120
Concentracin rutina (g/mL)
Figura 5. Grfica de curva tipo para cuantificacin de flavonoides con rutina

De la ecuacin 5 se despejo a x se obtuvo:
47
Tabla 16. Concentracin de flavonoides en extractos cetnicos de Achillea
millefolium y Portulaca oleracea
Planta
765nm rutina/mL]
Hoja
Achillea 0.230 64.171
millefolium
Flor
Achillea 0.108 29.314
millefolium
Hoja
Portulaca 0.109 29.600
oleracea
Tallo
Portulaca 0.413 116.314
oleracea
Los resultados de la cuantificacin de flavonoides para los extractos estudiados se

muestran en la tabla 16, donde se observa que el tallo de Portulaca oleracea tuvo
mayor concentracin con un valor de 116.314 g/mL, seguido de la hoja de
Achillea millefolium con 64.171 g/mL despus la hoja de Portulaca oleracea con
29.600 g/mL y finalmente la flor de Achillea millefolium con un valor de 29.314
g/mL.
Para el caso de la planta Portulaca oleracea no se encontraron trabajos donde

reporten las cuantificaciones de flavonoides y as poder hacer una comparacin
con el valor que se obtuvo en este trabajo sin embargo el tallo fue la parte que
presento mayor poder anti-inflamatorio y es el que tiene mayor concentracin de
flavonoides, pero como ya se mencion esta capacidad depende el conjunto de
metabolitos que estn contenidos en cada uno de los extractos.
Para Achillea millefolium existe un registro de tesis realizada en la universidad

politcnica de Chimborazo de cuantificacin de flavonoides, pero utilizando como
48
patrn (Quercetina) en el cual el resultado fue expresado como % de quercetina
en el extracto y fue de 1.94%, por lo tanto como tal no se puede hacer una
comparacin debido a la diferencia de patrn y la tcnica utilizada.
5.2.4. Cuantificacin de taninos con cido tnico
Para la cuantificacin de taninos se realiz una curva tipo como referencia la cual
se muestra en la figura 6 con una concentracin que va de 20 a 100 g, el
coeficiente de correlacin obtenido en la grfica es aceptable de 0.988 la ecuacin
dada en la grfica se utiliz para obtener la concentracin de las muestras.
0.7
0.6
Absorbancia (nm)
0.5
0.4
0.3
0.2 y = 0.0054x + 0.0305

R = 0.988
0.1
0
0 20 40 60 80 100 120
Concentracin cido tnico (g/mL)
Figura 6. Grfica de curva tipo para cuantificacin de taninos con cido

tnico
49
Tabla 17. Concentracin de taninos en extractos cetnicos de Achillea
Concentracin
765nm cido tnico/mL]
tnico/mL]
Hoja
Achillea 0.553 96.759 1:10 967.592
millefolium
Flor
Achillea 0.385 65.648 1:10 656.481
millefolium
Hoja
Portulaca 0.281 46.388 1:10 463.888
oleracea
Tallo
Portulaca 0.552 96.574 - 96.574
oleracea
Los resultados de cuantificacin de taninos se muestran en la tabla 17, como

podemos observar la hoja de Achillea millefolium presento mayor concentracin de
taninos con 967.592 g/mL, la hoja de esta misma planta tuvo 656.481 g/mL y
en cuanto a Portulaca oleracea solo se realiz la cuantificacin a la hoja con un
valor de 463.888 g/mL y al tallo con 96.574 g/mL, a la flor no se le hizo este
anlisis debido a que recordando el resultado del tamiz no se detect presencia de
este metabolito.
Es importante recordar que los taninos pertenecen a los compuestos fenlicos y

por lo tanto tiene importancia anti-inflamatoria y antioxidante, no se logr encontrar
resultados antecesores a estos por lo tanto no se puede realizar dicha
comparacin, solo se sabe por lo antes reportado que ambas plantas poseen
flavonoides.
50
5.2.4. Cuantificacin de esteroides con colesterol
Para la cuantificacin de esteroides se realiz una curva tipo como referencia la

cual se muestra en la figura 7 con una concentracin que va de 0 a 3 mg, el
coeficiente de correlacin obtenido en la grfica es aceptable de 0.999 la ecuacin
dada en la grfica se utiliz para obtener la concentracin de las muestras.
1.2
1
Absorbancia (nm)
0.8
0.6
0.4 y = 0.3162x - 0.0024

R = 0.9991
0.2
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Concentracin colesterol (mg/mL)
Figura 7. Grfica de curva tipo para cuantificacin de esteroides con

colesterol

51
Tabla 18.Concentracin de esteroides en extractos cetnicos de Achillea
Absorbancia Concentracin[mg
Planta
765nm colesterol/mL]
Hoja Achillea millefolium 0.014 0.053
Flor Achillea millefolium 0.113 0.367
Hoja Portulaca oleracea 0.085 0.277
Tallo Portulaca oleracea 0.030 0.104
Flor Portulaca oleracea 0.023 0.082
En la tabla 18 se muestran los resultados de la cuantificacin de esteroides en la

cual la flor de Achillea millefolium obtuvo el contenido ms alto con 0.367 mg/mL,
seguido de la hoja de Portulaca oleracea con 0.277 mg/mL, despus de este sigue
el tallo de Portulaca oleracea con 0.104 mg/mL, el siguiente valor fue de 0.082
mg/mL para la flor de Portulaca oleracea y finalmente la concentracin ms baja
fue de 0.053 mg/mL para la hoja de Achillea millefolium.
En cuestin a datos reportados de dicha cuantificacin no se encontr ningn

valor en las plantas de estudio para este proyecto, pero se sabe que en pruebas
de tamiz si se han reportado presencia de esteroides en trabajos anteriores.
Es importante mencionar que el medio ambiente donde se desarrollan las plantas

es un factor que tiene gran impacto en la cantidad de metabolitos que secretan ya
que mientas las plantas estn en un medio favorable no generan tantas
concentraciones de metabolitos secundarios comparado con aquellas que se
encuentran en un ambiente de estrs.
52
Es por ello importante sealar que los valores de todas las cuantificaciones
realizadas en este proyecto pueden variar de acuerdo al lugar de recoleccin de
las plantas y temporada del ao de esta misma es por ello importante que se tome
en cuenta los meses de proliferacin de las plantas as como tipo de clima y suelo
donde se encuentran.
5.3. RESULTADOS Y DISCUSIN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA
Para la determinacin de la actividad antimicrobiana se realiz un bioensayo

mediante el mtodo disco-placa-cultivo y a continuacin se muestra en la tabla 17
los resultados de las medicines del halo, tras 24 horas de incubacin.
Tabla 19. Halos de inhibicin obtenidos de los extractos

Microorganismos
Halo (mm) Halo (mm) Halo (mm) Halo (mm) Halo (mm)
B. subtillis 10 - - - -
K. pneumoniae 18 12 11 13 8
B. cereus 14 11 - 11 -
Y. enterocolitica - - - - -
E. agglomerans - - - - -
C. albicans - - - - -
S. aureus - - - - -
L. monocytogenes - - - - -
Esta actividad se evala con tres tipos de microorganismos Gram +, Gram y

hongos, ya que la accin de los extractos difiere en que tanto poder tienen para
detener o retrasar el crecimiento de cada microorganismo, es por ello el uso de
diversas cepas.
53
Como se observa en la tabla 19 los extractos solo tuvieron la capacidad
antimicrobiana para tres microorganismos; la hoja de Achillea millefolium fue el
nico extracto que mostr halo de inhibicin de 10 mm a B. subtillis.
Para el caso de K. pneumoniae la hoja de Achillea millefolium tuvo el valor ms

grande del halo con 18 mm, seguido del tallo Portulaca oleracea con 13 mm,
posteriormente la flor de Achillea millefolium con 12 mm, en el caso de la hoja de
Portulaca oleracea se observ un halo de 11 mm y finalmente la flor de Portulaca
oleracea con 8 mm.
Mientras que con B. cereus solo tres extractos tuvieron halo de inhibicin, la hoja
de Achillea millefolium con 14 mm y tanto para la hoja de Achillea millefolium como
el tallo de Portulaca oleracea el valor del halo fue de 11mm.
En la literatura no se reportan estudios realizados de capacidad antimicrobiana a

los extractos de las plantas de estudio por lo tanto es una pauta para poder llevar
a cabo ms pruebas utilizando otras cepas y al mismo tiempo determinar la
concentracin y el metabolito que le confiere esta capacidad a cada parte de la
planta.
5.4. RESULTADOS Y DISCUSIN DE LA ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA
Mtodo de edema inducido por aceite de croton
Tabla 20. Pesos de los discos auriculares sin tratamiento

Extracto Peso (g)
Hoja de Achillea millefolium 0.0059
Flor de Achillea millefolium 0.0066
Hoja de Portulaca oleracea 0.0079
Tallo de Portulaca oleracea 0.0060
Flor de Portulaca oleracea 0.0072
Indometacina 0.0083
54
Tabla 21. Peso de los discos auriculares tratados (inflamados)
Extracto Peso (g)
Hoja de Achillea millefolium 0.0101
Flor de Achillea millefolium 0.0075
Hoja de Portulaca oleracea 0.0116
Tallo de Portulaca oleracea 0.0106
Flor de Portulaca oleracea 0.0106
Control 0.0211
Indometacina 0.0129
Porcentaje de inflamacin
El porcentaje de inflamacin de los extractos y el frmaco (Indometacina) se

determin de acuerdo a la ecuacin que se muestra a continuacin.
( )
Dnde:
T= media del peso de orejas tratadas
ST= media del peso de orejas sin tratamiento
Tabla 22. Porcentaje de inflamacin de extractos e Indometacina

Dosis administrada Porcentaje de inflamacin
Extracto
(mg/Kg) (%)
Hoja de Achillea millefolium 48 76.8368.009
Flor de Achillea millefolium 45 13.1318.747
Hoja de Portulaca oleracea 125 45.4164.389
Tallo de Portulaca oleracea 125 68.2539.523
Flor de Portulaca oleracea 79 67.5925.613
Indometacina 25 55.8239.201
55
90
80
70
% de inflamacin
60
50
40
30
20
10
0
Tallo Portulaca Hoja Portulaca Flor Portulaca Hoja Achillea Flor Achillea Indometacina
oleracea oleracea oleracea milefolium milefolium
Figura 8. Grfica del porciento de inflamacin de Achillea millefolium y

Portulaca oleracea.
En la figura 8 se muestra de manera grfica los porcentajes de inflamacin de los
extractos con sus respectivas desviaciones estndar de cada parte de las plantas
as como el frmaco (Indometacina).
Porcentaje de inhibicin de la inflamacin
Se obtuvo el porcentaje de inhibicin de la inflamacin con la ecuacin que se

muestra a continuacin, los resultados se muestran en la tabla 25.
( )
Dnde:
C= Control-aceite de croton-sin tratamiento
T= Tratado extracto/ Frmaco
56
Tabla 23. Porcentaje de inhibicin de la inflamacin de extractos e
indometacina
Dosis administrada % de inhibicin de la
Extracto
(mg/Kg) inflamacin
Hoja de Achillea millefolium 48 51.9744.675
Flor de Achillea millefolium 45 64.4122.736
Hoja de Portulaca oleracea 125 44.8651.664
Tallo de Portulaca oleracea 125 49.7632.843
Flor de Portulaca oleracea 79 36.42910.838
Indometacina 25 39.0204.140
En la figura 9 se muestra de manera grfica los porcentajes de inhibicin de la

inflamacin con sus respectivas desviaciones estndar de los extractos de cada
parte de las plantas as como el frmaco (Indometacina).
70
% de inhibicin de la inflamacin
60
50
40
30
20
10
0
Tallo Portulaca Hoja Portulaca Hoja Achillea Flor Achillea Flor Portulaca Indometacina
oleracea oleracea milefolium milefolium oleracea
Figura 9. Grfica del porciento de inhibicin de la inflamacin de Achillea

57
Es importante sealar que estos parmetros determinan la capacidad de los
extractos o frmaco para desinflamar o impedir que la inflamacin contine En la
tabla 22 se encuentran los resultados del porciento de inflamacin de los extractos
cetnicos de ambas plantas de estudio y podemos observar que para Achillea
millefolium la hoja tuvo el valor ms alto con 76.83% mientras que la flor fue de
13.13% y comparando este calor con el de la Indometacina de55.82% se puede
analizar que para poder llegar a tener un valor similar lo que se podra hacer es
aumentar la dosis administrada, en el caso de Portulaca oleracea el tallo fue el
ms alto con 68.25%, seguido de la flor con 67.59% y finalmente la hoja con
45.41% y comparados estos valores con el frmaco Indometacina presentan un
buen porcentaje de inflamacin, en trabajos anteriores a estos se ha reportado
resultados similares en los que mediante otro mtodo por ejemplo el edema
plantar se ha observado que los extractos tanto de Achillea millefolium como de
Portulaca oleracea tienen valores similares o por lo menos cercanos al frmaco de
comparacin.
Otro valor que se determin mediante este experimento es el porciento de

inhibicin de la inflamacin el cual nos da informacin de que tanto porcentaje de
inflamacin logro disminuir cada extracto los resultados se muestran en la tabla 23
en donde podemos observar que en el caso de Achillea millefolium la flor tuvo un
efecto mayor con 64.41% mientras que la hoja fue de 51.97% y comparados con
la Indometacina de 30.02% los extractos fueron mejores, mientras que en
Portulaca oleracea el tallo mostro mayor efecto con un 49.76% de inhibicin
seguido de la hoja con 44.86% y finalmente la flor con 36.42% comparando los
valores con la Indometacina tanto la hoja como el tallo superan su efecto y la flor
present un efecto menor, pero esta diferencia no es muy grande por lo cual no se
descarta a este extracto como un tratamiento lo que se necesita en este caso es
aumentar la dosis administrada y de esta manera observar si se logra potencializar
el efecto.
En una tesis realizada en la Escuela Superior Politcnica de Chimborazo en 2011

determinaron que una dosis de 500mg/Kg era la que tuvo mejor efecto anti-
58
inflamatorio en extractos etanlicos de Portulaca oleracea, cabe mencionar que la
administracin de esta concentracin se llev a cabo a diferentes tiempos, en
comparacin con este proyecto fue una nica dosis y el extracto fue cetnico, pero
los resultados de ambos estudios muestran que esta planta tiene un buen efecto y
puede ser comparado con el efecto de un anti-inflamatorio como la Indometacina.
La variacin de las dosis administradas en este proyecto se debe a que de todas

las plantas se parti de la misma cantidad de planta seca que fueron 5 g, pero tras
el paso de la evaporacin del solvente (acetona) se obtuvieron pesos distintos es
por ello que se realiz un ajuste para que cada ratn de ese lote tuviera una
concentracin igual, pero no se pudo lograr que estas dosis fueran iguales en
todos los lotes.
Realizando un anlisis respecto a la dosis administrada podemos observar que la

planta de Achillea millefolium es la que requiere dosis bajas y tiene un buen efecto
ya que en ambas partes fueron dosis menores a 50 mg/Kg y para el caso de
Portulaca oleracea se requiere una mayor dosis para lograr un efecto similar.
5.5 RESULTADOS Y DISCUSIN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
5.5.1. Actividad antioxidante por el mtodo 2,2-Azinobis-3 Etilbenzotiazolin-

6-cido Sulfnico (ABTS)
Para determinar la capacidad antioxidante por el mtodo de ABTS se realiz la

curva tipo utilizando como estndar Trolox, en la figura 10 se muestra la grfica
con un ndice de correlacin aceptable de 0.992.
59
120
100
% de Inhibicin
80
60
40 y = 1793.8x + 11.903
R = 0.9925
20
0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
Concentracin trolox (mM/mL)
Figura 10. Grfica de curva tipo utilizando Trolox, para determinar

concentracin equivalente a estndar contenida en extractos.
Tabla 24. Porcentaje de actividad antioxidante (ABTS)

Concentracin
Absorbancia
Extracto %AAO Vitamina C
734 nm
(mg/mL)
Hoja de Achillea millefolium 0.264 62.4520.685 0.0283.8X10-4
Flor de Achillea millefolium 0.436 38.0760.735 0.0154.1X10-4
Hoja de Portulaca oleracea 0.610 13.4360.133 0.0017.4X10-5
Tallo de Portulaca oleracea 0.592 15.9910.177 0.0029.8X10-5
Flor de Portulaca oleracea 0.644 8.5150.049 >0.001
60
5.5.2. Actividad antioxidante por el mtodo 2,2-Difenil-1-picrilhidrazilo
(DPPH)
Para determinar la capacidad antioxidante por el mtodo de DPPH se realiz la

curva tipo utilizando como estndar vitamina C, en la figura 11 se muestra la
grfica con un ndice de correlacin aceptable de 0.996.
100
90
80
70
60
%AAO
50
40
y = 423.86x + 24.09
R = 0.9968
30
20
10
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2
Concentacin Vitamina C (mg/mL)
Figura 11. Grfica de curva tipo utilizando Vitamina C, para determinar

concentracin equivalente a estndar contenida en extractos.
61
Tabla 25. Porcentaje de actividad antioxidante (DPPH)
Concentracin
Absorbancia
Extracto %AAO Vitamina C
734 nm
(mg/mL)
Hoja de Achillea millefolium 0.456 80.0003.508 0.1320.008
Flor de Achillea millefolium 0.311 54.6490.438 0.0720.001
Hoja de Portulaca oleracea 0.243 42.6311.053 0.0440.002
Tallo de Portulaca oleracea 0.277 48.6841.316 0.0580.002
Flor de Portulaca oleracea 0.188 32.9820.351 0.0210.001
Esta prueba como ya se haba mencionado determina la capacidad que tienen los
extractos de estabilizar radicales libres y de esta manera ayudar al organismo ya
que se dice que cada vez que se logra estabilizar este tipo de molculas las
clulas del cuerpo sufren deterioros, es por ello que se da el proceso de
envejecimiento, por lo tanto la ingesta de este tipo de extractos es muy importante.
Esta propiedad se determin mediante dos mtodos el de ABTS y DPPH en

ambos el principio es el mismo ya que lo que detecta el espectrofotmetro es el
cambio de coloracin en los radicales y este cambio se debe a la capacidad del
extracto de estabilizar estas molculas, en las tablas 24 y 25 se muestran los
resultados de ambas determinaciones y se puede observar que tanto en ABTS
como en DPPH la hoja de Achillea millefolium mostr un mayor efecto con
62.45%AAO y 80.00% respectivamente, seguido de estos valores la flor tuvo
30.07% en ABTS y 54.64%, estos extractos aparte de poseer buen efecto anti-
inflamatorio son buenos antioxidantes, mientas que para Portulaca oleracea el
tallo obtuvo el mejor porciento de actividad antioxidante con 15.99% en ABTS y
para DPPH fue de 48.68%, seguido de la hoja con 13.43% y 42.63%
respectivamente y el valor menor fue para la flor la cual en ABTS obtuvo 8.51% y
en DPPH fue de 32.98% , tambin se muestra en estas tablas la concentracin
equivalente a Trolox y vitamina C que tienen los extractos cetnicos de las plantas
y como es de esperarse los valores que tienen mayor concentracin son los
extractos con mayor % de actividad antioxidante (AAO), esta capacidad se debe
62
principalmente a la presencia de compuestos fenlicos como flavonoides, taninos,
cumarinas y los mismos fenoles y respecto a las cantidades obtenidas en las
cuantificaciones los extractos tienen cantidades significativas.
CAPTULO VII. CONCLUSIONES
Los metabolitos secundarios que contienen Achillea millefolium y Portulaca

oleracea son alcaloides, flavonoides, azcares reductores, saponinas,
taninos, cumarinas, glicsidos cardiacos y esteroides.
La flor de Achillea millefolium present 64.41% de inhibicin de la

inflamacin mientras que la flor de Portulaca oleracea fue de 36.429%.
En la actividad antioxidante con los mtodos de ABTS y DPPH, la hoja de

Achillea millefolium present 62.45% y 80.00% respectivamente.
Para la actividad antimicrobiana la hoja de Achillea millefolium present

inhibicin del crecimiento de B. subtillis, K. pneumoniae y B. cereus.
Dado que Achillea millefolium y Portulaca oleracea forman parte de la dieta

y presentan propiedades farmacolgicas estas son consideradas como
nutracuticos.
La capacidad antioxidante est relacionada con el contenido de

compuestos fenlicos presentes en los extractos.
63
CAPTULO VIII. RECOMENDACIONES FUTURAS
Realizar la prueba de actividad anti-inflmatoria con la misma dosis de

extracto para poder realizar una comparacin mejor.
Realizar la prueba anti-inflamatoria con otro mtodo y determinar si tiene el
mismo comportamiento que el de edema inducido con aceite de croton.
Repetir la parte experimental utilizando las plantas completan sin hacer
separacin de hoja, tallo y flor, y observar si se potencializan sus efectos
anti-inflamatorio, antioxidante y antimicrobiano.
Realizar la prueba antimicrobiana utilizando algn frmaco como patrn o
referencia y observar si tiene la misma capacidad de inhibicin.
Realizar una cromatografa en columna para obtener las fracciones de los
compuestos.
64
ANEXOS
1) Preparacin de reactivos usados en el tamiz fitoqumico
Reactivo de Warner: 1.27 g de yoduro de potasio aforado a 100 mL de agua

destilada.
Cloruro frrico solucin al 1%: 0.5 g de cloruro frrico aforado a 50 mL de
agua destilada.
Reactivo de gelatina: 0.5 g de grenetina pura aforado a 50 mL de agua
destilada.
Reactivo de Benedic: 8.65 g de Citrato de sodio + 5 g de Na 2CO3 anhidro
en 30 mL de agua destilada, se aadi lentamente y agitando + 0.865
CuSO4 en 7.5 mL de agua destilada y se afora a 50 mL.
Reactivo de Fehling:
Solucin A: 3.5 g de CuSO4 5 H2O aforado a 50 mL de agua destilada.
Solucin B: 17.5 g de tartrato de sodio y potasio + 5 g de NaOH aforado a
50 mL con agua destilada.
Hidrxido de sodio al 5%: 2.5 g de hidrxido de sodio aforado a 50 mL de
agua destilada.
Hidrxido de sodio al 10%: 5g de hidrxido de sodio aforado a 50 mL de
agua destilada.
Reactivo de Erlich: 15 mL de cido clorhdrico concentrado, 25 mL de agua
destilada, 25 mL de etanol al 95% y 1 g de para-dimetilaminobenzaldehido.
Reactivo de Mayer: 0.1355 g de cloruro de mercurio y 2.5 g de yoduro de
potasio en agua aforado a 50 mL.
Reactivo de Rosenthaler: 0.5 g de vainillina a 50 mL con etanol.
Reactivo de Grignard: 0.5 g de carbonato de sodio + 50 mg de cido pcrico
y agua destilada hasta 50 mL.
Hidrxido de potasio 2 N: 2.8 g de hidrxido de potasio en 50 mL de agua
destilada.
Hidrxido de potasio al 5%: 2.5 g de hidrxido de potasio a 50 mL de agua
destilada.
65
Ferrocianuro de potasio al 1%: 0.5 g de ferrocianuro de potasio en 50 mL
de agua destilada.
Clorhidrato de hidroxilamina 2 N: 1.7375 g en 50 mL de agua destilada.
Reactivo de Sonneschain: solucin saturada de molibdato de amonio en
agua se aade lentamente a una solucin saturada de fosfato disdico a
40C, se forma un precipitado, este precipitado se lava con agua y se pasa
a un vaso donde se agrega una solucin concentrada de carbonato de
calcio.
Nota: se agregan 2.2 g de molibdato de amonio, 1.4 g de fosfato disdico y
20 g de carbonato de calcio.
2) Preparacin de radicales para evaluacin antioxidante.
Radical ABTS 7mM

Para preparar 10mL de una solucin con el radical ABTS 7mM se pesan
0.0384g del mismo radical y se disuelven en 9mL de agua destilada hasta
aforarlo a 10.
Radical DPPH 2.45mM

Para preparar 10mL de la solucin de persulfato de potasio 2.45mM se
pesan 0.0066grs del reactivo de persulfato de potasio y se disuelven en
9mL de agua destilada hasta aforarlo a 10.
66
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68

Antiinflmatorio Antioxidante Verdolaga Milenrama (BN)

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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGA

EVALUACIN FITOQUMICA Y PROPIEDADES NUTRACUTICAS DE

INFORME TCNICO DE LA OPCIN CURRICULAR EN LA MODALIDAD

QUE PARA OBTENER EL TTULO DE:

ALEJANDRA GARCA RODRGUEZ

DIRECTOR DEL PROYECTO

DRA. YOLANDA DE LAS MERCEDES GMEZ Y GMEZ

M. en C. MNICA IRLANDA GARCA ARANDA

M. en E. REFUGIA PREZ SNCHEZ

MXICO D.F. MARZO 2015

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGA

ACTA DE TRABAJO ESCRITO

La Comisin de Evaluacin para Opcin Curricular ha revisado el trabajo escrito

Despus de revisar los integrantes de la Comisin de Evaluacin manifiestan

Nombre y firma Nombre y firma

Nombre y firma Nombre y firma

Instituto Politcnico Nacional

Bajo protesta de decir verdad el que suscribe Alejandra Garca Rodrguez,

En virtud de lo anterior, El IPN deber reconocer en todo momento mi calidad de

Adicionalmente, y en mi calidad de autor y titular de los derechos morales y

Mxico, D. F., a 19 de Febrero del 2015.

Alejandra Garca Rodrguez

Antes que nada quiero agradecer a Dios por darme la

A mis padres que han sido un gran apoyo para m que

A la doctora Yolanda de las M. Gmez y Gmez por darme

A la M. en C. Mnica Irlanda y a la M. en E. Refugia Prez

A mis amigos inseparables Marco y Jonathan que nunca

A mis dems amigos como Uriel, Jessica y todos los que de

Antes que nada con todo mi corazn le dedico este triunfo

A mis padres por todos los aos de trabajo, por la gran

A mi familia les dedico este logro ya que siempre creyeron y

A mis ngeles que se fueron al cielo y que yo s que estaran

Alejandra Garca Rodrguez, Yolanda de las Mercedes Gmez y Gmez*,

Palabras clave: Antiinflamatorio, inflamacin, extracto, plantas medicinales

Introduccin. Cuando un tejido presenta una lesin tisular ya sea 70 64.61

Figura 1. Planta verdolaga. ..................................................................................... 7

Posteriormente a esto surgi la medicina aloptica basada en la administracin de

Es por ello que hoy en da se ha retomado el uso de plantas medicinales lo que

Principalmente la parte ms afectada al consumir AINEs es el tracto

Como ya se haba mencionado estas lesiones dependen de la inhibicin de las

Aproximadamente un 20% de las personas que consumen este tipo de

Otro aspecto importante es la falta de caracterizacin y evaluacin de actividad

Dentro del contexto de los productos naturales anti-inflamatorios, la medicina

Mxico ocupa el segundo lugar a nivel mundial en el nmero de plantas

Actualmente se recomienda la administracin de fitofrmacos a la par de un

Mediante esta investigacin se puede sugerir como alternativa el uso de

Finalmente el estudio de estos extractos permitir un uso ms apropiado de los

H0: La concentracin administrada a los ratones CD1 no tiene relacin con el

El presente trabajo de investigacin se realiz en el laboratorio de farmacologa de

Alcance descriptivo: el cual pretende identificar que metabolitos secundarios

Alcance correlacional: en el que se busca determinar cmo es la relacin de la

Figura 1. Planta verdolaga.

Fuente: Tenorio Lezama, P. (2009)

Nombre comunes usados en espaol

Reino: Plantae; Subreino: Traqueobionta (plantas vasculares); Superdivisin:

Se encuentra en Chiapas, Durango, Guanajuato, Guerrero, Hidalgo, Jalisco,

De acuerdo con estudios realizados por Rzedowski & Rzedowski, (2001),

a) Hbito y forma de vida: Hierba carnosa, rastrera, a veces algo ascendente,

Propagacin, dispersin y germinacin

Se propaga por semillas.

Crece en primavera y florece desde mediados de esta estacin o principios de

Comestible y medicinal (diurtica, refrescante, purgante, contra enfermedades de

Anteriormente se han realizado estudios relacionados con esta planta algunos de