Sunteți pe pagina 1din 173

Universitatea de Stat din Moldova

Laboratorul de Cercetri tiinifice Algologie

Sergiu Dobrojan, Victor alaru,


Vasile alaru, Victor Melnic, Galina Dobrojan

CULTIVAREA ALGELOR
Monografie

Chiinu, 2016
CZU 633.529.3
C 94

Aprobat de:
Departamentul Biologiei Ecologie,
Consiliul Facultii de Biologie i Pedologie,
Senatul Universitii de Stat din Moldova

Recenzeni: Valeriu Rudic, doctor habilitat, profesor universitar,


academician;
Ludmila Rudi, doctor, confereniar cercettor;
Vera MiScu, doctor, confereniar cercettor

Descrierea CIP a Camerei Naionale a Crii


Cultivarea algelor: Monografie / Sergiu Dobrojan, Victor alaru, Vasile
alaru [et al.]; Univ. de Stat din Moldova, Lab. de Cercet. t. Algologie.
Chiinu: CEP USM, 2016. 173 p.
Bibliogr.: p. 118-128 (169 tit.). 50 ex.
ISBN 978-9975-71-736-6.
633.529.3
C 94

Monografia este elaborat n cadrul Proiectului 14.819.18.02._A

S. Dobrojan, V. alaru i al.


ISBN 978-9975-71-736-6 CEP USM, 2016
CUPRINS

Introducere...................................................................................................................... 6

CAPITOLUL I
CULTIVAREA ALGELOR NECESITATE ACTUAL........................................ 7
1.1. Argumentele privind necesitatea cultivrii algelor.................................................. 7
1.2. Producia mondial de biomas algal................................................................... 10

CAPITOLUL II
CARACTERISTICA GENERAL A PROCESULUI DE CULTIVARE A
ALGELOR.................................................................................................................. 15

CAPITOLUL III
COLECTAREA PROBELOR DE ALGE PENTRU CULTIVARE....................... 17
3.1. Colectarea probelor de alge din ecosistemele acvatice.......................................... 17
3.2. Colectarea algelor bentonice.................................................................................. 19
3.3. Colectarea algelor de perifiton............................................................................... 19
3.4. Colectarea algelor edafice...................................................................................... 19
3.5. Colectarea algelor aerofile..................................................................................... 20

CAPITOLUL IV
OBINEREA CULTURILOR DE ALGE DENSE.................................................. 21
4.1. Obinerea culturilor brute....................................................................................... 21
4.2. Obinerea culturilor monoalgale............................................................................ 22
4.2.1. Metoda dilurii......................................................................................... 22
4.2.2. Metoda microvegetal.............................................................................. 23
4.2.3. Metoda de selectare a culturilor algologice . ........................................... 23
4.2.4. Metoda de inoculare a algelor n interiorul agarului................................ 24
4.2.5. Metoda de separare a algelor prin centrifugare i sedimentare................ 24
4.2.6. Metoda de obinere a monoculturilor din culturi brute dense.................. 25
4.2.7. Selectarea monoculturilor prin intermediul fototaxisului......................... 26

CAPITOLUL V
OBINEREA CULTURILOR ALGALE PURE (AXENICE)............................... 27
5.1. Obinerea culturilor algale pure prin utilizarea antibioticelor................................ 27
5.2. Utilizarea metodelor de filtrare pentru nlturarea bacteriilor din culturile
de microalge........................................................................................................... 33
5.3. Metoda de obinere a culturilor algale pure utiliznd mediile agarizate................ 34

3
5.4. Utilizarea metodelor chimice pentru obinerea culturilor algale axenice.............. 34
5.5. Utilizarea luminii ultraviolete pentru obinerea culturilor algale pure.................. 35
5.6. Aplicarea ultrasunetului pentru nlturarea bacteriilor din culturile algale........... 36

CAPITOLUL VI
CULTURILE ALGALE INTENSIVE...................................................................... 38

CAPITOLUL VII
TEHNOLOGII DE CULTIVARE A MONOCULTURILOR ALGALE................ 40
7.1. Medii nutritive pentru cultivarea algelor............................................................... 41
7.1.1. Macroelementele n nutriia mineral a algelor........................................ 42
Azotul................................................................................................................. 43
Fosforul............................................................................................................... 45
Kaliul.................................................................................................................. 47
Magneziul........................................................................................................... 48
Sulful.................................................................................................................. 48
Calciul................................................................................................................. 49
Sodiul.................................................................................................................. 50
7.1.2. Macroelementele n nutriia mineral a algelor cianofite......................... 51
7.1.3. Macroelementele n nutriia mineral a algelor verzi............................... 55
7.1.4. Macroelementele n nutriia mineral a algelor diatomee, roii,
galben-verzi.............................................................................................. 59
7.2. Microelementele n nutriia mineral a algelor . ................................................... 62
Fierul................................................................................................................... 62
Manganul............................................................................................................ 63
Zincul.................................................................................................................. 64
Cuprul................................................................................................................. 64
Molibdenul.......................................................................................................... 65
Borul................................................................................................................... 66
Cobaltul.............................................................................................................. 67
7.2.1. Microelementele n nutriia mineral a algelor cianofite . ....................... 68
7.2.2. Nutriia mineral cu microelemente a algelor verzi................................. 72
7.2.3. Nutriia mineral cu microelemente pentru cultivarea algelor diatomee,
roii, galben-verzi..................................................................................... 76
7.3. Prepararea mediilor nutritive................................................................................. 78
7.3.1. Prepararea mediilor nutritive lichide........................................................ 78
7.3.2. Prepararea mediilor nutritive solide......................................................... 80
7.4. Sterilizarea mediilor nutritive................................................................................ 80
7.4.1. Sterilizarea mediilor nutritive lichide....................................................... 81
Autoclavarea....................................................................................................... 81
4
Tindalizarea........................................................................................................ 81
Sterilizarea n cuptorul cu microunde................................................................. 82
Sterilizarea cu ajutorul lmpii ultraviolete......................................................... 82
7.4.2. Sterilizarea mediilor nutritive solide........................................................ 83
7.5. Pregtirea inoculului algal..................................................................................... 83
7.6. Condiiile de cultivare a algelor............................................................................. 84
7.6.1. Temperatura.............................................................................................. 85
7.6.2. Iluminarea................................................................................................. 86

CAPITOLUL VIII
METODE DE CULTIVARE A ALGELOR.............................................................. 88
8.1. Caracteristica general a metodelor de cultivare a algelor.................................... 88
Cultivarea periodic............................................................................................ 88
Cultivarea periodic n adncime....................................................................... 88
Cultivarea periodic ndelungat........................................................................ 89
Cultivarea multiciclic........................................................................................ 90
Cultivarea semicontinu..................................................................................... 90
Cultivarea continu............................................................................................. 91
Cultivarea sincronizat....................................................................................... 92
8.2. Cultivarea continu a algei Nostoc flagelliforme pe medii obinute pe baza
deeurilor de la complexele zootehnice................................................................. 92
8.3. Cultivarea periodic a algei Spirulina platensis pe ape reziduale zootehnice....... 96
8.4. Cultivarea periodic a algei Anabaenopsis sp....................................................... 99
8.5. Utilizarea metodei semicontinue la cultivarea algei Anabaenopsis sp................ 102
8.6. Utilizarea metodei de cultivare continu a algei Spirulina platensis pe ape
reziduale zootehnice............................................................................................. 107

CAPITOLUL IX
COLECII DE ALGE...............................................................................................114
9.1. Caracteristica general a coleciilor de alge..........................................................114
9.2. Tehnologii de meninere a algelor n colecii........................................................114
9.2.1. Meninerea pe medii nutritive solide i lichide.......................................114
9.2.2. Meninerea algelor prin crioconservare...................................................116
9.2.3. Meninerea algelor n colecii prin ahidrobioz.......................................117
Bibliografie..................................................................................................................118
Anexa nr.1. Medii nutritive utilizate pentru cultivarea algelor................................... 129
Anexa nr.2. Mediile nutritive optime pentru cultivarea unor specii de alge............... 149
Anexa nr.3. Condiiile optime de temperatur pentru cultivarea algelor.................... 155
Anexa nr.4. Date de contact privind coleciile de alge............................................... 160

5
Introducere

Cultivarea algelor este una dintre cele mai importante direcii actuale ale cerce-
trilor tiinifice de ordin biologic cu caracter practic. Datorit procesului de cultivare
putem obine biomas algal care este benefic pentru om n vastele sale activiti,
dar i pentru natur, contribuind la meninerea i reglarea echilibrului ecologic.
Datorit proprietilor i capacitilor sale, actualmente algele sunt studiate sub
toate aspectele: populaional, celular, molecular, atomic etc. Algele servesc drept
modele i pentru direcii tinifice ndeprtate de biologie, cum ar fi cele radiaionale,
biochimia, genetica etc. Astfel, pentru realizarea acestor cercetri este necesar ca
algele s fie cultivate i meninute.
Cu toate c aceast direcie tiinific este studiat i abordat n literatura de
specialitate, sunt necesare totui noi viziuni, descrieri i modificri pentru a com-
pleta informaiile teoretice, dar i pentru a eficientiza procesul practic de cultivare a
algelor. De aceea, n lucrare sunt selectate i prezentate att rezultatele cercetrilor
tinifice din literatura de specialitate, ct i cele proprii ale autorilor.
Prezenta monografie este elaborat pentru a dezvolta aceast direcie indispen-
sabil progresului societii actuale. Lucrarea este structurat n nou capitole, n
care este caracterizat procesul de cultivare ncepnd cu colectarea probelor, obi-
nerea culturilor algale dense i pure, urmnd caracteristica i aplicarea metodelor
de cultivare, caracteristica condiiilor de cultivare, specificarea necesarului de sub-
stane nutritive pentru alge i terminnd cu caracteristica metodelor de meninere a
algelor n colecii.
Autorii sper ca monografia va prezenta interes pentru specialitii n domeniu,
pentru studeni, masteranzi i doctoranzi specializai n biologie i ecologie, dar i
pentru toti cei interesai n a obine noi cunotine teoretico-aplicative n domeniul
cultivrii algelor.

6
CAPITOLUL I
CULTIVAREA ALGELOR NECESITATE ACTUAL

1.1. Argumentele privind necesitatea cultivrii algelor


Pentru valorificarea i exploatarea pe larg a algelor este necesar creterea ma-
jor obinut prin cultivarea lor. Cultivarea algelor permite obinerea biomasei
algale care poate fi utilizat n practic. Cultivarea algelor poate fi efectuat
n condiii deschise n cmp i nchise n laborator. Avantajele cultivrii
algelor n condiii de laborator s-au dovedit a fi mai nalte, caracterizate prin
obinerea produselor ecologice fr impuriti, care au fost i sunt importante
pe fonul problemelor de mediu i sntate. Primele ncercri de cultivare a al-
gelor n cultur de laborator au nceput cu mai bine de 130 de ani n urm, n
contextul cercetrilor de fiziologie vegetal.
Cultivarea algelor n condiii de reglare a activitilor vitale este una din-
tre direciile de perspectiv ale acvaculturii, biotehnologiei, algologiei practice
etc. La ora actual interesul fa de cultivarea n mas a algelor a crescut sem-
nificativ1.
Necesitatea cultivrii algelor este argumentat de avantajele oferite i de
rezultatele foarte bune obinute la aplicarea biomasei algale n vaste domenii.
n ultimii ani un succes nalt i se atribuie industrializrii fotosintezei bazate
pe utilizarea algelor microscopice, capabile s asimileze carbonul din atmo-
sfer i s elimine oxigen2.. Acest aspect prezint un solid argument n vederea
utilizrii algelor n ameliorarea procesului de nclzire global a Terrei.
Cultivarea algelor este argumentat i de faptul c algele fac parte din pri-
mul lan trofic al ecosistemelor acvatice i terestre, constituind materia organi-
c primar din componentele anorganice ale mediului. Astfel, acest lucru spo-
rete interesul pentru aplicarea practic a algelor, pentru sporirea produciei i
asigurarea echilibrului ecosistemelor.
Algele prezint surs important de hran a animelelor i omului. Algele
utilizate n practica de consum sunt colectate din natur i prin cultivare n con-
diii de laborator. Algele colectate din natur sunt mai puin sigure, deoarece n
biomasa algal se ntlnesc multe organisme (cum ar fi bacterii i nevertebrate)
care sunt greu de nlturat i uneori prezint pericol pentru oameni i animale n
rezultatul consumului. Cultivarea n condiii de laborator este mai costisitoare,
ns prezint siguran sporit, deoarece culturile cultivate sunt mai inti izola-
te i lipsite de alte organisme.
1
.., .., .., .. -
. : , 1999. 264 .
2
.. : -
. // , 1985, .92-95.

7
n ultima perioad sunt cultivate pe larg n cantiti mari algele roii, brune,
verzi i albastre-verzi. Conform criteriului cantitativ, biomas algal constituie
circa 20% din producia mondial a acvaculturii. Dintre cele mai importante
alge cultivate pentru utilizarea biomasei n alimentaie se menioneaz 81 spe-
cii de alge roii, 54 specii de alge brune, 25 specii de alge verzi, 8 specii de alge
albastre -verzi3,4.
Un alt argument care stimulez cultivarea industrial a algelor este coni-
nutul biochimic al biomasei lor. n cele din urm, vom caracteriza coninutul
biochimic al ncrengturilor de alge cultivate industrial.
Algele roii au n componena biomasei glucide (pn la 70%), proteine
(20-40%), lipide (pn la 3%), cenu i alte substane (20%). Algele brune
au i ele un coninut major de glucide (pn la 70%), proteine (5-20%), lipide
(1-3%), cenu i alte substane (25-35%). Algele cianofite au n componena
biomasei glucide (pn la 60%), proteine (pn la 78%), n special ficobilipro-
teine, fieroritrin i ficocianin, lipide (2-12%). Algele verzi conin mai puine
glucide (30-40%), substane azotoase (40-45%), lipide (1-10%) i alte substan-
e (10-20%)5.
Coninutul biochimic prezentat mai sus poate fi privit ca un aspect orientativ,
deoarece componena biochimic a biomasei algelor se poate modifica, ntr-o
oarecare msur, n funcie de specie, condiiile de cultivare, starea fiziologic
a celulelor, vrsta tulpinii etc.
Cultivarea algelor este argumentat i de utilizarea lor pe larg n scopuri me-
dicale. Utilizarea algelor n scopul tratrii diferitelor boli era practicat n Orient
nc cu o mie de ani naintea erei noastre. La ora actual s-a descoperit c alge-
le conin cele mai variate substane care influeneaz asupra activitii inimii,
stomacului, intestinului, glandelor endocrine, sistemului nervos i endocrin etc.
S-a demonstrat c algele au proprieti antisclerotice, mbuntesc procesele de
hematopoiez, sunt antioxidante, rein procesul de mbtrnire a organismului,
contribuie la eliminarea toxinelor din organism, la suplinirea organismului cu
substane biologic active i conin multe micro- i macroelemente necesare de-
rulrii normale a activitii organismului uman. Unele alge sunt utilizate pentru
obinerea textilelor, hrtiei, vopselei, fiind cultivate n cantiti mari6.

3
Abbott I.A., Cheney D.P. Comercial uses of algal products: introduction und bibliography.
// Selected papers in phycology, vol. 2, 1982, p.779 -787.
4
Algal Biotehnology. Progres in biotehnology of photoautotrophic microorganism. // 6 Intern.
Conf. on applied algology, 1993. 84 p.
5
.. . : -
, 1972. 336 .
6
.., .. . ,
, . ; -: -, 1997.
155 .

8
Cultivarea algelor este stimulat i de utilizarea lor pe larg n agricultur. Al-
gele sunt utilizate ca surs alimentar pentru animale, ca biostimulator al cre-
terii plantelor de cultur, iar utilizarea lor n acest scop sporete pe an ce trece.
Algele sunt utilizare ca hran verde pentru animale n multe ri ale lumii (Is-
landa, Scoia, Danemarca, Noua Zeeland, SUA etc.), precum i ca supliment
n raia alimentar. Biomasa algal poate fi administrat animalelor n stare vie,
uscat, n form de fin i granulat. Din biomasa algelor se obin suplimente
nutritive pentru diverse animale care sunt destul de bogate n proteine, glucide,
lipide, peptide, vitamine, macro- i microelemente, aminoacizi etc.7
Algele sunt utilizate n scopul proteciei mediului, constituind surse de le-
gturi chimice diverse care se elimin n mediu, n acelai timp i de substane
biologic active. Algele particip la formarea hidrobiocenozelor, influeneaz
proprietile organoleptice ale apelor, calitatea apelor de suprafa. mbog-
esc apele cu oxigen, epureaz apele poluate cu elemente biogene, metale gre-
le, radionuclizi, contribuind la epurarea n general a tuturor componentelor
mediului.
Cultivarea algelor este argumentat i de necesitatea aplicrii algelor pen-
tru sporirea fertilitii solului. n lipsa substanelor organice, algele cianofite
azotfixatoare contribuie la formarea fertilitii, creeaz asociaii cu bacteriile i
contribuie la fixarea azotului atmosferic i la acumularea substanelor organice,
la mbuntirea structurii solului, sporindu-i umiditatea, capacitatea lui antie-
rozional. Contribuia algelor n acumularea substanelor organice este semnifi-
cativ; s-a demonstrat c n pustiurile din SUA algele contribuie la acumularea
a 300 kg/ha de substan organic. Substana organic acumulat de alge este
uor asimilat de plantele superioare i alte organisme ale biocenozelor. Viteza
de mobilizare a azotului i a carbonului din biomasa algelor determin tipul
de sol i regimul lui hidrotermic. Algele servesc ca factor de acumulare supli-
mentar a energiei solare n biomas; n afar de aceasta, din contul algelor se
mrete perioada vegetativ a fitocenozelor, ele contribuie la ameliorarea celor
mai poluate soluri cu pesticide, metale grele, petrol etc.
Un argument important pentru cultivarea masiv a algelor este i utilizarea
lor n calitate de biofertilizani. Algele cianofite azotfixatoare sunt cele mai
atractive specii utilizate ca biofertilizani. Aceste alge contribuie la acumularea
azotului n sol (din contul fixrii din atmosfer) accesibil plantelor i echili-
breaz coninutul lui, iar dezvoltarea masiv a biomasei algelor azotfixatoare
nu cauzeaz poluarea biologic a solului cu azot atmosferic fixat, deoarece
procesul de fixare biologic a azotului la alge este autoreglabil. Aportul algelor
n economisirea azotului n sol este de 1044,22 mii t pe an. Algele cianofite
7
.., .. . ,
, . ; -: -, 1997.
155 .

9
pot fixa n solurile regiunilor cu clim moderat circa 20-557 kg/ha de azot (n
masa uscat), n solurile utilizate la cultivarea orezului 15-90 kg/ha anual. Bio-
masa algelor include o mare parte a cabonului, iar n rezultatul descompunerii
biomasei acesta se elibereaz n sol i contribuie la formarea aciziilor humici i
fulvici. Azotul celular (care constituie 40-60% din azotul fixat) la descompune-
rea biomasei algale este accesibil bacteriilor, ciupercilor, algelor nefixatoare de
azot i muchilor. Experimental s-a demonstrat c algele pot asigura 4,3-15%
din necesarul de azot din sol al plantelor superioare.
Algele sunt cultivate i pentru utilizarea biomasei algale n scop energetic.
Algele utilizeaz eficient energia solar, conservnd-o n biomas. n compa-
raie cu energia atomic, algele sunt surse de energie absolut sigure; utilizarea
lor nu contribuie la dereglarea echilibrului ecologic i nu genereaz poluarea
radioactiv sau termic a mediului. Din cantitatea total a energiei solare, ce
atinge anual suprafaa solului, plantele utilizeaz n medie 0,1%. Aceast can-
titate este de cteva ori mai nalt dect necesarul global de energie. De aceea
se utilizeaz biogazul ca surs de energie din biomasa algelor pe calea abio-
conversiei. Algele permit sporirea cu 3-5% a eficacitii conversiei energiei so-
lare. Astfel, algele pot servi ca reactor solar eficient. Pentru obinerea energiei
din biomasa algelor, n SUA, Japonia se practic pe larg cultivarea lor pe ape
reziduale. Se consider c 50-60 t de biomas uscat de alge pot genera 74 mii
kw/or de electricitate. Energia obinut n rezultatul fotosintezei algelor este
mai rentabil de convertit n gaz i se consider a fi concurent pe plan global
cu energia nuclear, cu toate c n toate cercetrile se evideniaz c algele sunt
mai avantajoase economic8. Astfel, cultivarea algelor pe ape reziduale permite
soluionarea mai multor probleme, cum ar fi: epurarea apelor, protecia mediu-
lui contra polurii, obinerea surselor suplimentare de energie i fertilizani,
economisirea i regenerarea resurselor naturale.

1.2. Producia mondial de biomas algal


Cultivarea industrial a algelor a cptat o larg rspndire n ntreaga lume.
Conform unor estimri, din cele 50.000 de specii de microalge, circa 10 sunt
cultivate industrial n scopul obinerii unor produse comercializabile (Spiruli-
na, Crypthecodinium cohnii, Chlorella, Dunaliella salina, Ulkenia sp., Hae-
matococcus pluvialis, Schizochytrium, Aphanizomenon flos-aquae, Euglena i
Odontella aurita). Din cele 10 specii cultivate industrial cel mai mare aport au
speciile Chlorella, Spirulina i Cryptecodinium.

8
.., .., .. . : . : -
, 1989. 605 .

10
Tabelul 1
Producia global a biomasei microalgelor i aplicarea lor
Producia
Taxon Produsul Aplicarea estimat,
t/an
Chlorella vulgaris Extract din Produs alimentar, 2000
biomas sntate, supliment
alimentar, cosmetic
Spirulina platensis Biomas, Produs alimentar, 3000
ficocianin, sntate, alimente
extract funcionale
Dunaliella salina Carotenoizi, Produs alimentar, 1200
-caroten sntate, supliment
alimentar, cosmetic
Nostoc fusiforme Biomas Produs alimentar, 600
sntate
Aphanizomenon flos- Biomas Produs alimentar, 500
aquae sntate
Haematococcus Carotenoid Farmacie, produs 50
pluvialis astaxantin alimentar aditiv,
acvacultur
Odontella aurita Biomas Cosmetic, alimentaie 20

Producia mondial de biomas algal doar a unor specii analizate este de


7370 t pe an. Biomasa algei Spirulina platensis este estimat la cele mai mari
cantiti (3000 t/an), deoarece ea nu este toxic, fiind eficient sntii umane i
animale, iar cele mai mici cantiti de biomas algal nu depesc 20 t pe an (la
cultivarea speciei Odontella aurita).
Potrivit altor surse, producia mondial de biomas algal uscat este n pre-
zent de aproximativ 7000 t pe an9.
Actualmente se consider c productorii mondiali de biomas algal cultiv
variate specii, n funcie de scop i produsul obinut (Tab. 2).

9
http://www.algaemax.eu/more-in-detail.html

11
Tabelul 2
Productorii mondiali de biomas algal10
ara Compania Algele cultivate Produsul obinut
SUA Martek Crypthecodinium Acid
docosahexaenoic-
omega 3
SUA Gates Foundation Kappaphycus Caragenan
SUA R&D Lobophora Macrolide
Canada Oceannutrition Chlorella Extract de glucide
Germania Astaxa Nannochloropsis sp. Omega 3
Tetraselmis sp.,
Phaeodactylum
tricornutum,
Arthrospira
(Spirulina) platensis,
Chlorella vulgaris,
Scenedesmus sp.,
Haematococcus
pluvialis,
Porphyridium
cruentum,
Germania Nutrinova Uklaria Acid
docosahexaenoic-
omega 3
Frana Dior Odontella EPA
Austria Panmol/Madaus Spirulia Vitamina B12
Marea BSV Rhodophyta Biomas
Britanie
Danisco Ulva lactuca Hexoz oxidaz

Astfel, dup cum observm, cei mai muli productori de biomas algal sunt
n SUA i n Germania, iar biomasa algal este utilizat n scopuri farmaceutice
i alimentare.
Jumtate din biomasa mondial a algelor este utilizat ca aliment, iar cea de a
doua jumtate servete drept surs pentru obinerea extractelor. Cele mai impor-
tante extracte obinute din biomasa algelor sunt: carotenoizii, ficobiliproteinele
i antioxidanii.
10
Egardt J., Lie ., Aulie J., Myhre P. Microalgae a market analysis carried out as part of
the Interreg KASK IVA project: Blue Biotechnology for Sustainable Innovations, Blue Bio.
Sweden, 2013. 79 p.

12
Valoarea economic a biomasei algale, estimat n anul 2010, era de 600 mi-
lioane de euro. Principala utilizare pe pia a biomasei algelor este: n scopuri
umane (74%), ca hran a animalelor (25%) i n calitate de produse cosmetice i
n scopuri de cercetare.
Conform altor autori, biomasa global a algelor cultivate se estimez la apro-
ximativ 3,5-5 miliarde de euro. Din acestea, sectorarelor alimentar i sntate
li se atribuie 1,5 miliarde de euro, iar cercetrii i acvaculturii 0,5 miliarde de
euro11.
Actualmente sunt estimate calcule pentru obinerea a 1 kg de biomas algal
utilizat n diferite scopuri. Informaia respectiv este prezentat n Tabelul 3.

Tabelul 3
Costul estimat al biomasei algale n funcie de scopul utilizrii11

Scopul utilizrii Produsul Costul estimat, dolari/kg


Produs alimentar pentru 10-80
Biomas sntate
Aliment funcional 25-52
Aliment aditiv 10-130
Acvacultur 50-150
Fertilizant pentru sol >10
Pigment Astaxantin 2500-8000
Antioxidant -caroten >750
Superoxid dismutaz >1000
Tocoferol 30-40
Acizi grai saturai extract 30-80

Astfel, putem constata c cele mai costisitoare produse obinute din biomasa
algelor sunt pigmenii estimai la 2500-8000 dolari pentru 1 kg, iar cea mai ief-
tin este biomasa algal utilizat n calitate de biofertilizant (ce nu depete 10
dolari/kg).
Pe plan mondial aproximativ 75,2% din toi productorii de biomas algal
sunt din domeniu public sau privat i abia 18,6% sunt din sfera instituiilor de
cercetare i inovare.

11
http://www.algaemax.eu/more-in-detail.html

13
Algele macrofite au i ele o importan economic destul de mare. Actualmen-
te se estimez c valoarea economic global a biomasei algelor macrofite este
de 5,5-6 miliarde de euro.
O direcie strategic a cultivrii algelor, care n ultima perioad a cptat
rspndire mondial, este bazat pe obinerea biodiselului din biomasa algal.
Biomasa algal prezint surs important de obinere a petrolului, cu caracteris-
tici care depesc multe plante oleagenoase (Tab. 4).
Tabelul 4
Producia medie de petrol a unor plante oleaginoase i a algelor12

Sursa de ulei Randament (L.m2/yr-1)


Alge 4,7-17
Palmier 0,54
Jatropha 0,19
Rapi 0,12
Floareasoarelui 0,09
Soia 0,04

Rezultatele prezentate atest c algele sunt cultivate pe plan mondial n can-


titi majore datorit utilizri biomasei algale n vaste domenii, valorificrii bio-
masei i comercializrii acesteia.

12
Schenk P.M., Thomas-Hall S., Stephens E., Marx U.C., Mussgnug J.H., Posten C., Kruse O.,
Hankamer B. Second Generation Biofuels: High-Efficiency Microalgae for Biodiesel Production.
BioEnergy Research, 2008, 1(1), p.20-43.

14
CAPITOLUL II
CARACTERISTICA GENERAL A PROCESULUI
DE CULTIVARE A ALGELOR

Dup cum am menionat, cultivarea algelor n condiii de laborator prezint


un interes tiinific major. Pentru efectuarea experimentelor de laborator privind
obinerea biomasei algale se utilizeaz culturile de alge. Cultivarea algelor n
condiii de laborator include un complex mare de operaii, care depind de scopul
i sarcinile cercetrilor, de caracteristicile specifice i biologice ale algelor etc.
Tehnica de cultivare a algelor este un proces destul de complicat. Tehnica de cul-
tivare a fiecrei specii de alge este puin diferit, dar, totui, n mare parte trebuie
realizate aceleai etape de baz. Etapele cultivrii algelor sunt variate, ns n linii
mari trebuie realizate ase etape de baz13 (Fig. 1).

Fig.1. Etapele generale ale cultivrii algelor.


13
.., .., .. . - -
. : , 1975. 241 c.

15
Primul i cel mai important pas este colectarea probelor de alge din natur
n locurile unde se dezvolt masiv (etapa 1), transportarea lor n laborator i
meninerea culturilor de alge dense pe mediile nutritive de unde au fost colectate
sau pe medii nutritive artificiale (etapa 2), dup care urmeaz o procedur mai
dificil de obinere a culturilor de alge curate pe baza utilizrii mediilor nutritive
artificiale solide, uneori i lichide (etapa 3). Cea mai mare dificultate n culti-
varea algelor este obinerea n cultur a unei specii. Culturile algale ce conin o
singur specie trebuie lipsite de bacterii i alte microorganisme prin aplicarea
tehnicilor specifice (etapa 4). Dup realizarea cu succes a celor 4 etape urmea-
z cultivarea algelor n condiii dirijate sub influena diferiilor factori pentru
determinarea condiiilor optime de cretere a biomasei algale (etapa 5). Un lu-
cru important este i meninerea algelor n colecii, pentru asigurarea viabilitii
culturii n scopul ntreinerii ndelungate a algelor pentru viitoarele necesiti de
cultivare.
Etapele cultivrii algelor trebuie realizate consecutiv, una dup alt, pentru
obinerea culturilor algologice pure. Odat obinute, culturile algologice pure
trebuie meninute i cultivate dup procedee pe care le vom descrie n continu-
are. De menionat c fiecare etap de cultivare a algelor, indicat n Figura 1,
se realizeaz dup metode i procedee specifice, iar pentru obinerea biomasei
algale trebuie respectate cu strictee condiiile de cultivare. Astfel, pentru culti-
varea eficient a algelor i obinerea biomasei algale vom descrie detaliat fiecare
etap n parte.

16
CAPITOLUL III
COLECTAREA PROBELOR DE ALGE PENTRU CULTIVARE

Una dintre cele mai importante etape este colectarea coret a probelor de alge
care asigur realizarea uoar a celorlalte etape generale ale cultivrii.
Colectarea probelor de alge din natur trebuie efectuat n perioada activ a
vegetaiei speciei. Pentru colectare trebuie selectate acele habitate unde specia de
alg se dezvolt n cantiti maximale i se afl ntr-o stare activ de via.14 Pen-
tru realizarea colectrii probelor de alge avem nevoie de unele unelte specifice,
vase de depozitare a culturii i de aparate pentru determinarea caracteristicilor
fizice, fizicochimice i chimice ale locului de colectare.

3.1. Colectarea probelor de alge din ecosistemele acvatice


Colectarea probelor de alge din ecosistemele acvatice se realizeaz diferit n
funcie de habitatul speciei colectate. Din ecosistemele acvatice pot fi colectate
specii de fitoplancton fitobentos i perifiton.
n apele dulci din Europa se ntlnesc mai des urmtoarele ncrengturi:
Bacillariophyta alge diatomee (circa 15000 specii);
Chlorophyta alge verzi (circa 5700 specii);
Cyanophyta alge albastre-verzi (circa 1400 specii);
Euglenophyta alge euglenofite;
Chrysophyta alge crizofite; circa 2000 specii
Cryptophyta alge criptofite15.
Colectarea probelor de alge din lacurile i rurile mari se realizeaz din stratul
unde se produce fotosinteza. n cazul n care transparena apei n locul de colec-
tare este de 1 m, proba se va preleva de la adncimea de maximum 0,5 m. Probele
colectate se vor introduce n vas i se va aduga 1 l de ap din locul dat.
Pentru colectarea cantitativ a fitoplanctonului se utilizeaz plasa sau bato-
metrul. Plasa pentru colectarea planctonului este pe larg aplicat n practic (mai
frecvent se utilizeaz plasa Gedi). Plasa este constituit dintr-un inel metalic de
care se unete un sac n form conic din pnz special sau sit confecionat din
nailon sau mtase. n regiunea de sus i cea de jos ale sacului se pune o pnz mai
puternic (de dorit s fie din ln). n partea de jos a plasei se gsete un phru,
unde se depoziteaz sedimentul fitoplanctonului la filtrarea prin plas. Pentru
plasa de colectare a fitoplanctonului se utilizeaz un strat de mtase gros (L 68 i
mai mare), rezistent, cu dimensiunea egal a gurilor sale. Aceast plas permite
colectarea pe vertical a probelor de alge pentru cultivare.
14
.., .., ..
: . : - , 2008. 152 .
15
.. , -
. : , 2008. 128 .

17
Fig.2. Plas de colectare a fitoplanctonului.

Aceast procedur de colectare este bazat pe filtrarea volumelor mari de ap


i permite captarea speciilor de alge ce se dezvolt masiv i nu numai, care habi-
teaz n apele lacurilor, mrilor, oceanelor.
Pentru colectarea fitoplanctonului mai poate fi utilizat i barometrul (Fig. 3) de
diferit tip. Se consider c este mai eficient s se utilizeze barometrul din sticl
chimic neutr sau din plastic cu volum de 1-5 l. Pentru colectarea fitoplanctonu-
lui marin poate fi utilizat barometrul de 5 l. Batometrul se fixeaz de un lan de
metal care se scufund la adncimea necesar.

Fig.3. Batometru de colectare a probelor de suprafa.

18
Colectarea algelor bentonice se realizat prin prelevarea nmolului de fund i a
sedimentului de pe el. Colectarea din sursele de ap de mic adncime (pn la 0,5-1,0 m) se
realizeaz prin scufundarea 3.2. Colectarea
sifonului algelor
cu un furtun de bentonice
cauciuc i un capilar de sticl la capt.
Colectarea Colectarea algelor bentonice
algelor bentonice se realizat
mai poate princu
fi realizat ajutorul nmolului
prelevarea gleii saude fund i care este
paharului,
ataat adesedimentului
un baston, saude cu
pe ajutorul
el. Colectarea din sursele
diferitelor aparatededeap de mica adncime
colectare nmolului.(pn la
16

0,5-1,0 m) se realizeaz prin scufundarea sifonului cu un furtun de cauciuc i un


capilar
Pentrude sticl la capt.
colectarea algelorColectarea algelor
de fitobentos bentonice imai
se utilizeaz poate finumit
aparatul realizat cu
microbentometru,
ajutorul gleii sau paharului, care este ataat de un baston, sau cu ajutorul diferi-
redat n Figura. 4, care se utilizeaz i pentru16 colectarea probelor de fitobentos supuse analizelor
telor aparate de colectare a nmolului.
calitative.17
Pentru colectarea algelor de fitobentos se utilizeaz i aparatul numit micro-
bentometru, redat n Figura 4, care se utilizeaz i pentru colectarea probelor de
fitobentos supuse analizelor calitative.17

Fig.4.
Fig. Aparat de
4. Aparat decolectare
colectarea fitobentosului (Microbentometru
a fitobentosului C-1). C-1)
(Microbentometru

3.3. Colectarea algelor de perifiton


3.3. Colectarea algelor de perifiton
Algele de perifiton se coelcteaz cu ajutorul uni cuit obinuit sau cu raclete
speciale, care suntsesterilizate
Algele de perifiton coelcteazpreventiv. Esteuni
cu ajutorul important ca algele
cuit obinuit saude
cuperifiton s
raclete speciale, care
fie colectate npreun cu substratul, deoarece ele sunt strns fixate. Dup care
sunt sperilizate preventiv. Este important ca algele de perifiton s fie colectate npreun cu
se nltur substratul, iar algele prezente se introduc n vasul de colectare. Dup
substratul, deoarecealgelor
introducerea ele sunt
destrns fixate.
perifiton Dup
n vas care se puin
se adaug nltur substratul,
ap iar algele
din ecosistemul ac-prezente se
introduc n de
vatic vasul de se
unde colectare.
colecteazDup introducerea algelor de perifiton n vas se adaug puin ap
probele.
din ecosistemul acvatic de unde se colecteaz probele.13
3.4. Colectarea algelor edafice
Colectarea probelor de alge
3.4. edafice poate
Colectarea fi efectuat
algelor edaficeconform metodelor de
colectare a probelor de alge supuse analizelor taxonomice sau a unor procedee
mai simplificate.
Colectarea probelorPentru colectarea
de alge edaficealgelor
poate de fi sol se recomand
efectuat conforms metodelor
fie luat corect
de colectare a
proba medie, pungile i instrumentele de colectare s fie sterile, probele s fie eti-
probelor de alge
chetate. supuse probelor
Colectarea analizelordetaxonomice
alge de sol se sau a unor procedee
realizeaz, de regul,mai
de lasimplificate.
adnci- Pentru
colectarea
mea dealgelor
0-10 de
cm,sol se recomand
deoarece s fiealgelor
majoritatea luat corect proba
habiteaz medie,depungile
n stratul i instrumentele
la suprafaa
solului. s
de colectare Uneori poate fiprobele
fie sterile, colectatsproba i din orizonturile
fie etichetate. Colectareade adncime.
probelor n de cazul
alge de sol se
realizeaz, de regul, de la adncimea de 0-10 cm, deoarece majoritatea algelor ca
n care pe sol se dezvolt masiv algele i formeaz o pelicul, se recomand habiteaz n
algele s fie colectate cu un strat subire de sol de pe un teritoriu cu dimensiuni
stratul de la suprafaa solului. Uneori poate fi colectat proba i din orizonturile de adncime. n
care pot fi diferite n funcie de densitatea algelor: de la 10 la 100 cm2.
cazul n care pe sol se dezvolt masiv algele i formeaz o pelicul, se recomand algele s fie
colectate cu
16
un strat
..subire .
de sol de pe un :
teritoriu cu .
dimensiuni care:
pot fi -
diferite n funcie
, 2008. 199 c. 2
de densitatea
17 algelor: ..
de la
10 la 100 cm . : . :

, 2005. 128 .
Probele se colecteaz cu un cuit steril, fra sau hrle. n condiii de cmp sterilizarea
instrumentelor poate fi efectuat cu ajutorul19alcoolului etilic sau cu nfibgerea de multe ori a

16 .. . : . . : , 2008. 199
c.
Probele se colecteaz cu un cuit steril, fra sau hrle. n condiii de cmp
sterilizarea instrumentelor poate fi efectuat cu ajutorul alcoolului etilic sau cu
nfibgerea de multe ori a cuitului n solul de unde se colecteaz probele de alge.
Probele de alge i solul pot fi colectate n plicuri din hrtie dens sterile.18

3.5. Colectarea algelor aerofile


Colectarea poate fi efectuat de pe copaci, pereii cldirilor etc., cu ajutorul
unui cuit steril (mpreun cu substratul) ntr-un pachet de hrtie sau ntr-un vas
de sticl sterilizat preventiv.

18
o .. . : -. , 1990.
80 .

20
CAPITOLUL IV
OBINEREA CULTURILOR DE ALGE DENSE

Dup cum menionez d. prof. I.Cruu, dup colectarea probelor de alge


din natur urmeaz etape de lucru n ce privete realizarea culturilor de laborator,
care sunt:
culturi brute - dense;
culturi monoalgale;
culturi pure (,,axenice), lipsite de bacterii, ciuperci sau protozoare;
culturi intensive.

4.1. Obinerea culturilor brute


Culturile brute reprezinta prima etap de cultivare a algelor n laborator; n
esen, ele sunt reprezentate de probe (fragmente) preluate dintr-o biocenoz
natural i transferate n condiii de laborator. Aici, proba respectiv poate fi
divizat n mai multe pri, la fiecare fiind apoi adugate anumite substane
nutritive sau chiar medii complete, n funcie de specificul biocenozei iniiale
i de scopurile urmrite. Se recomand ca o poriune din proba iniial s fie
fixat, urmnd a oferi informaii referitoare la compoziia iniial a comunit-
ilor de alge. Ulterior, aceste culturi brute, care, de regul, conin mai multe
specii (dar nu toate speciile existente iniial n algocenoza respectiv), servesc
drept surs pentru izolarea unor specii de alge ce urmeaz s devin culturi
monoalgale.19
La aceast etap pot fi realizai paii ilustrai n Figura 1, ce reprezint doar o
parte a schemei propuse de Guillard i Morton.20

Fig.5. Schema obinerii culturilor brute de alge.


19
Cru I. Cultura algelor pentru biomas i principii active: Note de curs, lucrri de
laborator. Bacu: Universitatea din Bacu, 2007. 99 p.
20
Guillard R.R.L., and Morton S.L. Culture methods. // Hallegraeff G.M., Anderson D.M., and
Cembella A.D., eds. Manual on Harmful Marine Microalgae. UNESCO, Paris, 2003, p.7797.

21
4.2. Obinerea culturilor monoalgale
Probele care conin o singur specie de alge reprezint o etap important n
obinerea culturilor de laborator. Ele constituie rezultatul separrii dintr-o ,,poli-
cultura a unei singure specii de alge. Pentru obinerea culturilor algologice cu-
rate, trebuie s cunoatem informaia despre ciclul lor de via, despre structura
i reproducerea celulelor.
Pentru multe direcii de investigare, utilizarea culturilor monoalgale nu poate
asigura nivelul de precizie i rigurozitate tiinific necesar. Astfel, n majoritatea
proceselor care pot constitui obiectul studiului experimental (fotosinteza, nutriia
mineral, eliberarea unor substane ectocrine, rata de nmulire, productivitatea
culturii etc.), prezen n mediul nutritiv a altor organisme (precum bacteriile,
micromicetele sau chiar unele protozoare) poate determina interferene majore
i, n final, alterarea semnificativ a datelor obinute.
Pe de alt parte, prin consumul complementar de nutrieni, prin eliminarea
substanelor metabolice, organismele asociate algelor pot determina modificarea
condiiilor de nutriie i de via ale algei respective i, n final, scurtarea duratei
de existen/folosire a culturii.
n general, se poate considera c n condiiile cultivrii la scar mare a algelor,
sub cerul liber, n scopul obinerii de biomas, culturile de alge pot fi monospeci-
fice, dar nu sunt, de regul, axenice.
n literatura de specialitate sunt cunoscute mai multe procedee de divizare a
algelor n monocultur. n cele din urm vom meniona cteva metode bazate pe
utilizarea mediilor nutritive agarizate i lichide.
Utilizarea agarului solid este frecvent aplicat n practica de obinere a mo-
noculturilor algale. Concentraia agarului variaz de la o metod la alta, ns
n linii mari ea se situeaz n limitele 0,8-2%, unele alge pot crete pe agar cu
concentraii de 0,3-0,6%. Mediile agarizate permit apariia i dezvoltarea masiv
a ciupercilor, care ns pot fi nlturate prin filtrarea inoculului i a substanelor
organice. Dac se observ creterea masiv a ciupercilor, atunci aceste vase nu
trebuie deschise, ci aruncate. Mediile agarizate permit obinerea monoculturilor
algale peste o perioad de cteva zile pn la o lun (n cazul algelor marine).21

4.2.1. Metoda dilurii


nainte de a ncepe lucrul, algele trebuie incluse pe medii nutritive sterile sau
n ap distilat. Prima etap const n determinarea densitii suspensiei, a nu-
mrului de celule la 1 ml. Numrarea celulelor este comod de a fi efectuat n
camera Goreaev. Dup care, la necesitate, se efectueaz o serie de diluii (fie-
care diluie urmeaz s fie efectuat de 10 ori) pn cnd n 0,1 ml din ultima
soluie diluat se vor conine 100 celule de alge. Aceast densitate a inoculului
21
.., .., .. C
: . : - , 2008. 152 .

22
garanteaz la inocularea pe medii agarizate apariia coloniilor din fiecare specie.
Diluarea se efectueaz cu pipete sterile n cilindre cu ap distilat steril, pe ca-
lea transmiterii suspensiei dintr-un cilindru n altul. Inoculul cu volumul de 0,1
ml se introduce n vasul Petri (cu mediul agarizat solid) cu ajutorul spechelului
steril uniform la suprafaa agarului. Dup care cecua se nchide i se expune la
lumin la cultivator sau la fereastra de nord. Peste ceva timp (de regul, peste 2-3
sptmni) la suprafaa agarului se formeaz puncte colonii de alge. Transpa-
rena discului de agar permite algelor din vasele nchise s ptrund n interiorul
agarului pn la fund. Cu ajutorul obiectivului cu mrimea de 2x i cu ocularul de
8x pot fi vizualizate coloniile crescute. Dintre acestea pot fi selectate colonii de
diferite forme dimensionale i, dup posibiliti, alge care sunt lipsite de ciuperci
i bacterii. Coloniile selectate se inoculeaz n vasul Petri (steril ce conine agar)
cu ajutorul buclei linii inoculate. Liniile ce vor crete vor prezenta monoculturi
ale diferitelor alge. Ele vor fi din nou expuse pe medii nutritive agarizate pn se
va obine o monocultur. Aceast metod este eficace pentru algele microscopice
unicelulare. Algele macroscopice i cele coloniale de multe ori se pierd n pro-
cesul de diluare i este greu de obinut inocul.22 Astfel, obinerea acestor alge n
monocultur este o procedur ndelungat i grea, dar posibil de realizat.

4.2.2. Metoda microvegetal


O alt metod eficace este metoda algologic microvegetal elaborat de ..
23, care propune utilizarea filtrelor membranare (Nr.4 i Nr.5) ce se
utilizeaz pentru selectarea algelor din cele crescute pe filtru, colonii sau celule
separate. Metoda const n folosirea filtrelor membranare sterile care se expun n
vasul Petri cu mediu agarizat cldu. O pictur de suspensie de alge (de dorit s
fie puine celule) se introduce cu pipeta pe filtru. Peste 2-3 sptmni algele cresc
pe suprafaa filtrului n form de colonii. Filtrul se vizualizeaz la microscop i
se selecteaz coloniile. Din ele, cu ajutorul ansei sau bisturiului, se ia o cantitate
mic de alge i se inoculeaz pe mediul nutritiv proaspt pregtit. Se recomand
ca dup extragerea filtrului de pe mediul agarizat acesta s fie expus pe o sticl
dezinfectat i s se lase puin la uscat la temperatura camerei. Dup finisarea
lucrului filtrul se introduce din nou n cecua Petri pe mediul agarizat, deoarece
n caz c nu s-a reuit obinerea monoculturii s existe rezerv de colonii algale
selectate.

4.2.3. Metoda de selectare a culturilor algologice


Att prima, ct i a doua metod de selectare a culturilor sunt destul de
complicate i n multe cazuri capricioase. De aceea, .. i ..
22
.. (Chlorophyta:
Tetrasporales, Chlorococcales, Chlorosarcinales). : , 1998. 351 .
23
.. -
// O , 1977, . 38, 1, c.41-47.

23
24 au elaborat o metod mai simpl i accesibil de obinere a monocul-
turilor, pentru selectarea celulelor i coloniilor algale de orice dimensiune. Potri-
vit acestei metode, n vasul Petri se introduce mediul nutritiv agarizat (1,6-1,8%
agar), la suprafaa mediului solid se introduce 0,2-0,3 ml de ap distilat sterilizat
(n funcie de mrimea cetii Petri) ce se distribuie cu ajutorul spatulei sterile.
Trebuie ca n 1,5-2 zile apa s se mbibe n mediu nutritiv. Dup administra-
rea apei n vasele Petri se adaug o cantitate redus de suspensie algal, ceaca
se nchide i se expune la lumin. Peste ceva timp (de regul, 2-3 sptmni)
la suprafaa agarului ncep s apar colonii de alge. Printre ele, de regul la
marginile vasului, pot fi gsite colonii cu o singur specie. Dac vom analiza
n interval variat diferite colonii, care se deosebesc i dup culoare, pe care le
inoculm pe mediu nutritiv proaspt, atunci putem obine monoculturi aproape
la toate speciile de alge prezente n mediul agarizat.
Dup cum se cunoate, n culturile acumulatoare cu vrsta se produce mb-
trnirea i modificarea culturilor algale. La apariia noilor forme trebuie repeta-
t procedura de selectare a monoculturilor.

4.2.4. Metoda de inoculare a algelor n interiorul agarului


Unele alge nu pot s creasc la suprafaa agarului, ci n interior. Pentru aceas-
ta a fost elaborat, apoi modificat, metoda de selectare a algelor n monocultu-
r din interiorul agarului. Metoda const n parcurgerea unor etape distinctive.
Inoculul algelor colectate din cmp se agit cu agarul lichid (nclzit) i
se toarn n vasul Petri. Agarul se rcete la o temperatur puin mai nalt
dect cea din cultivator. Vasele cu inocul i mediu agarizat se incubeaz la
temperatur stabilit i iluminare continu n cultivator. Dup cretere algele
pot fi selectate n monocultur cu ajutorul micropipetei. De regul, se utilizea-
z micropipeta Pasteur sau capilarul de sticl. Pipeta Pasteur se sterilizeaz la
foc (lampa de spirt) fiind inut cu ajutorul pensetei. Pipeta trebuie uor sucit
deasupra flcrii pentru a o putea ntinde i rupe vrful, obinnd parc o a
subire. Vrful tubului obinut permite captarea algelor din interiorul agarului.25
Aceast metod se aplic att pentru selectarea algelor n monocultur, ct i
pentru meninerea ndelungat a culturii n laborator.

4.2.5. Metoda de separare a algelor prin centrifugare i sedimentare


Separarea algelor prin centrifugare i sedimentare este eficace pentru despri-
rea organismelor ce se deosebesc dup dimensiuni. Aceast metod permite sepa-
rarea celulelor mai mari i grele de cele mai mici i uoare, precum i de bacterii.
24
.., .. -
. .. // -
. , 1983, .92-104.
25
.., .., ..
: . : - , 2008. 152 .

24
Filtrarea uoar poate fi utilizat pentru nlturarea algelor diatomee i dinoflage-
latelor de celulele mai mici. Aceast procedur poate fi repetat pn la curarea
total a culturii. Pentru dinoflagelatele care plutesc accelerat aceast procedur
trebuie realizat n timp scurt, deoarece algele pot nimeri n soluie. Centrifugarea
intens poate afecta celulele algelor sensibile. Puterea de centrifugare a probelor
colectate depinde de specia de alg i poate fi determinat empiric.
Metoda de sedimentare se utilizeaz pentru separarea celulelor ce nu se mi-
c sau a celulelor grele. Probele se agit puin i se introduc n baloane cu fund
plat, cilindre sau alt vesel pentru sedimentare. Sedimentarea se efectueaz pn
cnd celulele necesare se depun pe fund, iar celulele mici vor fi suspendate n
soluie. Dup aceasta soluia de deasupra se arunc. Acest proces poate fi repetat
pn la obinerea rezultatului dorit.26
Aceast metod este eficace pentru culturile concentrate i cu celule mari, iar pen-
tru culturile cu dimensiuni celulare mici este greu de aplicat. Pentru algele cu dimen-
siuni mici metoda de filtrare sau centrifugare poate fi combinat cu alte metode.

4.2.6. Metoda de obinere a monoculturilor din culturi brute dense


Aceast metod are ca scop obinerea monoculturilor algale la utilizarea att
a mediilor solide, ct i lichide. Ea poate fi utilizat, n special, pentru obinerea
culturilor algologice pure de alge edafice sau aerofile. Probele de alge colectate
din natur (n cazul cnd algele formeaz cruste nflorirea solului), se expun
n apa distilat sterilizat. O poriune mic se microscopiaz i se determin, n
funcie de parametrii morfologici, care alge predomin.
Dup care selectm specia ce ne intereseaz. Probele se spal bine (de 45 ori
cu apa distilat) pentru nlturarea primar a particulelor solide i a altor alge, dar i
a bacteriilor ce sunt alipite crustei. Apoi algele sunt expuse din nou n apa distilat,
fiind supuse procedurii de centrifugare pentru separarea secundar de unele bacterii
i nevertebrate. Dup centrifugare probele se utilizeaz pentru inoculare.
Inocularea n vasul Petri pe mediu agarizat sterilizat (cu concentraia de 1,5%)
se va efectua astfel: 1. Coloniile n form de crust se vor dispersa cu ajutorul
pensetei sterile n buci mai mici (cu lungimea de 0,1-0,25 cm i limea de
0,05-0,07 cm) i mai mari (cu lungimea de 0,05-0,07 cm i limea de 0,02-0,03
cm). 2. Bucile mai mari se aranjeaz n form de cerc la suprafaa mediului
agarizat la distana de 1 cm de marginea cecuei (distana dintre bucile mari de
alge fiind de 2 ori mai mare dect lungimea lor) formnd prima circumferin, iar
bucile mici se aranjeaz la fel n form de cerc la suprafaa mediului agarizat
(distana dintre bucile mici fiind de dou ori mai mare dect lungimea lor) for-
mnd a dou circumferin. 3. n mijlocul celei de a doua circumferine se expune
o poriune mic de crust (Fig. 6). Probele inoculate se expun n cultivator la
iluminare continu i temperatura necesar.
26
.., .., ..
: . : - , 2008. 152 .

25
Fig.6. Inocularea algelor colectate pe mediu agarizat.

Inocularea probelor pe mediu lichid sterilizat se efectueaz n baloane Erlen-


mayer cu volum de 100 ml, volumul mediului lichid fiind de 50 ml. Se adminis-
treaz 40 mg de inocul pregtit, probele se agit puin i se expun la iluminare
continu i temperatura necesar. Dup ce se obine o cretere masiv a biomasei,
probele se microscopiaz, se selecteaz specia predominant i se expune din nou
pe mediu nutritiv. Etapele se repet pn la obinerea unei culturi monoalgale.
Aplicarea metodei permite obinerea monoculturilor algale ntr-un interval de
timp mai scurt dect prin aplicarea celorlalte metode.

4.2.7. Selectarea monoculturilor prin intermediul fototaxisului


Fototaxisul poate fi utilizat pentru obinerea monoculturilor de flagelate.
Aceast metod este eficient dac proba conine o specie dominant de flagelate
ce posed fototaxis. Dac sunt mai multe specii de acestea, atunci procesul de
selectare n monocultur se complic.
Pentru aplicarea acestei metode este necesar o instalaie special ce conine
o surs de lumin. Cea mai simpl instalaie const dintr-un tub umplut cu mediu
nutritiv steril. La un capt se afl proba de alge, la cellalt sursa de lumin.
Dup ce celulele se vor deplasa la o distan n mediul nutritiv steril, ele pot fi
separate cu ajutorul micropipetei i introduse din nou n mediu nutritiv steril.
Pentru eficientizarea procesului de separare a celulelor exist un dispozitiv spe-
cial (ce const dintr-o colb cu o mnec integrat). Astfel, proba de alge i bilele
sterile se introduc n colba cu mediu nutritiv, alturi de care se introduce sursa de
lumin. Dup ce celulele algelor se deplaseaz n mneca colbei, aceasta se ntoar-
ce astfel ca bilele s nchid mneca, iar mediul nutritiv rmas se exclude.
O alt metod complicat prevede utilizarea unei micropipete special constru-
ite pentru separarea flagelatelor de alte organisme. O parte din vrful pipetei se
arunc, iar celulele care s-au deplasat n partea superioar a pipetei se introduc
n vase speciale. Unele celule ale algelor ce nu se deplaseaz pot s se mite prin
agar la sursa de lumin. Dup migrarea spre lumin celulele separate pot fi colec-
tate pentru cultivarea ulterioar.27
27
.., .., ..
: . : - , 2008. 152 .
26
CAPITOLUL V
OBINEREA CULTURILOR ALGALE PURE (AXENICE)

Pentru stabilirea activitii algelor trebuie s avem culturi algale pure din punct
de vedere bacteriologic. Ideea despre culturi bacteriologic pure a fost naintat
de Koch i Pasteur. De menionat c obinerea culturilor algale pure se realizea-
z nu dintr-o celul, ci din populaie algal, care la cultivarea ndelungat sau la
schimbarea condiiilor de cultivare pot suferi unele modificri ce pot contribui la
schimbarea proprietilor culturii algale. De aceea, trebuie s stimulm obinerea
tulpinilor sau a clonelor selectate dintr-o celul. Selectarea dintr-o celul se poate
realiza atunci cnd se obine o monocultur clon a tulpinii din natur.28
Culturile algale pure sunt preferate n cazul cultivrii algelor pentru obinerea
biomasei utilizate n alimentaia uman, ca surs medicamentoas i n cadrul
cercetrilor tiinifice. n cele ce urmeaz vom descrie unele modaliti de obi-
nere a culturilor algale pure.

5.1. Obinerea culturilor algale pure prin utilizarea


antibioticelor
Antibioticele sunt substane cu efect bactericid sau bacteriostatic, cu toxicitate
selectiv, obinute prin biosintez microbian.29 Pentru nlturarea bacteriilor din
culturile algale se utilizeaz antibioticele antibacteriene cu spectru de aciune n-
gust (cum ar fi penicilina, streptomicina), dar i cu spectru de aciune larg (cum ar
fi clortetraciclina, ocitetraciclina, tetraciclina) care sunt active pe bacterii Gram
pozitive i negative, coci Gram pozitivi i negativi, spirochete, leptospire, chla-
midii, micoplasme etc.
Antibioticele pot fi utilizate pentru nlturarea bacteriilor din culturile algale
fr a le afecta, ns ele sunt utilizate rar n practica de cultivare.
Utilizarea antibioticelor pentru nlturarea bacteriilor prevede anumite mo-
mente ce trebuie luate n considerare:
La administrarea antibioticelor se reduce sinteza pereilor celulari. Pentru
stimularea diviziunilor celulare trebuie adugate substane organice, de-
oarece aceste antibiotice distrug bacteriile doar n cazul creterii active a
celulelor.
Nu se recomand s utilizm n paralel inhibitori ai divizrii peretelui celu-
lar (cum ar fi, de exemplu, penicilina) i inhibitori ai creterii celulelor.30
28
.., .. -
. , 1962. 58 .
29
Toma F. Bacteriologie general: Curs. Bucureti, 2005. 70 p.
30
.., .., ..
: . : - , 2008. 152 .

27
Tehnicile de tratare a culturilor algale cu antibiotice variaz n funcie de pre-
parat, de concentraia i timpul tratrii i au un efect letal asupra bacteriilor. Pre-
parate antibiotice pot fi utilizate att separat, ct i mixt (compuse din combinarea
a mai multor antibiotice), unele fiind utilizate la etapa iniial, iar altele la etapa
final de distrugere a bacteriilor din culturile algale.
Sensibilitatea algelor la antibiotice se modific ntr-un spectru larg i depinde
de specificul biologic al organismului. Un lucru extrem de important, n acest
sens, este concentraia antibioticelor administrate. Unele concentraii contribuie
la distrugerea total a tulpinilor algale, iar alte concentraii contribuie la distru-
gerea bacteriilor i nu afecteaz algele. Astfel, n lucrarea lui .. i
coautorii31 se evideniaz dozele de antibiotice letale pentru unele alge i dozele
necesare, care nu afecteaz tulpinile algale (doar bacteriile), acestea fiind prezen-
tate n tabelele 5 i 6.

31
.., .., .. . - -
c : : , 1975. 241 c.

28
Tabelul 5
Concentraia antibioticelor ce stopeaz complet creterea algelor
i bacteriilor, mg/ml
Antibioticele

Specia
Nestatin

Penicilin
Aurantin
Grizemin

Polimixin

Colimicin
Trihotecin

Candicidin

Gramicidin
Tertraciclin
Eritromicin

Levomicetin

Streptomicin
Oxitetraciclin

Cloetetraciclin
Chlorella vulgaris 1,51 0,01 0,03 0,05 0,20 0,20 >0,05 >0,10 >0,05 0,02 0,1 0,025 0,0303 0,05 0,1
Scenedesmus >3,03 >0,10 0,10 0,02 0,0005 >0,10 0,05 0,05 0,02 0,15 0,1 0,01 0,025 0,025 0,05
obliquus
Ankistrodesmus >3,03 0,02 0,10 0,02 0,0005 0,05 0,05 0,05 0,05 >0,05 0,15 0,005 0,025 0,0005 0,005
falcatus

29
Pseudomonas ovalis 0,72 0,40 1 0,20 0,01 0,05 >0,1 >0,1
Pseudomonas 0,14 0,10 >0,20 0,11 0,50 0,01 >0,1
pyocyaneum
Pseudomonas sp. >0,61 0,20 0,20 0,20 0,01 0,10 >0,1 >0,1
Achromobacter 0,1 0,40 0,10 0,02 0,01 0,05 0,01
harthlebii
Flavobacterium 2,91 0,04 0,02 0,01 0,20 0,025
sulfurum
Sterratia rubra 1,45 0,04 2,00 0,02 0,05 >0,0025
Bacillus mycoides >3,03 >0,10 0,10 0,10 >0,02 0,06 1,00 0,0005 0,01
Bacillus cereus >3,03 >0,10 0,0005 0,01 >0,20 0,23 0,50 >0,10 >0,1 0,1
Penicillium 0,015 0,05 0,05
chloroleucon
Aspergillus 0,1 0,025 0,025
ochraceae
Trichoderma sp. 0,05 0,01 0,05
Dup cum observm, cele mai mari doze de antibiotic administrate pot fi de penicilin (de 3 mg/ml), iar cele mai
mici sunt de candicidin i levomicetin care n concentraii de 0,0005 mg/ml stopeaz creterea algelor.

Tabelul 6
Concentraiile antibioticelor ce nu influeneaz creterea algelor i rein complet dezvoltarea
microorganismelor, mg/ml
Antibioticele

Specia
Nestatin

Penicilin
Aurantin
Grizemin

Polimixin

Colimicin
Trihotecin

Candicidin

Gramicidin
Tertraciclin
Eritromicin

Levomicetin

Streptomicin
Oxitetraciclin

Clortetraciclin
Chlorella vulgaris 0,91 0,01 0,05 0,008 0,02 0,05 0,02 0,005 0,005 0,0005 0,008 0,005 0,001
Scenedescmus obliquus 3,03 0,01 0,01 0,01 0,05 0,005 0,01 0,01 0,10 <0,0005 0,001 0,005 0,005 0,005

30
Ankistrodesmus falcatus 3,03 0,001 0,05 0,005 0,01 0,01 0,005 0,02 0,001 <0,0005 0,001 0,005 0,001
Pseudomonas ovalis 0,14 0,20 0,10 0,02 0,003 0,03 0,02 0,01 >0,005 >0,1 0,01
Pseudomonas 0,14 >0,10 0,01 0,05 0,05 >0,005 0,005 >0,1
pyocyaneum
Pseudomonas sp. 0,73 0,08 0,10 0,02 0,003 0,05 0,02 0,01 >0,005 0,0005 0,005
Achromobacter 0,14 0,04 <0,01 0,01 0,008 0,03 0,01 0,0025 0,1 0,005
harthlebii
Flavobacterium 1,45 0,04 0,01 0,003 0,05 0,0025 0,005
sulfurum
Sterratia rubra 0,36 0,04 0,10 0,01 0,03 0,01 0,01 0,0005 0,01
Bacillus mycoides >3,03 0,04 >0,10 <0,10 0,10 0,02 0,2 0,02 0,01 0,0005 0,01
Bacillus cereus 2,91 0,04 0,0005 <0,01 0,02 0,06 0,05 0,01 0,01 0,025 0,005
Penicillium 0,008 0,05 0,05
chloroleucon
Aspergillus ochraceae 0,05 0,025 0,01
Trichoderma sp. 0,025 0,005 0,05
Dozele de antibiotice prezentate n Tabelul 6 pot fi considerate ca rezistena
algelor la anumite concentraii de antibiotice. Rezistena algelor la antibiotice
poate fi natural sau dobndit, n funcie de condiiile de cultivare, coninutul
mediilor nutritive etc. n cazul dat antibioticele exercit influen negativ doar
asupra bacteriilor, iar asupra algelor influneaz pozitiv.
Sursele de specialitate, mai recente, menioneaz trei modaliti de disrugere
a bacteriilor prin utilizarea antibioticelor.
Prima modalitate eliminarea bacteriilor din mediul nutritiv de cultivare a
algelor. n literatura de specialitate se propune utilizarea mail multor antibiotice
combinate. Spre exemplu: la 100 mg de penicilin G se adaug 25 mg sulfat de
dehidrostreptomicin i 25 mg de sulfat de gentomicin care sunt dizolvate n 10
ml ap distilat (sau deionizat), dup care se sterilizeaz prin filtru membranar.
Soluia se pstreaz ngheat pn la utilizare (pentru pstrarea soluiei congela-
te se recomand utilizarea tuburilor de policarbonat). Pentru aplicare se utilizeaz
soluia decongelat (care se menine cel puin 5 zile la temperatura de 37C ),
soluia decongelat se poate pstra la circa 4C timp de cteva sptmni. Doza
standard de aplicare este de 0,5 ml antibiotic mixt la 50 ml de mediu nutritiv
pentru cultivarea algelor. Aceast concentraie este destul de bine suportat de
multe specii de alge.
Concentraia optim de antibiotic mixt poate fi determinat prin inocularea mo-
noculturii (aflat n faza exponenial de cretere n volum de la 0,5 pn la 5 ml
n funcie de densitatea culturii i mrimea celulelor) n 50 ml de mediu nutritiv
proaspt preparat (administrat n 5 vase). n primul vas nu se administreaz antibi-
otic, n cel de al doilea 0,25 ml, n al treilea 0,5 ml, n al patrulea 1 ml i n cel
de al cincilea 2 ml de antibiotic. Administrarea antibioticelor trebuie efectuat
la sfritul zilei de inoculare, astfel c peste aproximativ 15, 24, 36 i 48 ore de la
administrarea algelor s colectm cu ajutorul micropipetei o colonie sau o celul
de alg pentru a putea fi inoculat pe mediul nutritiv proaspt pregtit (care este
preventiv sterilizat). Dup aceasta se realizeaz un test de identificare a bacteriilor
din culturile algale.
Avantajele primei metode de combatere a bacteriilor const n faptul c an-
tibioticele nu influeneaz radical dezvoltarea algelor, iar dezavantajul principal
este c procedura necesit timp i efort mare, mai ales pentru splarea celulelor
dup extragerea de pe mediu cu antibiotic. Aceast metod poate fi utilizat, n
special, pentru celulele flagelatelor, diatomeelor mari, dinoflagelatelor mari i
formelor coloniale.
O alt metod de nlturare a bacteriilor din culturile algale este cea propus
de Droop32 , care este simpl i eficient. Aceast metod poate fi aplicat cultu-
rilor cu dimensiuni celulare mici i cu o vitez mare de cretere.
32
Droop M.R. A procedure for routine purificationof algal cultures with antibiotics. // Brit.
Phycol. Bull., 1967, no3, p.295.

31
Unul din procedeele propuse de Droop prevede utilizarea unui amestec de
antibiotice compus din: sulfatbenzilpenicilina G 2500 mg/l, cloramfenicol 200
mg/l; neomicin 200 mg/l, actidione (pentru nlturarea ciupercilor) 400 mg/l.
Multe surse tiinifice susin c aceste concentraii de antibiotic sunt extrem de
mari i contribuie la distrugerea celulelor algale. Antibioticele selectate de Droop
sunt utilizate pentru distrugerea bacteriilor gram pozitive (n special penicilina),
iar celelalte distrug bacteriile Gram pozitive prezente n mediile de cultivare a
algelor i n coloniile algale.
Un alt procedeu de combatere a bacteriilor din culturile monoalgale este transfe-
rul secvenial al culturilor algale ntr-o serie de baloane cu mediu nutritiv sterilizat
ce conin antibiotice care difer de la un balon la altul. Acestea permit algelor s
supravieuiasc i s creasc eventual i la concentraii reduse. Esena metodei
const n faptul c la fiecare trecere a culturilor algale dintr-un balon n altul se
reduce numrul bacteriilor. Aceast metod permite distrugerea pas cu pas a bac-
teriilor, cu toate c este posibil a distruge toate bacteriile odat (conform celor-
lalte dou procedee sus-menionate). Acest procedeu este mai puin toxic pentru
culturile algale, dect celelalte dou procedee. n afara de aceasta, antibioticele
mixte pot fi fatale pentru metaboliii unor alge, ns ar putea suprima creterea
altora. Aceast metod este avantajoas, deoarece un antibiotic poate distruge
unele bacterii, iar alte antibiotice pot distruge alte bacterii, astfel c ntr-un final
obinem o cultur algal pur. Aplicarea metodei date asigur acomodarea alge-
lor la antibiotice i creterea biomasei i eliminarea bacteriilor. Aceast metod a
fost utilizat pentru purificarea algei Micromonas flagela pusilla i a permis nl-
turrea total a bacteriilor. Astfel, au fost utilizate secvene de urmtoarele antibi-
otice: penicilin (1 g/l), neomicin (250 mg/l), gentamicin (1 g/l) i kanamycin
(0,5 sau 1 g/l). Primul antibiotic se administreaz la inoculul de 20%. Dup trei
zile n mediul nutritiv proaspt pregtit se introduce al doilea antibiotic, dup ce
se inoculeaz 20% din prima prob. Peste urmtoarele trei zile se administreaz
al treilea antibiotic (gentamicina) i se inoculeaz 20% din cea de a doua prob.
Dup urmtoarele patru zile se introduce ultimul antibiotic (din cele sus-meni-
onate) i se administreaz aceeai cantitate de inocul din combinaia precedent.
Astfel c la sfritul perioadei de expunere tulpina algal s-a purificat, fiind lip-
sit totalmente de bacterii.33
Pentru culturile de microalge marine se propune utilizarea metodei elaborate
de S.Slocombe,34 care garanteaz excluderea total a bacteriilor din culturile alga-
le. Astfel, se prepar 20 ml de antibiotic prin diluarea n ap distilat a cefatoxinei
(500 mg/l), carbenicilinului (500 mg/l), kanamycinei (200 mg/l i augmentinului
(200 mg/l). Soluia se sterilizeaz prin filtrare (utiliznd filtru cu diametrul de
0,22 ), se depoziteaz ntr-un flacon steril i se pstreaz n frigider 4 sptmni
33
Guillard R.R.L. Purification methods for microalgae. // Algae culturing techniques, 2005,
p.117-132.
34
Ibidem.

32
sau se congeleaz la temperatura de 200C. Pentru eliminarea bacteriilor se pro-
pune utilizarea a 6 tuburi cu mediu nutritiv ce conine urmtoarele concentraii
de antibiotice: 0%; 0,5%; 1%; 5%; 7,5%; 10%, la care se inoculeaz suspensia
algal. Se agit bine tuburile, se nchid i se expun la incubare pe noapte la con-
diii optime de temperatur i iluminare. Peste un interval de 16, 24, 40, 48, 72,
i 80 de ore se ia cte o pictur din fiecare tub i se inoculeaz n vase separate
ce conin mediu nutritiv sterilizat proaspt pregtit. Se monitorizeaz procesul
de cretere a algelor; acolo unde se observ cea mai rapid cretere, se consider
ca alga s-a acomodat mai rapid. Din acel vas se preiau probe pentru a fi supuse
analizelor bacteriologice (pentru verificarea puritii culturilor algale).
De menionat c utilizarea antibioticelor care au proprieti mutagene poate
contribui la formarea modificrilor genetice la algele cultivate.

5.2. Utilizarea metodelor de filtrare pentru nlturarea


bacteriilor din culturile de microalge
Pentru separarea celulelor algale de bacterii mai poate fi utilizat metoda de fil-
trare. Filtrarea se realizeaz utiliznd o instalaie special, prezentat n Figura 7.

Fig.7. Aparat de filtrare pentru nlturarea bacteriilor din culturile algale.

Aceast metod permite nlturarea bacteriilor din culturile algale, dac aces-
tea au dimensiuni mai mici dect celulele algelor. Metoda prevede utilizarea fil-
trului Nucleopor cu diametrul porilor de 8 , deoarece el permite trecerea celu-
lelor algelor microscopice. Pentru aceasta poate fi utilizat dispozitivul prezentat
n Figura 7. Aparatul este format dintr-un dispozitiv de plasare a filtrului cu dia-
metrul de 25 mm (A). Dispozitivul de plasare a filtrului are la capt o sering de
sticl cu dop de cauciuc (1), iar la baz un tub de cauciuc sau silicon (2). Tubul

33
(2) este conectat la un balon Buchner (3) de extragere n vid, care este conectat la
o pomp, cu capacitate mic, de extragere n vid (4). Tubul (2) are conexiune cu
un tub aferent nzestrat cu clem (C), la captul creia este ataat un suport (B)
cu membran cu diametrul porilor de 0,22 , prin care ptrunde aerul sterilizat
preventiv. Tubul (2) mai are conectat o clem (D) care, ca i clema anterioar
(C), are funcia de a regla presiunea aerului n vid. Presiunea n vid se regleaz
astfel nct mediul nutritiv cu culturile algale s se filtreze lent.35
Prin acest procedeu au fost sterilizate alga cianofit Aphanizomenon flos-
aquae f. gracile (Lemm.) Elenk. i alga diatomee Asterionella formosa Hass,
fiind obinute culturi algologice pure.

5.3. Metoda de obinere a culturilor algale pure utiliznd mediile


agarizate
Este una dintre cele mai vechi metode de purificare i poate fi aplicat doar
pentru algele care se dezvolt pe suprafaa agarului sau n interiorul lui. Aceast
metod, dup cum am menionat n capitolele precedente, poate fi utilizat att
pentru purificarea algelor de bacterii, ct i pentru obinerea culturilor unialgale.
n agar pot fi administrate antibiotice sau substane chimice antibacteriene. Se
propune ca mediile agarizate s fie autoclavate iniial, dup care gelifierea s se
produc la temperatura de 170C care nu influeneaz negativ asupra activitii
antibioticelor. Agarozele care s-au solidificat la temperaturi reduse sunt foarte
importante pentru purificarea algelor cianofite, n special pentru speciile genului
Mycrocystis. Aceast metod se utilizeaz n combinare cu metodele de ultrasu-
net i centrifugare. Cu ajutorul acestei metode a fost obinut i una din speciile
genului Synechococcus.36-38
36 37 38

5.4. Utilizarea metodelor chimice pentru obinerea culturilor


algale axenice
Pentru obinerea culturilor axenice se utilizeaz i metodele chimice, care
constau n splarea algelor cu soluii dezinfectante de anumite concentraii. Cele
mai frecvente antiseptice utilizate la sterilizarea algelor sunt urmtoarele:
I. Fenolul (acid carbolic) n concentraie de 0,01-1%;
II. Rivanol n concentraie de 0,01-0,1%;

35
Heaney By S.I., Jaworsk G.H.M. A simple separation technique for purifying micro-algae.
// Br. phycol., 1977, no.12, p.171-174.
36
Guillard R.R.L. Purification methods for microalgae. // Algal culturing techniques, 2005,
p.117-133.
37
Watanabe M.M., Suda S., Kasai F., Sawaguchi T. Axenic cultures of three species of Micro-
cystis (Cyanophyta= Cyanobacteria). // Bull. Jap. Fed. Culture Coll., 1985, p.57-63.
38
Watanabe M.M. et al. Purification of freshwater picoplanktonic cyanobacteria by pour-
plating in ultra-low-gelling-temperature agarose. // Phycol. Res., 1998, p.71-75.

34
III. Alcool etilic n concentraie de 1-10%;
IV. Detergeni (Dero, de exemplu) n concentraie de 1%.
Una din metodele de sterilizare chimic este cea propus de .. ,
care prevede utilizarea rivanolului (n concentraie de 0,1%) i bromului. Astfel,
se propune utilizarea rivanolului proaspt (de 0,1% obinut prin diluie cu ap
distilat) care se adaug n concentraie de 0,5-20 mg/l la mediul nutritiv steril.
Pe mediul cu rivanol se inoculeaz algele. La concentraii nalte de rivanol al-
gele rezist 4-5 ore, iar la concentraii mici pn la 3 zile. Cele mai rezistente
sunt algele clorococoficee, iar pentru cianofite are aciune letal (excepie prezen-
tnd formele mucilaginoase). Dup administrarea rivanolului algele trebuie bine
splate. Pentru sterilizarea algelor diatomee maritime se recomand utilizarea
iodului. Procedura se realizeaz astfel: se adaug 1-2 picturi de iod n 50 ml
de mediu nutritiv. Algele se menin timp de 1-2 minute, dup ce se separ i se
utilizeaz la inocularea pe mediu nutritiv proaspt pregtit.
Pentru sterilizarea culturilor de Clamodomonas i Euglena de bacterii se pro-
pune utilizarea cofeinei n concentraie de 0,01-0,03 mol la mediul mineral. Pen-
tru sterilizarea algelor verzi, albastre-verzi i diatomee de bacterii se mai utili-
zeaz actidionul (C15H23O5N) cu masa molar de 297,39, care este considerat
antibiotic de origine chimic.
Sterilizarea cu detergeni poate fi aplicat pentru algele cianofite i verzi.
Metoda se realizeaz prin adugarea a 2 picturi de detergeni la 50 ml de sus-
pensie algal, dup care se agit cu fenol (de 1%) n raport de 1 parte suspensie
la 4 pri soluie de fenol. Soluia obinut se centrifugheaz, iar celulele alge-
lor (care cad n sediment) se spal cu ap distilat steril. Dup care algele se
expun pe medii nutritive agarizate (2% agar + 0,5% glucoz) pentru cretere.
Coloniile crescute se mai inoculeaz pe agar de cteva ori pn nu se asigur
sterilitatea bacteriologic.

5.5. Utilizarea luminii ultraviolete pentru obinerea culturilor


algale pure
Principiul acestei metode const n nlturarea bacteriilor din culturile algale
prin utilizarea luminii ultraviolete cu radiaia ultraviolet de tip C. Pentru aceas-
ta se aplic lampa germicid care genereaz radiaie de 254 nm. Efectele letale
ale radiaiei ultraviolete asupra bacteriilor sunt n limitele de 240-280 nm (cu
capacitatea maxim la 260 nm). Astfel, radiaia ultraviolet trece prin celulele
bacteriilor i iniial este absorbit de ADN, ceea ce are drept urmare stoparea
reproducerii. Se produce o leziune asupra bazelor pirimidinice timina i citozi-
na care sunt afectate i formeaz legturi anormale, numite dimeri pirimidinici.
Ca rezultat se mpiedic replicarea i transcripia ADN-ului i are lor inhibarea
creterii i moartea celulelor bacteriene. n afar de alterarea ADN-ului raze-
le ultraviolete dezintegreaz celulele algelor prin producerea radicalilor liberi

35
substane fotochimice toxice. Expunerea ndelungat la radiaia ultraviolet
contribuie la distrugerea celulelor vegetative i a sporilor bacteriilor.39
Aceast metod permite nlturarea bacteriilor heterotrofe i virusurilor da-
torit reaciei lor la iluminarea ultraviolet, deoarece acizii lor nucleici sunt mai
puin protejai. Iluminarea ultraviolet este una din modalitile de separare a
algelor de bacterii. Radiaia ultraviolet poate fi aplicat n cazul cnd bacteriile
se lipesc de celulele mai mari ale algelor.40, 41
Procedura se realizeaz astfel: culturile algelor se expun pe sticla de cuar i se
plaseaz sub lampa germicid timp de 10-20 min. la distana de 20-30 cm. Dup
iluminare algele se inoculeaz pe mediu agarizat i se verific puritatea lor.
n procesul de lucru cu lmpile germicide cercettorii trebuie s posede oche-
lari protectori, haine specifice i s nu se afle n box pe perioada de sterilizare.
La influena radiaiei ultraviolete pot aprea mutani rezisteni.42 De menionat
c utilizarea lmpilor germicide, care au proprieti mutagene, poate duce la for-
marea modificrilor genetice la culturile algelor.

5.6. Aplicarea ultrasunetului pentru nlturarea bacteriilor


din culturile algale
Ultrasunetele sunt vibraii acustice (cu o frecven de peste 20000 Hz), care se
obin n aparate speciale ce permit trecerea unui curent alternativ de nalt frec-
ven printr-un cristal de cuar. Vibraiile masei cristalului de cuar, sub aciunea
impulsurilor electrice, duc la dezintegrarea rapid a celulelor bacteriene.43 Astfel
de vibraii transmise ntr-o camer umplut cu ap induc modificri de presiune
i formarea unor minuscule caviti asemntoare unor bule de lichid, fenomen
numit cavitaie. Bulele au o via scurt, se umfl i creeaz puncte intense de
turbulen care pot deforma i rupe celulele din vecintate. Bacilii Gram negativi
sunt foarte sensibili la aceste vibraii, iar cocii Gram pozitiv i sporii bacteriilor
sunt foarte rezisteni la aceste vibraii.44, 45
Pentru probele cu particule separate ale algelor se propune utilizarea ultrasu-
netului urmat de centrifugare. Aceast metod a fot aplicat pentru nlturarea
39
Bogdan A.T., ogoe I., Cmpeanu Gh., Ivana S., Enache T., Britareanu S., Iudith I.,
Popescu A. Microbiologia alimentelor. Vol 1. Bucureti, 2011. 294 p.
40
Guillard R.R.L., Morton S.L. Culture methods: // Hallegraeff G.M., Anderson D.M., and
Cembella A.D., (eds). Manual on Harmful Marine Microalgae. UNESCO, Paris, 2003, p.77-97.
41
.., .., ..
: . : - , 2008. 152 .
42
.., .., .. . - -
. : , 1975. 241 c.
43
Blidari C.F., Petru-Vancea A. Biotehnologie. Lucrri practice de laborator. Oradea, 2006.
103 p.
44
Bogdan A.T., ogoe I., Cmpeanu Gh. i al. Microbiologia alimentelor: Vol. 1. Bucureti,
2011. 294 p.
45
Simiona I. Bacteriologie general. Bucureti, 2005.

36
bacteriilor din culturile algelor cianofite.46 M.Watanable47 a nlturat bacteriile
din cultura de Microcystis infectat timp de 30 s la frecvena de 20 kHz, unde,
ca rezultat, majoritatea coloniilor se divizau n celule separate. Soluia se cen-
trifugheaz i se dizolv cu ap distilat de 4 ori, dup care celulele separate se
izoleaz cu ajutorul micropipetei. M.Shirahai i coautorii48 au aplicat materialul
pe mediu agarizat utiliznd aceleai tehnici de separare i centrifugare. Pentru
separarea algelor eucariote poate fi aplicat metoda cu ultrasunet cu intensitate
mic (90 kHz), timp de 5-20 min.

46
Solp H., Starr M.P. Principles of isolation, cultivation and conservation of bacteria. // The
Procaryotes. Vol. 1. Vienna: Springer-Verlag, 1981, p.135-175.
47
Watanabe M.M., Suda S., Kasai F., Sawaguchi T. Axenic cultures of three species of
Microcystis (Cyanophyta= Cyanobacteria). // Bull. Jap. Fed. Culture Coll., 1985, p.5763.
48
Brown R.M., Jr., Bischoff H.W. A new and useful method for obtaining axenic cultures of
algae. // Phycol. Soc.Amer. News Bull., 1962, vol. 15, p.43-44.

37
CAPITOLUL VI
CULTURILE ALGALE INTENSIVE

Creterea intensiva a algelor n condiii de laborator vizeaz n principal cercetri


ce necesit obinerea, relativ rapid, a unor cantiti destul de mari de biomas.49
Culturile intensive de alge pot fi eficiente dac vor corespunde urmtoarelor
cerine:
1. Culturile algale trebuie s posede o intensitate sporit a fotosintezei la cul-
tivarea pe medii minerale cu concentraii mari de sruri, care ar permite
s adugm mai rar elemente nutritive i s obinem o cretere intensiv a
algelor.
2. Culturile algale trebuie s posede o energie mare de cretere n condiii de
iluminare cu intensitate mare. Iluminarea optim a suspensiei poate fi uor
realizat, de aceea pentru asigurarea luminii toate celulele din suspensie se
folosesc de intensitatea mare a luminii care duce la iluminarea mare a unor
poriuni ale celulelor, ndeosebi la suspensiile agitate. Pentru cultivare sunt
mai convenabile acele culturi care au un coeficient mai mare de utilizare a
energiei.
3. S fie culturi algale termofile, deoarece intensitatea mare a luminii i tem-
paraturii este o cerin de cretere a lor. Speciile de alge termofile au o
energie de dezvoltare mai mare, de aceea ele au o perspectiv mai mare n
cultivarea intensiv.
4. Culturile algale trebuie s posede proprietatea de a inhiba dezvoltarea mi-
croflorei strine (bacteriilor i altor specii de alge).
5. Formele microscopice unicelulare sau formele coloniale mici de alge sunt
mai accesibile cultivrii intensive n comparaie cu algele macrofite. Aceas-
ta se argumenteaz prin faptul c microalgele se pot uor ajusta la cultiva-
rea n adncime, pot fi bine agitate, au un contact mai mare cu CO2 i cu
lumina. Formele ce formeaz mucilagii, bule etc. pot fi la fel acceptate pen-
tru cultivarea intensiv. Pe lng aceasta, se cere ca speciile de microalge
s fie bine studiate i s nu posede un ciclu de dezvoltare complicat. Cele
mai studiate i aplicate n cultivarea intensiv sunt algele verzi, protococo-
ficeele unicelulare, algele albastre-verzi i cele diatomee.50
6. Culturile algale trebuie s fie uor de colectat, separat de mediu nutritiv sau
se elaboreaz metode pentru realizarea eficient a acestor cerine.
7. Culturile algale necesit a fi studiate n detaliu n condiii de laborator i s
fie stabilit tehnologia de cultivare.
49
Cru I. Cultura algelor pentru biomas i principii active: Note de curs, lucrri de
laborator. Bacu: Universitatea din Bacu, 2007. 99 p.
50
.., .. -
: , 1962. 58 .

38
Pentru a cultiva intensiv o specie de alg selectat trebuie s respectm cerin-
ele sus-menionate i s cunotem informaia expus n chestionarul inclus n
Tabelul 7.
Tabelul 7
Poziiile necesare la cultivarea intensiv a algelor
Informaia necesar Rezultatul
Poziia sistematic a speciei (regn, ncrengtur, clas, ordin,
familie, gen, specie)
Fotografia microscopic a speciei
Locul de unde a fost prelevat proba, habitatul
Modul de obinere a culturii (dint-o celul separat sau dintr-o
colonie)
Caracteristicile morfologice ale tulpinii pe medii agarizate
(dimensiunile celulelor, formele i culoarea)
Caracteristicile morfologice ale tulpinii pe medii lichide
(dimensiunile celulelor, formele i culoarea)
Rezistena culturii (la bacterii, ciuperci, virui)
Modul de expunere a biomasei pe mediile lichide (la suprafa,
n adncime, fixat de perei etc.)
Mediul nutritiv utilizat pentru cultivare (componena mediului
solid i a celui lichid)
Cantitatea inoculului (la inocularea pe medii solide i lichide)
Caracteristica creterii pe mediile solide (durata fazelor i
viteza de cretere)
Caracteristicile creterii pe medii lichide (durata fazelor i
viteza de cretere)
Biomasa obinut pe medii solide (pe o perioad de 10-30
zile)
Biomasa obinut pe medii lichide (pe o perioad de 6-12
zile)
Concentraia de CO2 administrat n mediile nutritive lichide
Condiiile de cultivare pe medii solide i lichide (umiditatea
aerului, temperatura, iluminarea)
Metoda de cultivare (pe medii solide i lichide)
Instalaii utilizate pentru cultivare (aparate, vesel, caracteristica
instalaiei etc.)
pH-ul mediilor nutritive (la nceputul cultivrii i la sfritul
cultivrii)
Caracteristicile biochimice ale culturii (proteine, glucide,
lipide, vitamine etc.)

39
CAPITOLUL VII
TEHNOLOGII DE CULTIVARE A MONOCULTURILOR ALGALE
CaPitolUl vII. TEHNOLOGII DE CULTIVARE A
Tehnologiile de cultivareMonoCUltUrilor alGale
a algelor reprezint ansamblul de procese, metode i
tehnici ce trebuie aplicate
Tehnologiile i respectate
de cultivare pentru
a algelor reprezint obinerea
ansamblul biomasei
de procese, algale.
metode i tehnici ce
Astfel,trebuie
considerm, n linii
aplicate i respectate pentrumari,
obinereacbiomasei
tehnologiile
algale. de cultivare a algelor obi-
nute n monocultur includn5linii
Astfel, considerm, etape
mari, distinctive.
c tehnologiile deAceste
cultivare etape
a algelorprevd
obinute nselectarea
i prepararea mediilor nutritive, pregtirea i inocularea algelor, identificarea
monocultur includ 5 etape distinctive. Aceste etape prevd selectarea i prepararea mediilor
nutritive, pregtirea i inocularea algelor, identificarea i respectarea condiiilor de cultivare
i respectarea condiiilor
urmat de de cultivare
selectarea i aplicarea urmat de
metodei corespunztoare selectarea
de cultivare i aplicarea
pentru obinerea biomasei metodei
corespunztoare dencultivare
algale utilizate vaste domenii pentru
(Fig. 8). obinerea biomasei algale utilizate n vaste
domenii (Fig. 8).

Fig. 8. Schema
Fig. 8. Schema tehnologic
tehnologic dedecultivare
cultivare a algelor.
a algelor.
Tehnologiile de cultivare a algelor trebuie respectate, studiate i ajustate etapelor de

Tehnologiile de cultivare a algelor trebuie respectate, studiate i ajustate etape-


evoluie a societii, dar i condiiilor de mediu. Rezultatul final, ce reflect eficacitatea
importan i necesitatea tehnologiei este biomasa algal. Pe an ce trece, biomasa algal gsete
lor de evoluie a societii, dar i condiiilor de mediu. Rezultatul final ce reflect
tot mai multe ntrebuinri n diverse domenii, ca: protecia mediului, biotehnologie, medicin,
eficacitatea, importana i necesitatea tehnologiei este biomasa algal. Pe an ce
agricultur etc. Algele sunt utilizate la soluionarea unor astfel de probleme biologice generale
trece, biomasa algal gsete tot mai multe 37
ntrebuinri n diverse domenii, ca:
protecia mediului, biotehnologie, medicin, agricultur etc. Algele sunt utilizate
la soluionarea unor astfel de probleme biologice generale, cum ar fi elucida-
rea mecanismelor de difereniere i prolifiere, interaciunea celulelor cu mediul,
adaptarea, mbtrnirea, mobilitatea biologic, transformrile maligne i multe
altele. Ele sunt surse (material) pentru crearea producenilor celulari, utilizai
40
n scopul ridicrii productivitii animalelor i pentru selectarea noilor soiuri de
plante. Culturile celulare sunt utilizate la tratarea bolilor ereditare, n calitate de
testobiecte la experimentarea substanelor farmacologice noi, pentru menine-
51-54
rea genofondului, a speciilor de animale i plante pe cale de dispariie.51, 52, 53, 54
Utilizarea biomasei algale permite soluionarea urmtoarelor probleme ti-
inifico-aplicative: 1) studierea dinamicii i cinetica creterii i consumului de
substane; 2) studierea influenei dintre specii; 3) studierea principiilor limi-
trii; 4) studierea influenei diferiilor factori de mediu asupra dezvoltrii i
funcionrii ecosistemelor; 5) soluionarea obiectivelor de dirijare i optimizare
a cercetrilor algologice.55
Algele marine au nceput a fi cultivate cu aproximativ 300 de ani n urm,
ns abia la nceputul anilor 70 ai secolului XX cultivarea lor capt o rspn-
dire i o amploare la nivel mondial.56

7.1. Medii nutritive pentru cultivarea algelor


Mediile nutritive prezint un amestec de substane chimice diferite ca natur
chimic, complexitate, provenien, consisten, care asigur algele cu substan-
e nutritive i energie necesar creterii i dezvoltrii. Actualmente se cunosc
numeroase medii nutritive utilizate la cultivarea algelor.
Mediile nutritive pot fi clasificate dup trei criterii principale:
Dup consisten lichide, semisolide, solide;
Compoziia chimic naturale, sintetice, semisintetice;
Frecvena i scopul utilizrii n laborator uzuale i speciale.57
Mediile nutritive recomandate pentru cultivarea artificial a algelor sunt va-
riate (unele reete de medii nutritive sunt prezentate n Anexa nr. 1). Selectarea
mediilor nutritive depinde de specificul obiectului cultivat i de scopul cul-
tivrii. Mediile nutritive pot fi lichide i solide (agarizat). Mediile lichide se
utilizeaz pentru obinerea biomasei algelor i pentru cercetrile morfologice,
51
. . : , 1983. 263 .
52
.. . :
, 2004. 64 .
53
. . . : , 1978.
300 .
54
.., .., .., .. -
. B: , 2008, .9-18.
55
.., .., o .. -
. , 1997. 184 .
56
.. (Gracilaria): . B:
M, 2002, . 60, .5070.
57
Bogdan A.T., ogoe I., Cmpeanu Gh. i al. Microbiologia alimentelor. Vol.1. Bucureti,
2011. 294 p.

41
citologice, fiziologo-biochimice etc. Mediile solide sunt utilizate pentru pstra-
rea coleciilor algale (muzeu).58
Una dintre cele mai eseniale aspecte ale tehnologiilor de cultivare a algelor
este asigurarea cu elemente necesare nutriiei minerale. Pentru sinteza substan-
elor biologic active n biomasa algelor este necesar ca acestea s fie asigurate
cu macro- i microelemente. Majoritatea algelor au nevoie de azot pentru sin-
teza proteinelor. Pentru creterea eficient a algelor mediile nutritive trebuie s
conin i P, K, Mg, S. Calciul, de exemplu, este necesar doar n concentraii
reduse. Printre elementele ce sunt necesare pentru cultivarea algelor cianofite
se enumer i natriul, care face parte din grupa macroelementelor eseniale.

7.1.1. Macroelementele n nutriia mineral a algelor


Macroelementele, de rnd cu microelementele, sunt componente necesare
ale talului algal, au un rol definitoriu i determin intensitatea dezvoltarii lor.59
Elementele biogene sunt acele substane ce intr mereu n componena orga-
nismelor i sunt necesare pentru dezvoltare. Dintre acestea un rol deosebit i se
atribuie azotului i fosforului. Azotul intr n componena tuturor moleculelor
proteice, iar fosforul este un component obligatoriu al substanelor nucleare,
avnd un rol important n cadrul reaciilor de oxidoreducere. Caliul, calciul,
sulful i magneziul sunt la fel de necesare ca i azotul i fosforul. Caliul se uti-
lizez n cantiti mari de ctre alge i trebuie s se regseasc n mediile nutri-
tive. Magneziul intr n componena clorofilei, care este un pigment esenial ce
fotosintetizeaz, fiind prezent la multe ncrengturi de alge. Problema privind
stabilirea concentraiei optime de macroelemente este abordat i studiat pn
la ora actual.
Concentraia substanelor din mediul nutritiv de cultivare a algelor care asi-
gur dezvoltarea cea mai nalt a biomasei algale poate fi asociat cu necesita-
tea de substane nutritive n celulele algale.60
n urma cercetrilor de laborator, .. , .. , ..
o au demonstrat c procesul de cretere a biomasei algelor este condi-
ionat cu consumul de elemente biogene ce se manifest n trei stadii (Fig. 9).

58
.., .. o . ,
1984. 336 .
59
.., .., .. . . . : -
, 1989. 605.
60
.. K .
// , 1983, .74-80.

42
n urma cercetrilor de laborator .., , .., , .., o au demonstrat
c procesul de cretere a biomasei algelor este condiionat cu consumul de elemente biogene ce
se manifest n trei stadii (Fig. 9).

Fig. 9. Stadiile procesului de consum al substanelor nutritive pe parcursul creterii


Fig.9. Stadiile procesului de consum al substanelor nutritive pe parcursul creterii
biomasei algale. 61
biomasei algale.61
n stadia A are loc consumul de substane biogene n celulele algale fr majorarea
n stadiuldeA celule.
numrului are locnconsumul
stadia B de
se substane biogene n
realizeaz dividerea celuleleconcomitent
celulelor algale frcuma-
consumul
jorarea numrului de celule. n stadiul B se realizeaz dividerea celulelor conco-
substanelor nutritive, iar n stadia C divizarea celulelor fr consumul substanelor din mediul
mitent cu(din
nutritiv consumul substanelor
contul rezervelor interne). iar n stadiul C divizarea celulelor
nutritive,
celulare
fr consumul substanelor din mediul nutritiv (din contul rezervelor celulare
interne).
Aceste stadii pot doar parial s corespund cu fazele de cretere evideniate dup curba de
Aceste Astfel,
cretere. stadii stadia
pot doar parial
A este s corespund
o parte cu fazele
din lagfaz (deoarece la de cretere
inceputul evideniate
lagfazei nu se produce
dup
nici creterea i nici consumul de substane nutritive), iar stadiile B i C se includla n faza
curba de cretere. Astfel, stadiul A este o parte din lagfaz (deoarece
nceputul lagfazei
exponenial nu se produce nici creterea i nici consumul de substane nu-
a creterii.
tritive), iar stadiile B i C se includ n faza exponenial a creterii.
Azotul
Azotul
Numeroase
Numeroase lucrri
lucrri au au
fost fost consacrate determinrii
consacrate determinrii rolului
roluluielementelor
elementelorchimice,
chimi- inclusiv a
ce,azotului,
inclusivn aviaa algelor, n
azotului, printre
viaacare un loc printre
algelor, important l ocup
care un loc lucrrile cercettorilor
important l ocupdin fosta
62 63 64 65 66
Uniune Sovetic .
lucrrile cercettorilor din fosta Uniune Sovetic.
62-66
62 63 64 65 66

61
.., .., .. -

61
.
.., ,..
.., 1997. 184 .

62
..
. , 1997. 184 .
. //
. , 1981, c.139147.
..
.., ..
. ,
1965. 272 .
-
6263


64
..,
.
.
..,// . . ,
.. 1981.
c.139147.
-

63

. // ..,
.. .
. 1965.
. 272 .1980, c. 140157.
,
64 .. , . // .
65
.., .., ..
.
., 1952, c. 392.- . // -

66
..
. . 1980,
c. 140157. . // ,
1945, .14, 4, c.248 253.
65
.. "" , . // . . . 1952,
c. 392. 43
40
Azotul se conine n apele naturale servind ca surs nutritiv pentru algele ce
habiteaz ecosistemele acvatice.67 Este un element indispensabil pentru biosinte-
za substanelor proteice, intr n componena moleculelor aminoacizilor, acizilor
nucleici, clorofilelor, alcaloizilor, amidelor etc. Efectul maximal al azotului asu-
pra creterii i dezvoltrii algelor se realizeaz n cazul n care se afl n raport
optim cu fosforul i potasiul.68 Reprezint factorul limitativ pentru algele oleage-
noase i este unul din componentele de baz ale mediilor nutritive.69, 70
Dup datele lui . a71, cea mai bun concentraie a azotului pentru
alge este de 5-10 mg/l n forma de NO3. Azotul amoniacal, n comparaie cu cel
nitric, se consum de 10 ori mai mult de algele albastre-verzi. Nitriii la fel pot
fi consumai de alge, dar n prezena lor celulele se modific i capt o form
neobinuit.72
Azotul este folosit n cea mai mare parte de ctre algele albastre-verzi i, ca
rezultat, coninutul lui n celule este mai mare. La algele diatomee coninutul azo-
tului n celule este de 1,53%, la cele verzi de 2-8%, la cianofite variaz de la 7 la
12% n biomasa uscat.73 Metabolismul azotului, aspectul morfologic i nutriia
Spirulinei, dar i a altor alge, n regim diferit de cultivare rmne pn n prezent
neneles n totalitate. La limitarea azotului scade concentraia ficobiliproteinelor
din biomas.74 Reducerea cantitii de azot sub form de nitrat din mediul nutritiv
contribuie la scderea productivitii i a cantitii de proteine din biomasa alga-
l. Cercetrile efectuate de .. i coautorii75 denot c productivitatea
Spirulinei, sinteza proteinelor, clorofileia, cficocianinei i carotenoizilor sunt
direct dependente de concentraia nitratului de azot n mediul nutritiv. Astfel,
s-a demonstrat c concentraiile de 500 mg N/l, 200 mg N/l i 100 mg N/l duc
la creterea semnificativ (8,6 - 8,5% BAU/ m2 zi) a productivitii Spirulinei.
Nivelul proteinelor la variantele 500 i 200 mg N/l se stabilete ncepnd cu a 6-a
67
.., .., .., .., .., -
.., .., .., .. . ,
2005. 640 .
68
Stancic M. Biochimie vegetal. Bucureti: Editura Didactic i Pedagogica, 2003, p.4378.
69
Manabe E., Hiroyuki, and H. Morio. Spirulina Culture for Enhanced Manufacture of
Linolenie Acid, Chem. Abstr, 116:8225, 1992.
70
Kyle D.J. Specialty Oils from Microalgae: Perspective, // Biotechnoloyy of Plant Fats and
Oils, Edited, by J. Rattray, American Oils Chemists Society, Champaiyn, 1991, p.130-143.
71
.. - -
. // - . .-., 1965, 12-32 c.
72
.. : . ,
1983. 72 .
73
.. , . // .
. ., 1952, c.392.
74
.. . . : , 1990, .1
196.
75
.., .., .., .. P
Spirulina (Artrospira) Platensis (Nordst) Gitler
. // M, 2002, . 62, c.6266.

44
zi i rmne neschimbat pn la a 18-a zi (62 - 52% BAU). La concentraia de
100 mg N/l sunt mai puine proteine, iar de la a 9-a zi pn la a 18-a zi descrete
pn la 30,9% BAU.
Pentru obinerea biomasei algale ieftine putem folosi apele reziduale bogate
n elemente biogene, ceea ce permite reducerea sinecostului mediului nutritiv, i
paralel fiind rezolvat problema purificrii apelor.76, 77
Odat cu creterea productivitii algelor are lor reducerea concentraiei de
azot din mediul de cultivare, fapt ce demonstreaz posibilitatea purificrii ape-
lor reziduale bogate n azot.78 Rezultate semnificative, soldate cu consumul
nalt al azotului, au fost observate i n cazul utilizrii n procesul de purificare
a apelor reziduale de la complexele zootehnice a speciilor de alge Oscillatoria
limnetica, Chlorella vulgaris, Scenedesmus quadricauda, Synechocystis sali-
na.79, 80
Azotul, n special cel amoniacal, servete ca o modalitate de optimizare a
coninutului de acid linolenic n celulele Spirulinei. E.Manabe i H.Morio81
au demonstrat posibilitatea sporirii cantiti de acid linolenic din biomasa
algei Spirulina platensis prin adugarea srii de NH4Cl. Dup 72 ore de la
administrarea azotului amoniacal cantitatea acidului linolenic a crescut ajun-
gnd la valoarea de 15,0 mg/g mas uscat. Coninutul acizilor grai palmitic
i oleic la fel se majoreaz de la 15 la 50 mg/l, dar descrete dup 48 ore de
cultivare.82, 83
Fosforul
Fosforul face parte i el din rndurile elementelor biogene indispensabile
pentru organismele vegetale, ns majorarea cantitii lui este duntoare pentru
ecosisteme. Fosforul contribuie la formarea acizilor nucleici, a unor coenzime
(NADP+, NAD+ etc.), se afl n componena unor lipide complexe, a nucleotide-
lor etc. Fosforul are o aciune favorabil asupra biosintezei clorofilelor, particip
76
.., .. -
Platimonas viridis Rouch. // M, 2006, . 70, .52-60.
77
C.. Spirulina platensis (NORDST.)
GEITL. . // , 2007, 74, c.18-20.
78
Besker E.W. Spirulina alga of Life. // Bull. Inst. Oceanolorg., 1993, no12, p.141-155.
79
Faintuch B.L., Sato S., Aquarone E. Use of different nitrogen sources in the production of
biomass of Oscillatoria limnetica. // Afrev. Microbiol., 1992, 23, no 1, p.32- 36.
80
Iachim M. Rolul algelor i unor plante vasculare n procesul de epurare biologic a apelor
reziduale de la complexele zotehnice: Tez de doctor. Chiinu, 2007. 131 p.
81
Manabe E., Morio, and T.Hiroyuki, I.D. Naoka, S.Koji, and M.Tadashi. Influence of
Ammonium Chloride on Growth and Fatty Acid Production by Spirulina Platensis. //Appl.
Biochem. Biotechnol., 34-35: 274-281, 1992.
82
Manabe E., Hiroyuki, and H.Morio. Spirulina Culture for Enhanced Manufacture of
Linolenie Acid. // Chem. Abstr., 116:8225, 1992.
83
Chaudhury B.K. De S., and Bhattacharyya D.K. Effect of Nitroyen Sources on Linolenic
Acid Accumulation in Spirulina platensis. // Jaocs, 1995, vol. 76, no 1, p.153-155.

45
la procesele de fosforilare, n biosinteza i degradarea glucidelor, lipidelor, sub-
stanelor proteice. Fosforul este un nutrient care are un rol principal n procesele
metabolice fundamentale, cum sunt respiraia i fotosinteza.84, 85
Limitarea fosforului deregleaz toate procesele metabolice ce in de folosirea
energiei n celulele algelor.86 n cazul insuficienei de fosfor la cultivarea algei
Spirulina maxima se produce ncetinirea fotosintezei i micorarea cantitativ a
acizilor nucleici i eterilor fosfai.87 De rnd cu azotul, fosforul deseori limiteaz
creterea microalgelor n natur.88 Fosforul este administrat algelor n form de
H2PO4 i/sau HPO4.
n cercetrile sale C.. 89 demonstreaz importana fosforului
pentru alga Spirulina platensis. Experienele realizate de ea denot c cantitatea
de fosfor necesar pentru majorarea biomasei algale este de 18,73 mg/l adugate
n mediul Zarrouc. A fost demonstrat i corelaia dintre azot i fosfor ce duce la
creterea biomasei n faza liniar (fiind n raport de 4,3:1).
Stabilirea raportului optim dintre azot i fosfor este important, n special n
cazul cultivii algelor pe ape reziduale, facilitnd astfel selectarea concentraiei
optime.
Insuficiena fosforului mineral reduce sinteza oricrui pigment i blocheaz
sinteza la nivel de transcripie.90 n lipsa fosforului la lumin se distrug chiar i
carotenoizii care, de regul, sunt mai siguri la fotodistrucie.91 Concentraia fo-
sforului din mediul nutritiv de cultivare a algei Spirulina platensis influeneaz
asupra coninutului de pigmeni din celule. .. i .. 92 au
demonstrat c n lipsa fosforului (timp de 6-7 zile) celulele algei Spirulina pla-
tensis pierd total pigmenii, dar i pstreaz forma de via. n lipsa fosforului
pigmenii se distrug de 5 ori mai mult dect n lipsa azotului.
84
Neamu G., Cmpeanu Gh., Socaciu C. Biochimie vegetal. Bucureti: Editura Didactic i
Pedagogic, 1993, p.244-264.
85
Tarmure C. Biochimie structural i metabolic. Cluj- Napoca: Dacia, 1996, p.4358.
86
.., .. Spirulina platensis (NORDST.)
GEITL. . // M, 2002, . 60, .21-26.
87
Baldia S.F., Fukami K., Nuishijima T., Hata Y. Growth response of Spirulina platensis to
somo physico- chemical factors and the kinetics of phosphourus utillization. // EISH, 1995, no2,
p.351-335.
88
Dubinsky Z. Productivity af algae under natural, Handboc of microalgal mass culture. Ed.
Richmond A. Boca Raton CRC. Pres, 1986, p.101- 115.
89
C.. Spirulina platensis (NORDST.) GEITL.
. // , 2007, . 74, c.18-20.
90
Geider R.J, Maklntire H.L., Kana T.M., A dynamic of photoadaptation in phytoplankton. //
Limnol. Oceanorg., 1996, no 1, p.1-15.
91
k .. -
. // . . , 1989, .1-167.
92
.., .. Spirulina platensis (NORDST.)
GEITL. . // M, 2002, . 60, .21-26.

46
.. 93 afirm c la algele albastre-verzi nu se observ o corelaie
strict ntre numrul lor i coninutul de fosfor. Dup datele lui Fogg,94 aceasta
se explic prin faptul c ele au vacuole gazoase ce regleaz flotabilitatea lor i le
permite ca noaptea s coboare n partea de jos a zonei fotice bogat n fosfor, iar
dimineaa din nou s urce la exterior. Este important nu doar concentraia fosfo-
rului de una singur, dar i corelaia dintre azot i fosfor. Se consider normal
corelaia dintre azot i fosfor n celulele algelor n raport de 15:1.

Kaliul
Unul dintre elementele nutritive de nenlocuit necesare pentru cultivarea algelor
este kaliul. Kaliul practic nu poate fi nlocuit cu alte elemente, doar n unele procese
individuale el se substituie cu natriu i rubidiu. n celule kaliul se gsete practic
n form solubil i determin structura coloidal chimic a citoplasmei i funci-
onarea activ a celulei. Cu tatoate c nu intr n componena proteinelor, lipidelor,
glucidelor, este necesar celulelor pentru sinteza lor. Consumul kaliului este realizat
printr-un proces metabolic activ legat de utilizarea luminii i energiei celulare n
condiii autotrofe sau n cazul nutriiei heterotrofe, folosind legturile organice.
Insuficiena acestui element n mediul nutritiv al algelor contribuie la inhiba-
rea fotosintezei i majorarea respiraiei, diminuarea proceselor de biosintez a
glucigelor, lipidelor, protidelor i a diviziunii celulare.
n cazul micorrii concentraiei de kaliu apare cloroza. La adugarea kaliului
n mediul nutritiv de cultivare a algelor se normalizaz procesele de respiraie, de
acumulare a lipidelor i proteinlor.
Necesarul de kaliu pentru biosinteza a 1 kg de biomas uscat a algei Chlo-
rella vulgaris este de 15-16 g. La cultivarea continu a algei Chlorella vulgaris
s-a nregistrat consumul minimal de 10-11 g de kaliu pentru sinteza a 1 kg de
biomas uscat.
Consumul de kaliu de ctre celulele algelor este dependent i de concentra-
ia altor sruri. La concentraia nalt de NaCl (20 g/l) n mediul de cultivare a
algei Chlorella vulgaris se reduce de dou ori consumul de kaliu. Pentru cul-
tivarea microalgelor Spirulina platensis, Dunaliella tertiolecta i Cyanidium
caldarium n scopul obinerii biomasei, necesarul de kaliu este de 1000 mg/l
(n form de KNO3).95
Gh. Neamu96 susine c raportul optim dintre coninutul potasiului intrace-
lular i cel extracelular, la plante, este de 25:1. Potasiul are un rol important
93
.., .. Spirulina platensis (NORDST.)
GEITL. . // M, 2002, . 60, .21-26.
94
Fogg G.E. Phosporus in primary aquatic plants. // Water Res., 1973, no7, vol.12, p.77-89.
95
.. -
o. , 1983. 240 .
96
Neamu G. Cmpeanu Gh., Socaciu C. Biochimie vegetal. Bucureti: Editura Didactic i
Pedagogic, 1993, p.244-264.

47
n biosinteza, transportul i depozitarea glucidelor, reglarea presiunii osmotice
etc. Importana metabolic nsemnat a potasiului rezult i din faptul c este
agent catalitic i un activator a peste 46 de sisteme enzimatice, meninnd un
mediu ionic favorabil activitilor enzimatice. Ionul de potasiu contribuie n mod
substanial la reglarea coninutului de ap din celule, stimuleaz fotosinteza i
biosinteza substanelor proteice. Potasiul are un rol de baz n procesul de men-
inere funcional normal a celulelor, n reglarea permeabilitii membranelor
citoplasmatice, n metabolismul azotului.97, 98, 99

Magneziul
Magneziul este important pentru alge, fiind component al clorofilei i al multor
altor legturi organice. Are un rol nsemnat n reaciile de fosforilare i contribuie la
meninerea echilibrului compuilor macroergici, precum i la metabolismul acidu-
lui fosforic. Intervine aproape n toate procesele metabolice ce necesit ATP.
Insuficiena magneziului, spre exemplu, n mediul nutritiv de cultivare a al-
gei Chlorella vulgaris contribuie la reducerea biosintezei proteinelor, la majora-
rea coninutului de glucide i la reducerea creterii culturii. Influeneaz asupra
schimbului de acizi nucleici.
Pentru biosinteza a 1 kg de biomas uscat a algei Chlorella vulgaris se con-
sum 4-6 g de magneziu. La cultivarea continu a acestei alge necesitatea n mag-
neziu este de 3,3 g la biosinteza a 1 kg de biomas (recalculat la mas uscat).
Magneziul particip n procesele de biosintez a clorofilei, protidelor, gluci-
delor, lipidelor etc. Ionii acestui element chimic mresc permeabilitatea mem-
branelor celulare, favorizeaz absorbia fosforului. Magneziul se comport ca un
reglator al metabolismului calciului. Absorbia magneziului n celulele plantelor
este reglat de raportul dintre potasiu i magneziu i de pHul mediului.100, 101
Magneziul este utilizat pentru cultivarea algelor, de regul, n form de sulfat
de magneziu care, pe lng magneziu, asigur celulele i cu sulf. Ca surs de
magneziu poate fi utilizat i carbonatul de magneziu, care asigur n paralel i
stabilizarea pH-ului la utilizarea n componena mediilor nutritive a legturilor
acide. Pentru cultivarea industrial se utilizeaz kaliumagneziu, ce servete ca
surs de magneziu, kaliu i sulf.
Sulful
Sulful este unul dintre elementele necesare pentru cultivarea algelor. Intr n
componena proteinelor, fermenilor, peptidelor, aminoacizilor ce conin sulf, fi-
97
Tarmure C. Biochimie structural i metabolic. Cluj- Napoca: Dacia, 1996, p.4358.
98
Chiu I. Biochimie. Vol. I. Timioara: Mitron, 1999, p.94111.
99
.. -
o. , 1983. 240 .
100
Neamu G., Cmpeanu Gh., Socaciu C. Biochimie vegetal. Bucureti: Editura Didactic
i Pedagogic, 1993, p.244-264.
101
Stancic M. Biochimie vegetal. Bucureti: Editura Didactic i Pedagogic, 2003, p.4378.

48
ind un component al multor altor legturi organice din celulele algelor. Unele
legturi ale sulfului particip n cadrul reaciilor de oxidoreducere, n biosinteza
i metabolismul multor substane. n particular, rolul sulfului este important n
determinarea proprietilor i structurii de transformare a moleculelor proteice.
Majoritatea algelor consum sulful din legturile oxidative sulf-sulfai.
Sulful particip n cadrul metabolismului general i se reduce (de la sulfai
pn la sulfhidril). n unele condiii specifice n celule se poate realiza procesul
de recuperare a sulfailor. Sulful anorganic din celulele algelor nu permite acu-
mularea producenilor toxici ai oxidrii aminoacizilor ce conin sulf.
La reducerea concentraiei de sulf n mediul nutritiv pn la 3,3 g la 1 kg de bio-
mas algal (recalculat la masa uscat) celulele algei Chlorella vulgaris resimt
insuficiena lui. Acest lucru condiioneaz majorarea dimensional a celulelor
acestei alge, ceea ce indic c se modific mecanismul de dividere celular.
Ca surs de sulf n mediile nutritive de cultivare a algelor cel mai frecvent
se utilizeaz sulfaii sau alte forme ale sulfului. La cultivarea unei alte alge din
genul chlorela (Chlorella pyrenoidosa) poate fi utilizat sulful din tiosulfai, din
aminoacizii metionina i cistina. n mediile nutritive sulful este sub forma sulfa-
ilor (sau a acidului sulfuric).
La cultivarea speciilor din genul Chlorela coninutul de sulf n celule, de obi-
cei, se situeaz ntre 4 i 11 g la 1 kg biomas uscat.102
Sulful se introduce n mediile nutritive n forma sulfailor de magneziu, de
kaliu, de amoniu, de zinc, de fier, de cupru.
Calciul
Un alt element nutritiv necesar pentru cultivarea algelor este calciul. Comparativ
cu plantele superioare, algele au o necesitate mai mic de calciu. Ionii de calciu au
un rol important n stabilizarea structurii membranare, permit absorbia de ctre ce-
lule a anionilor i cationilor. ndeprtarea calciului determin creterea schimbului
fluxului de ioni din celul. Acest element micoreaz permeabilitatea membranelor
protoplasmatice, modific pH-ul mediului deplasndu-l spre valori bazice. mpie-
dic ieirea potasiului din celule n timpul mbtrnirii acestora. Pe lng acestea,
se evideniaz i aciunea bicatalitic n numeroase procese biochimice.103-105
103, 104, 105

Calciul poate fi exclus din mediul nutritiv de cultivare a algelor prin trata-
rea special a mediilor. Ca rezultat, are loc micorarea creterii biomasei algei
Chlorella vulgaris. La adugarea a 0,001-0,2 mg/l de Ca dezvoltarea culturii de
clorel revine la norm.
102
.. - -
. , 1983. 240 .
103
Neamu G., Cmpeanu Gh., Socaciu C. Biochimie vegetal. Bucureti: Editura Didactic
i Pedagogic, 1993, p.244-264.
104
Stancic M. Biochimie vegetal. Bucureti: Editura Didactic i Pedagogic, 2003, p.4378.
105
CachitaCosma D., Deliu C., Rakosy-Tican L., Ardelean A. Tratat de biotehnologie
vegetal. Vol. I. Cluj- Napoca: Dacia, 2003, p.10-18.

49
La alte alge, cum ar fi specile genurilor Chlorococcum, Amphora .a., insufi-
ciena calciului ncetinete deplasarea.
Administrarea acestui element n doz de 0,4 mg/l contribuie la acumularea
cuprului n celulele algei scenedesmusului i la inhibarea creterii biomasei. Se
consider c calciul ptruns n celule apr liganda locul cu aciune toxic a
cuprului.
Calciul, n forma carbonatului de calciu, contribuie la reglarea pH-ului mediu-
lui nutritiv, n cazul utilizrii legturilor fiziologice acide. Carbonatul de calciu
este puin solubil i nu contribuie la bazificarea puternic a mediului nutritiv.
ns, utilizarea carbonatului de calciu, n unele condiii, poate contribui la infec-
tarea culturilor algale cu bacterii parazite.
Pentru stabilizarea pHului mediului nutritiv de cultivare a algelor se reco-
mand utilizarea carbonatului de magneziu, care nu afecteaz cultura.
n unele cazuri pentru cultivarea industrial a algelor poate fi utilizat apa de
suprafa sau subteran, care are n componena sa calciu.106

Sodiul
Natriul este un element necesar pentru cultivarea algelor cianofite; la exclu-
derea lui din mediu nutritiv multe culturi se dezvolt slab. Lipsa natriului n me-
diul nutritiv pentru cultivarea algei Anabaena cylindrica contribuie la reducerea
concentraiei clorofilei i a coninutului de azot organic din celule. n cazul in-
suficienei natriului algele elimin din celule n form organic o parte mare a
carbonului fixat anterior.
Rezistena algelor la natriu, n form de NaCl, este diferit. Mai puin rezis-
tente sunt formele filamentoase, multe din ele nu rezist la concentraia de 10 g/l,
iar alte alge i stopeaz creterea la concentraia de 20 g/l. Algele cianofite uni-
celulare pot crete pe medii nutritive cu concentraii de 30 g/l NaCl, iar la 50-90
g/l creterea lor, de regul, se oprete. Sunt ns unele specii, cum ar fi cele din
genurile Microcystis, Synechocystis, Aphanocapsa, Myxosarcina, care pot crete
i la concentraii de 90 g/l NaCl.
Unele cercetri demonstreaz c n cazul surplusului de NaCl n mediul nutri-
tiv de cultivare a algelor se prelungesc fazele de cretere i se frneaz procesul
de reproducere a celulelor algale. Se minimizeaz procesul de sintez a clorofilei,
dar fotosinteza continue i, n rezultat, se produc modificri morfologice (crete
volumul i masa celular). Nu se produc modificri ale concentraiei proteinelor
i glucidelor din celulele algale. n cazul excesului de NaCl n mediul nutritiv de
cultivare se produce plasmoliza, se decoloreaz cromatoforii, se stopeaz repro-
ducerea i celulele mor.
Sodiul se gsete n plante, predominant n lichidele extracelulare. Contri-
buie la reglarea presiunii osmotice i la circulaia apei. nlocuiete potasiul
.. - -
106

. , 1983. 240 .

50
n unele procese biochimice, contribuind la economisirea acestui element. Se
gsete n cantiti mai mari n algele marine i n plante terestre ce habitea-
z pe terenuri srturoase. n plante sodiul se gsete sub form de combina-
ii anorganice (cloruri, azotai, fosfai, sulfai, carbonai), precum i organici
(axalai, tartrai de sodiu etc.). Cantitile mici de sodiu stimuleaz biosinteza
proteinelor i activarea nitratreductazei. n caren de sodiu sporete activitatea
nitratreductazei, care determin transformarea nitrailor n nitrii. Iat de ce
este absolut necesar introducerea n mediu nutritiv al Spirulinei a sodiului,
clorului i potasiului.107, 108

7.1.2. Macroelementele n nutriia mineral a algelor cianofite


Stabilirea concentraiilor optime de macroelemente ce trebuie asigurat pentru
cultivarea algelor cianofite prezint un mare interes att tiinific, ct i practic.
Determinarea concentraiilor optime de macroelemente faciliteaz esenial cerce-
trile biotehnologice consacrate optimizrii mediilor nutritive pentru cultivarea
algelor n scopul majorrii coninutului de substane biologic active din biomasa
algal. Stabilirea concentraiilor optime de macroelemente va permite aplicarea
uoar a metodelor continue i semicontinue de cultivare a algelor. Dozele stabi-
lite vor permite identificarea noilor surse netradiionale de medii nutritive pentru
cultivarea algelor, realizarea experimentelor de studiere a speciilor de alge, pre-
cum i cultivarea periodic uoar a acestora.
Concentraiile optime de macroelemente se caracterizeaz n funcie de pozi-
ia sistematic a algelor. Concentraiile optime de macroelemente necesare pentru
cultivarea algelor cianofite studiate au fost stabilite prin calculul acestor elemente
din recetele cu medii nutritive (Anexa nr.1, Anexa nr.2).
Conform datelor din tabelele 8 i 9, algele cel mai frecvent cultivate aparin la
6 ordine, 17 familii i 28 genuri.
Indiferent de apartenena sistematic (gen, familie, ordin etc.), unele specii de
alge au necisitatea n diferite elemente de o anumit concentraie.
Astfel, pentru cultivarea algelor cianofite din genurile Synechocystis, Synecho-
coccus, Merismopedia, Aphanothece, Gloeocapsa, Myxosarcina, Chamaesiphon,
Mastigocladus, Nostoc, Nodularia, Microchaete, Scytonema, Phormidium, Sym-
ploca, Lyngbya, Microcoleus, Plectonema, Cyanotheca este necesar ca mediile
nutritive s conin macroelemente n urmtoarele concentraii (mg/l): N-139,36;
P-35,56; K-476,51; Mg-19,72; S-27,12; Ca-54,52; Na-56,64 (Tab. 8).
Algele anumitor genuri au preferine specifice fa de componena mediului
nutiritiv. Dintre acestea putem enumera urmtoarele genuri:
Coccopedia (concentraia optim a macroelementelor este (mg/l): N-84,85;
P-53,34; K-134,68; Mg-19,72; S-213,53; Ca-54,52; Na-196,34);
107
Chiu I. Biochimie. Vol. I. Timioara: Mitron, 1999, p.94111.
108
Tarmure C. Biochimie structural i metabolic. Cluj- Napoca: Dacia, 1996, p.4358.

51
Eucapsis (necesit asigurarea mediilor nutritive cu urmtoarele concentra-
ii de macroelemente (mg/l): N41,2-139,36; P-35,56; K-264,11-476,51;
Mg-7,39-19,72; S-27,12-46,14; Ca-15,16-54,52; Na- 56,64-77,45);
Anabaenopsis (poate fi cultivat prin asigurarea mediilor nutritive cu ur-
mtoarele macroelemente (mg/l) ): N0-85,44; P-0,06-7,11; K-0,12-7,11;
Mg-0,03-7,39; S-0,03-9,75; Ca-0,1-1; Na- 0-0,09);
Cylindrospermum (trebuie ca mediile nutritive s conine urmtoarele con-
centraii de macroelemente (mg/l): N0-279,85; P-0,06-53,35; K-0,12-
224,42; Mg-2,46-19,72; S-3,25-44,19; Ca-0,1-40; Na- 0-108,4);
Tolypothrix i Oscillatoria (mediile nutritive trebuie s conin urmtoa-
rele macroelemente (mg/l); N0-139,36; P-35,56; K-476,51; Mg-19,72;
S-27,12; Ca-54,52; Na-56,64);
Anabaena (prefer macroelementele (mg/l): N0-279,85; P-7,11-35,56; K-
7,11-476,51; Mg-7,39-19,72; S-9,75-27,12; Ca-1-54,52; Na- 0-414,58);
Calothrix (concentraia macroelementelor trebuie s fie urmtoarea (mg/l):
N0-279,85; P-4,48-53,35; K- 0,12-476,51; Mg-19,72; S-3,25-44,19; Ca-
0,1-54,52; Na-0-108,4) (Tab. 8).
Cea mai mare necesitate n macroelemente au speciile de alge cianofite din
genurile Microcystis (N279,85 mg/l; P-61,88 mg/l; K- 937,42 mg/l; Mg-24,25
mg/l; S-32,04,19 mg/l; Ca-29,99 mg/l; Na-46,02 mg/l) i Spirulina (N412 mg/l;
P-88,92 mg/l; K- 713,21 mg/l; Mg-19,72 mg/l; S-210 mg/l; Ca-25,55 mg/l; Na-
676,2 mg/l) (Tab. 8). Astfel, constatm c pentru cultivarea speciilor de alge din
genurile Microcystis i Spirulina vor fi necesare cheltuieli mai mari pentru medi-
ile nutritive, deoarece au nevoie de cantiti mai nalte de macroelemente.
De menionat c concentraia azotului pentru genurile Anabaenopsis, Cylin-
drospermum, Tolypothrix, Oscillatoria, Anabaena i Calothrix poate fi egal cu
zero. Acest lucru se explic prin faptul c speciile acestor genuri au capacitatea
de fixare biologic a azotului atmosferic. Totui, pentru cultivarea industrial a
lor n scopul obinerii biomasei furajere, alimentare sau farmaceutice trebuie asi-
gurat un coninut mai nalt de azot (indicat anterior).
La nivel de familii, necesitatea de macroelemente n mediile nutritive este
urmtoarea:
Coccobactreaceae, Merismopediaceae, Pleurocapsaceae, Dermocarpa-
ceae, Chamaesiphonaceae, Mastigocladaceae, Nostocaceae, Nodularia-
ceae, Schizothrichaceae, Plectonemataceae, Scytonemataceae (concentra-
ia optim a macroelementelor mg/l este de: N-139,36; P-35,56; K-476,51;
Mg-19,72; S-27,12; Ca-54,52; Na-56,64).
Holopediaceae (mediile nutritive trebuie s conin macroelementele spe-
cifice genului Coccopedia);
Gloeocapsaceae (prefer mediile nutritive cu urmtoarele macroelemente
(mg/l): N-41,2-139,36; P-35,56; K-264,11-476,51; Mg-7,39-19,72; S-27,
12-46,14; Ca-15,16-54,52; Na-56,64-77,45).

52
Anabaenaceae (necesarul de macroelemente este urmtorul (mg/l): N0-
279,85; P-0,06-53,35; K-0,12-224,42; Mg-2,46-19,72; S-3,25-44,19; Ca-
0,1-54,52; Na- 0-414,58);
Concentraia de microelemente necesar pemtru cultivarea algelor din fa-
milia Scytonemataceae este asemntoare cu cea a familiilor Coccobac-
treaceae, Merismopediaceae, Pleurocapsaceae, Dermocarpaceae, Cha-
maesiphonaceae, Mastigocladaceae, Nostocaceae, Nodulariaceae, Schi-
zothrichaceae i Plectonemataceae, excepie fcnd azotul, care poate s
lipseasc;
Rivulariaceae (este repartizat de genul Calothrix, respectiv i macroele-
mentele sunt specifice acestui gen);
Microcistidaceae pot fi cultivate pe medii nutritive asigurate cu urmtoarele
macroelemente (mg/l): N-139,36-279,85; P- 35,56-61,88; K-47, 51-937,42;
Mg-19,72-24,25; S-27,12-32,04; Ca-29,99-54,52; Na-46,02-56,64);
Oscillatoriaceae (mediile nutritive trebuie s posede urmtoarea compo-
nen de microelemente (mg/l): N0-412,85; P-35,56-88,92; K- 476,51-
713,21; Mg-19,72; S-27,12-210; Ca-25,55-54,52; Na-56,64-676,2).
La nivel de clase necesitatea n macroelemente este urmtoarea:
Chroococceae (mediile nutritive trebuie s conin macroelemente n ur-
mtoarele concentraii (mg/l): N-41,2-279,85; P-35,56-61,88; K-134,
68-937,42; Mg-7,39-24,25; S-27,12-24,25; Ca-15,16-54,52; Na-56,64-
196,34);
Chamaesiphoneae (macroelementele trebuie s fie aceleai ca i pentru
ordinele, familiile i genurile care o reprezint);
Hormogoneae (concentraia macroelementelor variaz i se prezint ast-
fel (mg/l): N-0-412,85; P-0,06-88,92; K-0,12-713,21; Mg-0,03-19,72;
S-0,03-210; Ca-0,1-54,52; Na-0-676,2).
.

53
Tabelul 8
Concentraia macroelementelor necesar pentru cultivarea algelor cianofite
Taxoni Concentraia macroelementelor, mg/l
Ordin Familie Gen N P K Mg S Ca Na
Chroococcales Coccobactreaceae Synechocystis 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Synechococcus 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Holopediaceae Coccopedia 84,85 53,34 134,68 19,72 213,53 54,52 196,34
Merismopediaceae Merismopedia 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Microcistidaceae Microcystis 279,85 61,88 937,42 24,25 32,04 29,99 46,02
Aphanothece 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Gloeocapsaceae Gloeocapsa 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Eucapsis 41,2-139,36 35,56-48,19 364,11 - 7,39-19,72 27,12 - 15,16 - 56,64 -
476,51 46,14 54,52 -77,45
Pleurocapsales Pleurocapsaceae Myxosarcina 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Dermocarpales Dermocarpaceae Cyanotheca 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Chamaesiphonaceae Chamaesiphon 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64

54
Mastigocladales Mastigocladaceae Mastigocladus 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Nostocales Nostocaceae Amorphonostoc 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Anabaenaceae Anabaena 0-279,85 7,11-35,56 7,11-476,51 7,39-19,72 9,75-27,12 1-54,52 0-414,58
Anabaenopsis 0-85,44 0,06-7,11 0,12-7,11 0,03-7,39 0,03-9,75 0,1-1 0-0,09
Cylindrospermum 0-279,85 0,06-53,35 0,12-224,42 2,46-19,72 3,25-44,19 0,1-40 0-108,4
Nodulariaceae Nodularia 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Microchaete 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Scytonemataceae Scytonema 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Tolypothrix 0-139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Rivulariaceae Calothrix 0-279,85 4,48-53,35 0,12-476,51 19,72 3,25-44,19 0,1-54,52 0-108,4
Oscillatoriales Oscillatoriaceae Oscillatoria 0-139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Spirulina 412 88,92 713,21 19,72 210 25,55 676,2
Phormidium 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Symploca 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Lyngbya 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Schizothrichaceae Microcoleus 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Plectonemataceae Plectonema 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
Tabelul 9
Coninutul macroelementelor necesare pentru cultivarea algelor cianofite
din diferite clase
Concentraia macroelementelor, mg/l
Clasa
N P K Mg S Ca Na
Chroococceae 41,2-279,85 35,56-61,88 134,68-937,42 7,39-24,25 27,12-24,25 15,16-54,52 56,64-196,34
Chamaesipho- 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 54,52 56,64
neae
Hormogoneae 0-412 0,06-88,92 0,12-713,21 0,03-19,72 0,03-210 0,1-54,52 0-676,2

7.1.3. Macroelementele n nutriia mineral a algelor verzi


Pentru cultivarea algelor verzi sunt utilizate medii nutritive care, n majoritate,
se deosebesc de mediile aplicate pentru cultivarea algelor cianofite. Concentraia
macroelementelor necesar pentru cultivarea algelor verzi variaz n funcie de
poziia sistematic, specie, gen, familie, ordin i clas.
Nutriia mineral a algelor verzi are unele asemnri, dar i deosebiri, n func-
ie de gen.
Preferinele genurilor algelor verzi n nutriie mineral se prezint astfel:
Genurile Haematococus,Chlamydomonas, Stichococcus, Ulothrix, Chlorel-
la, Scenedesmus prefer urmtoarele concentraii de macroelemente (mg/l):
N-0,014-139,36; P-0,002-35,56; K-0,004-476,51; Mg-0,001-19,72; S-0,001-
27,12; Ca-0-96,6; Na-0-56,64. Raportul dintre N:P:K:Mg:S:Ca:Na este de la
1:0,14:0,28:0,07:0,07:0:0 pn la 1:0,25:3,42:0,14:0,19:0,69:0,41;
Genurile Trentepohlia i Dictyococcus, Pediastrum, Kirchneriella mediul
nutritiv trebuie asigurat cu urmtoarele macroelemente (mg/l): N- 14,67; P-
11,86; K- 68,61; Mg- 3,28; S-5,81; Ca-0,43; Na-0,68. Raportul optim dintre
N:P:K:Mg:S:Ca:Na este urmtorul: 1:0,81:4,68:0,22:0,39:0,03:0,05);
Genurile Chodatella, Coelastrum, Dictyosphaerium, Staurastrum au urm-
toarele preferine de macroelemente (mg/l): N- 139,36; P- 35,56; K-476,51;
Mg-19,72; S-27,12; Ca-96,6; Na-56,64. Raportul dintre N:P:K:Mg:S:Ca:Na
este urmtorul: 1:0,25:3,42:0,14:0,19:0,69:0,41;
Genurile Ankistrodesmus, Tetraedron, Chlorococcum, Neochloris, Coc-
comyxa au nevoie de macroelemente n urmtoarele doze (mg/l): N- 14,67-
139,36; P-11,86-35,56; K- 68,61-476,51; Mg- 3,28-19,72; S-5,81-27,12;
Ca-0,43-96,6; Na-0,68-56,64. Raportul dintre N:P:K:Mg:S:Ca:Na este
de la 1:0,81:4,68:0,22:0,39:0,03:0,05 pn la 1:0,25:3,42:0,14:0,19:0,69:
0,41;
Genul Asteromonaspoate poate fi cultivat prin asigurarea urmtoarelor
concentraii de macroelemente (mg/l): N-0,014-14,67; P-0,002-11,86;
K-0,004-68,61; Mg-0,001-3,28; S-0,001-5,81; Ca-0-0,43; Na-0-0,68. Ra-
portul dintre N:P:K:Mg:S:Ca:Na este n limitele 1:0,14:0,28:0,07:0,07:0:
0 1:0,81:4,68:0,22:0,39:0,03:0,05.

55
Genul Hydrodictyon poate fi cultivat pe medii care conin urmtoare-
le concentraii de macroelemente (mg/l): N-14,67-41,54; P- 11,86-31,12;
K-68,61-78,56; Mg-3,28-7,39; S-5,81-9,75; Ca-0,43-15,16; Na-0,68-78,005.
Raportul dintre N:P:K:Mg:S:Ca:Na este de la 1:0,81:4,68:0,22:0,39:0,03:0,05
pn la 1:0,75:1,89:0,18:0,23:0,36:1,88.
Genul Dunaliella mediile nutritive trebuie s fie mai bogate n macroele-
mente. Concentraia macroelementelor ce trebuie asigurat este urmtoarea
(mg/l): N-349,36; P-45,52; K-1024,26; Mg-4930; S-6505,67; Ca-0; Na-
45627,74.
La nivel de familii, necesitatea macroelementelor n mediile nutritive de cul-
tivare a algelor este urmtoarea:
Chlamydomonadaceae i Ulotrichaceae este necesar ca mediile nutriti-
ve s conin urmtoarele concentrai de macroelemente (mg/l): N-0,014-
139,36; P-0,002-35,56; K-0,004-476,51; Mg-0,001-19,72; S-0,001-27,12;
Ca-0-96,6; Na-0-56,64;
Ankistrodesrmaceae prefer macroelemente n urmtoarele cantiti
(mg/l): N-14,67-139,36; P-11,86-35,56; K- 68,61-476,51; Mg- 3,28-19,72;
S-5,81-27,12; Ca- 0,43-96,6; Na- 0,68-56,64.
Trentepohliaceae i Selenastraceae pot fi cultivate pe medii ce conin ur-
mtoarele macroelemente (mg/l): N- 14,67; P- 11,86; K- 68,61; Mg- 3,28;
S-5,81; Ca- 0,43; Na-0,68.
Asteromonadaceae pot fi cultivte pe medii cu urmtorul coninut de ma-
croelemente (mg/l): N-0,014-14,67; P- 0,002-11,86; K-0,004-68,61; Mg-
0,001-3,28; S-0,001-5,81; Ca-0-0,43; Na-0-0,68.
Chlorellaceae i Scenedesmaceae concentraia macroelementelor din
mediile nutritive este urmtoarea (mg/l): N-0,014-139,36; P-0,002-35,56;
K-0,004-476,51; Mg-0,001-19,72; S-0,001-27,12; Ca-0-96,6; Na-0-56,64;
Chlorococcaceae pot fi cultivate pe medii nutritive cu urmtoarele
concentraii de microelemente (mf/l): N-14,67-139,36; P-11,86-35,56; K-
68,61-476,51; Mg- 3,28-19,72; S-5,81-27,12 ; Ca- 0,43-96,6; Na- 0,68-
56,64;
Oocystaceae, Coelastraceae, Botryococcaceae, Desmidiaceae pot fi cul-
tivate pe medii nutritive ce conin macroelemente n urmtoarele concen-
traii (mg/l): N-139,36; P-35,56; K-476,51; Mg-19,72; S-27,12; Ca-96,6;
Na-56,64;
Hydrodictyaceae concentraia macroelementelor n mediul nutritiv tre-
buie s fie urmtoarea (mg/l): N-14,67-41,54; P- 11,86-31,12; K-68,61-
78,56; Mg-3,28-7,39; S-5,81-9,75; Ca-0,43-15,16; Na-0,68-78,005;
Dunaliellaceae speciile pot fi cultivare pe medii nutritive ce conin ma-
croelemente specifice genului Dunaliella.
La nivel de ordin concentraiile de macroelemente necesre de a fi asigurate n
mediile nutritive se prezint astfel:

56
Chlamydomonadales pot fi cultivate pe medii nutritive ce conin macroele-
mente, menionate mai sus, pentru familia Chlamydomonadaceae;
Ulotrichales i Chlorococcales pot fi cultivate pe medii untritive ce con-
in urmtoarele macroelemente (mg/l): N-0,014-139,36; P-0,002-35,56;
K-0,004-476,51; Mg-0,001-19,72; S-0,001-27,12; Ca-0-96,6; Na-0-56,64;
Volvocales pentru a fi cultivat trebuie s fie asigurat cu macroelemente n
urmtoarele concentraii (mg/l): N-349,36; P-45,52; K-1024,26; Mg-4930;
S-6505,67; Ca-0; Na-45627,74;
Desmideales a fost studiat doar o familie i un gen. Pentru cultivarea
acestor specii este necesar ca mediile nutritive s conin macroelemete,
menionate mai sus, pentru genul Staurastrum.
Analiza concentraiei macroelementelor necesare pentru cultivarea diferitelor
clase sistematice ale algelor verzi se prezint astfel:
Chlorococcophyceae i Ulotrichophyceae este necesar s asigurm me-
diile nutritive practic cu aceleai concentraii de macroelemente, excepie
fcnd Na, care pentru algele din clasa Chlorococcophyceae este mai nalt
(0-78,005 mg/l);
Zygnematophyceae poate fi cultivat pe medii nutritive cu urmtoarele
concentraii de macroelemente (mg/l): N-139,36; P-35,56; K-476,51; Mg-
19,72; S-27,12; Ca-96,6; Na-56,64;
Volvocophyceae are cea mai mare cerin fa de macroelemente. Pentru
cultivarea speciilor din clasa Volvocophyceae mediile nutritive trebuie
s conin urmtoarele concentraii de macroelemente (mg/l): N-0,014-
349,36; P-0,002-45,52; K-0,004-1024,26; Mg-0,001-4930; S-0,001-
6505,67; Ca-0-96,6; Na-0-45627,74 (Tab. 11).
Astfel, constatm c odat cu ascendena n treapta sistematic de la specie
la clas se observ variaii mari ale concentraiilor de macroelemente necesare
pentru cultivarea algelor verzi.

57
Tabelul 10
Coninutul macroelementelor n mediile nutritive de cultivare a algelor verzi, mg/l
Taxoni Concentraia macroelementelor, mg/l
Ordin Familie Gen N P K Mg S Ca Na
Chlamydomo- Chlamydomona- Haematococus 0,014- 0,002-35,56 0,004-476,51 0,001-19,72 0,001- 0-96,6 0-56,64
nadales daceae 139,36 27,12
Chlamydomo- 0,014- 0,002-35,56 0,004-476,51 0,001-19,72 0,001- 0-96,6 0-56,64
nas 139,36 27,12
Ulotrichales Ulotrichaceae Stichococcus 0,014- 0,002-35,56 0,004-476,51 0,001-19,72 0,001- 0-96,6 0-56,64
139,36 27,12
Ulothrix 0,014- 0,002-35,56 0,004-476,51 0,001-19,72 0,001- 0-96,6 0-56,64
139,36 27,12
Trentepohliaceae Trentepohlia 14,67 11,86 68,61 3,28 5,81 0,43 0,68
Chlorococ- Ankistrodesrma- Ankistrodesmus 14,67-139,36 11,86-35,56 68,61-476,51 3,28-19,72 5,81-27,12 0,43-96,6 0,68-56,64
cales ceae
Asteromonada- Asteromonas 0,014-14,67 0,002-11,86 0,004-68,61 0,001-3,28 0,001-5,81 0-0,43 0-0,68
ceae
Chlorellaceae Chlorella 0,014-139,36 0,002-35,56 0,004-476,51 0,001-19,72 0,001- 0-96,6 0-56,64

58
27,12
Tetraedron 14,67-139,36 11,86-35,56 68,61-476,51 3,28-19,7 5,81-27,12 0,43-96,6 0,68-56,64
Chlorococcaceae Chlorococcum 14,67-139,36 11,86-35,56 68,61-476,51 3,28-19,72 5,81-27,12 0,43-96,6 0,68-56,64
Neochloris 14,67-139,36 11,86-35,56 68,61-476,51 3,28-19,7 5,81-27,12 0,43-96,6 0,68-56,64
Coccomyxa 14,67-139,36 11,86-35,56 68,61-476,51 3,28-19,72 5,81-27,12 0,43-96,6 0,68-56,64
Dictyococcus 14,67 11,86 68,61 3,28 5,81 0,43 0,68
Oocystaceae Chodatella 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 96,6 56,64
Coelastraceae Coelastrum 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 96,6 56,64
Botryococcaceae Dictyosphae- 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 96,6 56,64
rium
Hydrodictyaceae Hydrodictyon 14,67-41,54 11,86-31,12 68,61-78,56 3,28-7,39 5,81-9,75 0,43- 0,68-
15,16 78,005
Pediastrum 14,67 11,86 68,61 3,28 5,81 0,43 0,68
Selenastraceae Kirchneriella 14,67 11,86 68,61 3,28 5,81 0,43 0,68
Scenedesmaceae Scenedesmus 0,014-139,36 0,002-35,56 0,004-476,51 0,001-19,72 0,001- 0-96,6 0-56,64
27,12
Volvocales Dunaliellaceae Dunaliella 349,36 45,52 1024,26 4930 6505,67 0 45627,74
Desmideales Desmidiaceae Staurastrum 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 96,6 56,64
Tabelul 11
Concentraia macroelementelor necesar pentru cultivarea diferitelor
clase de alge verzi
Concentraia macroelementelor, mg/l
Clas
N P K Mg S Ca Na
Chlorococco- 0,014-139,36 0,002-35,56 0,004-476,51 0,001-19,72 0,001-27,12 0-96,6 0-78,005
phyceae
Ulotrichophy- 0,014-139,36 0,002-35,56 0,004-476,51 0,001-19,72 0,001-27,12 0-96,6 0-56,64
ceae
Zygnematophy- 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 96,6 56,64
ceae
Volvocophyceae 0,014-349,36 0,002-45,52 0,004-1024,26 0,001-4930 0,001-6505,67 0-96,6 0-45627,74

7.1.4. Macroelementele n nutriia mineral a algelor diatomee, roii,


galben-verzi
innd cont de faptul c algele diatomee, roii i cele galben-verzi prezin-
t interes mai redus pentru cultivare, din aceste ncrengturi am analizat doar
unii reprezentani ai acestora ce sunt mai frecvent cultivai. Astfel, informaia
prezentat este specific n general genurilor analizate i speciilor n particular.
De aceea, necesarul de macroelemente specific pentru familii, ordine i clase
de alge diatomee, roii i cele galben-verzi nu poate fi abordat cu exactitate,
deoarece aceste uniti taxonomice ntrunesc mult mai multe specii care nu au
fost analizate.
Pentru cultivarea algelor diatomee din genul Nitzschia mediul nutritiv tre-
buie asigurat cu urmtoarele macroelemente: N-139,36 mg/l; P-35,56 mg/l;
K-476,51 mg/l; Mg-19,72 mg/l; S-27,12 mg/l; Ca-96,6 mg/l; Na-56,64 mg/l
(Tab. 12). Aceste concentraii sunt caracteristice i pentru cultivarea unor specii
de alge verzi, deaoarece sunt cultivate pe acelai mediu nutritiv.
Nutriia mineral cu macroelemente pentru cultivarea algelor roii este mai
mare comparativ cu cultivarea speciilor din genul Nitzschia. Algele roii anali-
zate aparin genurilor Porphyridium i Cyanidium, care au necesitate variat de
macroelemente din mediul nutritiv. Speciile din genul Porphyridium pot fi culti-
vate pe medii cu urmtoarele concentraii de macroelemente (mg/l): N-202,63;
P-88,2; K-713,97; Mg-242,56; S-320,04; Ca-44,12; Na-493,54. Concentraia
macroelementelor pentru nutriia mineral a algelor din genul Cyanidium este
mai mic comparativ cu speciile genului Porphyridium. Concentraia optim a
macroelementelor pentru cultivarea speciilor de alge din genul Cyanidium este
urmtoarea (mg/l): N-247,2; P-6,4; K-16,16; Mg-3,54; S-4,68; Ca-8,18; Na- 9
(Tab. 13).
Pentru cultivareea algelor galben-verzi concentraia macroelementelor este
mai redus dect pentru cultivarea algelor roii. Concentraiile macroelemen-

59
telor variaz i n funcie de genul algelor. Cultivarea algelor din genul Chlori-
della poate fi realizat pe medii ce conin urmtoarele doze de macroelemente
(mg/l): N-14,67; P- 11,86; K-68,61; Mg-3,28; S-5,81; Ca-0,43; Na-0,68. Cele
din Pleurochloris necesit cantiti variate de macroelemente (mg/l): N-0,014-
14,67; P- 0,002-11,86; K-0,04-68,61; Mg-0,001-3,28; S-0,001-5,81; Ca-0-0,77;
Na-0,68. Algele din genul Chlorocloster au preferine mai mari de macroele-
mente (de 1,2-99 ori) dect cele din genul Pleurochloris (Tab. 14)

60
Tabelul 12
Coninutul macroelementelor n mediile nutritive de cultivare a algelor diatomee, mg/l
Taxoni Concentraia macroelementelor, mg/l
Clas Ordin Familie Gen N P K Mg S Ca Na
Pennatophyceae Raphinales Nitzschiaceae Nitzschia 139,36 35,56 476,51 19,72 27,12 96,6 56,64

Tabelul 13
Coninutul macroelementelor n mediile nutritive de cultivare a algelor roii, mg/l
Taxoni Concentraia macroelementelor, mg/l
Clas Ordin Familie Gen N P K Mg S Ca Na

Rhodellophyceae Porphyridiales Porphyridiaceae Porphyridium 202,63 88,2 713,97 242,56 320,04 44,12 493,54

61

Tabelul 14
Coninutul macroelementelor n mediile nutritive de cultivare a algelor galben-verzi, mg/l
Taxoni Concentraia macroelementelor, mg/l
Clas Ordin Familie Gen N P K Mg S Ca Na

Heterococcophy- Heterococ- Pleurochlori- Chloridella 14,67 11,86 68,61 3,28 5,81 0,43 0,68
ceae cales daceae
Pleurochloris 0,014- 0,002- 0,04- 0,001- 0,001- 0-0,77 0,68
14,67 11,86 68,61 3,28 5,81
Chlorocloster 41,2 53,16 83,94 7,39 9,82 15,97 67,62
7.2. Microelementele n nutriia mineral a algelor
Microelementele se manifest deseori n calitate de factori limitativi ai cre-
terii celulelor algale. Sunt necesare n cantiti mici, dar au o importan deo-
sebit pentru cultivare, deoarece intr n componena multor fermeni. n cate-
goria lor pot fi incluse 10 cele mai importante elemente: Fe, Mn, Zn, Cu, B, Si,
Mo, Cl, V, Co. Din punct de vedere fiziologic, pot fi divizate n trei categorii
n funcie de necesitate: 1) pentru fotosintez Mn, Fe, Cl, Zn i V; 2) pentru
metabolismul azotului Mo, B, Co, Fe; 3) pentru alte funcii metabolice Mn,
B, Co, Cu, Si.109
Coninutul unor microelemente din componena biomasei algale este mult mai
nalt dect n plantele superioare i cloroplaste (Tab. 15).
Tabelul 15
Coninutul de fier i raportul unor metale n diferite grupe ale regnului
vegetal i cloroplastelor 110
Sursa Fe, mg/kg Fe/Cu Fe/Zn Fe/Mn Fe/Mo
Alge 1800 70 20 36 4000
Plante 650 50 9 2 1480
arhegoniate
Plante 180 10 4 1 300
angiosperme
Cloroplaste 720 10 34 1 240
Astfel, analiznd rezultatele prezentate n Tabelul 15, observm c biomasa
algelor conine cantiti mult mai mari de microelemente dect cea a plantelor
arhegoniate, angiosperme i chiar n cloroplastele celulare. Conform acestor re-
zultate, biomasa algelor conine de 2,77-10 ori mai mult Fe dect plantele ar-
hegoniate i angiosperme, la fel i concentraia Cu, Zn, Mn este mai nalt n
biomasa algal.
Fierul
Este un microelement necesar la cultivarea algelor, deoarece particip n mul-
te procese fiziologice. Formele lui metabolice sunt fermenii ce conin fier, ca:
catalaza, peroxidaza, citocromoxidaza, variai citocromi i feroproteine (ferodo-
xin, fiero-flavoproteide). Proteinele fierice particip n reaciile oxidoreductoare
ale fotosintezei, respiraiei, metabolismului glucidelor, la fixarea azotului atmo-
sferic. Fierul i molibdenul intr n componena nitrogenazei, care catalizeaz
recuperarea azotului molecular n procesul de fixare a azotului.
Insuficiena fierului conduce la reducerea creterii algelor, ca rezultat al mic-
orrii fotosintezei i apariiei clorozei. Dup adugarea fierului n mediul nu-
109
.., .., .. . . . : -
, 1989. 605 .
110
.. . -, 2004. 336 .

62
tritiv de cultivare a algelor fotosinteza se restabilete ncet (n decursul ctorva
zile). Pentru sinteza clorofilei este necesar ca celulele algelor s fie asigurate cu
Fe. Fierul legat ocup aproape jumtate din masa cloroplastelor algelor.
Pentru a prentmpina sedimentarea fierului (la pH neutru al mediului nutritiv)
din mediile nutritive de cultivare a algelor, se recomand a se utiliza citratul de
natriu 10 mg la 5 mg Fe. Acest procedeu este efectiv chiar i la doze mari de
fosfor.111
Manganul
Manganul este un microelement necesar pentru cultivarea algelor. Insuficiena
manganului duce la reducerea creterii biomasei algale i contribuie la modifi-
carea aspectului morfologic. Insuficiena manganului n mediile nutritive pentru
cultivarea algelor fotosintetizatoare frneaz dividerea celulelor i, ca rezultat,
apar celule cu form neobinuit, care sunt foarte mari n lime i lungime.
G.Reisner i J.Thompson au demonstrat c algele cu nutriie autotrof, cul-
tivate pe medii nutritive lipsite de mangan, au o vitez redus de cretere a
biomasei. Din cauza insuficienei manganului, de regul, se reduce viteza foto-
sintezei, deoarece manganul particip la reaciile fotochimice ale fotosintezei.
Insuficiena manganului la alge n primul rnd influeneaz procesul de elimi-
nare a oxigenului.
Se consider c legturile de mangan la alge sunt responsabile de activitatea
centrului de eliminare a oxigenului, a fotosistemei 2.112 Unii autori113 consider
c insuficiena manganului n mediul nutritiv preseaz procesul de eliminare a
oxigenului din celulele algelor cianofite i verzi.
Conform rezultatelor noastre, s-a demonstrat c algele cianofite Anabaenopsis
sp., Calothrix Elenkini, Cylindrospermum licheniforme, Nostoc commune var.
flagelliforme, N. gelatinosum, N. linckia pot fi cultivate pe mediu Drew lipsit de
mangan. Aceasta ns nu inhib creterea lor i eliminarea oxigenului.
De rnd cu necesitatea manganului n obinerea oxigenului fotosintetic, s-a
demonstrat rolul lui i al fierului n reaciile de reducere a fotosintezei. Insufi-
ciena manganului sporete sensibilitatea clorofilei la distrugerea luminii, ceea
ce poate duce la apariia clorozei (ca un simptom al insuficienei manganului) la
iluminare sporit. Odat cu adugarea acestui element n mediile nutritive aceste
anomalii dispar. Insuficiena manganului contribuie i la reducerea concentraiei
de glucide din celulele algale.
Pentru obinerea a 1 kg de biomas uscat de clorel sunt necesare circa 2,5-
60 mg de Mn.
111
Hopkins E., Wann F. Relation of hydrogen-ion concentration to growth of chlorella and to
availbility of iron. // Bot. Gaz., vol.81, n4, 1962, p.355-376.
112
Tel Or. E., Stewart W. Manganes and photosynthetic oxygen evolutio by algae. // Nature,
1975, vol.258, no 5537, p.715-716.
113
Gherhardt S. Mangan effekte in photosynthetischen reaktionen von Anacystis. // Ber., dt.
bot. Ges., 1966., no 11, p.63-68.

63
Zincul
Zincul este parte component a fermenilor, care influeneaz asupra meta-
bolismului glucidelor, proteinelor, fotosintezei i regleaz potenialul oxidore-
ductor al celulelor. Zincul se conine n fermeni n concentraii de 0,2-0,3%.
Actualmente se cunosc mai bine de 40 de fermeni ce conin zinc. Zincul fortific
biosinteza acizilor nucleici i influenez asupra activitii fermenilor metabolis-
mului nucleic.114
n rezultatul experimentelor efectuate cu algele Euglena i Chlorella s-a sta-
bilit c zincul are o legtur direct n sinteza ARN i a proteinelor. Insuficiena
Zn contribuie la reducerea sintezei ARN i proteinelor, dar nu influeneaz asupra
sintezei ADN-ului. Cultivarea algei Euglena pe medii nutritive cu coninut insu-
ficient de zinc contribuie la dispariia ribosomilor citoplasmatici, meninndu-i
structura. La adugarea zincului acest proces se regleaz i ribosomii celulari
reapar, meninndu-i structura.115
Zincul acioneaz i ca stabilizator al componentelor membranelor biologice.
Acest element se leag mai uor n membrana celular a algelor comparativ cu
alte microelemente (cum ar fi Fe, Cd, Co, Cu) i determin reactivitatea lor.
Zincul, n doze de 5-20 mg/l, este propus pentru nlturarea bacteriilor din
cultura infectat de clorela.
Cuprul
Cuprul joac un rol important n reaciile de fotosintez la alge. n comparaie
cu manganul, el influenez mult la fotoreducie i mai puin la reacia Hill. Par-
ticiparea cuprului n reaciile fotosintezei este legat de coninutul su din cito-
cromoxidaz. O parte mare a cuprului se gsete n proteinele moleculare mici cu
funcii catalitice care conin cupru (plastocianine). Plastocianinele i citocromul f
se consider transportori de electroni ntre fotosinteza 1 i fotosinteza 2. Concen-
traiile mari de cupru sunt toxice i conduc la micorarea fotosintezei, ndeosebi
n condiii de iluminare intens. La iliminarea redus toxicitatea cuprului este
mai mic. Astfel c dispersia fotosintezei, n prezena cuprului, conduce la acu-
mularea produselor de asimilare n celulele algelor, care, la rndul lor, frneaz
procesul de dividere a celulelor.116
Pentru cultivarea algelor sunt necesare concentraii mici de cupru, care trebuie
asigurate n mediul nutritiv.
n multe cazuri, la pH neutru al mediilor nutritive cuprul se sedimenteaz sau
formeaz cu metaboliii eliminai n mediul nutritiv legturi solubile complexe.
Fosfatul, la pH de 5,1, sedimentez o parte din cupru, iar la pH de 5,9 l exclude
114
.. . //
, 1976, .5-16.
115
Prask J., Plocke D. A role for zinc in the cytoplasmic ribosomes of Euglena gracilis. // Plant
Physiol., 1971, vol. 48, no.2, p.150-155.
116
.. - -
. , 1983. c240.

64
total din soluie. Acelai efect se atest i la administrarea srii de Na2CO3 la pH
de 8,4: sedimenteaz total cuprul. Sedimentarea cuprului nu ntodeauna reduce
activitatea lui. Unele cercetri arat c la pH neutru al mediului nutirtiv de culti-
vare a algelor, cnd o parte mare de cupru se sedimenteaz, iar n soluie rmn
doar 8%, toxicitatea lui nu se reduce. Eliminrile extracelulare ale microalgelor
majoreaz rezistena lor la cupru, deoarece la formarea complexelor organice el
este mai puin toxic. De exemplu, celulele algei Euglena gracilis elimin n me-
diul nutritiv de cultivare glicopeptide, care prezint ageni de chelare a cuprului
i zincului, iar n rezultat algele i menin o vitez bun de cretere la concentra-
ii de pn la 10 mg/l.117
Cuprul este un element mai toxic dect fierul i nichelul. Concentraiile sporite
de cupru influenez negativ asupra algelor, fapt evideniat i prin modificrile mor-
fologice specifice ce se caracterizeaz prin decolorare, schimbarea culorii, mico-
rarea dimensiunilor celulare, deformarea celulelor i granularea cloroplastelor.118
Cuprul poate fi redus din mediul nutritiv odat cu formarea legturilor lui
intracelulare complexe cu aminoacizii, polipeptidele i proteinele. Concentraile
mari de proteine celulare pot inactiva ionul de cupru, din care motiv la cantiti
mari de azot n mediul nutritiv al algelor consumul lui se majoreaz. Efect ase-
mntor se atest i la adugarea n mediul nutritiv a Trilonului-B; n acest caz,
cuprul nu manifest influen toxic la concentraii nalte (pn la 30 mg/l).
Mai mult de 59% din cupru se gsesc n cloroplaste legat de plastocianine.119

Molibdenul
Molibdenul se gsete n plante n forma anionilor de (MoO42-). Molibdenul se
consider microelementul metabolismului azotului, deoarece intr n componen-
a centrelor active ale nitratreductazei (HO) i nitrogenazei, ndeplinind funcia
de fixare biologic a azotului. Acest element este necesar n special n mediile
ce conin azot nitric, sau n condiiile cnd azotul molecular este unica surs
nutritiv de azot. La fixarea biologic a azotului molibdenul poate fi nlocuit cu
vanadiul, care ns este mai puin efectiv dect molibdenul. Astfel, molibdenul
are un rol decisiv n procesul de fixare biologic a azotului, care n cantiti nu
prea mari persist n nitrogenaz chiar i la substituirea lui cu vanadiu n mediul
nutritiv de cultivare a algelor.
117
Albergoni V., Piccini E., Coppellotti O. Response to heavy metals in organism. Excretion and
accumulation of physiological and nonphysiological metals in Euglena gracilis. // omparative
Biochem. Physiol., 1980, vol.67, n2, p.121-127.
118
.., .., .. -
Eustigmatos magnuis (B. Petersen) Hibberd (Eustigmatophyta) Hantzschia amphioxis
(Ehrenberg) Grunow in Cleve et Grunow (Bacillariphyta) .
// , 2009, .6 (100), c.609-610.
119
.., .., .., .., ..,
.., .., .., .. . , 2005.
640 .

65
Insuficiena molibdenului contribuie la acumularea unor cantiti mari de ni-
trai i se frneaz creterea algelor. La cultivarea algei cianofite Nostoc mus-
corum n insuficien de molibden, celulele capt o culoarea galben-verde, ca
rezultat al reducerii concentraiei de ficocianin i clorofil.
Conform datelor noastre, s-a demonstrat c la cultivarea algei Nostoc flagelli-
forme pe medii nutritive lipsite de azot i molibden nu se atest modificri morfo-
logice ale celulelor algale, iar pe perioada de cultivare se desfoar toate fazele
de cretere.
Molibdenul este component al mai multor fermeni i poate fi n formele
Mo(VI) i Mo(V). Se cunosc mai bine de 20 de fermeni ce conin molibden,
dintre care menionm: aldehidoxidaza, sulfitoxidaza, xantindehidrogenaza, xan-
tinoxidaza etc. n cazul fermenilor nitratreductaza i xantinoxidaza molibdenul
intr n componena molibdopterinei, sau molibdocofactorului (Mo-Co). Mo-Co
se formeaz i se distruge uor i este un centru activ al nitratreductazei, unde n
prezena molibdenul nitraii se transform n NO2..120
Pentru fixarea biologic a azotului sunt necesare cantiti mai mari de mo-
libden dect n cazul reducerii nitrailor, iar n mediile nutritive care conin azot
amoniacal molibdenul nu este necesar.
Molibdenul este necesar plantelor n cantiti mai mici dect alte microele-
mente. Simptomele morfologice n cazul insuficienei molibdenului uneori apar
dereglri ale culturii algale asemntoare cu cele aprute n cazul insuficienei
azotului.115, 116
Borul
Borul este parte component a grupei metaloizilor i n soluii apoase la con-
centraii mai mici de 25 mM persist n form monomer B(OH)3 sau n form
ionic B(OH)4-. Borul se mai ntlnete n plante n form complex cu legtu-
rile organice. Absorbia borului este dependent direct de pH. Borul se conine n
peretele celular i constituie circa 60-80% din cantitatea lui, fiind legat cu poliza-
haridele pectinice. n cazul insuficienei borului, proprietile fizice ale peretelui
celular se modific, se inhib rapid elasticitatea celulelor, se modific formarea
peretelui celular i funcionarea plasmolemei. Cu toate acestea, se consider c
borul particip n unele procese, cum ar fi: sinteza i structura peretelui celular,
metabolismul glucidelor, ARN, fenoluri, respiraie, transportul zaharurilor, func-
ionarea plasmolemei, reglarea procesului de cretere i dezvoltare.
Borul, n comparaie cu microelementele metalice, nu este component sau ac-
tivator al fermenilor. Elementul respectiv este un formator de complexe, care, la
fel ca i calciul, formeaz uor legturi coordinative cu substanele ce au legturi
ale grupei-OH n poziia cis. Posibil, ar exista o concuren direct ntre bor i
calciu pentru locul de legtur a polimerilor peretelui celular.
Borul reprezint un element necesar plantelor superioare i unelor alge n proce-
sul de cultivare. Experienele efectuate cu alge marine i alge diatomee terestre au
120
.. . -, 2004. 336 .

66
demonstrat necesitatea borului. Astfel, s-a stabilit c la transferarea algei diatomee
Cylindrotheca fusiformis, cultivate pe mediu nutritiv asigurat cu bor, pe mediu nu-
tritiv lipsit de el se stopeaz procesul de dividere (peste 24-30 de ore), se mrete
de dou ori volumul celulelor, iar peste un interval de 48 de ore se dubleaz viteza
de respiraie. Borul este necesar i pentru cultivarea algelor cianofite Nostoc mus-
corum, Anabaena cylindrica, contribuind la majorarea vitezei de cretere.
Contribuie la intensificarea procesului de fixare biologic a azotului la alga
Nostoc muscorum. Astfel c la adugarea nitrailor n mediul nutritiv ce coninea
bor alga Nostoc muscorum fixa o cantitate mai mare de azot i avea o cretere
mai nalt. Culturile crescute n insuficien de bor i pierd culoarea specific
celulelor, ca i n cazul insuficienei de fier.121
Experienele noastre au demonstrat c algele cianofite azotfixatoare nu sufer
modificri morfologice i se reproduc eficient pe medii nutritive lipsite de bor.
Astfel, putem constata c pentru unele microalge borul este un element nece-
sar, iar alte culturi sunt indiferente fa de el i pot fi cultivate n lipsa lui.
Cobaltul
Cobaltul ndeplinete mai multe funcii specifice i nespecifice n celulele
microorganismelor. Este de nenlocuit din componena coenzimei cobalamina,
particip la multe reacii fermentative. Datorit proprietilor lui de a forma xe-
laturi cu legturile organice, acioneaz activ n cadrul unor reacii specifice din
celulele microorganismelor. Se consider c sporete activitatea antibacterian,
influennd asupra bacteriei Salmonella pullorum.
Concentraia optim a cobaltului variaz n funcie de specia microorganisme-
lor, regimul de cultivare i specificul microorganismelor. n unele condiii speci-
ale microorganismele au capacitatea de a se acomoda la doze nalte de cobalt.
Experimental s-a demonstrat c cobaltul este necesar pentru cultivarea alge-
lor cianofite Nostoc muscorum, Calothrix parietina, Coccochloris peniocystis,
Microcystis aeruginosa. La concentraiile cobaltului de 0,003 mcg/l s-a majorat
creterea biomasei (cu 58%) i concentraia azotului, iar concentraia de 0,04
mcg/l este optim pentru creterea bun a culturilor. Ionii de cobalt n concentra-
ii mici (0,2-0,4 mg/l), pot fi substituii cu vitamina B12 n cantiti mici (0,0075
mcg/l), nemodificnd creterea culturii. Este necesar att algelor cianofite azot-
fixatoare, ct i celor neazotfixatoare, indiferent de sursa de azot (molecular sau
din srurile introduse n mediu). De rnd cu cuprul i zincul, cobaltul se atribuie
elementelor active algicide: concentraii de 1 mg/l inhib creterea microcistesu-
lui pe mediul nutritiv.
Excesul de cobalt n mediul nutritiv inhib creterea algelor. Astfel, la cultiva-
rea algei Euglena gracilis n prezena acestui element n doze mari (mai mari de
4,4 mg/l) are loc stoparea total a creterii.
121
.. -
oo. , 1983. 240 .

67
Cobaltul este necesar pentru multe microorganisme n forma specific vita-
mina B12, sau n forma uneia din cobamidele de cobalt, care pot fi sintetizate sau
adugate direct n medii nutritive.
Pentru fixarea biologic a azotului molecular plantele superioare au nevoie
de cobalt. n plante acest element se gsete n form ionic i ca legturi por-
firinice cianocobalamine (vitamina B12). Insuficiena cobaltului influeneaz
asupra aspectului exterior, simptomele fiind asemntoare cu cazul insuficienei
azotului.122

7.2.1. Microelementele n nutriia mineral a algelor cianofite


Concentraiile optime ale microelementelor, ca i n cazul macroelementelor,
trebuie administrate pentru a putea cultiva unele alge cianofite n funcie de ca-
racteristicile sistematice (specie, gen, familie, ordin i clas).
Concentraiile optime ale microelementelor necesare pentru cultivarea algelor
cianofite analizate de noi (prezentate n Anexa nr.2) au fost stabilite prin calculul
acestor elemente din recetele cu medii nutritive prezentate n Anexa nr.1.
Informaia ce cuprinde algele cianofite studiate n acest capitol aparin la 6
ordine, 17 familii i 28 genuri.
n cele ce urmeaz voma analiza aspectele nutriiei minerale cu microelemen-
te pentru cultivarea algelor cianofite n funcie de apartenena sitematic.
Pentru cultivarea algelor cianofite din genurile Synechocystis, Synechococcus,
Merismopedia, Aphanothece, Gloeocapsa, Myxosarcina, Chamaesiphon, Mas-
tigocladus, Amorphonostoc, Nodularia, Microchaete, Scytonema, Phormidium,
Symploca, Lyngbya, Microcoleus, Plectonema, Cyanotheca, Tolypothrix i Oscil-
latoria mediul nutritiv trebuie s conin microelemente n urmtoarele concen-
traii (mg/l): Fe1,86; Mn-0,66; Zn-0,05; Cu- 0,02; Mo-0,54; B-0,16; Co-0,004
(Tab.16). Raportul optim Fe:Mn:Zn:Cu:Mo:B:Co este urmtorul: 1:0,35:0,03:0,
01:0,29:0,09:0,002.
Unele genuri au o nutriie mineral a microelementelor specific; dintre aces-
tea menionm:
Coccopedia concentraia optim a microelementelor este urmtoa-
rea (mg/l): Fe0,68; Mn- 2,51; Zn-0,25; Cu- 0,08; Mo-0,06; B-1,99;
Co-0. Raportul optim Fe:Mn:Zn:Cu:Mo:B:Co este urmtorul
1:3,69:0,37:0,12:0,09:2,93:0;
Eucapsis poate fi cultivat prin asigurarea mediilor nutritive cu urmtoarele
concentraii de microelemente (mg/l): Fe-0-1,86; Mn-0,66; Zn-0,05; Cu-
0,02; Mo-0,009-0,54; B-0,16-0,4; Co-0-0,004;
Anabaenopsis prefer urmtoarele microelemente (mg/l) ): Fe-0,0001-
0,001; Mn-0-0,58; Zn-0-0,06; Cu-0-0,03; Mo-0-0,05; B-0-0,4; Co-0-0,02;
122
.. . .-., 2004. 336 .

68
Cylindrospermum are nevoie de urmtoarele concentraii de microelemente
(mg/l): Fe-0,0001-0,5; Mn-0-0,5;Zn-0-0,05; Cu-0-0,02; Mo-0-0,009; B-0-
0,4; Co-0-0,0004;
Anabaena i Calothrix pentru cultivare sunt necesare urmtoarele micro-
elemente (mg/l): Fe-0-1,86; Mn-0-0,66; Zn-0-0,05; Cu-0-0,02; Mo-0-0,54;
B-0-0,4; Co-0-0,01;
Microcystis poate fi cultivat pe medii nutritive ce conin microelemente n
urmtoarele doze (mg/l): Fe-0,002; Mn-0,5; Zn-0,05; Cu-0,02; Mo-0,01;
B-0,4; Co-0,01;
Spirulina mediile nutritive trebuie s fi ndestulate cu microelemente n
urmtoarele concentraii (mg/l): Fe-2; Mn-0,31-0,5; Zn-0,05; Cu-0-0,02;
Mo-0,009-0,155; B-0,4; Co-0-0,01 (Tab. 16).
La nivelul familiilor concentraia de microelemente necesar pentru cultivare
este urmtoarea:
Coccobactreaceae, Merismopediaceae, Pleurocapsaceae, Dermocarpa-
ceae, Chamaesiphonaceae, Mastigocladaceae, Nostocaceae, Nodularia-
ceae, Scytonemataceae, Schizothrichaceae, Plectonemataceae concen-
traia optim a microelementelor este (mg/l): Fe-1,86; Mn-0,66; Zn-0,05;
Cu-0,02; Mo-0,54; B-0,16; Co-0,004;
Microcistidaceae au necesiti de microelemente ce variaz, ns n linii
generale ele se cuprind n urmtoarele limite (mg/l): Fe-0,002-1,86; Mn-
0,5-0,66; Zn-0,05: Cu-0,02; Mo-0,01-0,54; B-0,4-0,16; Co-0,0-0,004;
Holopediaceae mediile nutritive trebuie s conin microelementele in-
dicate mai sus pentru genul Coccopedia, deoarece a fost analizat doar un
gen al acestei familii;
Cultivarea reprezentanilor familiei Gloeocapsaceae poate fi realizat
prin asigurarea mediilor nutritive cu urmtoarele microelemente (mg/l);
Fe-0-1,86; Mn-0,66; Zn-0,05; Cu-0,02; Mo-0,009-0,54; B-0,16-0,4; Co-0-
0,004.
Algele din familia Anabaenaceae au urmtoarea nutriie mineral (mg/l):
Fe-0-1,86; Mn0-0,66; Zn-0-0,06; Cu-0-0,03; Mo-0-0,54; B-0-0,4; Co-0-
0,02.
Familia Rivulariaceae este reprezentat de genul Calothrix, respectiv i
microelementele sunt specifice acestui gen.
Familia Oscillatoriaceae are urmtoarele preferine de nutriie mineral
cu microelemente (mg/l): Fe-1,86-2; Mn-0,31-0,66; Zn-0-0,5; Cu-0-0,02;
Mo-0,009-0,54; B-0,16-0,4; Co-0-0,01.
Specificul nutriiei minerale a macroelementelor pentru diferite clase de alge
cianofite cultivate se prezint astfel:
Clasa Chroococceae prefer n nutriia mineral urmtoarele microelemen-
te (mg/l): Fe-0-1,86; Mn-0,5-2,51; Zn-0,05-0,25; Cu-0,02; Mo-0,009-0,54;
B-0,16-1,99; Co-0-0,01.

69
Clasa Chamaesiphoneae se nutrete cu microelemente specifice pentru
ordinele, familiile i genurile ce le reprezint (pentru speciile studiate de
noi).
Clasa Hormogoneae are preferine de microelemente variate, care se pre-
zint astfel (mg/l): Fe-0-2; Mn-0-0,66; Zn-0-0,66; Cu-0-0,03; Mo-0-0,54;
B-0-0,4; Co-0-0,02 (Tab. 17).
Dup cum observm, nu exist concentraii fixe de microelemente specifice
claselor, cu excepia clasei Chamaesiphoneae, deoarece am analizat reprezen-
tani doar a dou ordine, 3 familii i 3 genuri. Spre deosebire de macroelemente,
microelementele au variaii mai mici ale limitelor superioare i celor inferioare
necesare pentru cultivarea algelor cianofite. Cu toate acestea, pentru cultivarea
speciilor de alge cianofite este necesar s cunoatem poziia sistematic i, re-
ieind din aceasta, s identificm mediul nutritiv sau s optimizm un mediu
nutritiv nou.

70
Tabelul 16
Coninutul microelementelor n mediile nutritive de cultivare
a algelor cianofite, mg/l
Taxoni Concentraia microelementelor, mg/l
Ordin Familie Gen Fe Mn Zn Cu Mo B Co
Chroo- Coccobac- Synecho- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
coccales treaceae cystis
Synecho- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
coccus
Holopedia- Coccope- 0,68 2,51 0,25 0,08 0,06 1,99 0
ceae dia
Merismope- Merismo- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
diaceae pedia
Microcisti- Microcys- 0,002 0,5 0,05 0,02 0,01 0,4 0,01
daceae tis
Aphano- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
thece
Gloeocap- Gloeo- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
saceae capsa
Eucapsis 0-1,86 0,66 0,05 0,02 0,009-0,54 0,16- 0-0,004
0,40
Pleuro- Pleurocap- Myxosar- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
capsales saceae cina
Dermo- Dermocar- Cyano- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
carpales paceae theca
Chamaesip- Chamae- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
honaceae siphon
Mastigo- Mastigocla- Mastigo- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
cladales daceae cladus
Nostoca- Nostoca- Amorpho- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
les ceae nostoc
Anabaena- Anabaena 0-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,40 0-0,01
ceae Anabae- 0,0001- 0-0,58 0-0,06 0-0,03 0-0,05 0-0,40 0-0,02
nopsis 0,001
Cylin- 0,0001- 0-0,50 0-0,05 0-0,02 0-0,009 0-0,40 0-0,0004
drosper- 0,5
mum
Nodularia- Nodularia 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
ceae Microcha- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
ete
Scytonema- Scytone- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
taceae ma
Tolypo- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
thrix
Rivularia- Calothrix 0-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,40 0-0,01
ceae

71
Oscilla- Oscillato- Oscilla- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
toriales riaceae toria
Spirulina 2,00 0,31- 0,05 0-0,02 0,009- 0,40 0-0,01
0,5 0,155
Phormi- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
dium
Symploca 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Lyngbya 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Schizothri- Microco- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
chaceae leus
Plectone- Plectone- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
mataceae ma

Tabelul 17
Coninutul microelementelor necesare pentru cultivarea algelor
din clasele de cianofite
Clasa Concentraia microelementelor, mg/l
Fe Mn Zn Cu Mo B Co
Chroococ- 0-1,86 0,5-2,51 0,05-0,25 0,02 0,009-0,54 0,16-1,99 0-0,01
ceae
Chamaesip- 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
honeae
Hormogo- 0-2,00 0-0,66 0-0,06 0-0,03 0-0,54 0-0,40 0-0,02
neae

7.2.2. Nutriia mineral cu microelemente a algelor verzi


Pentru cultivarea algelor verzi sunt necesare medii nutritive ce au n compo-
nen microelemente. Concentraia microelementelor necesar pentru cultivarea
algelor verzi difer n funcie de poziia sistematic, specie, gen, familie, ordin.
Algele verzi analizate de noi aparin la 4 clase, 5 ordine, 18 familii i 22 genuri.
Clasa Chlorococcophyceae este reprezentat de ordinul Chlorococcales, fa-
miliile Ankistrodesrmaceae cu genul Ankistrodesmus, familia Asteromonadaceae
cu genul Asteromonas, familia Chlorellaceae cu genurile Chlorella i Tetraedron,
familia Chlorococcaceae cu genurile Neochloris, Chlorococcum, Dictyococcus
i Coccomyxa, familia Oocystaceae cu genul Chodatella, familia Coelastraceae
cu genul Coelastrum, familia Botryococcaceae cu genul Dictyosphaerium, fami-
lia Hydrodictyaceae cu genurile Hydrodictyon i Pediastrum, familia Selenastra-
ceae cu genul Kirchneriella, familia Scenedesmaceae cu genul Scenedesmus.
Clasa Volvocophyceae este reprezentat de ordinul Chlamydomonadales, fa-
milia Chlamydomonadaceae, genurile Haematococus i Chlamydomonas, de or-
dinul Volvocales, familia Dunaliellaceae, genul Dunaliella.
Clasa Ulotrichophyceae este reprezentat de ordinul Ulotrichales, familiile
Ulotrichaceae i Trentepohliaceae, genurile Ulothrix, Stichococcus i Trente-
pohlia.
72
Clasa Zygnematophyceae este reprezentat de ordinul Desmideales, familia
Desmidiaceae, genul Staurastrum.
Nutriia mineral cu microelemente necesar pentru cultivarea diferitelor ge-
nuri de alge este ntr-o oarecare msur aceeai i se prezint astfel:
Haematococus, Chlamydomonas, Stichococcus, Ulothrix, Chlorella, Sce-
nedesmus este necesar s le asigurm cu urmtoarele concentraii de
microelemente (mg/l): Fe-0,002-1,86; Mn-0-0,66; Zn-0-0,05; Cu-0-0,02;
Mo-0-0,54; B-0-0,16; Co-0-0,004.
Trentepohlia, Ankistrodesmus, Chlorococcum, Dictyococcus, Coccomyxa,
Chodatella, Coelastrum, Dictyosphaerium, Pediastrum, Kirchneriella i
Staurastrum au urmtoarea nutriie mineral cu microelemente: Fe-1,86
mg/l; Mn-0,66 mg/l; Zn-0,05 mg/l; Cu-0,02 mg/l; Mo-0,54 mg/l; B-0,16
mg/l; Co-0,004 mg/l.
Hydrodictyon, Neochloris i Tetraedron au urmtoarele necesiti de mi-
croelemente n nutriia mineral (mg/l): Fe-0,1-1,86; Mn-0,07-0,66; Zn-
0,014-0,05; Cu-0-0,02; Mo-0,54; B-0,01-0,16; Co-0,003-0,004.
Dunaliella are urmtoarele necesiti de microelemente (mg/l): Fe-2,008;
Mn-0,5; Zn-0,05; Cu-0,015; Mo-0,01; B-0,4; Co-0.
Nutriia mineral cu microelemente necesar pentru cultivarea algelor verzi
difer puin i se prezint astfel:
Chlamydomonadaceae, Ulotrichaceae, Asteromonadaceae, Chlorellaceae
i Scenedesmaceae mediile nutritive s conin urmtoarele microele-
mente (mg/l): Fe -0,002-1,86; Mn -0-0,66; Zn -0-0,05; Cu- 0-0,02; Mo -
0-0,54; B -0-0,16; Co -0-0,004.
Trentepohliaceae, Ankistrodesrmaceae, Oocystaceae, Coelastraceae, Bo-
tryococcaceae, Selenastraceae i Desmidiaceae trebuiesc aprovizionate cu
microelemente n urmtoarele concentraii (mg/l): Fe-1,86; Mn-0,66; Zn-
0,05; Cu-0,02; Mo-0,54; B-0,16; Co-0,004.
Hydrodictyaceae, Chlorococcaceae necesit asigurarea mediilor nutri-
tive cu urmtoarele microelemente (mg/l): Fe-0,1-1,86; Mn-0,07-0,66;
Zn-0,014-0,05; Cu-0-0,02; Mo-0,54; B-0,01-0,16; Co-0,003-0,004.
Dunaliellaceae pot fi utilizate medii nutritive ce conin microelemente
menionate pentru genul Dunaliella.
Nutriia mineral cu microelemente pentru cultivarea algelor la nivel de ordin
este urmtoarea:
Ordinul Chlamydomonadales reprezentanii lui pot fi cultivai pe medii
nutritive cu microelemente, menionate mai sus, pentru familia Chlamydo-
monadaceae.
Ordinele Ulotrichales i Chlorococcale prefer urmtoarele concentraii de
microelemente (mg/l): Fe-0,002-1,86; Mn-0-0,66; Zn-0-0,05; Cu-0-0,02;
Mo- 0-0,54; B-0-0,16; Co-0-0,004.

73
Ordinul Volvocales poate fi cultivat pe medii nutritive ce trebuie s fie asi-
gurate cu microelemente n urmtoarele concentraii (mg/l): Fe -2,008;
Mn-0,5; Zn -0,05; Cu- 0,015; Mo - 0,01; B0,4; Co -0.
Ordinul Desmideales trebuie asigurat cu microelemente n urmtoarele
concentraii (mg/l): Fe-1,86; Mn-0,66; Zn-0,05; Cu-0,02; Mo-0,54; B-0,16;
Co-0,004.
Nutriia mineral pentru cultivarea unor clase de alge verzi este diferit.
n linii generale, ea se prezint astfel:
Clasele Chlorococcophyceae i Ulotrichophyceae se nutresc cu microe-
lemente ale cror concentraii (mg/l) variaz: Fe-0,002-1,86; Mn-0-0,66;
Zn-0-0,05; Cu-0-0,02; Mo-0-0,54; B-0-0,16; Co-0-0,004.
Clasa Zygnematophyceae poate fi cultivat pe medii nutritive cu urm-
toarele concentraii de microelemente (mg/l): Fe-1,86; Mn-0,66; Zn-0,05;
Cu-0,02; Mo-0,54; B-0,16; Co-0,004.
Clasa Volvocophyceae mediile nutritive trebuie s conin: Fe-0,002-2,008
mg/l; Mn - 0-0,66 mg/l; Zn-0-0,05 mg/l; Cu-0-0,02 mg/l; Mo-0-0,54 mg/l;
B-0-0,4 mg/l; Co-0-0,004 mg/l.
Astfel, constatm c odat cu ascendena n treapta sistematic de la specie
la clas se observ variaii mari ale concentraiilor de microelemente necesare
pentru cultivarea algelor verzi.

74
Tabelul 18
Coninutul microelementelor n mediile nutritive de cultivare a algelor verzi, mg/l
Taxoni Concentraia microelementelor, mg/l
Ordin Familie Gen Fe Mn Zn Cu Mo B Co
Chlamydomona- Chlamydomona- Haematococus 0,002-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,16 0-0,004
dales daceae Chlamydomonas 0,002-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,16 0-0,004
Ulotrichales Ulotrichaceae Stichococcus 0,002-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,16 0-0,004
Ulothrix 0,002-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,16 0-0,004
Trentepohliaceae Trentepohlia 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Chlorococcales Ankistrodesrma- Ankistrodesmus 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
ceae
Asteromonadaceae Asteromonas 0,002-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,16 0-0,004
Chlorellaceae Chlorella 0,002-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,16 0-0,004
Tetraedron 0,1-1,86 0,07- 0,014- 0-0,02 0,54 0,01-0,16 0,003-0,004
0,66 0,05

75
Chlorococcaceae Chlorococcum 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Neochloris 0,1-1,86 0,07- 0,014- 0-0,02 0,54 0,01-0,16 0,003-0,004
0,66 0,05
Dictyococcus 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Coccomyxa 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Oocystaceae Chodatella 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Coelastraceae Coelastrum 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Botryococcaceae Dictyosphaerium 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Hydrodictyaceae Hydrodictyon 0,1-1,86 0,07- 0,014- 0-0,02 0,54 0,01-0,16 0,003-0,004
0,66 0,05
Pediastrum 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Selenastraceae Kirchneriella 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Scenedesmaceae Scenedesmus 0,002-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,16 0-0,004
Volvocales Dunaliellaceae Dunaliella 2,01 0,50 0,05 0,015 0,01 0,4 0
Desmideales Desmidiaceae Staurastrum 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Tabelul 19
Coninutul microelementelor necesare pentru cultivarea algelor verzi
Clasa Concentraia microelementelor, mg/l
Fe Mn Zn Cu Mo B Co
Chlorococcophyceae 0,002-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,16 0-0,004
Ulotrichophyceae 0,002-1,86 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,16 0-0,004
Zygnematophyceae 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
Volvocophyceae 0,002-2,008 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,4 0-0,004

7.2.3. Nutriia mineral cu microelemente pentru cultivarea algelor


diatomee, roii, galben-verzi
Nutriia mineral cu microelemente pentru algele diatomee, roii i cele galben-
verzi a fost determinat pe baza analizei reprezentanilor acestor specii (indicate n
Anexa nr. 2), care sunt mai frecvent cultivai (Tab. 20). Astfel, informaia prezen-
tat este specific n general genurilor analizate i speciilor n particular. De aceea,
nutriia mineral cu microelemente caracteristice pentru familii, ordine i clase de
alge diatomee, roii i cele galben-verzi nu poate fi stabilit cu exactitate, deoarece
aceti taxoni ntrunesc mult mai multe specii pe care noi nu le-am analizat.
Pentru cultivarea algelor diatomee din genul Nitzschia mediul nutritiv trebuie
asigurat cu urmtoarele microelemente (mg/l): Fe-1,86; Mn-0,66; Zn-0,05; Cu-
0,02; Mo-0,54; B-0,16; Co-0,004 (Tab. 20). Aceste concentraii sunt caracteristi-
ce i pentru cultivarea unor specii de alge verzi.
Nutriia mineral cu microelemente pentru cultivarea algelor roii difer fa
de concentraiile caracteristice speciilor din genul Nitzschia. Algele roii, anali-
zate de noi, aparin la dou genuri (Porphyridium i Cyanidium), care au nutriie
variat cu microelemente din mediile de cultivare. Speciile din genul Porphyri-
dium pot fi cultivate pe medii nutritive cu urmtoarele concentraii de microele-
mente (mg/l): Fe-1,87; Mn-0,44; Zn-0,05; Cu-0,02; Mo-0,54; B-0,16; Co-0,004.
Concentraia microelementelor necesar pentru cultivarea algelor din genul Cya-
nidium este mai mic comparativ cu cea necesar speciilor genului Porphyridium.
Concentraia optim a microelementelor necesare pentru cultivarea speciilor de
alge din genul Cyanidium este urmtoarea (mg/l): Fe-0,02; Mn-0,01; Zn-0,002;
Cu-0; Mo-0,001; B-0; Co-0,001(Tab. 21).
Pentru cultivareea algelor galben-verzi concentraia microelementelor este di-
ferit comparativ cu cea specific pentru cultivarea algelor roii. Concentraiile
optime ale microelementelor n nutriia algelor galben-verzi variaz, la fel, n
funcie de poziia sistematic a speciilor de alge. Cultivarea algelor din genul
Chloridella poate fi realizat pe medii ce conin urmtoarele doze de microele-
mente (mg/l): Fe-1,86; Mn-0,66; Zn-0,05; Cu-0,02; Mo-0,54; B-0,16; Co-0,004.
Algele genului Pleurochloris necesit cantiti variate de microelemente (mg/l):
Fe-0,002-1,86; Mn-0-0,66; Zn-0-0,05; Cu-0-0,02; Mo-0-0,54; B-0-0,16; Co-0-
0,004. Algele din genul Chlorocloster au necesiti mai mici de microelemente
dect cele din genul Pleurochloris (Tab. 22).

76
Tabelul 20
Coninutul microelementelor n mediile nutritive de cultivare a algelor diatomee, mg/l
Taxoni Concentraia microelementelor, mg/l
Clasa Ordin Familie Gen Fe Mn Zn Cu Mo B Co
Pennatophyceae Raphinales Nitzschiaceae Nitzschia 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004

Tabelul 21
Coninutul microelementelor m mediile nutritive de cultivare a algelor roii, mg/l
Taxoni Concentraia microelementelor, mg/l
Clas Ordin Familie Gen Fe Mn Zn Cu Mo B Co
Rhodellophyceae Porphyridiales Porphyridiaceae Porphyridium 1,87 0,44 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004

77
Cyanidiales Cyanidiaceae Cyanidium 0,02 0,01 0,002 0 0,001 0 0,001

Tabelul 22
Coninutul microelementelor n mediile nutritive de cultivare a algelor galben-verzi, mg/l
Taxoni Concentraia microelementelor, mg/l
Clas Ordin Familie Gen Fe Mn Zn Cu Mo B Co
Heterococcophy- Heterococ- Pleurochlori- Chloridella 1,86 0,66 0,05 0,02 0,54 0,16 0,004
ceae cales daceae
Pleurochloris 0 , 0 0 2 - 0-0,66 0-0,05 0-0,02 0-0,54 0-0,16 0-0,004
1,86
Chlorocloster 0,1 0,07 0,045 0,015 0 0,03 0
7.3. Prepararea mediilor nutritive
7.3.1. Prepararea mediilor nutritive lichide
Prepararea mediilor nutritive este o etap important a procesului de culti-
vare a algelor. Acest etap se realizeaz prin metode caracteristice pe care le
vom descrie n detaliu n continuare.
Metodele clasice de preparare a mediilor nutritive lichide pentru cultivarea
algelor includ urmtoarele etape:
1. Selectarea i utilizarea reactivelor chimice (ce sunt destinate pentru ana-
lize) indicate n recet;
2. Cntrirea i adugarea reactivelor n mediul nutritiv n ordinea indicat
n recet;
3. Fiecare sare se adaug n mediul nutritiv dup dizolvarea srii preceden-
te;
4. Srurile de Fe (citrat de fer) se dizolv separat n volume mici de ap fiar-
t, dup care se rcesc i se adaug n mediul nutritiv sterilizat;
5. n mediul nutritiv sterilizat i rcit se adaug soluia sterilizat de micro-
elemente;
6. Pentru omiterea sedimentrii mediilor nutritive, componentele mediului
se recomand a fi pregtite separat n volume mici. Soluiile trebuie ste-
rilizate i dup rcire ele se combin, fiind adugat volumul necesar de
ap;
7. Dup necesitate, se ajusteaz pH-ul cu ajutorul soluiilor speciale.123, 124
Aplicarea tehnicii de preparare a mediilor nutritive sus-menionate este des-
tul de anevoioas, n special la cultivarea industrial a algelor. Pentru prepara-
rea acestor medii sunt necesare cheltuieli, munca specialitilor nalt calificai,
legate de timpul necesar la dizolvarea reagenilor chimici. Astfel, pentru solui-
onarea acestei probleme propunem o modalitate de preparare a mediului nutri-
tiv, pentru cultivarea n condiii de laborator i industrial, testat pe exemplul
algei Spirulina platensis.
Procedeul se desfoar prin adugarea reagenilor necesari n apa de robi-
net, pentru prepararea a 1 l de mediu Zarrouk i prin introducerea lor n balonul
Erlenmayer cu volum de 1 l. Dizolvarea reagenilor se produce utiliznd apa
potabil din robinet sub presiunea cuprins ntre 20 i 25 bari. Mediul preparat
astfel iniial are o culoare alb, dup care devine transparent. Pentru a putea
efectua o comparaie ntre metode, mediul nutritiv Zarrouk a fost preparat, la
fel pe baza apei din robinet, conform procedeului clasic (cu parcurgerea celor
123
.., .., .. . -
. : , 1975. 241 c.
124
Atlas R.M. Handbook of microbiological media fourth edition. New York, 2010. 2063 p.

78
7 etape sus-menionate). Alga Spirulina platensis, aflat n faza exponenial,
s-a inoculat pe mediile obinute, n cantitate de 0,2530,002g/l BAU. Cultiva-
rea periodic a algei Spirulina platensis (n 5 repetri) s-a efectuat n baloane
Erlenmayer cu volum de 200 ml, volumul mediului constituind 200 ml. Reci-
pientul a fost plasat la temperatura de 271C i iluminarea continu de 18-24
mii erg/cm2, cu agitare periodic n timpul zilei, pe parcursul a 15 zile.
Prepararea mediului nutritiv, conform procedeului, permite economisirea
a 40% din timpul alocat acestei etape tehnologice de cultivare (la prepararea
mediului sub presiune este nevoie de 9.13 min., iar conform procedeului cla-
sic de 15.41min.), obinerea unei cantiti mai nalte de biomas algal (la a
15-a zi de cultivare biomasa atingea 2,0020,100g/l BAU pe mediul preparat
conform procedeului, iar n varianta cu mediu pregtit dup metoda clasic
1,7920,090 g/l BAU) (Tab. 23).
Tabelul 23
Productivitatea algei Spirulina platensis cultivate pe mediul Zarrouk
conform procedeului propus, g/l BAU
Zilele de Loturile experimentale
analiz
Mediul preparat clasic Mediul preparat conform
(Xx) procedeului
(Xx)
1 0,2530,002 0,2530,002
3 0,5650,012 0,5520,013
6 0,7780,022 0,8510,033
9 0,9510,040 1,0880,050
12 1,5620,042 1,6040,052
15 1,7920,090 2,0020,100

Valorile vitezei de reproducere i de cretere a populaiei algale sunt mai


nalte n cazul preparrii mediului conform procedeului (atingnd 0,071- 0,305
zile-1 n faza exponenial CE) comparativ cu modalitatea clasic de preparare
(0,056-0,259 zile-1 n faza exponenial). Aceeai legitate este specific i n
cazul coeficientului de reproducere, care atest cele mai nalte valori n lotul
cu mediul nutritiv obinut pe baza dizolvrii reagenilor sub presiune (1,248)
la a 15-a zi, iar n lotul cu dizolvare prin agitare 1,147 (n aceeai perioad)
(Tab. 24).

79
Tabelul 24
Modificrile indicilor fiziologici ai algei Spirulina platensis cultivate pe
mediul Zarrouk conform procedeului propus
Loturile experimentale
Mediul preparat dup metoda
Zilele Mediul preparat clasic
nou
de ana-
liz Viteza Viteza de Coeficien- Viteza de Viteza de Coeficien-
de re- cretere a tul de re- reprodu- cretere a tul de re-
produ- populaiei producere cere populaiei producere
cere
3 0,116 0,156 2,233 0,112 0,149 2,181
6 0,046 0,106 1,376 0,062 0,149 1,541
9 0,029 0,086 1,222 0,035 0,118 1,278
12 0,071 0,305 1,642 0,056 0,258 1,474
15 0,019 0,115 1,147 0,099 0,119 1,248

Astfel, putem conclude c prepararea mediului nutritiv Zarrouk pe baza apei


din robinet sub presiune asigur intensificarea proceselor fiziologice ale algei
Spirulina platensis (Nordst.) Geitl., obinnd ca rezultat majorarea biomasei al-
gale i economisirea timpului specific acestei etape tehnologice de cultivare.

7.3.2. Prepararea mediilor nutritive solide


La mediul lichid cu srurile dizolvate se adaug agar (15 g/l) pentru mediile
solide tipice. Concentraile mici de 7-10 g/l de agar se utilizeaz pentru obinerea
mediilor nutritive semisolide. Dup adugarea agarului mediul se nclzete pn
la fierbere pentru dizolvarea agarului. Mediul obinut se introduce n recipientul
de cultivare i se rcete. Dup solidificare mediul nutritiv este utilizat pentru
cultivare.125
7.4. Sterilizarea mediilor nutritive
Sterilizarea mediilor nutritive este operaiunea de distrugere a microorganis-
melor prezente ntr-un mediu nutritiv. Familiarizarea cu metodele de sterilizare
este necesar pentru desfurarea corect i reuit a procesului de cultivare a
algelor. Actualmente exist mai multe metode de sterilizare:
Metode care utilizeaz agenii fizici cldura, radiaia ultraviolet, filtra-
rea, ultrasunetul;
Metode care utilizeaz agenii chimici substane antiseptice etc.

125
Atlas R.M. Handbook of microbiological media fourth edition. New York, 2010. 2063 p.

80
7.4.1.Sterilizarea
7.4.1. Sterilizarea mediilor
mediilor nutritive
nutritive lichide
lichide
Autoclavarea
Autoclavarea
Mediile lichide se sterilizeaz, de regul, prin autoclavare (la temperatura
deMediile
121Clichide
timp sedesterilizeaz,
20 min.).deAutoclavarea
regul, prin autoclavare
reprezint sterilizareadecu
(la temperatura vapori
121C timp de
de 20ap Autoclavarea reprezint sterilizarea cu vapori de ap sub presiune
sub presiune (Fig. 9). Este cel mai frecvent utilizat n practic (pentru
min.). (Fig. 9). Este cel
mai obinerea
frecvent utilizat n practic
culturilor (pentru obinerea
bacteriologic curate), este o sterilizare
culturilor complet
bacteriologic curate), ieste
sigur.
o
sterilizare complet i sigur. Vaporii de ap supui presiunii rezult cu
Vaporii de ap supui presiunii rezult cu temperaturii de peste 100C. Astfel, temperaturii de peste
la 0,5
100C. atmosfere
Astfel, temperatura
la 0,5 atmosfere este este
temperatura de 115C;
de 115C;la la 1 atmosfer temperatura
1 atmosfer temperatura este de de
este
126
121C;
121C; la 1,5 atmosfere de 127 C,
la 1,5 atmosfere de
la 2127 C, la2deatmosfere
atmosfere 135C. de 135C. 126

Fig.9.
Fig. 9.Autoclavarea
Autoclavareamediilor
mediilor nutritive utilizatelalacultivarea
nutritive utilizate cultivareaalgelor
algelor.

Lasterilizarea
La sterilizarea mediilor
mediilor se acordat
nutritive
nutritive atenie atenie
se acordat special special
strii acestora.
striiDac se
acestora.
modific culoarea sau se formeaz,
Dac se modific culoarea sau se formeaz sediment, atunci acest mediu nutri-
sediment atunci acest mediu nutritiv nu poate fi utilizat la
cultivare. Mediul poate s se modifice din mai multe cauze, de aceea trebuie
tiv nu poate fi utilizat la cultivare. Mediul poate s se modifice din mai multe verificat starea lui
n timpul
cauze,fiecrei etape
de aceea de pregtire.
trebuie verificatVitaminele
starea luipotnfitimpul
adugate n mediu
fiecrei etapenutritiv dup
de pregtire.
Vitaminele
sterilizare, deoarecepot
elefisunt
adugate
sensibilen mediu nutritiv dup sterilizare, deoarece ele sunt
la sterilizare.
sensibile la sterilizare.
Tindalizarea
Tindalizarea
Tindalizarea
Tindalizarea esteeste o pasteurizare
o pasteurizare repetatrepetat
de 3 ori de 3 ori la
la interval de interval
3 zile. Sede 3 zile. Se
recomand
pentru mediile nutritive care conin diferite substane organice (de exemplu, glucide). n(de
recomand pentru mediile nutritive care conin diferite substane organice
exemplu,
intervalul dintre glucide). n intervalul
sterilizri mediile nutritive dintre sterilizri
se pstreaz mediilecamerei
la temperatura nutritive secapstreaz
pentru sporii
la temperatura
rmai camereila pentru
nedistrui s evolueze ca sporiicare
forme vegetative rmai
vor finedistrui
distruse la s evolueze
urmtoarea la forme
nclzire.
vegetative
Tindalizarea este care vor fi distruse
o sterilizare complet. la urmtoarea
Tindalizarea nclzire.n Tindalizarea
se utilizeaz estecnd
locul autoclavrii, o ste-
rilizare complet. Tindalizarea se utilizeaz n locul
mediul nutritiv conine componente sensibile la creterea temperaturii. autoclavrii, cnd mediul
nutritiv conine componente sensibile la creterea temperaturii.

126 126
CarolinaSupply
Carolina Biological Biological Supply
Company. Company.
Culturing Culturing
Algae. U.S.A., 2012.Algae.
27 p. U.S.A., 2012. 27 p.

81
83
Sterilizarea n cuptorul cu microunde
Cu ajutorul acestei metode se sterilizeaz mediile lichide i solide cu volum
mic ( 1,5 l).127 Metoda prevede expunerea mediului nutritiv lichid pe 5-10 min.
la 700 W; mediile solide pe 20 min. la 600 W sau pe 45 min. la 600 W fr
ap. Cu ajutorul acestei metode de sterilizare putem atinge temperatura maxim
a mediului nutritiv de 84C. Aceast metod modific pH-ul mediului nutritiv,
dup rcire, n direcia bazic.
Cu ajutorul acestei metode pot fi sterilizate att mediile nutritive de cultivare a
algelor, ct i cele pentru cultivarea ciupercilor i bacteriilor (Tab. 25.)
Tabelul 25
Efectul utilizrii metodei de sterilizare cu microunde asupra
microorganismelor din mediile nutritive de cultivare a algelor, bacteriilor i
fungilor 128

Mediu nutritiv Mediu nutritiv Mediu nutritiv


Timpul expunerii, pentru pentru
cultivarea pentru cultivarea
min. cultivarea
algelor fungilor
bacteriilor
0 + + +
3 + + +
5 - + +
8 - - +
10 - - -
Not: + prezena contaminrii; - lipsa contaminrii

Cu toate acestea, se recomand ca vitaminele s se adauge dup sterilizare.


Sterilizarea cu microunde este eficient n timp i permite evitarea polurii medi-
ilor cu metale grele i sedimentarea carbonailor.129 Dezavantajul acestei metode
este c permite sterilizarea mediilor nutritive n volume mici, pe cnd autoclava-
rea permite sterilizarea unui volum mai mare de mediu (de 20 l).130

Sterilizarea cu ajutorul lmpii ultraviolete


Acest tip de sterilizare este pe larg utilizat, ns radiaia ultraviolet este peri-
culoas pentru sntatea omului (n special pentru ochi), astfel c trebuie s ex-
127
.., .., ..
: . : - , 2008. 152 .
128
Keller M.D., Bellows W.K., Guilhd R.R.L. Microwave treatment for sterilization of
phytoplankton culture media. // J. Esp. Mar. Bid. Ed., 1988, vol. 117, p.279-283.
129
Jeng D.K.H., Kaczmarek K.A., Woodworth A.G., Balasky G. Mechanism of microwave
sterilization in the dry state. // Appl. Environ. Microbiol., 1987, no53:2133, p.7.
130
Kawachi M., Nol M.H. Sterilization and sterile technique. // Algal Culturing Techniques,
2005, p.65-81.

82
cludem contactul razelor cu corpul uman. n procesul funcionrii lmpilor se eli-
min ozon, care la fel este toxic pentru om. Razele ultraviolete la 260 nm au efect
letal asupra microorganismelor. Lmpile ultraviolete eman iluminare cu lungi-
mea de und de la 240 la 280 nm. Energia variaz n funcie de mrimea lmpii
i se situeaz ntre 40 i 40000 mkW*c/cm2. Razele ultraviolete nu ptrund prin
sticla obinuit, de aceea pentru sterilizarea mediilor nutritive lichide cu volum
mare se recomand utilizarea lmpilor rezistente la ap pentru administrarea lor
subacvatic. Pe lng aceasta, lumina ultraviolet nu ptrunde uniform pe ntreg
volumul apei, se absoarbe i, odat cu ndeprtarea de la surs, se reduce. Aceast
problem poate fi soluionat prin utilizarea lmpilor mai puternice, prin agitarea
probelor i expunerea pe o perioad mai ndelungat.

7.4.2. Sterilizarea mediilor nutritive solide


Pentru sterilizarea mediilor nutritive solide, ca i n cazul mediilor lichide, de
regul, se utilizeaz autoclavarea (15 minute la 121C). La utilizarea vaselor Petri
agarul se repartizeaz uniform pe vasul steril cu instrumente sterile, dup care
se rcete. Pentru evitarea infectrii, volumul agarului nu trebuie s depeasc
jumtate din volumul vasului Petri.

7.5. Pregtirea inoculului algal


Inocularea algelor pentru cultivare se realizeaz dup metode speciale care va-
riaz n funcie de caracteristicile de cretere a culturii, nivelul de adaptare la con-
diiile concrete de cultivare. De menionat c inoculul algal nu poate fi colectat
din culturile crescute pe medii agarizate, deoarece nu putem obine unul omogen.
Astfel, cultura crescut pe agar trebuie mai nti transferat pe medii lichide i,
dup ce a crescut 15-20 de zile, de pe aceste medii poate fi luat biomasa algal
n calitate de inocul.
n cazul culturilor ce cresc intens la omogenizare, probele se mrunesc (cu
ajutorul mainii cu cuite Aparatul utel prin expunerea culturii n aparat pe
10 min.). Cultura obinut, n cazul n care celulele au dimensiuni de 4-7 , se
filtreaz n vas steril (utiliznd filtru cu lent albastr).131
Uneori putem obine culturi fracionate prin centrifugare. n acest caz, pen-
tru inoculare se utilizeaz fracii separate de celule sedimentate n rezultatul
centrifugrii.
Pentru pregtirea inoculului utilizat n cultivarea algelor propunem realizarea
urmtoarelor etape:
Extragerea inoculului algal se realizeaz din cultura care a crescut anterior
pe acelai mediu nutritiv;
Inoculul extras se obine din cultura aflat la mijlocul fazei exponeniale
131
.., .., .. . -
. : , 1975. 241 c.

83
de cretere;
Inoculul se separ de mediul nutritiv prin filtrare sau centrifugare;
Splarea inoculului (cu apa distilat) i sterilizarea;
Administrarea inoculului n forma optim i doza necesar;
Agitarea probelor inoculate.
Important n procesul de cultivare a algelor este i cantitatea de inocul. De re-
gul, cantitatea inoculului algelor este de 0,40,5 g/l sau de 0,40,5 g/l calcul la bi-
omas absolut uscat pentru cultivarea periodic. Pentru cultivarea continu sau
semicontinu inoculul trebuie administrat n funcie de cantitatea specific iniierii
fazei exponeniale de cretere (determinat anterior la cultivarea periodic).
Forma inoculului are i ea o importan deosebit n procesul de cultivare
a algelor. Pentru a studia influena formei de administrare a inoculului asupra
acumulrii biomasei algale au fost efectuate experimente de cultivare a algelor
Anabaenopsis sp. i Nostoc flagelliforme pe acelai mediu nutritiv lichid (Drew)
la administrarea inoculului n form ntreag i mrunit (Tab. 26).
Tabelul 26
Productivitatea algelor Anabaenopsis sp. i Nostoc flagelliforme la
administrarea formei variate a inoculului, g/l
Anabaenopsis sp. Nostoc flagelliforme
Perioada
Forma de administrare Forma de administrare
analizat,
zile Mrunit ntreag Mrunit, ntreag,
Xx Xx Xx Xx
1 0,400,01 0,400,01 0,400,01 0,400,01
3 0,960,08 0,840,08 1,060,18 1,000,20
6 1,170,10 1,630,10 2,370,30 2,730,21
9 2,080,20 2,180,21 3,280,20 3,580,30

n rezultatul efecturii acestor experimente s-a demonstrat c pentru majora-


rea productivitii algelor cianofite Anabaenopsis sp. i Nostoc flagelliforme ino-
cularea trebuie administrat n form ntreag, deoarece obinem practic aceleai
rezultate (Tab. 26).
7.6. Condiiile de cultivare a algelor
Pentru cultivarea algelor trebuiesc meninute i respectate condiii specifice de
temperatur, iluminare, agitare, care ar asigura creterea i dezvoltarea optim a
celulelor algale. De multe ori aceste condiii sunt i factori ce limiteaz creterea
biomasei algelor n procesul de cultivare, iar nerespectarea lor duce la aceea c
sistemul devine ineficient. n continuare, ne vom referi succint la fiecare din con-
diiile de cultivare a algelor.

84
7.6.1. Temperatura
Pentru cultivarea algelor tropicale i subtropicale temperatura optim este de
20-25C132, constatare susinut i de H.Belcher i E.Swale.133
Alte surse tiinifice menioneaz c pentru algele ce populeaz apele dulci i
apele srate (marine, oceanice) temperatura optim pentru cultivare este de 15-
25C. Iar temperaturile mai mari de 30C sunt considerate letale.134
Conform datelor FAO, temperaturile optimale pentru cultivarea algelor sunt
cuprinse, n general, ntre 16 i 27C n funcie de compoziia mediului nutritiv,
specii i, concret, de tulpina cultivat. Temperatura optim pentru cultivarea ma-
joritii algelor este de 18-24C. Temperaturi mai mici de 16C ncetinesc crete-
rea culturii, iar cele mai mari de 35C sunt letale pentru multe specii de alge.135
.. , .. , .. i coautorii136 consider
c pentru cultivarea algelor marine temperatura optim este de 282C. Spre
exemplu, Chlorella poate fi cultivat la temperatura de 30C, Platimonas de
25C, Dunaliela de 26-28C.
Pentru cultivarea algelor I.Laing137menioneaz alte valori ale temperaturilor
optimale: 17-22C. Temperaturile mai mici de 17C stopeaz creterea algelor, la
fel ca i n cazul temperaturilor mai mari de 27C.
n general, n literatura de specialitate exist preri diferite referitor la tem-
peratura optim pentru cultivarea algelor. Din aceste considerente, n Anexa nr.3
prezentm speciile de alge i temperaturile optimale meninute la creterea aces-
tora propuse de diferii autori.
Conform datelor din tabel, la cultivarea majoritii speciilor de alge cianofite
temperaturile optimale se situeaz n limitele 22-27C. Cu excepia unor specii care
prefer temperaturi mai reduse (Chroococcidiopsis thermalis 12C) sau mai nal-
te (Chroococcus globosus, Cyanidium caldarium, Nostoc flagelliforme, Spirulina
major, Spirulina maxima, Spirulina platensis, Spirulina subsalsa 25-35C).
Pentru majoritatea algelor verzi temperaturile optimale se includ n limitele
22-27C. i n acest caz avem unele excepii, cum ar fi Stichococcus chodati,
Stichococcus minor, Stichococcus mirabilis, Stichococcus sp., pentru care tem-
peratura optim de cultivare este cuprins n limitele 15-20C.
Valorile optimale pentru cltivarea algelor diatomee, roii i euglenine sunt
cuprinse ntre 22 i 25C.

132
West J.A. Long-term macroalgal culture maintenance.// Algal culturing techniques, 2005,
p.157-163.
133
Belcher H., Swale E. Culturing Algae, a guide for schools and colleges. U.S.A., 1982. 25 p.
134
James D.E. Culturing algae. U.S.A., 2012. 27 p.
135
FAO. Manual on the production an duse of live food for aquaculture. Rome, FAO. 1996.
295 p.
136
.., .., .. .
. , 1986. 65 .
137
Laing I. Cultivation of marine uniclular algae. Lowestoft, 1991. 31 p.

85
7.6.2. Iluminarea
Algele sunt capabile s-i menin viteza optim de cretere la un interval larg
al iluminrii ce variaz de la o specie la alta.
Confor afirmaiilor lui I. Cruu138, intensitatea luminii, n cazul creterii di-
rijate a algelor, reprezint un factor de mediu extrem de important, nu doar prin
semnificaia sa, n sine, de element determinant al fotosintezei, ci i prin faptul
c, pe parcursul derulrii procesului de cretere a algelor, odat cu mrirea densi-
tii suspensiei n mediul nutritiv apare un efect de autoumbrire n cadrul culturii
algale, ceea ce reprezint n fapt scderea intensitii radiaiei luminoase la nive-
lul culturii n ansamblul su.
Pentru a se evita efectele negative ale acestei situaii asupra productivitii
culturilor, au fost propuse trei tipuri de soluii tehnologice:
introducerea unor sisteme eficiente de agitare continu a suspensiei, astfel
ca, practic, toate celulele s primeasc cantitatea de lumin necesar pentru
realizarea fotosintezei;
creterea treptat a intensitii luminii, direct proporional cu creterea
populaional, respectiv mrirea ,,densitii optice a suspensiei algale;
ndeprtarea (recoltarea) periodic a unei pri din cantitatea de alge din
cultur, pentru a menine densitatea optic a suspensiei n limite convena-
bile pentru derularea normal a fotosintezei.139
Algele pot fi cultivate la lumina soarelui sau la o surs artificial de lumin
(lmpi luminescente sau fluorescente). La concentraii mici ale celulelor algale
(pn la 0,5 g/l biomas absolut uscat) iluminarea deasupra culturii nu trebuie s
fie mai mare de 10-12 klx. La concentaria biomasei de 0,5-1 g/l biomas absolut
uscat i mai mare algele trebuie cultivate la iluminare mai mare pn la 100
klx.140
Sursele artificiale de lumin, generate de lmpile fluorescente i incandescente,
au o eficacitate diferit. Lmpile incandescente sunt inferioare lmpilor fluorescen-
te i sunt utilizate rareori pentru cultivarea algelor. Lmpile fluorescente au o durat
de funcionare foarte bun, o intensitate mai mare i sunt mai eficiente. P.W. Be-
hrens141 menioneaz c fluxul luminos scade proporional cu durata de funcionare,
ca urmare a degradrii luminoforului sub aciunea vaporilor de mercur i datorit
nnegririi extremitilor tubului din cauza volatilizrii filamentului.
Unii autorii consider c cultivarea algelor, n general, trebuie s fie asigurat
cu lumin timp de 16 ore pe zi, 8 ore aflndu-se n ntuneric. n mod ideal cultu-
138
Cru I. Cultura algelor pentru biomasa i principii active: Note de curs, lucrri de
laborator. Bacu: Universitatea din Bacu, 2007. 99 p.
139
Ibidem.
140
.., .., .. .
. , 1986. 65 .
141
Behrens P.W. Photobioreactors and fermentors: the light and dark sides of growing algae.
// Algal Culturing Techniques, 2005, p.189-203.

86
rile trebuie iluminate cu lmpi fluorescente de 40 W, iar dispozitivul de iluminare
s fie nsoit de cronometru. Unii autorii142 consider c pentru cultivarea algelor
se recomand ca iluminarea s fie de 4000-5000 lux. Intensitatea luminii poate
varia n funcie de cantitatea de biomas. Pentru inocul se recomand asigurarea
cu lumin de 500-1000 lux.
J.A. West143 la fel susine c cea mai optim surs de lumin pentru cultivarea
microalgelor n laborator este lumina artificial generat de lmpile fluorescente
de (15-36 W). Puterea maxim a acestor lmpi este de 80 mol fotoni*m-2*s-2 la
o distan de 50 mm. Pentru cultivarea macroalgelor aceast iluminare este prea
puternic. Ele prefer o intensitate mai redus a luminii.
Pentru cultivarea algelor n instalaii industriale, conform datelor lui I.Cru144,
radiaiile din domeniul luminii roii (n jurul lungimii de und de 600 nm) prezin-
t eficien fotosintetic cea mai ridicat.

142
Wnse all rights reserved. Working with algae and cyanobacteria. U.S.A., 2012. 10 p.
143
West J.A. Long-term macroalgal culture maintenance. // Algal Culturing Techniques, 2005,
p.157-163.
144
Cru I. Cultura algelor pentru biomas i principii active: Note de curs, lucrri de
laborator. Bacu: Universitatea din Bacu, 2007. 99 p.

87
CAPITOLUL VIII
METODE DE CULTIVARE A ALGELOR

8.1. Caracteristica general a metodelor de cultivare a algelor


Cele mai frecvente metode utilizate la cultivarea algelor, ndeosebi n scopuri
industriale, sunt: cultivarea periodic; periodic n adncime; multiciclic; semi-
continu; continu.145-147
145, 146 ,147

n continuare vom descrie i carcateriza succint fiecare metod de cultivare a


algelor.
Cultivarea periodic
Cultivarea periodic prevede inocularea celulelor algale n mediul nutritiv la
nceputul procesului i meninerea culturii pn la atingerea fazei propuse de
cretere a culturii. Concentraia microorganismelor n procesul cultivrii periodi-
ce crete, dup care se oprete din cauza limitrii substratului sau prin inhibarea
produselor metabolice toxice.148, 149 Pentru acest tip de cultivare sunt caracteristi-
ce modificri nencetate ale strii fiziologice a celulelor, cauzate de schimbrile
condiiilor produse de activitatea vital a celulelor nsei.150 Astfel, rezult c
cultivarea periodic poate menine reproducerea celulelor numai pentru o pe-
rioad de timp limitat. Dup faza exponenial de cretere, populaia ncepe a
suferi din cauza insuficienei elementelor nutritive sau este inhibat de produsele
metabolice, ceea ce duce la nrutirea strii fiziologice a celulelor. Practic toate
sistemele cultivrii periodice sunt nchise, deoarece microorganismele n ele se
reproduc i trec toate fazele de dezvoltare fr adaosul mediului nutritiv i extra-
gerea biomasei mpreun cu mediul nutritiv.
La studierea dinamicii creterii culturii microorganismelor trebuie respectate
unele condiii, ca: viabilitatea inoculului, prezena n mediul nutritiv a tuturor
elementelor necesare, lipsa inhibitorilor, meninerea condiiilor fizico-chimice
optime n mediu.
Cultivarea periodic n adncime
Cultivarea periodic n adncime este utilizat la cultivarea organismelor pe
145
.. . :
, 2004, c.4-64.
146
.. (Gracilaria): O. :
M, 2002, . 60, .57-70.
147
.., .., .., .. -
. B: , 2008, .9-18.
148
. . : , 1983. 263 .
149 .., .. . K . :
, 2002. 105 .
150
.. . . a: , 1984. 280 .

88
medii nutritive lichide, cu agitarea periodic a culturilor, pentru echilibrarea con-
diiilor de cretere n diferite pri ale volumului de lucru din instalaia de culti-
vare, fapt ce a condus la apariia sistemelor dinamice de cultivare n adncime,
nzestrate cu echipament special. Cultivarea periodic n adncime, n fermenta-
toare, n comparaie cu cea de la suprafa, accelereaz creterea i dezvoltarea
microalgelor pe contul nlturrii aa-numitei ,,zone flmnde din jurul celulelor
i asigur obinerea unei culturi omogene cu agitare ideal. 151 n aa sisteme ce-
lulele se repartizeaz uniform n tot volumul fermentatorului i se afl n aceleai
condiii, avnd loc rspndirea uniform a mediilor nutritive i a produselor me-
tabolice. Implementarea sistemelor dinamice n adncime ne permite s obinem
mai raional nu doar biomasa i endometaboliii, dar i exoprodusele de sintez
algal, eliminate de celule n mediul nconjurtor n rezultatul metabolismului.
Obinnd din start o rspndire larg n producerea drojdiei i antibioticelor, n
continuare metoda cultivrii n adncime se recomand ca fiind mai avantajoas
pentru cultivarea industrial i n condiii de laborator a microorganismelor, in-
clusiv a algelor.152
Cultivarea periodic ndelungat
Cultivarea periodic ndelungat prevede numai o singur umplere i o golire
a fermentatoarelor. Ciclul de dezvoltare a microalgelor n procesul de cultiva-
re periodic ndelungat este mai lung fie din contul adaosului (periodic sau
nentrerupt), fie din cauza meninerii ndelungate a celulelor n sistem (cultura
dialitic). Concentraia microalgelor i viteza de cretere n procesele periodice
ndelungate sunt mai mari n comparaie cu procesele periodice obinuite.
Astfel, se prelungete att faza exponenial, ct mai ales faza de cretere li-
niar. Adaosul de substane nutritive n mediu transform procesul periodic n
proces periodic ndelungat i se utilizeaz, n general, la obinerea produselor
biosintezei, care mresc performana procesului.
La culturile periodice treptat se acumuleaz produse metabolice care inhib
creterea. Pentru sporirea productivitii sau n scopul ridicrii concentraiei bio-
masei se utilizeaz procesul de dializ.153 Cea mai simpl metod de acest gen
este cultivarea organismelor n saci de polietilen, dar aceast metod nu are o
rspndire larg. La cultivarea ndelungat periodic poate fi atribuit cultivarea
microalgelor n sisteme dialitice cu adaos de mediu, deoarece adaosul mrete
perioada de cretere i dezvoltare a populaiilor algale, ns acest sistem nu este
continuu, din cauza lipsei procedurii de extragere a biomasei. n sistemele dia-
litice cu adaos de mediu biomasa total crete pn cnd ajunge la aa o stare,
nct devine imposibil agitarea ei de mai departe. Astfel, metoda d posibilitatea
151
.. . : ,
1978. c.230 -300.
152
Sasson A. Biotehnologii i dezvoltare. Bucureti: Editura Tehnic, 1993. 303 p.
153
.., .. . : ,
1984. 160 .

89
de a cultiva microorganisme, inclusiv alge, pn la obinerea unui volum nalt
de biomas. Culturile dialitice se utilizeaz, n general, n trei cazuri: 1) pentru
produsul concentrat nedifundat; 2) pentru reducerea concentraiei produsului di-
fundat, inhibnd creterea i mrirea produciei biomasei; 3) pentru acumularea
i separarea de la celule a produsului difundat.154

Cultivarea multiciclic
Cultivarea multiciclic se caracterizeaz prin faptul c ciclul de cultivare a
culturilor se repet de multe ori, fr sterilizarea multipl a mediului. n procesul
cultivrii multiciclice dependena concentraiei microalgelor i viteza specific
relativ (n fiecare ciclu) sunt asemntoare cu cele ale cultivrii periodice. Culti-
varea multiciclic poate fi diferit. Ea poate fi efectuat ntr-un fermentator, repe-
tnd de multe ori ciclul complet de dezvoltare a culturilor, fr ntrerupere pentru
sterilizare. La un fermentator se poate repeta sau micora ciclul, finisndu-l, de
exemplu, cu faza exponenial de cretere. Cultivarea multiciclic ofer posi-
bilitatea de a implementa procesul multistadic i multiciclic, care este bazat pe
principiul repetrii i urmrii cultivrii periodice, parcurgnd cteva cultivatoare,
cu scopul de a utiliza cultura pe un termen lung. Cnd cultura ntr-un fermentator
ajunge la starea exponenial, o parte din ea se transfer n alt cultivator. n pri-
mul cultivator cultura continu s se dezvolte, pn la urmtorul stadiu. Cnd n
cel de-al doilea fermentator cultura de asemenea ajunge la starea exponenial, o
parte din ea se transfer n al treilea. Deoarece cultura atinge doar faza exponen-
ial, nu are loc mbtrnirea sau degenerarea ei.155156157
155-157
Cultivarea multiciclic a
microalgelor se utilizeaz att la obinerea biomasei, ct i a produselor de sin-
tez ca proteinele, aminoacizii etc. Utilizarea acestei metode asigur reducerea
de cteva ori a cheltuielilor de obinere a produsului, n comparaie cu metoda de
cultivare periodic.
Cultivarea semicontinu
La cultivarea semicontinu n sistemele semicontinue descrcarea i ncr-
carea total a cultivatorului se efectueaz o singur dat. n procesul de cretere
a culturii o parte din coninut se elimin, iar volumul eliberat se nlocuiete cu
mediul nutritiv proaspt pregtit. n aa mod funcioneaz sistemul de eliminare-
nlocuire. Astfel, cultivarea semicontinu se caracterizeaz prin densitatea i vo-
lumul culturii eliminate i adugarea mediului nutritiv proaspt pregtit n culti-
vatorul n funciune. Regimul stabilit la cultivarea semicontinu se caracterizeaz
154
.. . -
: , 1992. 192 .
155
.. . : ,
1978, c.230 -300.
156
.. . :
, 2004, c.464.
157
. . : , 1983. 263 .

90
prin oscilarea concentraiei organismelor n jurul uneia i aceleiai mrimi relativ
constante, cu o vitez specific de cretere a populaiei, la fel relativ constant.
Acest tip de cultivare poate fi realizat n sisteme deschise omogene unistadice i
poate fi aplicat n orice fermentator utilizat la cultivarea periodic, nzestrat cu
sisteme de agitare i aerare.
Cultivarea semicontinu, n diverse varieti, se utilizeaz n procesul de pro-
ducere a algelor, drojdiilor .a.
Cultivarea continu
n comparaie cu cultivarea periodic, n procesul continuu mediul nutritiv se
introduce permanent, la fel permanent are loc i extragerea biomasei mpreun
cu produsele vitale. Regimul stabilit n cazul cultivrii continue se caracterizeaz
prin concentraia stabil a microalgelor, prin viteza specific de cretere a popu-
laiei. Acest tip de cultivare se realizeaz n sisteme dinamice deschise, care pot
fi att omogene, ct i eterogene. Aceste sisteme sunt capabile s funcioneze
ntr-un interval lung de timp i ntr-un regim permanent.
n sistemele omogene cu agitare ideal microalgele cresc n mediul cultural
neschimbtor i n fiecare moment concret se gsesc n aceeai stare fiziologic,
adic ntr-o stare de echilibru dinamic, care se numete steady state. Concen-
traia tuturor produselor n interiorul fermentatorului i n soluia extras este
aceeai, iar viteza de diluare este egal cu viteza specific de cretere n timpul
echilibrului stabilit. Procesele date au unele avantaje tehnice, comparativ cu cele
periodice, deoarece teoretic pot fi realizate ntr-un interval de timp ndelungat.158
Oriice proces periodic poate fi transformat n proces continuu n flux. Cultiva-
rea continu creeaz posibilitatea de a menine condiii permanente de cretere pe
calea obinerii unui aa coninut al mediului nutritiv, la care doar unul dintre fac-
torii dorii poate limita creterea. Dac ntr-un astfel de proces densitatea popula-
iilor este determinat de coninutul chimic al mediului (concentraia factorului
limitativ de cretere), el se numete cultivare hemostat. Cultivarea hemostat n
condiii strict controlate st la baza studierii particularitilor fiziologice, biochi-
mice i a altor proprieti generale ale celulelor microalgelor sau a culturilor de
alt natur. n cazul cultivrii continue n laborator pot fi modelate condiiile na-
turale, fapt ce poate ajuta la rezolvarea unor probleme ecologice. Astfel, ntr-un
interval de timp scurt pot fi urmrite fenomene care n condiii naturale sunt de
lung durat i pot fi stabilite legiti cu caracter ecologic.159
Un alt principiu de dirijare a acestor procese des utilizat este turbidostatul. n
acest caz, introducerea mediului nutritiv se efectueaz dup comanda elemen-
tului fotoelectric ce nregistreaz densitatea optic a culturilor. Spre deosebire
de hemostat, viteza de diluie se instaleaz automat, n funcie de densitatea
optic a culturii. Turbidostatul asigur obinerea unei viteze de cretere egale
158
.. 2:
. B: M, 2005, . 67, c.98-110.
159
.. . . : , 1984. 280 .

91
cu cea maximal, utilizat la studierea culturii, fixat n stadiul exponenial
de cretere. Hemostatul se utilizeaz n cazul vitezei de diluare ncepnd de
la valoarea cea mai mic pn la cea apropiat de valoarea maximal a vitezei
specifice de cretere.
n prezent sunt elaborate diferite variante de cultivare nentrerupt a microal-
gelor, ce funcioneaz dup principiul turbidostatului: pH stat, oxistat; CO2
stat, viscozistat .a., a cror denumire corespunde cu parametrul propus.160
Cultivarea sincronizat
Culturile de microalge, ca, de exemplu, Spirulina, chiar dac sunt luate n
acelai moment de nsmnare, reprezint o totalitate de celule care se afl n
diferite stadii de dezvoltare individual. Tendina de a obine culturi, ale cror ce-
lule se afl ntr-un anumit stadiu de dezvoltare, a contribuit la elaborarea metodei
sincronizate de diviziune a celulelor. Esena metodei este urmtoarea: utiliznd
diferite procedee, ca extragerea mecanic (metode selective), influena prin inter-
mediul unor factori fizici, chimici i biologici, celulele algei din cultura respec-
tiv se divid ntr-o singur stare fiziologic. Cultivarea sincronizat poate fi de
dou feluri: periodic i continu. Neajunsul primului tip de cultivare sincroni-
zat const n faptul c culturile de organisme i pierd relativ repede (peste 2-3
generaii) capacitatea de diviziune sincronizat. A doua metod se bazeaz pe
faptul c din cultivator se extrage periodic jumtate din coninut la un interval
de timp egal unei generaii; simultan cu aceasta, se adaug aceeai cantitate de
mediu nutritiv proaspt.

8.2. Cultivarea continu a algei Nostoc flagelliforme pe medii


obinute pe baza deeurilor de la complexele zootehnice
Deeurile animaliere pot fi reciclate, prin utilizarea lor ca surs nutritiv la cre-
terea algelor, obinnd profit mult mai nalt ca, de exemplu, n cazul folosirii lor pe
terenurile agricole ca ngrmnt organic. n afar de aceasta, algele au capacitatea
de epurare a acestor ape reziduale, caracterizat prin asimilarea unor indici chimici
i prin producerea, pe contul acestora, a unei mari cantiti de biomas algal, cu
un coninut biochimic valoros, care ulterior poate fi utilizat n agricultur, far-
maceutic etc. Printre speciile de alge care pot fi cultivate pe medii alctuite
din deeurile lichide sau solide de la complexele zootehnice se numr i Nos-
toc flagelliforme. Unele cercetri161 atest c biomasa algei Nostoc flagelliforme
cultivate pe ape reziduale prezint o surs bogat de substane biologic active,
printre care: proteine 20,80%, lipide 5,57% i glucide 11,24%. De aceea,
160
.. . :
, 2004, c.464.
161
Usturoi R., alaru V. Nostoc flagelliforme surs de substane biologic active. n:
Conferina tiinific naional cu participare internaional Probleme actuale ale microbiologiei
i biotehnologiei, consacrat celei de-a 50-a aniversri de la fondarea Seciei de Microbiologie.
- Chiinu, 2009, p.158-160.

92
cultivarea periodic a algei Nostoc flagelliforme pe medii nutritive compuse din
ape reziduale de la complexele zootehnice, n scopul obinerii biomasei algale
i epurrii acestora, prezint un interes deosebit pentru cercetare i implemen-
tare n practic.
Cultivarea periodic a fost realizat prin inocularea iniial a algei pe mediu
de cultur compus din deeuri solide de la complexele zootehnice i excluderea
biomasei la sfritul experienelor. Volumul iniial al mediilor de cultivare con-
stituia 200 ml, la care s-a inoculat alga cu doz de 0,5 g/l. Mediul de cultivare
este descris n Anexa nr.1. Experienele au fost efectuate n condiii de laborator
la temperatura de 28,51,02C i iluminarea continu de 1800-2400 lx, n trei
repetri.
Productivitatea algal a fost determinat conform metodei filtrelor uscate,
utiliznd urmtoarea formul de calcul: (B-A)5 (g/l), unde A greutatea fil-
trului splat i uscat; B greutatea filtrului cu biomas uscat i rcit pn la
temperatura camerei; 5 coeficientul de recalculare pentru 1 litru de suspen-
sie algal.162 Viteza de cretere a populaiei algei Nostoc flagelliforme (Berk.et
Curt.) Elenk. a fost determinat conform procedeului propus de .. ,163
iar viteza de reproducere a algei a fost determinat dup criteriul stabilit de
.. . Coninutul chimic a fost determinat conform metodelor specifi-
ce pentru analiza apelor reziduale (fizico-chimice i chimice). Calculul statistic
al rezultatelor a fost stabilit utiliznd programa Microsoft excel-2007, cu deter-
minarea mediei aritmetice (M) i a erorii standarde (m).
Apele reziduale conin cantiti semnificative de N, P, K, Na, Ca etc., care
constituie o surs incontestabil pentru creterea algelor. Pe lng aceasta, ele
prezint o problem major de mediu, contribuind la poluarea solului i apelor,
de aceea trebuie gestionate prin valorificare.
Analiza chimic a mediului de cultivare denot c pH-ul mediilor este situat
ntre valorile 7,15-7,66. Azotul amoniacal difer n funcie de concentraie: la
1% 16,991,09 mg/l, la 5% 84,955,45 mg/l i la 10% 169,910,9 mg/l.
Nitraii la fel se gsesc n cantitii mai mari n mediile cu concentraie mai
nalt: la concentraia de 10% 1,250,11 mg/l, la cea de 5% 0,620,0 mg/l,
iar la cea de 1% doar 0,120,01 mg/l. Ortofosfaii se situeaz n limitele de
15,47-1,54 mg/l, n mediile de 1-10%. Hidrogenocarbonaii, duritatea i rezi-
duul fix descresc odat cu reducerea concentraiei mediului (Tab.27).

162
.. a
. // . Mo: , 1984.
163
.. . : ,
1978, c.230 -300.

93
Tabelul 27
Coninutul chimic al mediului utilizat la cultivarea algei
Nostoc flagelliforme
Concen- Indicii analizai
traia pH NH4+, NO3 -, PO43-, HCO3-, Reziduu fix,
mediului mg/l mg/l mg/l mg/l mg/l
nutritiv Xx Xx Xx Xx Xx Xx
1% 7,150,25 16,991,03 0,120,01 1,540,16 32,031,52 43,671,85
5% 7,320,27 84,955,25 0,620,06 7,730,80 160,127,62 218,309,26
10% 7,660,31 169,9010,90 1,250,11 15,471,70 320,2515,25 436,6618,52

Astfel, conform rezultatelor analizelor chimice ale apelor reziduale, putem con-
stata c att concentraia de 1%, ct i cea de 10% sunt benefice pentru cultivarea
algei Nostoc flagelliforme. Concentraiile mai mari de 10% nu au fost utilizate ca
mediu de cultur, deoarece contribuie la obinerea unei cantiti reduse de biomas.

Fig.10. Productivitatea algei Nostoc flagelliforme cultivate pe ape reziduale.


Fig.10. Productivitatea algei Nostoc flagelliforme cultivate pe ape reziduale
Rezultatele investigaiilor efectuate atest c pe parcursul desfurrii expe-
Rezultatele
rienei investigaiilor
pn la a 10-a zi s-aefectuate
observatatest c pe parcursul
o cretere desfurrii
considerabil experienei
a biomasei pn la
n toate
a 10-aprobele, n special
zi s-a observat n cazulconsiderabil
o cretere probei cu concentraia
a biomasei de n 10%
toate probele,
8,140,4 g/l, pentru
n special n cazul
concentraia de 5% s-a obinut o productivitate de 7,710,32 g/l,
probei cu concentraia de 10% 8,140,4 g/l, pentru concentraia de 5% s-a obinut o pe cnd pentru
concentraia
productivitate de 1% de
de 7,710,32 g/l,doar 4,280,20
pe cnd pentru g/l. ncepnddecu1%
concentraia a 10-a
dezidoar
i pn la fi- g/l.
4,280,20
nelecu
ncepnd experienei
a 10-a zi i(15 zile)
pn s-a nregistrat
la finele o cretere
experienei (15 zile) mai lent a biomasei
s-a Nr.egistrat algale:
o cretere mai nlent a
cazul mediului de 1% se observ o cretere cu 1,42 g/l, pentru mediul de 5% cu
biomasei algale: n cazul mediului de 1% se observ o cretere cu 1,42 g/l, pentru mediul de 5%
3,14 g/l, iar n cazul mediului de 10% biomasa a diminuat cu 0,43 g/l. Aceasta se
cu 3,14 g/l, iar n cazul mediului de 10% biomasa a diminuat cu 0,43 g/l. Aceasta se explic
explic prin faptul c n mediile de cultivare cu adaos de ape reziduale la finele
prin faptul c n mediile
experienei a nceput deprocesul
cultivare de
cuepuizare
adaos deaape reziduale la
substanelor finele experienei
nutritive, a nceput
necesare cre-
procesul
terii de epuizare a algei
i dezvoltrii substanelor
Nostoc nutritive, necesare creterii i dezvoltrii algei Nostoc
flagelliforme.
Rezultatele obinute denot c viteza de cretere se mrete pn la a 10-a zi,
flagelliforme.
n toate probele: n varianta de 1% atingea valoarea de 0,38 zile -1, n cea de 5%
Rezultatele
de 0,76 zileobinute
-1
, iar ndenot
proba cde viteza
10% de decretere se -1mrete
0,72 zile (Tab.28).pn la a 10-a zi, n toate
-1 -1
probele: n varianta de 1% atingea valoarea de 0,38 zile , n cea de 5% de 0,76 zile , iar n
proba de 10% de 0,72 zile -1(Tab.28). 94

La a 15-a zi valorile vitezei de cretere diminueaz n cazul tuturor mediilor, ceea ce


indic c are loc iniierea fazei staionare de cretere.

Tabelul 28
La a 15-a zi valorile vitezei de cretere diminueaz n cazul tuturor mediilor,
ceea ce indic c are loc iniierea fazei staionare de cretere.
Tabelul 28
Viteza de cretere a populaiei algei Nostoc flagelliforme cultivate
pe ape reziduale (zile -1)
Concentraia mediului
Zilele de analiz 1% 5% 10%
5 0,03 0,05 0,11
10 0,38 0,76 0,72
15 0,34 0,71 0,45

Un alt indice fiziologic, ce permite stabilirea dinamicii dezvoltrii algei Nos-


toc flagelliforme cultivate pe ape reziduale, este viteza de reproducere care indic
intensitatea reproducerii realizat prin creterea biomasei (Tab.29).
Tabelul 29
Viteza
Viteza de reproducere
de reproducere a algeiaNostoc Nostoc flagelliforme
algei flagelliforme cultivate pecultivate pe medii
medii cu adaos cu
de ape
adaos de ape reziduale
-1
reziduale (zile ) (zile -1
)
Zilele de analiz Concentraia mediului
Zilele de analiz 1% Concentraia5%mediului 10%
5 1%0,089 5%
0,114 10%
0,184
5 10 0,089
0,110 0,114
0,203 0,184
0,193
10 0,110 0,203 0,193
15
15 0,100
0,100
0,166
0,166
0,124
0,124
Viteza de reproducere a algei Nostoc flagelliforme difer n funcie de perioada analizat
Viteza de reproducere a algei Nostoc flagelliforme difer n funcie de perioa-
i de concentraia mediului de cultur utilizat. n cazul probei de 1% observm c de la a 5-a la a
da analizat i de concentraia mediului de cultur utilizat. n cazul probei de 1%
10-a zi are loc o cretere cu 0,03, iar de la a 10-a la a 15-a zi se reduce cu 0,01. Pentru proba de
observm c de la a 5-a la a 10-a zi are loc o cretere cu 0,03, iar de la a 10-a la
5% la fel este caracteristic mrirea valorilor vitezei de reproducere de la a 5-a la a 10-a zi cu
a 15-a zi se reduce cu 0,01. Pentru proba de 5% la fel este caracteristic mrirea
0,089, pe cnd de la a 10-a la a 15-a zi are loc o diminuare cu 0,037; n cazul probei de 10%, de
valorilor vitezei de reproducere de la a 5-a la a 10-a zi cu 0,089, pe cnd de la
la a 5-a la a 10-a zi are loc o majorare cu 0,009, iar de la a 10-a pn la a 15-a zi a experienei
a 10-a la a 15-a zi are loc o diminuare cu 0,037; n cazul probei de 10%, de la a
viteza de reproducere a sczut cu 0,069.
5-a la a 10-a zi are loc o majorare cu 0,009, iar de la a 10-a pn la a 15-a zi a
experienei viteza de reproducere a sczut cu 0,069.

Fig.11. Modificrile pH-ului mediilor nutritive la cultivarea algei Nostoc flagelliforme.


Fig.11. Modificrile pH-ului mediilor nutritive la cultivarea algei Nostoc flagelliforme.

95
Analiznd modificrile pH-ului, observam c valorile acestuia variaz n dependen de
ziua experienei i de la o concentraie la alta. n prima zi media pH-ului este de 7,37. ncepnd
cu ziua a 5-a, pH-ul crete considerabil, n special n proba cu concentraia de 1% (9,15), pentru
5% 8,40, iar n mediul de 10% 8,05 (ceea ce denot c alga s-a acomodat la aceste medii i
are loc dividerea celulelor). ns, pn la finele experienei (la a 15-a zi), pH-ul se micoreaz.
De exemplu, n proba de 10% pH-ul era 8,30, n proba de 5% 9,37, iar n proba de 1% 9,16,
Analiznd modificrile pH-ului, observam c valorile acestuia variaz n
dependen de ziua experienei i de la o concentraie la alta. n prima zi me-
dia pH-ului este de 7,37. ncepnd cu ziua a 5-a, pH-ul crete considerabil, n
special n proba cu concentraia de 1% (9,15), pentru 5% 8,40, iar n mediul
de 10% 8,05 (ceea ce denot c alga s-a acomodat la aceste medii i are loc
dividerea celulelor). ns, pn la finele experienei (la a 15-a zi), pH-ul se mic-
oreaz. De exemplu, n proba de 10% pH-ul era 8,30, n proba de 5% 9,37,
iar n proba de 1% 9,16, ceea ce se asociaz cu viteza de reproducere (unde
practic se respect aceeai legitate).
Analiza rezultatelor experimentelor efectuate atest c metoda de cultivare
periodic poate fi utilizat pentru cultivarea algei Nostoc flagelliforme pe ape
reziduale.

8.3. Cultivarea periodic a algei Spirulina platensis pe ape


reziduale zootehnice
Metoda periodic a fost aplicat i la cultivarea algei Spirulina platensis pe
ape reziduale zootehnice. Inocularea algei Spirulina platensis s-a realizat n
vase de sticl i de mas plastic cu volumul de 5 l, temperatura aerului fiind de
301C i iluminarea continu 18-24 mii erg/cm2. La prepararea mediilor cu
adaos de ape reziduale au fost utilizate deeurile de la complexele zootehnice
de bovine, porcine i cele avicole, colectate direct din canalul din grajd sau de
pe platformele de depozitare. n laborator se cntrete 1 kg de deeu, la care se
aduga 5 litri de ap din robinet, se agit i se las la temperatura de 25C pe o
perioad de 5 zile, peste fiecare 4-5 ore agitndu-se manual (n total, 15 minute
pe zi). Dup 5 zile, supernatantul era strecurat prin 2-3 straturi de tifon, pentru
nlturarea maximal posibil a particulelor solide. Pregtit n asemenea mod,
lichidul obinut din deeurile de la bovine, porcine i cele avicole era utilizat n
experiene n diferite concentraii. Concentraiile experimentate au fost obinu-
te prin diluia lichidului cu ap distilat n proporie de 5% 10% 15% i 20%.
Viteza de cretere a populaiei algei Spirulina platensis a fost determinat
conform procedeului propus de .. 164, iar viteza de reproducere a algei
a fost determinat dup criteriul stabilit de .. .165

164
.. . : ,
1978, c.230 -300.
165
.. ( -
). : , 1971.

96
Viteza de cretere a populaiei algei Spirulina platensis a fost determinat conform
procedeului propus de .. 165, iar viteza de reproducere a algei a fost determinat dup
criteriul stabilit de .. .166

Fig. 12. Productivitatea algei Spirulina platensis la cultivarea periodic pe ape reziduale
Fig. 12. Productivitatea algei Spirulina platensis la cultivarea periodic pe ape
zootehnice.
reziduale zootehnice.
Comparnd productivitatea Spirulinei cultivate pe diverse ape reziduale, s-a constatat c
celeComparnd
mai bune rezultate se obin n aSpirulinei
productivitatea 15-a i a 20-a zi de cultivare
cultivate pe apeape
pe diverse cu dejecii de las-a
reziduale,
constatat c cele mai bune rezultate se obin n a 15-a i a 20-a zi de cultivare
pe
165
ape..
cu dejecii de la complexele
de bovine.
Acestea
. se refer,
: , n-300.
1978, c.230 primul rnd,
la166 concentraia de 10%, care atinge valoarea de 3,770,04 g/l BAU, i ceva mai
.. ( ). :
puin
(3,250,05
, 1971. g/l BAU) la concentraia de 5% (Fig. 12). Biomasa de Spirulin
obinut este de aproximativ 3-7 ori mai mare dect cea de pe apele cu dejecii de
la complexele de porcine i cele avicole. 98
Productivitatea maxim a Spirulinei pe
apele reziduale de 10% cocentraie cu dejecii de la bovine coincide cu creterea
lungimii filamentului, n general, i a celulelor, n particular. Totodat, crete i
limea lor. Pe apele reziduale de 5% concentraie cu dejecii de la complexele
de bovine, unde la fel a fost constatat una dintre cele mai mari productiviti a
Spirulinei, creterea lungimii filamentului este urmat de micorarea lungimii ce-
lulelor. Ceea ce mrturisete c n aceste condiii are loc o cretere semnificativ
a vitezei de diviziune a celulelor algale.
Esenial n cercetrile de cultivare periodic este i stabilirea indicilor de
cretere (viteza de reproducere, viteza de cretere a populaiei algale). Aceti in-
dicatori poart o informaie importan legat de desfurarea fazelor de cretere
i de intensitatea lor.

97
Tabelul 30
Viteza de reproducere a algei Spirulina platensis cultivate dup
metoda periodic pe ape reziduale zootehnice, zile-1
Proveniena Concentraia mediului Perioada monitorizat, zile
mediului nutritiv nutritiv, % 1-5 5-10 10-15 15-20
5 0,08 0,02 0,06 0,02
complexele
duale de la

de bovine
Ape rezi-

10 0,09 0,04 0,05 0,008


15 0,05 0,001 0,02 0,03
20 0,06 0,01 -0,02 0,04
5 0,05 0,01 -0,01 0,05
complexele
duale de la

de porcine
Ape rezi-

10 0,08 -0,02 0,04 0,002


15 0,06 0,007 -0,02 0,008
20 0,04 -0,01 0,02 0,03
5 0,02 0,03 -0,002 0,03
complexele
duale de la
Ape rezi-

avicole

10 -0,002 0,008 0,004 0,02


15 -0,01 -0,002 0,02 0,02
20 -0,03 0 0 0

Tabelul 31
Viteza de cretere a populaiei algei Spirulina platensis cultivate
dup metoda periodic pe ape reziduale zootehnice, zile-1
Proveniena Concentraia Perioada monitorizat, zile
mediului nutritiv mediului nutritiv, % 1-5 5-10 10-15 15-20
5 0,15 0,05 0,27 0,13
complexele
duale de la

de bovine
Ape rezi-

10 0,19 0,12 0,32 0,07


15 0,07 0,002 0,04 0,07
20 0,09 0,03 -0,04 0,09
5 0,08 0,02 -0,02 0,1
complexele
duale de la

de porcine
Ape rezi-

10 0,2 -0,06 0,1 0,008


15 0,11 0,01 -0,04 0,01
20 0,06 -0,02 0,02 0,06
5 0,02 0,04 -0,004 0,05
complexele
duale de la
Ape rezi-

avicole

10 -0,003 0,008 0,004 0,02


15 -0,01 -0,002 0,014 0,02
20 -0,03 0 0 0

98
Rezultatele indicate n Tabelul 30 au fost calculate reieind din cantitatea de
biomas a algei Spirulina platensis specific intervalelor monitorizate (1-5 zile,
5-10 zile, 10-15 zile, 15-20 zile) exprimat n g/l biomas absolut uscat. Date-
le obinute denot c la cultivarea periodic a algei Spirulina platensis pe ape
reziduale viteza de reproducere se modific, de la un interval la altul i de la o
concentraie la alta. Aparatul reproductiv sufer modificri eseniale n special
n mediile nutritive cu concentraii de 15-20%, unde se atest rezultate negative
(cea ce indic c pe perioada respectiv celulele nu se reproduc i practic se dis-
trug). Cele mai mari valori ale vitezei de reproducere a algei Spirulina platensis
(0,08-0,09 zile-1) se atest n perioada 1-5 zile la concentraiile de 5-10% ape
reziduale de la complexele de bovine i porcine. Iar cele mai mici rezultate se
atest la cultivarea periodic pe medii compuse din ape reziduale de la comple-
xele avicole 15-20% (0 i - 0,002 zile-1).
Viteza de cretere a populaiei algale indic aceeai legitate ca i n cazul vite-
zei de reproducere, deoarece populaia algal nu poate crete dac nu se produce
reproducerea celulelor (Tab. 31).
Astfel, putem constata c aplicarea metodei de cultivare periodic a algei Spi-
rulina platensis ne-a permis s identificm mediile optime compuse din ape rezi-
duale pentru modelarea ulterioar a acestora.

8.4. Cultivarea periodic a algei Anabaenopsis sp.


Aplicarea metodei de cultivare periodic a algei Anabaenopsis sp. a fost re-
alizat utiliznd mediul nutritiv Drew, sterilizat prin metoda fizic. Cultivarea
s-a efectuat n baloane Erlenmayer cu volum de 250 ml. n calitate de inocul
s-a utilizat alga Anabaenopsis sp. cultivat pe mediul lichid care se afla n faza
exponenial de cretere, obinut conform metodologiei descrise n Capitolul 7,
densitatea culturii inoculate fiind de 0,4 g/l. Experienele au demarat n condiii
de laborator la temperatura de 28-300C i la intensitatea luminii de 4000 lx. Cre-
terea biomasei a fost determinat dup formula: (AnA0)/n, unde An cantitatea
de biomas obinut peste n zile, A0 cantitatea iniial de biomas, n perioa-
da analizat (zile). Productivitatea algal a fost stabilit conform metodei dife-
reniale.166 Indicele pHului a fost stabilit cu ajutorul aparatului multifuncional
Consort C944. Productivitatea maxim i viteza specific de cretere au fost
determinate conform procedeului descris de .. .167 Calculul statistic
al rezultatelor a fost efectuat utiliznd programa Statistica 6, cu determinarea
mediei aritmetice (X) i a erorii standarde (x). Experimentele au fost efectuate n
6 repetri.

166
.., .., .. . - -
. // : , 1975. 241 c.
167
.. 2:
. B: M, 2005, . 67, c.98-110.

99
Calculul statistic al rezultatelor a fost efectuat utiliznd programa Statistica 6, cu determinarea
mediei aritmetice (X) i aerorii standarde (x). Experimentele au fost efectuate n 6 repetri.
Mediul nutritiv Drew are un avantaj economic n aplicare, dar, pe lng aceasta,
Mediulcnutritiv
considerm Drew are
este incomplet, un avantaj
deoarece lipsesceconomic n aplicare,idar,
multe macroelemente pe lng aceasta,
microelemente, sursa de
considerm c este incomplet, deoarece lipsesc multe macroelemente i microele-
CO2, etc.,sursa
mente, care de
contribuie
CO etc.,la care
creterea biomasei
contribuie algale i biomasei
la creterea la acumularea
algalesubstanelor biologic
i la acumularea
2
substanelor
active n celule. biologic
Cantitateaactive n celule.
biomasei Cantitatea sp.
algei Anabaenopsis biomasei
obinutalgei Anabaenopsis
la cultivarea sp.de
pe mediul
obinute
cultur Drewlaeste
cultivarea penmediul
prezentat Figura de
13. cultur Drew este prezentat n Figura 13.

Fig.13. Productivitatea algei Anabaenopsis sp. cultivate pe mediul nutritiv Drew.


Fig.13. Productivitatea algei Anabaenopsis sp. cultivate pe mediul nutritiv Drew.
Biomasa algei crete pn la a 12-a zi atingnd 1,0420,05 g/l, dup care descrete pn
Biomasa
la valoarea algei
iniial creteg/l).
(0,40,02 pnns,
la aaceast
12-a zi atingnd
cantitate 1,0420,05
de biomas g/l,nudup
obinut care des-i
este suficient
nucrete pn
permite la valoarea
dea utiliza iniial
acest mediu (0,40,02industrial
la cultivarea g/l). ns, aceast
a algei, dar cantitate de biomas
poate fi aplicat n form
obinut nu este suficient i nu permite de a utiliza acest mediu la cultivarea
solid pentru meninerea
industrial algeipoate
a algei, dar Anabaenopsis sp. n
fi aplicat n colecia
form laboratorului.
solid pentru meninerea algei
Anabaenopsis sp. n colecia laboratorului. Tabelul 32
Tabelul
Creterea biomasei algei Anabaenopsis sp. n funcie de pH-ul i temperatura 32
mediului
Creterea biomasei algei Anabaenopsis sp. n funcie de pH-ul i
temperaturanutritiv
mediului nutritiv
Perioada analizat, Indiciiexaminai
Indicii examinai
zile temperatura pH-ul mediului biomasei,
Perioada temperatura mediului pH-ul mediului creterea creterea
mediului nutritiv, C nutritiv g/l/zi
analizat, zile nutritiv,
Xx
C nutritiv
Xx
biomasei,
Xx
g/l/zi
1 Xx
18,000,11 Xx
7,170,02 Xx
0
31 18,000,11
31,300,32 7,170,02
7,390,05 0
0,0710,003
63 31,300,32
32,750,47 7,390,05
7,440,03 0,0710,003
0,0560,002
96 32,750,47
30,700,30 7,440,03
8,040,01 0,0560,002
0,0400,002
129 29,360,48
30,700,30 7,740,06
8,040,01 0,0530,002
0,0400,002
1512 26,670,23
29,360,48 7,760,09
7,740,06 0
0,0530,002
Conform datelor din Tabelul 32, temperatura mediului nutritiv este n cretere. Iniial era
15 26,670,23 7,760,09 0
de 18,000,11C, la a 6-a zi, de exemplu, atingea 32,750,47C, iar la finele experimentelor
100
103
Conform datelor din Tabelul 32, temperatura mediului nutritiv este n cretere.
26,670,23C,
Iniial care este favorabil
era de 18,000,11 0
C, la apentru
6-a zi,creterea
de exemplu, atingea 32,750,47
algei Anabaenopsis C, iar la
sp. pH-ul 0mediului
finele
nutritivexperimentelor
crete pn la a 9-a 26,670,23
zi (8,040,01),C,
0
care
dup careeste favorabil
se observ pentru lent.
o descretere creterea
Biomasaalgei
a
Anabaenopsis sp. pH-ul mediului nutritiv crete pn la a 9-a zi (8,040,01),
crescut cel mai mult de la 1-a la a 3-a zi, fiind egal cu 0,0710,003, urmat de o cretere puin
dup care se observ o descretere lent. Biomasa a crescut cel mai mult de la 1-a
mai redus n intervalul 3-6 zile (0,0560,002), iar dup a 6-a zi se observ o descretere, astfel
la a 3-a zi, fiind egal cu 0,0710,003, urmat de o cretere puin mai redus n
c la a 15-a3-6
intervalul zi sezile
reduce pn la 0 (Tab. iar
(0,0560,002), Analiza
32).dup raportului
a 6-a dintre pH:biomas
zi se observ algal denot
o descretere, astfel
cclapn
a 15-a zi se
la a 6-a zi reduce
odat cu pn la 0biomasei
creterea (Tab. 32). Analiza
se mrete raportului
i pH-ul, iar la adintre
9-a zi pH:biomas
pH-ul crete;
algal
valoriledenot
creteriicbiomasei
pn lasea reduc
6-a zidup
odatcarecusecreterea biomasei
observ oscilri se mrete
ale pH-ului, i pH-ul,
iar indicele de
iar la a 9-a zi pH-ul
cretere se reduce.
crete; valorile creterii biomasei se reduc, dup care se ob-
serv oscilri ale pH-ului, iar indicele de cretere se reduce.
Un lucru important n demararea cultivrii periodice este i stabilirea fazelor de cretere,
Un lucru important n demararea cultivrii periodice este i stabilirea fazelor
de cretere,
care care
ar indica, ar indica,
conform uneiaconform uneia din
din metodologii, metodologii,
timpul i cantitateatimpul i cantitatea
de biomas obinut la de
biomas
cultivareaobinut
continu alaalgei
cultivarea
(unde secontinu
vor realizaanalgei
flux (unde
continu sefazele
vor realiza
liniare indeflux conti-
ncetinire)
nuu fazele
(Fig. 14). liniare i de ncetinire) (Fig. 14).

Fig. 14. Fazele de cretere a algei Anabaenopsis sp. la cultivarea periodic pe mediul de
Fig.14. Fazele de cretere a algei Anabaenopsis sp. la cultivarea periodic pe
mediulcultur Drew.Drew.
de cultur
Determinarea fazelor de cretere este o procedur destul de complicat. Uneori este
Determinarea
necesar fazelor de
stabilirea cantitii debiomas
creterentr-un
este ointerval
procedur
de 2-24destul
ore saude
decomplicat.
24-168 ore, nUneori,
funcie
este necesar stabilirea cantitii de biomas ntr-un interval de 2-24 ore sau de
de faza de cretere, condiiile de temperatur, iluminare, agitare, coninutul mediului nuritiv etc.
24-168 ore, n funcie de faza de cretere, condiiile de temperatur, iluminare,
La cultivarea
agitare, algei Anabaenopsis
coninutul mediului nuritiv etc. Ladatcultivarea
sp. pe mediul durata fazelor a fost:
algei lag1 zi, log1
Anabaenopsis sp.zi,
pe
mediul dat durata fazelor a fost: lag 1 zi, log 1 zi, liniar 7 zile, staionar
liniar 7 zile, staionar 1 zi, declin 3 zile (Fig. 14).
1Cea
zi, mai
declin 3 zile
esenial (Fig. 14).
caracteristic a dezvoltrii microalgelor este viteza de cretere, care determin
Cea mai esenial caracteristic a dezvoltrii
procesele de fotobiosintez i depinde de viteza de sintezmicroalgelor esteviteza
a biomasei.160 ns, viteza de cre-
specific de
tere, care determin procesele de fotobiosintez i depinde de viteza de sintez a
cretere difer dela o faz la alta, fapt remarcat i de ali cercettori.
biomasei. ns, viteza specific de cretere difer dela o faz la alta, fapt remarcat
i de ali cercettori.
tabelul 33

101

104
Tabelul 33
Caracteristica cinetic a creterii algei Anabaenopsis sp. cultivate pe
mediul de cultur Drew
Fazele de Cantitatea de Productivitatea Viteza specific de
cretere biomas, g/l maxim cretere, zile-1
Lag 0,3800,01 - -
Log 0,6140,02 - 0,4790,015
Liniar 0,9650,03 0,0500,002 0,0100,004
ncetinire 1,0400,05 0,0380,002 0,0180,00085
Staionar 1,0400,051 0 0
Declin 0,4000,015 -0,2130,012 -0,3180,001

Conform metodologiei utilizate, pentru faza lag nu se indic modalitatea de
determinare a vitezei specifice i a productivitii maxime, aceasta se stabilete
ncepnd cu faza log. Valorile vitezei de cretere sunt cele mai nalte n cazul log
fazei (0,4790,015 zile-1), deoarece se determin dup un alt mod, pentru faza
liniar are valori de 0,0100,004 zile-1 care sunt relativ mici, iar pentru cea de
ncetinire se atest 0,0180,00085 zile-1; acelai lucru este specific i pentru pro-
ductivitatea maxim. n cazul fazei staionare viteza de cretere i productivitatea
maxim este 0, iar n cazul fazei de declin se reduc substanial cantitatea de bio-
mas, productivitatea maxim i viteza de cretere (Tab. 33). n urma rezultatelor
obinute putem constata c exist un raport direct dependent ntre viteza specific
de cretere i pH.
n rezultatul investigrilor realizate s-a constatat c alga Anabaenopsis sp. poa-
te fi cultivat pe mediul Drew. Aceasta permite obinerea a maximum 1,040,05
g/l n decursul a 11-12 zile, ceea ce este puin pentru iniierea cultivrii industri-
ale, iar pentru meninerea culturii n stare pur (pe mediul solid) este suficient.
Timp de 15 zile alga cultivat pe mediul Drew parcurge toate fazele de cretere
(ncepnd de la log i terminnd cu declin). pH-ul mediului este n raport di-
rect proporional cu viteza specific de cretere i invers proporional cu crete-
rea biomasei. Cele mai mari valori ale vitezei specifice a fazei liniare atingeau
0,0100,004 zile-1, ceea ce indic c creterea algei este redus i, respectiv, can-
titatea de biomas este mic.

8.5. Utilizarea metodei semicontinue la cultivarea algei


Anabaenopsis sp.
Cultivarea semicontinu este o metod eficient ce poate fi utilizat n practica
industrial de obinere a biomasei algale.
Cultivarea semicontinu a algei Anabaenopsis sp. a fost efectuat n condiii
de laborator la temperatura de 28-30C i la intensitatea luminii de 4000 lx, pe o
perioad de 9 zile. Pentru realizarea metodei de cultivare a algei Anabaenopsis sp.
102
nutritiv proaspt pregtit, iar biomasa algal nu se exclude. Alga a fost cultivat n baloane
Erlenmayer cu volum de 100 ml. n calitate de inocul a fost utilizat alga cultivat pe mediul
lichid care se afla n faza exponenial de cretere, densitatea culturii inoculate fiind de
au fost antrenate mediile nutritive Drew i Gromov-6. Modelul cultivrii semi-
0,7370,032 g/l n
continue mediul
a fost nutritiv
realizat prin Drew i de a2,271g/l
excluderea 25%, 50% n mediul
i 75% din nutritiv Gromov-6
volumul medi- (Gr. 6).
ilor nutritive peste un interval de 3 zile i nlocuirea cu acelai
Cantitatea de inocul administrat a fost astfel selectat deoarece aceasta este specific volum de mediu
nutritiv proaspt pregtit, iar biomasa algal nu se exclude. Alga a fost cultivat
nceputului fazei exponeniale
n baloane Erlenmayerde cucretere
volum de a algei
100 ml. n calitate de
Anabaenopsis sp. inocul a fostnutritive
pe mediile utilizatdate, fapt
alga cultivat pe mediul lichid care se afla n faza exponenial de cretere, den-
stabilit la cultivarea
sitatea culturiianterioar dup de
inoculate fiind metoda periodic.
0,7370,032 Pemediul
g/l n parcursul experimentelor
nutritiv Drew i de au fost
2,271g/l
determinate: n mediulde
coeficientul nutritiv Gromov-6
diluare (Gr. de
(), viteza 6). scurgere
Cantitateaa de inocul administrat
mediului nutritiv ()ai viteza
fost astfel selectat deoarece160aceasta este specific nceputului fazei exponeniale
specificdede cretere
cretere a culturii
a algei (). Productivitatea
Anabaenopsis sp. pe mediilealgal a fost
nutritive date,stabilit prin diferena
fapt stabilit la cul- dintre
tivareacurate
masa filtrelor anterioar
(prindup
caremetoda
iniial periodic.
se trece apaPe parcursul
distilat) experimentelor
i masa filtrelor au cu
fostsedimentarea
de-
terminate: coeficientul de diluare (), viteza de scurgere a mediului nutritiv () i
biomaseiviteza
algale, calcululdecorespunztor
specific efectundu-se
cretere a culturii n g/l.169 A algal
().160 Productivitatea fost determinat indicele pH
a fost stabilit
prin diferena
ului la aparatul dintre masa
multifuncional filtrelor C-944.
Consort curate (prin care iniial
Prelucrarea se trece aapa
matematic distilat) obinute
rezultatelor
i masa filtrelor cu sedimentarea biomasei algale, calculul corespunztor efectu-
s-a realizat utiliznd
ndu-se programa
n g/l. 168
A fostcomputerizat Microsoft
determinat indicele Office
pHului 2010, fiind
la aparatul determinat eroarea
multifuncional
Consort C-944. Prelucrarea matematic a rezultatelor obinute s-a realizat utili-
standardznd
(x) iprograma
media aritmetic (X). Microsoft Office 2010, fiind determinat eroarea
computerizat
standard (x) i complet
Omogenizarea media aritmetic (X). algei Anabaenopsis sp. este imposibil, lucru care
a biomasei
Omogenizarea complet a biomasei algei Anabaenopsis sp. este imposibil,
determin cultivarea
lucru prin excluderea
care determin cultivareadoar
prinaexcluderea
mediului nutritiv. Aceastanutritiv.
doar a mediului contribuie la asigurarea
Aceasta
contribuie
permanent la asigurarea
a biomasei algale permanent
cu substane a biomasei
nutritive algale cu substane
noi; totodat, se nutritive
elimin noi;i produsele
totodat, se elimin i produsele metabolice acumulate n mediul nutritiv ca re-
metabolice acumulate
zultat n mediul
al creterii biomasei nutritiv
algale.ca rezultat al creterii biomasei algale.
UnulUnul dintreobiectivele
dintre obiectiveletrasate
trasate aa fost
fostmonitorizarea
monitorizarea cantitativ a biomasei
cantitativ al-
a biomasei algei
gei Anabaenopsis sp. obinute la cultivare dup metoda semicontinu (Fig. 15).
Anabaenopsis sp. obinute la cultivare dup metoda semicontinu (Fig. 15).

Fig.15. Productivitatea algei Anabaenopsis sp. obinute la cultivarea dup


Fig. 15. Productivitatea algei Anabaenopsis
metoda sp. obinute la cultivarea dup
semicontinu.
168
.. .
metoda
, semicontinu.
, .
; : , 2012. 728 .
Productivitatea algei Anabaenopsis sp. cultivate dup metoda semicontinu difer n
103
funcie de mediul nutritiv i volumul extras. Aplicarea acestei metode la cultivarea algei

169
.. . ,
, . ; :
Productivitatea algei Anabaenopsis sp. cultivate dup metoda semicontinu
difer n funcie de mediul nutritiv i volumul extras. Aplicarea acestei metode
la cultivarea algei Anabaenopsis sp. pe mediul nutritiv Gromov-6 permite obi-
nerea unor rezultate nalte, n special la extragerea a 75% din mediu, unde la a
9-a zi s-a atestat 10,780,81 g/l. Extragerea a 25% i a 50% din mediul nutritiv
Gromov-6 permite obinerea a 7,810,70 8,100,74 g/l n acelai interval. Pe
mediul nutritiv Drew cele mai mari cantiti de biomas se obin la extragerea a
75% din mediul nutritiv, iar cele mai reduse la extragerea a 25%. La cultiva-
rea pe mediul nutritiv Gromov-6 se observ oscilri manifestate de descretere
urmate de cretere, ceea ce se explic prin acomodarea algei la modul de cul-
tivare. Productivitatea algei cultivate pe mediul nutritiv Drew este n continu
cretere, ceea ce denot c n cazul deficitului iniial de substane nutritive aco-
modarea la metoda semicontinu de cultivare este mai rapid, astfel c prima
excludere a mediului nutritiv nu influeneaz procesul de reproducere.
Monitoringul indicatorilor fiziologici de cretere a algei Anabaenopsis sp. la
cultivare dup metoda semicontinu la fel atest diferene n funcie de cantitatea
de mediu extras (Tab. 34).
Tabelul 34
Valorile indiciilor de cretere la cultivarea semicontinu a algei
Anabaenopsis sp. pe mediul nutritiv Gromov-6
Cantitatea de mediu nutritiv extras i substituit
Perioada
25% 50% 75%
analizat,
zile
Xx Xx Xx Xx Xx Xx Xx Xx Xx
1,3330,051

0,1240,005

0,5860,020

0,5860,020

0,3750,018

0,5860,021
0,2500,01

1-3
20,09

40,2
-0,2030,006

-0,1590,007

-0,1580,006
1,3330,054

0,0830,004

0,1660,008

0,2500,012

3-6
20,08

40,19
1,3330,060

0,0830,004

0,8190,042

0,1660,008

0,8320,045

0,2500,013

1,1300,04

6-9
20,09

40,18

104
Creterea algei Anabaenopsis sp. pe mediul nutritiv Gromov-6 variaz n func-
ie de concentraiile extrase. La a 6-a zi de cultivare valorile vitezei specifice de
cretere indic rezultate negative n toate loturile experimentale, ceea ce arat c
procesul de reproducere s-a redus semnificativ. De la a 6-a la a 9-a zi se observ
majorarea intens a vitezei specifice de cretere. Cele mai bune rezultate se atest
n varianta cu 75% extragere (1,1300,02 zile-1), iar n variantele de 25% i 50%
se obin practic aceleai valori. Acest lucru denot c procesele reproductive sunt
mai intense n varianta cu 75% i, respectiv, se obine i o cantitate mai nalt
de biomas. Valorile coeficientului de diluare i ale vitezei de scurgere indic o
continuitate n ce privete creterea algei (Tab. 34).
Aplicarea metodei semicontinue la cultivarea algei Anabaenopsis sp. pe me-
diul nutritiv Drew relev aceeai legitate. ns, procesul de acomodare a algei la
condiiile noi de cultivare este mai rapid i nu afecteaz att de mult activitatea
reproductiv. n toate loturile experimentale se observ reducerea vitezei de cre-
tere n intervalul de la a 3-a la a 6-a zi. Cele mai semnificative reduceri ale vitezei
specifice de cretere s-au observat n variantele de 50% (unde a descrescut de
1,42 ori) i de 75% (cu o reducere de 3,90 ori). n perioada de la a 6-a la a 9-a zi
viteza specific de cretere s-a majorat n special n variantele cu 75% extragere
de mediu nutritiv, unde s-au atestat valori de 0,9100,028 zile-1 i cu 50% extra-
gere 0,5850,026 zile-1, iar n proba 25% extragere de mediu nutritiv valorile
vitezei specifice de cretere s-au redus de 1,76 ori (Tab. 35).
Tabelul 35
Valorile indiciilor de cretere la cultivarea semicontinu a algei
Anabaenopsis sp. pe mediul nutritiv Drew
Cantitatea de mediu nutritiv extras i substituit
Perioada
25% 50% 75%
analizat,

zile
Xx Xx Xx Xx Xx Xx Xx Xx Xx
1,3330,051

0,1240,005

0,6830,022

0,6830,021

0,3750,018

0,6830,020
0,2500,01
20,09

40,2

1-3
1,3330,054

0,0830,004

0,6030,022

0,1660,008

0,4790,013

0,2500,012

0,1750,017
20,08

40,19

3-6
1,3330,060

0,0830,004

0,3420,012

0,1660,008

0,5850,026

0,2500,013

0,9100,028
20,09

40,18

6-9

105
caracteristic metodei periodice; altfel spus, alga s-a acomodat la condiiile noi induse i, ca
rezultat, se reduce biomasa n variantele cu 25-50% extragere i nlocuire. Pentru variantele de
75% i cele specifice la utilizarea mediului Drew de cultivare acest aspect nu s-a manifestat.
ncepnd cu a 6-a zi, alga era deja acomodat cultivrii respective, ceea ce contribuie la cretere
La a 3-a
accelerat zi se atest
a biomasei algalecreterea biomaseiialgale
care s-a Nr.egistrat la a 9-apezi ambele medii
de cultivare nutritive,
(Tab. 36). ceea
ce indic faptul c s-a iniiat practic faza exponenial, deoarece s-ar realiza pn
atunci cultivarea periodic. ncepnd cu a 3-a zi, a demarat cultivarea semicontinu, Tabelul 36
s-a efectuat prima excludere a mediului nutritiv i nlocuirea cu mediu proaspt,
ceea Evidenierea
ce a condus legitii biologice
la apariia fazei la cultivarea
lag, semicontinu
caracteristic metodei a algei Anabaenopsis
periodice; sp.
altfel spus,
algaZilele
s-a acomodat la condiiile noi induse i, ca rezultat,Mediul
Mediul nutritiv Drew
se reduce biomasa n vari-
nutritiv Gromov-6
antele cu 25-50%
monitorizate extragere Concentraiile mediilor excluse i nlocuitei
i nlocuire. Pentru variantele de 75% cele specifice
(%)
la utilizarea mediului
25 Drew de cultivare
50 acest
75 aspect nu25s-a manifestat.
50 ncepnd 75cu
a 6-a zi,
3 alga era deja
+ acomodat + cultivrii +respective, ceea
+ ce contribuie+ la cretere
+
accelerat
6 a biomasei
+ algale care
+ s-a nregistrat
+ i la a 9-a
- zi de cultivare
- (Tab. +36).
9 + + + + + Tabelul+ 36
total
Evidenierea legitii biologice la cultivarea semicontinu a algei 3
3 3 3 3 3
Not: + creterea biomasei algale; - reducerea biomasei algale.
Anabaenopsis sp.
La cultivarea algei Anabaenopsis sp. pe mediul nutritiv Gromov-6 valorile pH-ului au
Mediul nutritiv Drew Mediul nutritiv Gromov-6
Zilele
tendina de cretere liniar Cele mai nalte valori s-au atestat n varianta cu 75% extragere de
Concentraiile mediilor excluse i nlocuite (%)
monitorizate
mediu nutritiv (11,0260,50). La cultivarea algei pe mediul Drew valorile pH-ului, practic, nu se
25 50 75 25 50 75
difereniaz n funcie de volumul mediului extras, fiind cuprinse ntre 7,2 i 7,26, cu devieri
3 + + + + + +
neeseniale de 0,01-0,30 (Fig. 16).
6 + + + - - +
9 + + + + + +
n total 3 3 3 3 3 3
Not: + creterea biomasei algale; - reducerea biomasei algale.

La cultivarea algei Anabaenopsis sp. pe mediul nutritiv Gromov-6 valorile


pH-ului au tendina de cretere liniar. Cele mai nalte valori s-au atestat n va-
rianta cu 75% extragere de mediu nutritiv (11,0260,50). La cultivarea algei pe
mediul Drew valorile pH-ului, practic, nu se difereniaz n funcie de volumul
mediului extras, fiind cuprinse ntre 7,2 i 7,26, cu devieri neeseniale de 0,01-
0,30 (Fig. 16).

a b

109
106
c
Fig. 16. Valorile pH-ului mediilor nutritive
Fig.16. Valorile pH-ului mediilor nutritive la cultivarea algeialgei
la cultivarea Anabaenopsis sp. dup
Anabaenopsis sp.
dup metoda
metoda semicontinu
semicontinu modificat:
modificat; a extragerea
a extragerea a 25% nutritive;
a 25% din mediile din mediile
b nutritive;
extragerea
b extragerea a 50%
a 50% din mediile
din mediile nutritive;
nutritiv; c extragerea
c extragerea a mediile
a 75% din 75% dinnutritive.
mediile nutritive.

n concluzie
n concluzieputem
putem constata ccea
constata c ceamaimai optim
optim extragere
extragere i nlocuire
i nlocuire a mediu-
a mediului nutritiv
lui nutritiv s-a dovedit a fi de 75%, care contribuie la obinerea a celor mai mari
s-a dovedit a fi de 75%, care contribuie la obinerea a celor mai mari valori ale productiviti
valori ale productiviti algale. Cel mai benefic mediu nutritiv este Gromov-6,
deoarece
algale. Cel la
maicultivarea algei
benefic mediu Anabaenopsis
nutritiv sp. pe
este Gromov-6, acestlamediu
deoarece reproducerea
cultivarea celu-
algei Anabaenopsis
lelor
sp. pe algale se desfoar
acest mediu reproducereacu o vitez
celulelor maise nalt
algale (care
desfoar cu atinge
o vitez1,1300,02 zile
mai nalt (care
-1
).
atinge
Metoda semicontinu
-1 este mai eficient, deoarece contribuie la obinerea unei
1,1300,02 zile ). Metoda semicontinu este mai eficient, deoarece contribuie la obinerea unei
cantiti nalte de biomas ntr-un interval redus de timp, accelereaz procesul de
cantiti nalte adecelulelor
reproducere biomas ntr-un interval
vegetative aleredus
algeideAnabaenopsis
timp, accelereazsp.procesul
i reducede reproducere
din timpula
alocat
celuleloromogenizrii.
vegetative ale algei Anabaenopsis sp. i reduce din timpul alocat omogenizrii.

8.6. Utilizarea metodei de cultivare continu a algei


Spirulina platensis pe ape reziduale zootehnice
8.6. Utilizarea metodei de cultivarea continu a algei Spirulina platensis pe
Cultivarea continu se efectueaz prin excluderea
ape reziduale zootehnice parial i periodic a bio-
masei i adugarea mediului nutritiv pentru meninerea substanelor biogene la
nivelulCultivarea
cuvenit. continu
Acest tip se de
efectueaz
cultivareprin excluderea
poate parial
fi utilizat i periodic
n sisteme a biomasei
deschise ce aui
posibilitatea de a nutritiv
adugarea mediului funciona unmeninerea
pentru termen lung ntrunbiogene
substanelor regim nentrerupt. 169, 170
la nivelul cuvenit. Acest tip
.. 171
a demonstrat c utilizarea metodei continue la cultivarea
de cultivare poate fi utilizat n sisteme deschise ce au posibilitatea de a funciona un termen lung
algelor Isochrisis galbana, 170 171
Monochrysis lutheris, Phaetoctilum tricornutum,
ntrun regim nentrerupt.
Thalassiosira weisllogi, Dunalliela viridis n cultivatoare de tip nchis permite
meninerea
.. pe o172perioad
a demonstratlung de timp metodei
c utilizarea a culturilor n faza
continue activ algelor
la cultivarea de cretere i
Isochrisis
concentraie optimal.
galbana, Monochrysis Aceeai
lutheris, metod de
Phaetoctilum cultivareThalassiosira
tricornutum, a fost utilizat i la Dunalliela
weisllogi, cultiva-
rea algei Haematococcus pluvialis pentru obinerea astaxantinei. Astfel, cea mai
viridis n
nalt cultivatoare
cantitate de de tip nchis permite
astaxantin a fostmeninerea
obinut pe perioad lung
la oexcluderea de timp
a 20% dina culturilor
biomasan
faza activ de cretere i concentraie optimal. Aceeai metod de cultivare a fost utilizat i la
169
. . : , 1983. 263 .
cultivarea
170 algei Haematococcus
pentru obinerea
pluvialis.
.. astaxantinei. Astfel,
: cea mai nalt

, 2004, c.464.
170 171

. ..

. : ,1983.

263 . -
. B: M, 2006, . 8, .5760.
171
.. . :
, 2004, c.464.
172 107
..
. B: M, 2006, . 8, .5760.

110
algal i nlocuire a acesteia cu mediu nutritiv.172 Utiliznd aceast metod, ..
173 obine la fel rezultate semnificative. Indicii productivitii la a 5-a
zi de cultivare ating valoarea de 2,40 g/l, deci mai mic ca n cazul cultivrii prin
metoda neproporional n flux, unde productivitatea atingea 3,82 g/l, dar mai
mare ca n cazul utilizrii metodei de acumulare a biomasei (2,36 g/l).
Cultivarea Spirulinei pe ape reziduale este una dintre direciile actuale ale bio-
tehnologiei. Cultivarea pe apele reziduale comunale, industriale sau de la comple-
xele zootehnice deschide noi posibiliti de obinere a proteinelor i a altor sub-
stane biologic active la un pre mult mai redus. n acelai timp, algele contribuie
la epurarea biologic a apelor reziduale.174
Reieind din cele menionate, am iniiat cultivarea Spirulinei platensis pe ape-
le reziduale de la complexele zootehnice specializate n creterea bovinelor, p-
srilor i porcinelor. La etapa iniial (n prima zi de cultivare), Spirulina a fost
inoculat n concentraia de 0,350 g/l biomas absolul uscat (BAU). Concentra-
ia mediilor compuse din ape reziduale utilizate la cultivarea algei a fost de 10%
n varianta cu ape reziduale de la porcine i de 5% n variantele cu ape reziduale
de la psri i bovine. Concentraiile menionate au fost selectate i utilizate n
experiene ca fiind cele optime pentru obinerea unei cantiti maxime de protei-
n n biomas, dar i a biomasei algale.
Cultivarea Spirulinei pe apele reziduale avicole dup metoda dat asigur ob-
inerea unei productiviti mai nalte (Tab. 37).
Tabelul 37
Cultivarea Spirulinei pe apele reziduale de la complexele avicole dup
metoda cultivrii continue
Indicii analizai
Productivitatea Productivitatea Coeficientul Viteza de Viteza de
Procentul
iniial, n g/l dup diluie, g/l de diluare cretere a scurgere a
biomasei
(BAU) (BAU) () culturii () mediului
extrase
nutritiv ()
Xx Xx Xx Xx Xx
Iniial
0% 0,350 0,01 0 0 0 0
Peste 3 zile
25% 0,620,01 0,460,01 1,340,02 0,510,019 0,130,01

172
.. .
Haematococcus pluvialis (Chlamydomonales) . B:
M. 2008, . 76, .7380.
173
.., .. Spirulina platensis Tetraselmis viridis
. B: M, 2005, . 70,
.9-11.
174
Ciferri O. Spirulina, the edible microorganism. In: Micobiological reviews, 1983,
p.567-569.

108
50% 0,610,01 0,300,0 2,030,02 0,630,014 0,250,01
75% 0,620,01 0,140,01 4,270,27 0,760,003 0,380,01
Peste 6 zile
25% 0,940,03 0,700,02 1,330,01 0,430,014 0,080,01
50% 0,600,01 0,290,00 2,020,04 0,490,017 0,170,01
75% 0,340,03 0,080,01 4,150,26 0,700,073 0,260,01
Peste 9 zile
25% 1,540,05 1,140,03 1,340,01 0,480,05 0,090,01
50% 0,640,06 0,320,03 2,020,04 0,560,07 0,170,01
75% 0 0 0 0 0
Peste 12 zile
25% 1,960,16 1,460,11 1,340,01 0,320,04 0,080,01
50% 0,930,16 0,460,08 2,020,02 0,790,07 0,170,01
75% 0 0 0 0 0
Peste 15 zile
25% 3,360,42 2,510,31 1,330,01 0,510,04 0,080,01
50% 0,790,19 0,390,10 2,060,05 0,400,03 0,170,01
75% 0 0 0 0 0
Peste 18 zile
25% 3,780,11 2,830,08 1,330,01 0,260,05 0,080,01
50% 0,630,14 0,310,06 1,990,03 0,380,03 0,170,01
75% 0 0 0 0 0

La extragerea a 25% din biomas se observ tendina evident de majorare a


productivitii algale dup fiecare extragere i nlocuire cu mediu nutritiv cores-
punztor. Acelai lucru l observm i dup diluie. Coeficientul de diluare, care
indic exactitatea diluiei i extraciei, rmne practic neschimbat n toate vari-
antele analizate. Cea mai nalt vitez de cretere a biomasei a fost observat la a
3-a i a 15-a zi de cultivare, fiind corespunztor de 0,513 i 0,510. Viteza de scur-
gere a mediului la concentraia dat este n descretere pn la a 15- a zi, dup
care rmne neschimbat. La extragerea a 50% obinem o cantitate puin mai
redus de biomas dup fiecare diluie. Cea mai nalt productivitate n aceast
variant a fost nregistrat la a 12-a zi (0,93 g/l).
Dup a 12-a zi productivitatea algei n aceast variant treptat se reduce. n
acelai timp, se observ o majorare continu a vitezei de scurgere a mediului
pn la a 15-a zi, fapt ce demonstreaz c, odat cu creterea valorilor vitezei de
scurgere a mediului, obinem o descretere a productivitii. Extragerea a 75%
din biomas nu poate fi recomandat, dat fiind faptul c la a 9-a zi productivitatea
algei se reduce pn la 0.
Metoda cultivrii continue poate fi folosit i n cazul cultivrii Spirulinei
platensis pe apele reziduale de la porcine. Ca i n cazul apelor reziduale de la
ntreprinderile avicole, cea mai avantajoas extragere s-a dovedit a fi cea de 25%
109
(Tab. 38). Ea duce la obinerea celei mai mari productiviti, atingnd la a 15-a
zi 1,54 g/l. Acelai lucru se observ i n cazul productivitii de dup diluare.
Coeficientul de diluare rmne neschimbat practic la toate concentraiile pe par-
cursul ntregii perioade a experienelor. Valorile vitezei de cretere a biomasei
tind s se mreasc pn la a 12-a zi, cnd ating cota maxim (0,390), dup care
are loc descreterea. Valorile vitezei de scurgere sunt invers proporionale fa de
cele ale vitezei de cretere. n cazul extragerii a 50% din biomas, productivitatea
maxim se observ la a 15-a zi de cultivare, atingnd cota de 1,04 g/l. Producti-
vitatea de dup diluare la fel este mai nalt la a 15-a zi. La extragerea a 50% se
observ o sporire a vitezei de cretere, comparativ cu extragerea precedent, cota
maxim fiind atins la a 12-a zi (1,218), dup care se diminueaz la urmtoarele
extrageri. Ca i n cazul precedent, viteza de scurgere a mediului se micoreaz
odat cu creterea valorilor vitezei de cretere a biomasei, cele mai mici rezultate
fiind nregistrate la a 12-a zi. Extragerea a 75% din biomas la fel nu este reco-
mandabil, deoarece, ncepnd cu a 6-a zi de extragere, se obine o productivitate
joas, iar la a 12-a zi alga piere.
Tabelul 38
Cultivarea Spirulinei pe apele reziduale de la complexele de porcine dup
metoda cultivrii continue
Indicii analizai
Productivitatea Productivitatea Coeficientul Viteza de Viteza de
Procentul
iniial, n g/l dup diluie, de diluare cretere a scurgere a
biomasei
(BAU) g/l (BAU) () culturii () mediului
extrase
nutritiv ()
Xx Xx Xx Xx Xx
Iniial
0% 0,350 0,01 0 0 0 0
Peste 3 zile
25% 0,440,02 0,310,00 1,340,01 0,250,02 0,130,01
50% 0,420,00 0,200,00 2,070,06 0,370,01 0,260,01
75% 0,430,01 0,110,02 3,980,74 0,470,06 0,360,03
Peste 6 zile
25% 0,600,02 0,440,01 1,360,03 0,360,01 0,090,01
50% 0,440,01 0,210,00 2,050,05 0,550,04 0,170,01
75% 0,260,03 0,060,00 4,130,40 0,690,07 0,250,01
Peste 9 zile
25% 0,770,05 0,560,04 1,350,01 0,340,04 0,090,01
50% 0,480,08 0,230,04 2,100,13 0,580,12 0,170,01
75% 0,080,00 0,020,00 4,721,26 0,340,04 0,260,02
Peste 12 zile
25% 1,110,21 0,830,16 1,320,01 0,390,08 0,080,01

110
50% 1,010,30 0,500,15 2,010,03 1,220,17 0,170,01
75% 0 0 0 0 0
Peste 15 zile
25% 1,540,43 1,160,32 1,330,01 0,350,06 0,080,01
50% 1,040,29 0,510,14 2,000,02 0,540,05 0,170,01
75% 0 0 0 0 0
Peste 18 zile
25% 1,310,34 0,980,26 1,340,01 0,130,01 0,090,01
50% 0,920,24 0,460,13 2,040,04 0,440,02 0,170,01
75% 0 0 0 0 0

Pe apele reziduale de la complexele de bovine se pot obine cantiti nalte de


biomas (Tab. 39).
Ca i n cazurile cu apele de la complexele avicole i de porcine, extragerea a
25% din suspensie contribuie la obinerea celei mai nalte cantiti de biomas,
cea mai nalt productivitate atingnd la a 15-a zi 2,36 g/l. Acelai lucru l putem
spune i n cazul productivitii de dup diluie. Coeficientul de diluare rmne
practic neschimbat n toate variantele analizate.
Tabelul 39
Cultivarea Spirulinei pe apele reziduale de la bovine dup metoda
cultivrii continue
Indicii analizai
Productivitatea Productivitatea Coeficientul Viteza de Viteza de
Procentul
iniial, g/l dup diluie, de diluare cretere a scurgere a
biomasei
(BAU) g/l (BAU) () culturii () mediului
extrase
nutritiv ()
Xx Xx Xx Xx Xx
Iniial
0% 0,350 0,01 0 0 0 0
Peste 3 zile
25% 0,580,03 0,430,02 1,360,01 0,460,04 0,130,01
50% 0,580,02 0,290,01 2,020,03 0,590,04 0,250,01
75% 0,610,00 0,150,01 4,170,43 0,760,21 0,380,01
Peste 6 zile
25% 0,840,07 0,620,06 1,350,02 0,420,03 0,090,01
50% 0,680,07 0,330,03 2,020,03 0,610,04 0,170,01
75% 0,420,05 0,090,01 4,470,25 0,860,03 0,260,01
Peste 9 zile
25% 1,230,08 0,900,058 1,350,02 0,420,07 0,090,01
50% 0,420,06 0,210,03 2,020,05 0,250,02 0,170,01
75% 0,210,04 0,040,01 5,191,16 0,570,02 0,260,01

111
Peste 12 zile
25% 1,680,26 1,250,19 1,330,01 0,360,08 0,080,01
50% 0,670,10 0,330,05 2,010,03 0,900,04 0,170,01
75% 0 0 0 0 0
Peste 15 zile
25% 2,360,46 1,770,35 1,340,01 0,370,03 0,080,01
50% 0,690,09 0,340,04 2,010,04 0,530,03 0,170,01
75% 0 0 0 0 0
Peste 18 zile
25% 2,300,31 1,720,4 1,340,01 0,190,03 0,080,01
50% 0,630,04 0,310,02 2,010,05 0,460,04 0,170,01
75% 0 0 0 0 0

Valorile vitezei de cretere a culturii sunt n descretere de la a 3-a zi. Viteza


de scurgere a mediului la concentraia dat oscileaz puin, dar practic are aceeai
tendin ca i n cazul vitezei de cretere a culturii. La extragerea a 50% obineam
o cantitate minim de biomas, ce nu depea 0,69 g/l i care pn la sfritul
experienelor scade, concomitent i n cazul productivitii de dup diluare. Vi-
teza de cretere a biomasei comparativ cu extracia precedent este mai mare,
atingnd 0,896 la a 12-a zi. La extragerea dat se observ o oscilare a valorilor
vitezei de scurgere n direcia reducerii lor. Extragerea a 75% din biomas nu
poate fi recomandat, dat fiind faptul c nu permite obinerea unei productiviti
satisfctoare.
n continuare am analizat cantitatea total de biomas de Spirulin cultivat
pe diverse ape reziduale, ca urmare a utilizrii metodei de cultivare continu
(Tab. 40).
Tabelul 40
Cantitatea total a biomasei de Spirulina platensis crescut pe apele
reziduale de la complexele de porcine, bovine i avicole dup metoda
cultivrii continue
(g/l BAU)
Cantitatea biomasei Apele reziduale
extrase 25% 50% 75%
Xx Xx Xx
Bovine 4,01 0,16 2,13 0,10 1,00 0,05
Porcine 2,36 0,10 2,64 0,11 0,60 0,03
Avicole 5,92 0,27 2,45 0,12 0,81 0,03

Extragerea a 25% din biomas i adugarea mediului compus din ape rezidu-
ale contribuie la obinerea celei mai mari cantiti de biomas, n cazul utilizrii
apelor reziduale de la complexele de bovine i cele avicole. n acest caz obinem

112
o biomas de 6,21 ori mai mare dect la cultivarea prin metoda periodic, pe o
perioad de 20 de zile, n varianta cu apele reziduale de la complexele avicole.
Acelai lucru se observ i la cultivarea Spirulinei pe mediu nutritiv alctuit pe
baza apelor reziduale de la complexele de bovine i porcine, obinnd un spor
de 1,06 i, respectiv, de 1,74 ori fa de metoda cultivrii periodice. Extragerea a
50% din biomas duce la obinerea unei cantiti mai nalte de biomas de Spiru-
lin doar n cazurile folosirii mediului compus din apele reziduale de la porcine.
Dac comparm rezultatele cu metoda de cultivare periodic, observm c att
n cazul utilizrii mediului compus din ape reziduale de la porcine, ct i n cazul
celui de la complexele avicole obinem o cretere de 1,95 i 2,57 ori. La extra-
gerea a 75% din biomas obinem cantiti nensemnate pentru toate variantele
analizate, fapt ce confirm ineficiena extragerii date.

113
CAPITOLUL IX
COLECII DE ALGE

9.1. Caracteristica general a coleciilor de alge


Coleciile de alge prezint o modalitate de conservare a genofondului algal i
de meninere a culturilor de alge valoroase care pot fi utilizate n procesul de cul-
tivare. Astfel, pe plan mondial au fost elaborate cu succes multe strategii, proiecte
care permiteau identificarea i nregistrarea coleciilor de alge ntr-o baz global
de date. Actualmente sunt cunoscute mai multe surse tiinifice care menionaz
coleciile de alge de pe diferite continente.175-178
175176177178
Una dintre cele mai importante baze
de date electronice a coleciilor mondiale de alge este cea a Federaiei Mondiale
a Coleciilor de Culturii.179 Actualmente, n registrul bazei de date a acestei Fede-
raii sunt nregistrate 3060 de specii i varieti de alge meninute n condiii de
colecii. Pe sate-ul oficial al Federaiei Mondiale a Coleciilor de Culturi sunt n-
registrate coleciile de alge, dintre care: n Europa 47 (majoritatea n Frana (6)
i n Federaia Rus (5); pe continentul american 15; n Asia 38 (majoritatea
n Thailanda 8); n Australia 8 colecii.
Datele de contact privind coleciile mondiale de alge sunt prezentate n Ane-
xa nr. 4.
9.2. Tehnologii de meninere a algelor n colecii
La momentul actual se utilizeaz un spectru larg de procedee ce permit a pstra
culturile de microalge. Printre acestea cele mai importante sunt: liofilizarea, crio-
conservarea, pstrarea algelor n stare de anhidrobioz, pe mediile lichide, agariza-
te, n azotul lichid .a. Fiecare din metodele utilizate are particulariti specifice.

9.2.1. Meninerea pe medii nutritive solide i lichide


.. i .. 180 propun utilizarea tehnologiilor cla-
sice de meninere al algelor n colecii, care prevd inocularea lor pe medii nu-
tritive solide (agarizate) sau lichide sterile. ns, cea mai corect i mai practic
175
James D.E. Culturing algae. U.S.A., 2012. 27 p.
176
Egardt J., Lie ., Aulie J., Myhre P. Microalgae a market analysis carried out as part of
the Interreg KASK IVA project: Blue Biotechnology for Sustainable Innovations, Blue Bio.
Sweden, 2013. 79 p.
177
Catalogue of the national culture collection (UKNCC). List of algae and protozoa. USA,
2001. 231 p.
178
Belkinova D.S., Kirjakov I.K., Mladenov R.D. Catalogue of the strains of plovdiv algal
culture collection (PACC). // Trav. Sci. Univ. Plovdiv, Plantarum (2), 2002, 38(6), p.3-78.
179
http://www.wfcc.info
180
.., ..
. // -
, 1983, .57-74.
114
metod este inocularea pe medii solide. Dup inocularea algelor probele se
expun la lumin pe 1-1,5 sptmni. Culturile meninute pe medii lichide tre-
buie s fie agitate periodic. Dup ce algele cresc bine, lucru care se observ
prin colorarea agarului i formarea unei pelicule, baloanele i vasele Pietri se
expun n frigider la temperatura de 6-10C cu iluminarea redus de 300-500 lux
generat de lmpi luminescente. n aa mod, culturile pot fi meninute un timp
ndelungat i necesit doar uneori (peste 1,5-2 luni) inocularea n cazul uscrii
mediilor solide.
.. i .. 181 propun, practic, aceeai tehnologie, care
ns se deosebete de cea precedent. Deosebirea principal este c dup ino-
cularea culturii probele se expun, timp de cteva zile, la iluminare continu de
2000 lux i la temperatura de 25C. Ulterior culturile se menin pe vitrine de
sticl la 15C i iluminare timp de 8 ore pe zi. Inocularea culturilor se realizea-
z peste fiecare 2-3 luni. Se propune ca fiecare specie s fie meninut pe mediu
solid i lichid.
.. 182 propune meninerea culturilor de alge n condiii vari-
ate, care difer n funcie de preferinele lor. Astfel, tulpinile mezofile trebuie
meninute n frigider la temperatura de 4-6C, cele termofile la temperatura
camerei. Recultivrile pot fi efectuate peste 3 sptmni. Autorul propune pen-
tru unele culturi de alge inocularea s fie efectuat o dat n lun la temperatura
de 24C i iluminarea de 6000 lux.
.. i .. 183 menioneaz c la meninerea algelor n
colecii se aplic inocularea periodic (peste fiecare 2-3 luni) pe mediu nutritiv.
Dup inoculare culturile sunt pstrate, timp de 32 sptmni, n condiii de ilu-
minare cu intensitatea de 3000-4000 lux (10-12 ore din 24 ore) la temperatura
de 25C. n continuare culturile se pstreaz n condiii de iluminare natural i
la temperatura de 10-15C.
.. 184 susine c culturile de alge cianofite axenice pot fi
pstrate n dulapuri de sticl la iluminare natural (sau la 300-500 lux) la tem-
peratura camerei pe medii lichide sau solide (1% agar). Inocularea se produce
o dat n dou luni. Iar culturile infectate bacteriologic se pstreaz pe medii
lichide i minerale n termostat la temperatura de 20C i se inoculeaz de dou
ori pe an.
181
.., .. -
. // -
, 1983, .1-27.
182
.. .
// , 1983, .74-80.
183
.., .. K -
. // ,
1983, .81-86.
184
.. - -
. // , 1983, .86-91.

115
D.S. Belkinova 185 i coautorii la fel menioneaz c culturile algale (fiecare
specie) se menin n dou eprubete cu medii solide (agarizate 1,7-2%) nclinate
n termostat la temperatura de 12C i intensitatea luminii sczut (600 lux);
nsmnarea se efectueaz o dat pe an. Culturile pot fi meninute i pe medii
lichide, n dou variante, la temperatura camerei (17-25C) i la lumina natura-
l; inocularea se face de dou ori pe an.

9.2.2. Meninerea algelor prin crioconservare


Pentru aplicarea acestei metode este necesar s dispunem de: azot lichid i
un vas special (Dewar) amenajat cu polie pentru meninerea cutiilor de depo-
zitare; un container de depozitare Nalgene ce menine 1C; congelator (care
congeleaz la -80C); o cutie de depozitare ptrat (care va menine 81 tuburi
de 2 ml ce permit depozitarea azotului); loc steril; o centrifug cu rotator adap-
tat pentru tuburile de 2 ml. Crioconservarea tulpinilor de alge solide (agatizate
nclinate) se realizeaz n modul urmator:
1. Se prepar medul nutritiv agarizat steril, pe care se menine alga. n tubul de
crioconservare (de 2 ml) se toarn 1 ml mediu agarizat i tubul se nclin. Dup
solidificare se inoculeaz alga i se expune n condiii normale de cretere;
2. Mediul nutritiv se dilueaz cu metanol la 5% (v/v) la adugarea meta-
nolului probele se expun la o iluminare redus;
3. Containerul de depozitare Nalgene ce conine izopropanol se plaseaz
ntr-un frigider (la temperatura de 4C) cu cel puin o zi nainte de a fi utilizat
pentru crioconservare;
4. Cutia de depozitare a criotuburilor se plaseaz n vasul Dewar ce conine
azot lichid, cu cel puin cteva ore nainte de fi utilizat;
5. Mediul nutritiv cu etanolul, pstrat la latemperatura camerei, se adaug
ncet, astfel nct agarul s fie nclinat n flaconul ngheat pn cnd volumul
total de material n flacon atinge 1,5-1,8 ml. La introducerea algelor n flacon
culturile trebuie s rmn pe mediu solid.
6. Probele se expun la rece. n vasul scos din frigider se plaseaz flacoanele
i se expun ntr-un congelator la -80C.
7. Dup cel puin 1,5 ore (nu se recomand a le depozita peste noapte) de
pstrare n congelator (la temperatura de -80C), vasul de congelare este scos.
Cutia de depozitare este imediat extras de pe suport. Apoi flacoanele congelate
se transfer n cutia din vasul Dewar, unde sunt depozitate pe termen lung sau
scurt. Cutia din vasul Dewar nu trebuie s rmn fr azot lichid. La necesita-
te, cutia cu probele de alge poate fi eliminat din vasul Dewar pentru puin timp
(mai puin de 3 minute), astfel ca temperatura criotubului s nu fi mai mic de
-130C. Pentru activarea algelor crioconservate flacoanele ngheate se exclud
185
Belkinova D.S., KirjakovI. K., Mladenov R.D. Catalogue of the strains of plovdiv algal
culture collection (PACC). // Trav. Sci. Univ. Plovdiv, Plantarum (2), 2002, 38(6), p.3-78.

116
din vasul Dewar, se expun n ap cald (de 37C) timp de cteva minute (n
general, mai puin de 2 minute), se elimin lichidul expus deasupra mediului
solid. Cultura se inoculeaz n mediu proaspt pregtit.186-188
186 187 188

9.2.3. Meninerea algelor n colecii prin ahidrobioz


Anhidrobioza este starea organismului n care se stopeaz temporar funciile
vitale datorit deshidratrii pariale sau totale. Aceast stare se caracterizeaz
prin ncetinirea metabolismului. O definiie cantitativ a deshidratrii complete
este, probabil, uscarea pn la <0,1g H2O g-1 de mas uscat, fiind echivalentul
uscrii aerului pn la 50% la umiditatea relativ de 20C. Aceast cantitate este
valabil doar pentru celulele izolate n condiii de laborator. Adaptarea organis-
melor la anhidrobioz (deshidratare) se bazeaz pe capacitatea acestora de a echi-
libra potenialul apos intern n raport cu mediul nconjurtor uscat i capacitatea
de a-i restabili funciile normale dup rehidratare.189
Procedeul de meninere a algelor n starea de anhidrobioz se realizeaz astfel:
biomasa algal (0,1 ml suspensie) colectat de pe mediu nutritiv lichid (aflat la
sfritul fazei exponeniale de cretere) se deshidrateaz la temperatura de 30-
60C n termostat timp de 24 ore. Dup aceasta biomasa se expune n flacoane
nchise ermetic i se pstreaz n stare uscat n termostat la umiditatea aerului
de 8-14% (umiditatea variaz n funcie de specie) i la temperatura de 15-20C.
Conform acestui procedeu, algele pot fi pstrate timp de 6 ani, iar dup aceasta
pot fi reactivate.190-192
190 191 192

Aceast metod de meninere a algelor n colecii este mai ieftin i accesibil,


deoarece nu necesit asigurarea cu spaiu mare pentru culturi, iluminare i nu este
necesar s efectum inocularea periodic pe medii nutritive (lichide sau solide).

186
Day J.G., Brand J.J. Cryopreservation methods for maintaining cultures. // Algal culturing
tehniques, 2005, p.165-187.
187
Day J.G. Cryopreservation of Microalgae and Cyanobacteria. Cryopreservation and
Freeze-Drying Protocols. USA, 2007, p.141-151.
188
http://www.utex.org/protocols.aspx
189
Alpert P. The limits and frontiers of desiccation tolerant life. Integr. // Comp. Biol.,
45:685-695, 2005.
190
Crowe J.H, Hoekstra F.A, Crowe L.M. Anhydrobiosis. // Annu Rev Physiol., 1992, 54,
p.579-599.
191
.. . // -
, : . -
(, 27-30 2006 .). - , 2006, c.173-174.
192
.. -
: . ... . . . , 2008. 25 .

117
Bibliografie
1. Abbott I.A., Cheney D.P. Comercial uses of algal products: introduction und
bibliography. // Selected papers in phycology, 1982, vol. 2, p.779-787.
2. Albergoni V., Piccini E., Coppellotti O. Response to heavy metals in orga-
nism. Excretion andaccumulation of physiological and nonphysiological
metals in Euglena gracilis. // Comparative Biochem. Physiol., 1980, vol.
67, no. 2, p.121-127.
3. Algal Biotehnology. Progres in biotehnology of photoautotrophic microor-
ganism. // 6 Intern. Conf. on applied algology, 1993. 84 p.
4. Alpert P. The limits and frontiers of desiccation tolerant life. Integr. //
Comp. biol., 2005, 45:685-695.
5. Atlas R.M. Handbook of microbiological media fourth edition. New York,
2010. 2063 p.
6. Baldia S.F., Nishijima T., Hata Y., Fucami K. Growth characteristics of
blue green alga Spirulina platensis for nitrogen utilization. // Nippon Su-
isan Gakkaishi., 1991, 57, no 4, p.645-654.
7. Baldia S.F. Fukami K., Nuishijima T., Hata Y., Growth response of Spiru-
lina platensis to somo physico- chemical factors and the kinetics of pho-
sphourus utillization. // EISH, 1995. no 2, p.351-335.
8. Bealy A., Kato T., Ota Y. Spirulina (Artrospira) potenial aplication as an
animal fud supliment. // J. Appl., Phycol., 1996, 8, no 4-5, p.143-147.
9. Behrens P.W. Photobioreactors and fermentors: the light and dark sides of
growing algae. // Algal Culturing Techniques, 2005, p.189-203.
10. BelcherH., Swale E. Culturing Algae, a guide for schools and colleges.
U.S.A., 1982. 25 p.
11. Belkinova D.S., Kirjakov I.K., Mladenov R.D. Catalogue of the strains of
plovdiv algal culture collection (PACC). // Trav. Sci. Univ. Plovdiv., Plan-
tarum (2), 2002, 38(6), p.3-78.
12. Besker E.W. Development of spirulina research in developing county india.
// Spirulina Algae of life. // Bull. Inst. Oceanorg.,1993, no12, p.141-155.
13. Besker E.W. Spirulina alga of life. // Bull. Inst. Oceanolorg., 1993, no12,
p.141-155.
14. Biodiesel Production. BioEnergy Research 1(1):20-43.
15. Blidari C.F., Petru-Vancea A. Biotehnologie. Lucrri practice de laborator.
Oradea, 2006. 103 p.
16. Bogdan A.T., ogoe I., Cmpeanu Gh., Ivana S., Enache T., Britareanu
S., Iudith I., Popescu A. Microbiologia alimentelor. Vol 1. Bucureti, 2011.
294 p.
17. Brown R.M., Jr., Bischoff H.W. A new and useful method for obtaining
axenic cultures of algae. // Phycol. Soc.Amer. News Bull., 1962, vol. 15,
p.43-44.

118
18. CachitaCosma D., Deliu C., Rakosy- Tican L., Aedelea A. Tratat de bio-
tehnologie vegetal. Vol. I. Cluj- Napoca: Dacia, 2003, p.10-18.
19. Carolina Biological Supply Company. Culturing Algae. U.S.A., 2012. 27 p.
20. Catalogue of the national culture collection (UKNCC). List of algae and
protozoa. USA, 2001. 231 p.
21. Cru I. Cultura algelor pentru biomas i principii active: Note de curs,
lucrri de laborator. Bacu: Universitatea din Bacu, 2007. 99 p.
22. Chaudhury B.K. De S., Bhattacharyya D.K. Effect of nitroyen sources on
linolenic acid accumulation in Spirulina platensis. //Jaocs, 1995, vol. 76,
no 1, p.153-155.
23. Chiu I. Biochimie. Vol. I. Timioara: Mitron, 1999. p.94-111.
24. Ciferri O. Spirulina, the edible microorganism. In: Micobiological reviews,
1983, p.567-569
25. Cozza K.L. Costa J.A.V. Lipdios em Spirulina. Vetor Rev. Cienc. Exatas
Eng., 2000, no 10, p.69-80.
26. Crowe J.H, Hoekstra F.A, Crowe L.M. Anhydrobiosis. // Annu. Rev. Phy-
siol., 1992, 54, p.579-599.
27. Day J.G. Cryopreservation of Microalgae and Cyanobacteria. Cryopreser-
vation and Freeze-Drying Protocols, USA, 2007, p.141-151.
28. Day J.G., Brand J.J. Cryopreservation methods for maintaining cultures. //
Algal culturing tehniques, 2005, p.165-187.
29. Day J.G., Lukavsk J., Friedl Th., Brand J.J., Campbell Ch.N., Lorenz M.,
Elster J. Pringsheims living legacy: CCALA, CCAP, SAG and UTEX cul-
ture collections of algae. Nova Hedwigia, 2004, 79, no1-2, p.27-37.
30. Dobrojan S. Modificrile morfofiziologice i biochimice ale algei Spirulina
platensis (Nordst.) Geitl. cultivate pe ape reziduale i utilizarea ei: Tez de
doctor n tiine biologice. Chiinu, 2011.
31. Dobrojan S., alaru V., alaru V. Utilizarea apelor reziduale de la com-
plexele zootehnice la cultivarea industrial a algei Spirulina platensis
(NORDST.) Geitl. // Studia Universitatis. Seria ,,tiine ale naturii, 2009,
nr.6 (26), p.46-50.
32. Dobrojan S., Gorbatenco C., Dobrojan G., Stratulat I. Cultivarea algei Nos-
toc flagelliforme pe medii obinute pe baza deeurilor de la complexele
zootehnice. // Studia Universitatis, 2012, nr.1 (51), p.19-22.
33. Dobrojan S., Dobrojan G., alaru V. Cultivarea algei cianofite Spirulina
platensis utiliznd ca mediu apele reziduale de la complexele de porcine. //
International Conference of young Researches, 2010, nr.8, p.60.
34. Dobrojan S., alaru V.M., alaru V.V., Dobrojan G., Stratulat I. Procedeu
de preparare a mediului nutritiv pentru cultivarea algei Spirulina platensis
(Nordst.) Geitl. // Al 3-lea Simpozion. Lacurile de acumulare din Romnia.
Tipologie, Valorificare, Protecie, 2012, p.3.
35. Droop M.R. A procedure for routine purificationof algal cultures with anti-
biotics. // Brit. Phycol. Bull., 1967, no3, p.295.

119
36. Dubinsky Z. Productivity af algae under natural, Handboc of microalgal mass
culture. // Ed. Richmond A- Boca Raton CRC. Press, 1986, p.101-115.
37. Egardt J., Lie ., Aulie J., Myhre P. Microalgae a market analysis carried
out as part of the Interreg KASK IVA project: Blue Biotechnology for Sus-
tainable Innovations, Blue Bio. Sweden, 2013. 79 p.
38. Faintuch B. L., Sato S., Aquarone E., Use of different nitrogen sources in
the production of biomass of Oscillatoria limnetica. // Afrev. Microbiol.
1992. 23, no1, p.32-36.
39. FAO. Manual on the production an duse of live food for aquaculture. Rome,
FAO, 1996. 295 p.
40. Findeneg J. Factors controlling primary prodyctivity, especially withregard
to water replenishment, stratification and mixing. // Proceendingsof the 1
B. P. Symposium on Prymary Productivity in Aquatic Enviroments. Pallan-
za, 1965, vol. 18, p.105-119.
41. Fogg G.E. Phosporus in primary aquatic plants. // Water Res., 1973, 7, vol.
12, p.77-89.
42. Frana M.B., Panek A.D., Eleutherio E.C. Oxidative stress and its effects
during dehydration. // Comp. Biochem. and Phys., Part A, 2007, 146:621-
631.
43. Geider R.J., Maklntire H.L., Kana T.M. A dynamic of photoadaptation in
phytoplankton. // Limnol. Oceanorg, 1996, no1, p.1-15.
44. Gherhardt S. Mangan effekte in photosynthetischen reaktionen von Anacys-
tis. // Ber., dt. bot. Ges., 1966., no11, p.63-68.
45. Guillard R.R.L. Purification methods for microalgae. // Algal culturing te-
chniques, 2005, p.117-133.
46. Guillard R.R.L., Morton S.L. Culture methods. // Hallegraeff G.M., Ander-
son D.M., and Cembella A.D., (eds). Manual on Harmful Marine Microal-
gae. UNESCO, Paris, 2003, p.77-97
47. Heaney By S.I., Jaworsk G.H.M. A simple separation technique for puri-
fying micro-algae. // Br. phycol., 1977, no12, p.171-174.
48. Hopkins E., Wann F. Relation of hydrogen-ion concentration to growth of
chlorella and to availbility of iron. // Bot. Gaz., vol. 81, no 4, 1962, p.355-
376.
49. Iachim M. Rolul algelor i al unor plante vasculare n procesul de epurare
biologic a apelor reziduale de la complexele zotehnice: Tez de doctorat.
Chiinu, 2007, p.131.
50. James D.E. Culturing algae. U.S.A., 2012. 27 p.
51. Jeng D.K.H., Kaczmarek K.A., Woodworth A.G., Balasky G. Mechanism
of microwave sterilization in the dry state. // Appl. Environ. Microbiol.,
1987, no 53:2133, p.7.
52. Kawachi M., Nol M.H. Sterilization and sterile technique. // Algal Cultu-
ring Techniques, 2005, p.65-81.

120
53. Keller M.D., Bellows W.K., Guilhd R.R.L. Microwave treatment for steri-
lization of phytoplankton culture media // J. Esp. Mar. Bid. Ed., 1988, vol.
117, p.279-283.
54. Kyle D.J. Specialty Oils from Microalgae: Perspective, in Biotechnoloyy
of Plant Fats and Oils. // Edited by J.Rattray, American Oils Chemists So-
ciety, Champaiyn, 1991, p.130-143.
55. Laing I. Cultivation of marine uniclular algale. Lowestoft, 1991. 31 p.
56. Lcia Helena Pelizer, J.C.M. Carvalho, Sunao Sato, Iracema de Oliveira
Moraes, Spirulina platensis growth estimation by pH determination at di-
fferent cultivations conditions. // Journal of Biotechnology, 2002, vol. 5,
no. 3.
57. Manabe E., Morio, and T. Hiroyuki, I.D. Naoka, S. Koji, and M.Tadashi.
Influrnce of ammonium chloride on growth and fatty acid production by
Spirulina platensis. // Appl. Biochem. Biotechnol, 1992, 34-35: 274-281.
58. Manabe E., Hiroyuki and H. Morio. Spirulina Culture for Enhanced Manu-
facture of Linolenie Acid. // Chem. Abstr., 1992, 116:82258.
59. Neamu G., Cmpeanu Gh., Socaciu C. Biochimie vegetal. Bucureti:
Editura Didactic i Pedagogic, 1993, p.244-264.
60. Prask J., Plocke D. A role for zinc in the cytoplasmic ribosomes of Euglena
gracilis. // Plant Physiol., 1971, vol. 48, no2, p.150-155.
61. Richmond A. Handbok of microalgal mass culture. // Boca Raton: CRC
Press, 1996, p. 528.
62. Richmond A. Handbook of microalgal mass culture. CRC Press, Boston,
1990.
63. Richmond A. Handbook of microalgal culture biotechnology and applied
phycology. Blackwell Science, Oxford, 2004.
64. Sasson A. Biotehnologii i dezvoltare. Bucureti: Editura Tehnic, 1993.
303 p.
65. Schenk P.M., Thomas-Hall S., Stephens E., Marx U.C., Mussgnug J.H.,
Posten C., Kruse O., Hankamer B. Second Generation Biofuels: High-Effi-
ciency Microalgae for Biodiesel Production. // Bio Energy Research, 2008,
no1(1), p.20-43.
66. Simiona I. Bacteriologie general. Bucureti, 2005.
67. Solp H., Starr M.P. Principles of isolation, cultivation and conservation of
bacteria. // The Procaryotes. Vol. 1. Vienna: Springer-Verlag, 1981. p.135-
175.
68. Stancic M. Biochimie vegetal. Bucureti: Editura Didactic i Pedagogi-
c, 2003, p.43-78.
69. Tarmure C. Biochimie structural i metabolic. Cluj- Napoca: Dacia,
1996, p.43-58.
70. Tel Or. E., Stewart W. Manganes and photosynthetic oxygen evolutio by
algae. // Nature, 1975, vol. 258, no5537, p.715-716.

121
71. Toma F. Bacteriologie general. Curs. Bucureti, 2005. 70 p.
72. Usturoi R., alaru V. Nostoc flagelliforme surs de substane biologic
active. // Conferina tiinific naional cu participare internaional Pro-
bleme actuale ale microbiologiei i biotehnologiei, consacrat celei de-a
50-a aniversri de la fondarea Seciei de Microbiologie. Chiinu, 2009,
p.158-160.
73. Vollenwaider R. Okologische Untersuchungen von planktischen Algenan
experimenteller Grundlage. // Schweiz. Z. Hydrobiol., 1950, Bd. 12, H.2,
s.194-212.
74. Vonshak, A. Spirulina platensis (Arthrospira) - physiology, cell biology
and biotechnology. Taylor & Francis, Londres, 1996.
75. Watanabe M.M., Suda S., Kasai F., Sawaguchi T. Axenic cultures of three
species of Microcystis (Cyanophyta= Cyanobacteria). // Bull. Jap. Fed.
Culture Coll., 1985, p.57-63.
76. Watanabe, M.M., et al. Purification of freshwater picoplanktonic cyanobac-
teria by pour-plating in ultra-low-gelling-temperature agarose. // Phycol.
Res., 1998, p.71-75.
77. West J.A. Long-term macroalgal culture maintenance. // Algal Culturing
Techniques, 2005, p.157-163.
78. Wnse all rights reserved. Working with algale and cyanobacteria. U.S.A.,
2012.10 p.
79. Yamaguchi K., Mori E., Tamura G. Nitrite reductase in the cyanobacterium
Spirulina platensis. // Agric Biol. Chem., 1985, no10, p.3061-3002.
80. . . : ,
1983. 263 .
81. .., .., .., .., -
.., .., .., .., ..
. , 2005. 640 .
82. .., .. -
. ..
. // . .,
1983, c.92-104.
83. . ., . . . . . . 200 .
84. .., .. -
. // -
. // . .
., 1982, . 185, c.137-145.
85. .. . : -
, 1972. 336 .
86. .., .., ..
. a, 2000.
150 .

122
87. .. -
. : , 1992. 192 .
88. .. . :
, 2004, c.4-64.
89. .., .. Spirulina platensis
Tetraselmis viridis -
. B: M, 2005, . 70, .9-11.
90. ..
Spirulina platensis
(Nordst.) Geitl. . // M, 2002, .
60, .48-52.
91. .. Spirulina platensis (Nordst.)
Geitl. -
. // . . . . - . , 2003, 1, c.128-
132.
92. .. Spirulina
platensis (NORDST.) GEITL -
. // M, 2003, . 64, .78-81.
93. .. -
-
. // . , 1981,
c.139-147.
94. .., .., .. . . -
. : , 1989, .605.
95. .., .., ..

. //
. , 1980, . 140-157.
96. .. . ,
1982. 198 .
97. .. - -
-
. // . , 1981, .17,
3, .121-122.
98. .., .. . , 1965. 272 .
99. .. .
// . ., 1990, . 75, 4, .454-461.
100. .., .. -
. , 1962. 58.
101. .., ..
. // -
, 1983, .57-74.

123
102. ..; ..; .. -
: . :
- , 2008. 152 .
103. .., .. Spirulina
platensis (NORDST.) GEITL. . // -
M, 2002, . 60, c.21-26.
104. . . - -
. // -
, 1983, .86-91.
105. .., .. . : -
, 1984. 160 .
106. .., .., ..

Dunaliella salina. // , 2007, . 74, .21-22.
107. C.. Spirulina platensis
(NORDST.) GEITL. . // , 2007,
74, c.18-20.
108. .., .. -
-
. // ,
1983, .1-27.
109. .. - . // , 1961, .15,
6, .1108-1128.
110. .. , . //
. . ., 1952, .3-92.
111. .. -
. // - -
. .-, 1965, c.12-32.
112. .., .. -
Melosira italica -
. // , 1959, .59. .126-130.
113. .. -
. ., 1985. 244 .
114. .., .. .
. : , 2002. 105 .
115. o .. . : - -
, 1990. 80 .
116. .. . //
. .1. , 1961, .50-54.
117. .. . ., 1980,
.1. 657 .

124
118. .., .. -
. , , . ;
-: -, 1997. 155 .
119. .. . // -
, 1945, .14, 4, .248-253.
120. .. - -
. , 1981. 210 .
121. .. Scenedesmus acutus
Meyen. // (), 1970, 9, .353363.
122. ..
- . // - . -
, 1969, .920.
123. ..
. B: , 2006, . 8,
.57-60.
124. .. . :
, 2012. 728 c.
125. .., .., .. -
. , 1997. 184 .
126. .. . -
,
, . ; : -
, 2012. 728 .
127. .. . : .
: , 2008. 199 c.
128. .. . // -
, 1974, .11, .3-19.
129. .., .. -
- .
// . (,
, ). ., 1991, .300-304.
130. .. -
. // -
, 1983, .74-80.
131. .. -
. // . ., 1972, . 57, 2, .182-
197.
132. .., .. .
- . // .
., 1972, .8, 3. .47-55.
133. ..
. // . ., 1985, .70, 8,
.1009-1018.

125
134. .. . . - , 2004. 336 .
135. ..
. // .
, 1989, .1-167.
136. .., .., .., .. P
Spirulina (Artrospira) Platensis (Nordst)
Gitler . // ,
2002, . 62, .62-66.
137. ..
(Gracilaria): . : , 2002, . 60, .57-70.
138. .. : -
. , 1983. 72 .
139. .. -
. // , 1977, . 38,
1, c.41-47.
140. .. . . : ,
1984. 280 .
141. .., .. -

// , 1981, .21, . 3, .523-528.
142. .. . //
, 1976, .5-16.
143. .. . -
: , 1978, .230-300.
144. .., .., .., .. -
. : , 1999. 264 .
145. .. a -
. // . Mo: ,
1984.
146. .., .., ..
Eustigmatos magnuis (B. Petersen) Hibberd
(Eustigmatophyta) Hantzschia amphioxis (Ehrenberg) Grunow in Cleve
et Grunow (Bacillariphyta) . // -
, 2009, 6 (100), c.609-610.
147. .. :
. // -
, 1985, .92-95.
148. .. .. .. .. ..
. . .. .. .. -
.. .. - -
. :
, 1975. 241 c.

126
149. .., .., .., .., -
.., .., .., ..,
.., ..
. , 1986. 65 .
150. .. . // , 1990,
.1-196.
151. .. .
. : , 2005. 128 .
152. .. . o -
Haematococcus pluvialis (Chlamydomonales) -
. B: M, 2008, . 76, .73-80.
153. .. .. .. -
-
(Cyanophita), // , 2002, 4, c.491-501.
154. .., ..
. , 1984. 336 .
155. .. 2: -
. B: , 2005, . 67, c.98-110.
156. .., . . -
Platimonas viridis Rouch. //
, 2006, . 70, .52-60.
157. .., .., .., .. -
-
. B: , 2008, . 9-18.
158. .. -
. , 1983. 240 .
159. .. .., .. .
55. .
// , 2001, 27, . 6, c.444-448.
160. .. , -
. :
, 2008. 128 .
161. .. -
( ). : , 1971.
162. ..
// , :
. - (, 27-30
2006 .). , 2006, .173-174.
163. ..
: . ... . . . ,
2008. 25 .

127
164. .., ..
K . //
, 1983, . 81-86
165. http://www.algaemax.eu/more-in-detail.html
166. http://www.utex.org/protocols.aspx
167. http://www.wfcc.info
168. http://www-cyanosite.bio.purdue.edu
169. http://gcm.wfcc.info

128
Anexa nr.1
Medii nutritive utilizate pentru cultivarea algelor
Chu 10 (g/l)
Ingredientul Cantitatea, g/l
Ca(NO3)2 0,04
K2HPO4 0,01
MgSO4*7H2O 0,025
Na2CO3 0,02
Na2SiO3*9 H2O 0,025
FeCl3*6 H2O 0,0008

Beneche
Ingredientul Cantitatea, g/l
MgSO4*7H2O 0,1
Ca(NO3)2 0,5
K2HPO4 0,2
FeC6H5O7 0,0033
C6H8O7 0,0033

Mediul nutrtiv Nr.6 (Gromov B.V., Titanova N.N.)


Ingredientul Cantitatea, g/l
KNO3 1
K2HPO4*3 H2O 0,2
MgSO4*7H2O 0,2
CaCl2*6H2O 0,15
NaHCO3 0,2
Soluie de microelemente 1 ml
pH Dup sterilizare se ajusteaz la 7,5-8 cu
ajutorul sol. de NaOH (de 10%)

129
Soluia de microelemente pentru mediul nutritiv Nr.6 (Gromov B.V., Tita-
nova N.N.)
Ingredientul Cantitatea, g/l
ZnSO4*7H2O 0,22
MnSO4 1,81
CuSO4*5H2O 0,08
NaBO3*5H2O 2,63
(NH4)6Mo7O24*4H2O 1
FeSO4*7H2O 9,3
CaCl2 1,2
Co(NO3)2*6H2O 0,02
EDTA (trilon B) 10

Mediul nutrtiv Nr.16 (Gromov B.V., Titanova N.N.)


Ingredientul Cantitatea, g/l
NaHCO3 16,8
K2HPO4*3H2O 0,5
NaNO3 2,5
K2SO4 1
NaCl 1
MgSO4*7H2O 0,2
CaCl2*6H2O 0,04
FeSO4 0,01
EDTA 0,08
Soluie de microelemente 1 ml

Soluie de microelemente pentru mediul nutritiv Nr. 16 (Gromov B.V., Tita-


nova N.N.)
Ingredientul Cantitatea, g/l
H3BO3 2,86
MnCl2 1,81
ZnSO4*7H2O 0,22
CuSO4*5H2O 0,08
MoO3 0,015

130
Mediul nutritiv Zarrouk
Ingredientul Cantitatea, g/l
NaHCO3 16,8
NaNO3 2,5
K2HPO4*3H2O 0,5
K2SO4 1
NaCl 1
MgSO4*7H2O 0,2
CaCl2*6H2O 0,04
FeSO4 0,01
EDTA 0,08
Soluie de microelemente 4 ml
pH 9,5

Soluie de microelemente pentru mediul nutritiv Zarrouk


Ingredientul Cantitatea, g/l
H3BO3 2,86
MnCl2*4H2O 1,13
ZnSO4*7H2O 0,222
NaMoO4*5H2O 0,39
Co(NO3)2*6H2O 0,049
CuSO4*5H2O 0,079

Mediul nutritiv Aiba i Ogawa (AO)


Se prepar prin combinaia soluiilor A+B (raport 1:1), pH 9,4-9,8
Soluia A
Ingredientul Cantitatea, g/l
NaCl 2
MgSO4*7H2O 0,4
K2SO4 2
CaCl2*2H2O 0,08
NaNO3 5
FeSO4*7H2O 0,02
Microelemente 2 ml

131
Saluia B
Ingredientul Cantitatea, g/l
K2HPO4 1
Na2CO3 8,04
NaHCO3 27,22

Microelementele pentru soluia A


Ingredientul Cantitatea, g/l
H3BO3 3,1
MnSO4 2,23
ZnSO4*7H2O 0,22
(NH4)6Mo7O24*4H2O 0,088
Co(NO3)2*6H2O 0,145
VOSO4*6H2O 0,054
Al(SO4)3K2SO4*2H2O 0,474
NiSO4(NH4)2SO4*6H2O 0,189
Cd(NO3)2*4H2O 0,154
Cr(NO3)2*7H2O 0,037
Na2WO4*2H2O 0,033
KBr 0,199
KI 0,083

Mediul nutritiv pentru Microcystis


Ingredientul Cantitatea, g/l
KNO3 2,02
K2HPO4*3H2O 0,348
MgSO4*7H2O 0,246
CaCl2*6H2O 0,11
NaCl 0,117
Tris (4 mM) 0,485
Soluie Fe+EDTA 1 ml/l
Soluie de microelemente 1 ml/l

132
Soluia de microelemente n mediul nutritiv pentru Microcystis
Ingredientul Cantitatea, g/l
Soluia I
H3BO3 2,86
MnCl2*4H2O 1,81
ZnSO4*7H2O 0,22
CuSO4*5H2O 0,06
MoO3 0,015
Soluia II
NH4VO3 0,023
K2Cr2(SO4)2*2H2O 0,096
NiSO4*7H2O 0,048
Na2WO4*2H2O 0,018
Ti2(SO4)3 0,04
Co(NO3)*6H2O 0,044

Soluia Fe+EDTA se cntrete 0,01 g/l FeSO4*7H2O + 0,08 g/l EDTA:


acestea se intorduc ntr-un balon i timp de 12 ore se adug aer fr CO2. Soluia
obinut poate fi utilizat mai mult de un an.

Mediul nutritiv pentru Coccopedia


Ingredientul Cantitatea, g/l
MgSO4*7H2O 0,2
K2HPO4*3H2O 0,3
CaCl2*6H2O 0,2
Na2SO4 0,4
(NH4)2SO4 0,4
NaCl 0,17
FeC6H5O7 0,003
Microelemente 5 ml/l
pH, dup sterilizare 2-3 se ajusteaz cu HCl sau H2SO4

133
Soluia de microelemente n mediul nutritiv pentru Coccopedia
Ingredientul Cantitatea, g/l
Soluia I
H3BO3 2,86
MnCl2*4H2O 1,81
ZnSO4*7H2O 0,222
CuSO4*5H2O 0,06
MoO3 0,018
NH4VO3 0,023

UTEX mediu nutritiv pentru Spirulina


Se adaug 500 ml soluie 1 + 500 ml soluie 2, mediul se sterilizeaz i se
pstreaz n frigider.
Soluia 1
Ingredientul Cantitatea, g/500 ml
NaHCO3 13,61
Na2CO3 4,03
K2HPO4*3H2O 0,5

Soluia 1 se sterilizeaz prin autoclavare.

Soluia 2
Ingredientul Cantitatea, g/500 ml
NaNO3 2,5
K2SO4 1
NaCl 1
MgSO4*7H2O 0,2
CaCl2*2H2O 0,04
P-IV soluie metalic 6 ml
Chu-soluie de microelemente 1 ml
Vitamina B12 1 ml

134
P-IV soluie metalic
Ingredientul Cantitatea, g/l
Na2EDTA*2H2O 0,75
FeCl3*6H2O 0,097
MnCl2*4H2O 0,041
ZnCl2 0,005
CoCl2*6H2O 0,002
Na2MoO4*2H2O 0,004

Chumicroelemente
Ingredientul Cantitatea, g/l
CuSO4*5H2O 0,02
ZnSO4 *7H2O 0,044
CoCl2*6H2O 0,02
MnCl2*4H2O 0,012
Na2MoO4*2H2O 0,012
H3BO3 0,62
Na2EDTA 0,05

Vitamina B12
Soluia de cianocobalamin se ajusteaz pn la pH de 7,8 cu soluia bufer.
Soluia de cianocobalamin ajustat se filtreaz utiliznd filtru cu diametrul de
0,45 .
Ingredientul Cantitatea, g/200 ml
Soluie bufer (Sigma H-3375) 2,4
Cianocobalamin 0,027

Mediul nutritiv Allen


Ingredientul Cantitatea, g/l
Tampon Hepes 2,3
NaNO3 1,5
P-IV soluie metalic 1 ml
K2HPO4*7H2O (6 g/l) 5 ml

135
MgSO4*7H2O (6 g/l) 5 ml
Na2CO3 (4 g/l) 5 ml
CaCl2*2H2O (2,5 g/l) 10 ml
Na2SiO3*9 H2O (4,64 g/l) 10 ml
C6H8O7 (4,8 g/l) 1 ml
pH 7,8
P-IV soluie metalic
Ingredientul Cantitatea, g/l
Na2EDTA*2H2O 0,75
FeCl3*6H2O 0,097
MnCl2*4H2O 0,041
ZnCl2 0,005
CoCl2*6H2O 0,002
Na2MoO4*2H2O 0,004
Mediul nutritiv Nawawy
Ingredientul Cantitatea, g/l
K2HPO4*3H2O 0,3
MgSO4*7H2O 0,2
K2SO4 0,2
CaCO3 0,1
Glucoz 2
FeCl3*6H2O, 1% (proaspt pregtit) 0,2 ml
Soluie de microelemente 1 ml
pH 7,5

Soluie de microelemente Nawawy


Ingredientul Cantitatea, g/l
H3BO3 2,9
MnCl2*4H2O 1,81
ZnCl2 0,11
CuSO4*5H2O 0,08
(NH4)6Mo7O24*4H2O 0,018

136
Mediul nutritiv Bonds modificat
Ingredientul Cantitatea, g/l
K2HPO4*3H2O 0,175
KH2PO4 0,075
MgSO4*7H2O 0,075
NaNO3 0,250
CaCl2 0,025
NaCl 0,025
K2SO4 0,2
FeCl3 1 pictur
Soluie de microelemente 1 ml
pH 7,5
Soluie de microelemente pentru mediul Bonds
Ingredientul Cantitatea, g/l
H3BO3 2,9
MnCl2*4H2O 1,81
ZnCl2 0,11
CuSO4*5H2O 0,08
(NH4)6Mo7O24*4H2O 0,018

Mediul nutritiv Fogg


Ingredientul Cantitatea, g/l
K2HPO4 0,2
MgSO4*7H2O 0,2
CaCl2 0,1
Na2MoO4 0,0001
MgCl2 0,0001
H3BO3 0,0001
CaSO4 0,0001
ZnSO4 0,0001
Fe-EDTA 1 ml
pH (se ajusteaz cu ajutorul HCl sau 7-7,5
NaOH)

137
Mediul nutritiv Allen i Arnon ce conine nitrai
Cantitatea, g/l
Ingredientul
Volumul
Soluia A 25 ml
Soluia B 6,25 ml
KNO3 0,253
NaNO3 0,21

Soluia A
Ingredientul Volumul, ml
MgSO4*7H2O (4%) 500
CaCl2*2H2O (1,2%) 500
NaCl (3,8%) 500
Soluie de microelemente 500

Soluia B
Ingredientul Concentraia, g/0,5l
K2HPO4 28

Soluia de microelemente pentru mediile nutritive Allen i Arnon


Concentraia, mg/l
Ingredientul
Volumul, ml
AA Fe-EDTA 160 ml
MnCl2*4H2O 360
MoO3 36
ZnSO4*7H2O 44
CuSO4*5H2O 15,8
H3BO3 572
NH4VO3 4,6
CoCl2*6H2O 8

Soluia de AA Fe EDTA 5,2 g KOH se dizolv n 186 ml apa distilat +


20,4 g Na2EDTA*2H2O. 13,7 g de FeSO4*7H2O se dizolv n 364 ml apa disti-
lat. Soluiile se amestec mpreun; astfel, se obine Fe-EDTA (pH-ul soluiei
este de 3,5).

138
Mediul nutritiv BG-11
Ingredientul Cantitatea, g/l
NaNO3 1,5
K2HPO4 0,04
MgSO4*7H2O 0,075
CaCl2*2H2O 0,036
C6H8O7 0,006
C6H8O7*Fe*H3N 0,006
EDTANa3Mg 0,001
Na2CO3 0,02
Soluie de microelemente 1 ml
pH (dup sterilizare se ajusteaz cu 7,1
1M NaOH sau HCl )

Soluia de microelemente pentru mediul BG11


Ingredientul Concentraia, g/l
H3BO3 2,86
MnCl2*4H2O 1,81
ZnSO4*7H2O 0,22
NaMoO4*2H2O 0,39
CuSO4*5H2O O,079
Co(NO3)2*6H2O 0,0494

Mediul nutritiv Z-8


Se prepar prin adugarea a 10 ml soluie 1 + 10 ml soluie 2 + 10 ml soluie 3
+ 1 ml soluie 4; se aduce pn la un litrul cu ap distilat; se autoclaveaz. PH
se situeaz ntre 6 i 7.
Soluia 1pentru mediul Z-8
Ingredientul Cantitatea, g/l
NaNO3 46,7
Ca(NO3)2*4H2O 5,9
MgSO4*7H2O 2,5

139
Soluia 2 pentru mediul Z-8
Ingredientul Cantitatea, g/l
K2HPO4 3,1
Na2CO3 2,1

Soluia 3 pentru mediul Z-8


Soluia 3 mediul Z-8 se prepar prin adugarea a 10 ml soluie A + 9,5 ml
soluie B; se aduce la 1 l cu apa distilat. Soluia A se prepar astfel: 2,8 g FeCl3
se dizolv n 100 ml 0,1N HCl. Soluia B se prepar astfel: 2,9 g EDTANa2 se
dizolv n 100 ml 0,1 N NaOH.
Soluia 4 pentru mediul Z-8
Ingredientul Cantitatea, g/100 ml
Na2WO4*2H2O 0,033
(NH4)6Mo7O24*4H2O 0,880
KBr 1,2
KI 0,83
ZnSO4*7H2O 2,87
Cd(NO3)2*4H2O 1,55
Co(NO3)2*6H2O 1,46
CuSO4*5H2O 1,25
NiSO4(NH4)2SO4*6H2O 1,98
Cr(NO3)3*9H2O 0,41
V 2O 5 0,089
KAl(SO4)2*12H2O 4,74
H3BO3 31
MnSO4*7H2O 1,6 g/l
Mediul nutritiv Gromov
Ingredientul Cantitatea, g/l
KNO3 0,1
K2HPO4 0,0667
MgSO4*7H2O 0,0333
ZnSO4*7H2O 0,000022
MnSO4 0,00181

140
CuSO4*5H2O 0,000079
NaBO3*4H2O 0,00263
(NH4)6Mo7O24*4H2O 0,001
FeSO4*7H2O 0,0093
CaCl2 0,0012
Co(NO3)2H2O 0,00002
EDTA 0,01

Mediul nutritiv Drew


Ingredientul Cantitatea, g/l
K2HPO4 0,2
MgSO4*7H2O 0,2
CaCl2 Urme
FeCl3 Urme

Mediu cu extract din sol


Ingredientul Cantitatea, g/l
K2HPO4 0,02
MgSO4*7H2O 0,02
Extract de sol 100 ml
Ap distilat 900ml

Extractul de sol se prepar prin dizolvarea a 1 kg sol de grdin n 1 l ap dis-


tilar, se agit i se las pe 30 minute, dup care se filtreaz i se utilizeaz.

Mediul nutritiv Tamia


Ingredientul Concentraia, mg/l
KNO3 5
MgSO4*7H2O 2,5
KH2PO4 1,25
FeSO4*7H2O 0,003
EDTA 0,037
H3BO3 2,86

141
MnCl2*4H2O 1,81
ZnSO4*7H2O 0,222
MoO3 17,64
NH4VO3 229,6

Mediul nutritiv Nr.1 (Gromov B.V., Titanova N.N.)


Ingredientul Concentraia, mg/l
K2HPO4 66,7
MgSO4*7H2O 33,3
KNO3 100
Microelemente 1 ml

Mediul nutritiv Nr.3 (Gromov B.V., Titanova N.N.)


Ingredientul Concentraia, mg/l
K2HPO4 66,7
MgSO4*7H2O 33,3
KNO3 100
Microelemente 1 ml
Pepton 1000
Glucoz 1000
Ap de drojdii 1 ml

Soluia de microelemente pentru mediile Nr.1, 3


Ingredientul Cantitatea, g/l
ZnSO4*7H2O 0,22
MnSO4 1,81
CuSO4*5H2O 0,079
NaBO3*5H2O 2,63
(NH4)6Mo7O24*4H2O 1
FeSO4*7H2O 9,3
CaCl2 1,2
Co(NO3)2*6H2O 0,02
EDTA 10

142
Mediu nutritiv pentru Chlamydomonas
Pentru a prepara 1 l de mediu nutritiv se iau 50 ml soluie A + 50 ml soluie B +
1 ml soluie Fe EDTA.

Soluia A pentru mediul nutritiv Chlamydomonas


Ingedientul Cantitatea g/l
NH4Cl 5
MgSO4*7H2O 2
CaCl2*2H2O 1

Soluia B pentru mediul nutritiv Chlamydomonas


Ingedientul Cantitatea g/l
K2HPO4 14,4
KH2PO4 7,2

Mediul nutritiv Prat


Ingredientul Concentraia, mg/l
KNO3 0,1
K2HPO4 0,01
MgSO4*7H2O 0,01
FeCl3*6H2O 0,001

Mediul nutritiv MES-volvox


Ingredientul Concentraia, g/100 ml Volumul, ml/l
Ca(NO3)2*4H2O 11,8 1
MgSO4*7H2O 4 1
Na2glicerofosfat*5H2O 5 1
KCl 5 1
MES 1,95
P-IV soluie metalic 6
NH4Cl 2,67 1
Vitamina B12 1
Soluie de vitamine biotin 1

143
Vitamina B12
Soluia de cianocobalamin se ajusteaz pn la pH de 7,8 cu soluia bufer. Solu-
ia de cianocobalamin ajustat se filtreaz utiliznd filtru cu diametrul de 0,45.
Ingredientul Cantitatea, g/200 ml
Soluie bufer (Sigma H-3375) 2,4
Cianocobalamin 0,027
Soluia de vitamina biotin
Soluia de biotin se ajusteaz pn la pH de 7,8 cu soluia bufer. Soluia de
biotin ajustat se filtreaz utiliznd filtru cu diametrul de 0,45 .
Ingredientul Cantitatea, g/200 ml
Soluie bufer (Sigma H-3375) 2,4
Biotin 0,005
P-IV soluie metalic
Ingredientul Cantitatea, g/l
Na2EDTA*2H2O 0,75
FeCl3*6H2O 0,097
MnCl2*4H2O 0,041
ZnCl2 0,005
CoCl2*6H2O 0,002
Na2MoO4*2H2O 0,004

Mediul nutritiv Bold 1 NV


Ingredientul Volumul, ml/l Cantitatea g/400 ml
NaNO3 10 10
CaCl2*2H2O 10 1
MgSO4*7H2O 10 3
K2HPO4 10 7
NaCl 10 1
Soluie metalic P-IV 6
Soluie de vitamina B12 1
Soluie de vitamina biotin
Soluie de vitamina tiamin

144
Vitamina B12
Soluia de cianocobalamin se ajusteaz pn la pH de 7,8 cu soluia bufer. Solu-
ia de cianocobalamin ajustat se filtreaz utiliznd filtru cu diametrul de 0,45.
Ingredientul Cantitatea, g/200 ml
Soluie bufer (Sigma H-3375) 2,4
Cianocobalamin 0,027

Soluia de vitamina biotin


Soluia de biotin se ajusteaz pn la pH de 7,8 cu soluia bufer. Soluia de
biotin ajustat se filtreaz utiliznd filtru cu diametrul de 0,45 .
Ingredientul Cantitatea, g/200 ml
Soluie bufer (Sigma H-3375) 2,4
Biotin 0,005

P-IV soluie metalic


Ingredientul Cantitatea, g/l
Na2EDTA*2H2O 0,75
FeCl3*6H2O 0,097
MnCl2*4H2O 0,041
ZnCl2 0,005
CoCl2*6H2O 0,002
Na2MoO4*2H2O 0,004

Soluie de vitamina tiamin


Soluia de tiamin se ajusteaz pn la pH de 7,8 cu soluia bufer. Soluia de
tiamin ajustat se filtreaz utiliznd filtru cu diametrul de 0,45.
Ingredientul Cantitatea, g/200 ml
Soluie bufer (Sigma H-3375) 2,4
Tiamin 0,067
Na2MoO4*2H2O 0,004

Mediul nutritiv Bristols


Ingredientul Cantitatea, g/l
NaNO3 0,25
K2HPO4 0,075

145
KH2PO4 0,175
CaCl2 0,025
NaCl 0,025
MgSO4*7H2O 0,075
FeCl3 0,0003
MnSO4*4H2O 0,0003
ZnSO4*7H2O 0,0002
H3BO4 0,0002
CuSO4*5H2O 0,00006
pH 6,8-7,2

Mediul nutritiv Proteaz


Se obine prin adugarea proteazei peptonice 1 g la 1 l mediu nutritiv
Bristols.
Mediul nutritiv Artarium
Ingredientul Cantitatea, g/l
NaCl 116
MgSO4*7H2O 50
KNO3 2,5
KH2PO4 0,2
FeSO4*7H2O 0,01
EDTA 0,04
Soluie de microelemente 1 ml/l

Microelemente pentru mediul Artarium


Ingredientul Cantitatea, g/l
H3BO3 2,86
MnCl2*4H2O 1,81
ZuSO4*7H2O 0,222
CuSO4*5H2O 0,06
MoO3 0,018
NH4VO3 0,023

146
Mediu nutritiv Nr.12 (Gromov B.V., Titanova N.N.)
Ingredientul Cantitatea, g/l
KCl 16
NaCl 12,5
MgSO4*7H2O 2,46
KNO3 1,24
K2HPO4 0,496
Ca(NO3)*4H2O 0,26
KBr 0,05
KI 0,05
Microelemente 1 ml

Soluie de microelemente pentru mediul nutritiv Nr.12


Ingredientul Cantitatea, g/l
ZnSO4*7H2O 0,22
MnSO4 1,81
CuSO4*5H2O 0,079
NaBO3*5H2O 2,63
(NH4)6Mo7O24*4H2O 1
FeSO4*7H2O 9,3
CaCl2 1,2
Co(NO3)2*6H2O 0,02
EDTA 10

Medii nutritive de provenien natural

Mediul Pringsheims
Procedeul 1. Se cntrete 1 kg sol de grdin (humus din frunze descompu-
se), se fierbe 1 or n 1 l ap din robinet. Soliuia se las pe 2 zile, dup care se
toarn. Soluia care urmeaz a fi utlilizat ca mediu nutritiv se dizolv de 6 ori cu
apa distilat, la 1 litru mediu nutritiv se adaug 0,5 g KNO3. nainte de utilizare
mediul nutritiv trebuie sterilizat.
Procedeul 2. Solul de grdin se dizolv cu ap (raport 1:2) i se las pe cteva
zile. nainte de utilizare soluia se dizolv n raport de 1:10 sau 1:50 i se ncl-
zete 5 minute la autoclav.

147
Mediul nutritiv Danilova
Solul se dizolv cu apa distilat (raport 1:4) timp de 3 minute, dup care se
filtreaz. Soluia filtrat de dizov cu apa distilat (raport 1:3), iar la 1 l mediu se
adaug srurile KH2PO4 0,2 g i Ca(NO3)2 0,2 g.

Mediul nutritiv DS (elaborat de noi)


Se cntresc cte 200 g de fecale de la porcine, bovine i psri (prospt colec-
tate sau care se menin n frigider maximum 6 luni), se dizolv (prin agitare per-
manent) cu apa distilat (n raport de 1:5). Fracia lichid se separ de cea solid
prin filtrare, efectuat n mai multe etape (utiliznd tifonul, hrtia de filtru, hrtia
cu lent albastr). Soluia obinut se dilueaz cu ap distilat la concentraia de
5% (sau 50 ml soluie + 950 ml ap distilat). pH ul mediului nutritiv 7,1-7,4.
nainte de utilizare mediul nutritiv obinut se sterilizeaz prin expunerea la lampa
germicid timp de 20 de minute.

148
Anexa nr.2
Mediile nutritive optime pentru cultivarea unor specii de alge
ALGELE CIANOFITE
Mediile nutritive utilizate
Speciile de alge cultivate
pentru cultivare
Ammatoidea simplex Woronichin Nr. 6
Anabaena arctica var. spiroides Kiselev Nr. 6, BG 11
A. augatumalis Schmidll. str. Janke Nr. 6, BG 11
A. constricta (Szaf.) Geitler Nr. 6, BG 11
A. contorta Bachm. Nr. 6, Foggs, v
A. cylindrica Lemmermann Nr. 6, Drew, Foggs, BG 11,
Chu-10, Allen
A. oscillarioides Bory de Saint-Vincent ex Bornet Nr. 6, BG 11
& Flahault
A. variabilis Ktzing ex Bornet & Flahault Nr. 6, BG 11, Drew, Chu-10,
Allen
Anabaena sp. Nr. 6. BG 11
Anabaenopsis sp. Z-8, Drew, DS
Anacystis nidulans N.L. Gardner Chu-10, Allen
Aphanocapsa thermalis Brgger Nr. 6
Aphanothece bullosa (Meneghini) Rabenhorst Nr. 6
Aphanothece clathrate West et. G.S. West Nr. 6
A. saxicola Ngeli Nr. 6
Calothrix clavata G.S. West Nr. 6, Chu-10, BG 11
C.ix Elenkini Kossinskaja Nr. 6, Drew, Chu-10, BG 11
C. thermalis Hasngirg ex Bornet & Flahault Nr. 6, Chu-10, BG 11
C. viguieri Frmy Nr. 6, Chu-10, BG 11
Chamaesiphon confervicola A.Braun in Nr. 6
Rabenhorst
Chlorogloea microcystoides Geitler Nr. 6
Chroococcidiopsis thermalis Geitler Nr. 6
Chroococcus globosus (Elenkin) Hindk Nr. 6
Coccopedia limnetica O.V. Troitzkaja Coccopedia
C. turkestanica E.Kiseleva Coccopedia
Cyanidium caldarium (Tilden) Geitler Nr. 6
Cyanotheca longipes Pascher Nr. 6
Cylindrospermum alatosporum F.E. Fritsch Chu-10, Drew, BG 11, Bonds
modificat
C. licheniforme Ktzing ex Bornet & Flahault Drew, BG 11, Allen, Nawawy
Eucapsis alpina F.E. Clements & H.L. Schantz Nr. 6, Bonds modificat
Gloeocapsa alpicola (Lyngbye) Bornet Nr. 6

149
Hapalosiphon stuhlmannii Hieronymus Foggs
Lyngbya aestuarii f. major Elenkin Nr.6
Mastigocladus bursa Dickie Nr.6
Merismopedia glauca (Ehrenberg) Ktzing Nr.6
M. punctata Meyen Nr.6
Microchaete tenera Thuret ex Bornet & Flahault Nr.6
Microcoleus vaginatus Gomont ex Gomont Nr.6
Microcystis aeruginosa (Ktzing) Ktzing BG11
Myxosarcina chroococcoides Geitler Nr.6
Nodularia spumigena Mertens ex Bornet & Nr. 6
Flahault
Nostoc commune var. flagelliforme Bornet & Nr.6, BG 11, Z-8, Drew, DS
Flahault
N. ellipsosporum Rabenhorst ex Bornet & Flahault Nr.6, BG 11, Drew, Z-8, Bonds
modificat
N. gelatinosum f. halophilum (Hansgirg) Elenkin Nr.6, BG 11, Drew, Z-8, Gromov,
Nawawy, DS
N. linckia Bornet ex Bornet & Flahault Nr.6, BG 11, Drew, Z-8, Gromov,
DS, Allen
N. flagelliforme (Berk.et Curt.) Elenkin Nr.6, BG 11, Drew, Z-8, Gromov,
DS, Allen
N. muscorum C.Agardh ex Bornet & Flahault Nr.6, BG 11, Drew, Z-8, Gromov
N . paludosum (Ktz.) Elenkin Nr. 6
N . punctiforme (Ktz.) Elenkin Nr. 6
Oscillatoria splendida Greville ex Gomont Nr.6, Drew
O. subbrevis Schmidle Nr.6, Drew
Phormidium autumnale f. tenue West & G.S.West Nr.6, Drew
Ph. autumnale Gomont Nr.6, Drew
Ph. autumnale var. minus Gardner Nr.6, Drew
Ph. favosum Gomont Nr.6
Ph. favosum var. minus Vasishta Nr.6
Ph. foveolarum f. moniliforme Anand Nr.6
Ph. foveolarum Gomont Nr.6
Ph. inundatum Ktzing ex Gomont Nr.6
Ph. molle Gomont Nr.6
Ph. subfuscum Ktzing ex Gomont Nr.6
Ph. tadzschicicum Meln. Nr.6
Ph. tenuissimum Woronichin Nr.6
Ph. uncinatum Gomont ex Gomont Nr.6
Plectonema boryanum Gomont Nr.6
P. nostocorum Bornet ex Gomont Nr.6
Scytonema sp. Nr.6
150
Spirulina major Ktzing ex Gomont UTEX mediu Spirulina
S. maxima (Setchell & N.L.Gardner) Geitler Nr.16, AO, Zarrouc, UTEX
mediu Spirulina
S. platensis (Nordst.) Geitler Nr.16, AO, Zarrouc, UTEX
mediu Spirulina
S. subsalsa Oersted ex Gomont UTEX mediu Spirulina
Symploca thermalis Gomont Nr.6
Synechococcus cedrorum Sauvageau Nr.6
S. elongatus (Ngeli) Ngeli Nr.6
Synechococcus sp. Nr.6
Synechocystis aquatilis Sauvageau Nr.6
S. minuscula Woronichin Nr.6
S. salina Wislouch Nr.6
Tolypothrix curta N.L. Gardner Nawawy, Nr.6
T. distorta Ktzing ex Bornet & Flahault Nawawy, Nr.6
T. tenuis Ktzing ex Bornet & Flahault Nawawy, Nr.6

ALGELE VERZI
Mediile nutritive utilizate
Specia
pentru cultivare
Ankistrodesmus acicularis (Braun) Korshikov Nr.3
A. arcuatus Korshikov Nr.6
A. braunii var. minutus Playfair Nr.6, Nr.1
A. convolutus Corda Nr.6
A. falcatus (Corda) Ralfs Nr.6
A. nannoselene Skuja Nr.6
A. pseudomirabilis Korshikov Nr.6
A. spiralis (W.B.Turner)Lemmermann Nr.6
A. rotundus Korshikov Nr.6
Ankistrodesmus sp. Nr.6
Asteromonas gracilis Artari Nr.3, Prat
Chlamydomonas eugametos Moewus Nr.1
Ch. gloeogama f.Humicola Nr.6
Ch. gyrus Pascher Nr.3
Ch. moewusii Gerloff Chlamydomonas, Nr.6, Nr.3
Ch. reinhardtii P.A.Dangeard Nr.3
Chlorella ellipsoidea Gerneck Nr.6, Prat
Ch. luteo-viridis Chodat in Conrad & Kufferath Nr.1
Ch. luteo-viridis var. aureoviridis Mayer Nr.6
Ch. minita (Naeg.) Olimanns Nr.3
Ch. ovalis Butcher Nr.3

151
Ch. paramecii Loefer Nr.3
Ch. protothecoides Krger Nr.3
Ch. pyrenoidosa H.Chick Nr.3, Nr.6, Prat
Ch. terricola Gollerbach Nr.3
Ch. variegata Beijerinck Nr.3, Bristols
Ch. vulgaris Beyerinck Nr.1, Bristols
Ch. vulgaris var. viridis Chodat Nr.1, Bristols
Chlorella sp. Nr.3, Nr.6, Bristols
Chlorococcum aplanosporum Arce & Bold Nr.3
Ch. ellipsoideum Deason & H.C. Bold Nr.1
Ch. humicola var. incrassatum F. E. Fritsch & R.P. Nr.3
John
Ch. hypnosporum Starr Nr.3
Ch. intermedium Deason & Bold Nr.6
Ch. macrostigmatum R.C. Starr Nr.3
Ch. minutum R.C. Starr Nr.6
Ch. perforatum Arce & H.C. Bold Nr.3
Ch. pinguideum Arce & H.C. Bold Nr.3
Ch. polymorphum Bischoff & Bold Nr.3
Ch. punctatum Arce & H.C. Bold Nr.3
Ch. wimmeri (F.W. Hilse) Rabenhorst Nr.6
Chodatella balatonica Scherffel in Kol Nr.6
Chromochloris cinnabarina Kol & F.Chodat Nr.6
Coccomyxa dispar Schmidle Nr.6
C. lacustris (Chodat) Chodat Nr.3
Coelastrum cambricum W.Archer Nr.6
C. microporum Ngeli in A.Braun Nr.6
C. proboscideum var. dilatatum Vischer Nr.6
Dictyococcus pseudovarians Korshikov Nr.3
Dictyosphaerium pulchellum var. ovatum Nr.6
Korshikov
Dunaliella salina (Dunal) Teodoresco Aratium
Haematococcus pluvialis Flotow Nr.6, MES volvox, Prat
Hormidium dissectum (F.Gay) Chodat Nr.1, Prat
H. flaccidum (Ktzing) A.Braun Nr.6
H. fluitans (Gay) Heering Nr.1
H. nitens G.A.Klebs Nr.6
Hydrodictyon reticulatum (Linnaeus) Bory de Nr.3, Bold 1 NV
Saint-Vincent
Kirchneriella cornuta Korshikov Nr.3
K. obesa (West) West & G.S. West Nr.3

152
K. subsolitaria G.S. West Nr.3
Mesotaenium caldariorum (Lagerheim) Hansgirg Nr.3, Bristols
Neochloris alveolaris H.C. Bold Nr.3, Bristols
N. conjuncta P.A. Archibald Bold 1 NV modificat
N. fusispora G.Arce & H.C. Bold Nr.6, Bristols
N. gelatinosa Herndon Nr.3, Bristols
N. minuta G.Arce & H.C. Bold Nr.6, Bristols
Pediastrum boryanum (Turpin) Meneghini Nr.3
Pseudospongiococcum protococcoides Gromov & Nr.3
Mamkaeva
Scenedesmus acuminatus (Lagerheim) Chodat Nr.6, Bristols, Proteaz
S. acutiformis Schrder Nr.6, Prat, Proteaz
S. acutus f. alternans Hortobagyi Nr.3, Prat, Bristols
S. acutus Meyen Nr.1, Prat, Bristols
S. bijugatus Ktzing Nr.3, Prat
S. brasiliensis var. quadrangularis (Corda) Borge Nr.6, Prat
S. carinatus (Lemmermann) Chodat Nr.6
S. dactylococcoides Chodat Nr.6
S. dimorphus (Turpin) Ktzing Nr.6
S. dispar Brbisson Nr.3
S. ecornis (Ehrenberg) Chodat Nr.6
S. falcatus Chodat Nr.3, Proteaz
S. longus var. naegelii Brbisson Nr.6
S. obliquus (Turpin) Ktzing Nr.3, Nr.6, Proteaz, Prat
S. obtusiusculus Chodat Nr.6, Prat
S. quadricauda (Turpin) Brbisson in Brbisson & Nr.3, Proteaz, Prat
Godey
S. quadricauda var. abundans (Kirchner) Hansgirg Nr.6, Proteaz, Prat
S. serratus (Corda) Bohlin Nr.3
Scenedesmus sp. Nr.1, Nr.3, Nr.6, Proteaz, Prat
Scotiella nivalis (Chodat) Fritsch Nr.6
Staurastrum punctulatum Brbisson in Ralfs Nr.6
Stichococcus chodati (Bialosuknia) Heering Bristol
S. minor Ngeli Nr.1
S. mirabilis Lagerheim in Wittrock & Nordstedt Prat
Stichococcus sp. Nr.6
Tetradron bitridens Beck-Mannagetta Nr.3, Bristol
T. caudatum (Corda) Hansgirg Nr.6
T. minimum (A.Braun) Hansgirg Nr.1, Nr.6
Trentepohlia annulata F.Brand Nr.1

153
ALGE DIATOMEIE (Bacillariophyta)
Speciile de alge cultivate Mediile nutritive utilizate
pentru cultivare
Nitzschia communis Rabenhorst Nr.6

ALGE ROII (Rhodophyta)


Speciile de alge cultivate Mediile nutritive utilizate
pentru cultivare
Porphyridium cruentum (S. F. Gray) Ngeli Nr.12

ALGE EUGLENINE (Euglenophyta)


Speciile de alge cultivate Mediile nutritive utilizate
pentru cultivare
Euglena gracilis Klebs Proteaz
E. proxima Dang Bristols
E. clara Skuja Bristols
E. oblonga Schmitz Bristols

ALGE GALBEN-VERZI (Xanthophyta)


Speciile de alge cultivate Mediile nutritive utilizate
pentru cultivare
Chloridella neglecta (Pascher & Geitler) Pascher Nr.1
Chlorocloster dactylococcoides Pascher Bristol
Pleurochloris magna J.B. Petersen Nr.3, Prat
P. pyrenoidosa Pascher Bold

154
Anexa nr.3
Condiiile optime de temperatur pentru cultivarea algelor
ALGE CIANOFITE
Specia Temperatura optim, C
Anabaena arctica var. spiroides Kiselev 22
A. augatumalis Schmidll. str. Janke 22
A. constricta (Szaf.) Geitler 22
A. contorta Bachm. 22
A, cylindrica Lemmermann 22
A. oscillarioides Bory de Saint-Vincent ex Bornet 22
& Flahault
Anabaena variabilis Ktzing ex Bornet & Flahault 22
Anabaena sp. 22
Anabaenopsis sp. 23-27
Calothrix clavata G.S. West 25
C. Elenkini Kossinskaja 25
C. thermalis Hasngirg ex Bornet & Flahault 25
C. viguieri Frmy 25
Chroococcidiopsis thermalis Geitler 12
Chroococcus globosus (Elenkin) Hindk 25-30
Cyanidium caldarium (Tilden) Geitler 37
Cylindrospermum alatosporum F.E. Fritsch 25
C. licheniforme Ktzing ex Bornet & Flahault 25
Gloeocapsa alpicola (Lyngbye) Bornet 25
Hapalosiphon stuhlmannii Hieronymus 25
Lyngbya aestuarii f. major Elenkin 22
Mastigocladus bursa Dickie 25
Merismopedia glauca (Ehrenberg) Ktzing 25
M. punctata Meyen 25
Microchaete tenera Thuret ex Bornet & Flahault 25
Microcoleus vaginatus Gomont ex Gomont 25
Microcystis aeruginosa (Ktzing) Ktzing 25
Nodularia spumigena Mertens ex Bornet & 25
Flahault
Nostoc commune var. flagelliforme Bornet & 25
Flahault
N. ellipsosporum Rabenhorst ex Bornet & Flahault 25
N. gelatinosum f. halophilum (Hansgirg) Elenkin 25
N. linckia Bornet ex Bornet & Flahault 22
N. flagelliforme (Berk.et Curt.) Elenk. 25-35
N. muscorum C.Agardh ex Bornet & Flahault 25

155
Oscillatoria splendida Greville ex Gomont 25
O. subbrevis Schmidle 25
Phormidium autumnale f. tenue West & G.S. West 25
Ph. autumnale Gomont 12-25
Ph. autumnale var. minus Gardner 12-25
Ph. favosum Gomont 25
Ph. favosum var. minus Vasishta 25

Ph. foveolarum f. moniliforme Anand 25


Ph. foveolarum Gomont 25
Ph. inundatum Ktzing ex Gomont 15-25
Ph. molle Gomont 25
Ph. subfuscum Ktzing ex Gomont 25
Ph. tadzschicicum Meln. 25
Ph. tenuissimum Woronichin 15-25
Ph. uncinatum Gomont ex Gomont 25
Plectonema boryanum Gomont 25
Pl. nostocorum Bornet ex Gomont 22
Scytonema sp. 22-25
Spirulina major Ktzing ex Gomont 25-30
S. maxima (Setchell & N.L.Gardner) Geitler 25-30
S. platensis (Nordst.) Geitl. 25-30
S. subsalsa Oersted ex Gomont 25-30
Synechococcus cedrorum Sauvageau 25
S. elongatus (Ngeli) Ngeli 25
Synechococcus sp. 25
Synechocystis aquatilis Sauvageau 25
S. salina Wislouch 25
Tolypothrix tenuis Ktzing ex Bornet & Flahault 22
T. curta N.L.Gardner 22
T. distorta Ktzing ex Bornet & Flahault 22

ALGE VERZI
Specia Temperatura optim, C
Ankistrodesmus acicularis (Braun) Korshikov 25
A. arcuatus Korshikov 25
A. braunii var. minutus Playfair 25
A. convolutus Corda 25
A. falcatus (Corda) Ralfs 25
A. nannoselene Skuja 25
A. pseudomirabilis Korshikov 25

156
A. rotundus Korshikov 25
A. spiralis (W.B.Turner)Lemmermann 25
Ankistrodesmus sp. 22
Chlamydomonas eugametos Moewus 25
Chlamydomonas gloeogama f.Humicola 25
Ch. gyrus Pascher 25
Ch.moewusii Gerloff 25
Ch.reinhardtii P.A. Dangeard 25
Chlorella ellipsoidea Gerneck 22-25
Ch. luteo-viridis Chodat in Conrad & Kufferath 22
Ch. luteo-viridis var. aureoviridis Mayer 22
Ch. minita (Naeg.) Olimanns 25
Ch. ovalis Butcher 25
Ch. paramecii Loefer 22
Ch. protothecoides Krger 22
Ch. pyrenoidosa H.Chick 25
Ch. terricola Gollerbach 22-25
Ch. variegata Beijerinck 25
Ch. vulgaris Beyerinck 25-27
Ch. vulgaris var. viridis Chodat 25
Chlorella sp. 25
Chlorococcum aplanosporum Arce & Bold 22
Ch. ellipsoideum Deason & H.C. Bold 22
Chlorococcum humicola var. incrassatum F.E. 22
Fritsch & R.P. John
Ch. hypnosporum Starr 25
Ch. intermedium Deason & Bold 22
Ch. macrostigmatum R.C. Starr 22
Ch. minutum R.C.Starr 22-25
Ch. perforatum Arce & Bold 22
Ch. pinguideum Arce & H.C. Bold 25
Ch. polymorphum Bischoff & Bold 25
Ch. punctatum Arce & H.C. Bold 25
Ch. wimmeri (F.W. Hilse) Rabenhorst 22
Chodatella balatonica Scherffel in Kol 25
Coelastrum cambricum W.Archer 25
Coelastrum microporum Ngeli in A.Braun 25
Coelastrum proboscideum var. dilatatum Vischer 25
Dunaliella salina (Dunal) Teodoresco 27
Haematococcus pluvialis Flotow 25-27
Hormidium dissectum (F.Gay) Chodat 22

157
Hormidium flaccidum (Ktzing) A.Braun 22
H. fluitans (Gay) Heering 22
H. nitens G.A. Klebs 22
Hydrodictyon reticulatum (Linnaeus) Bory de 25
Saint-Vincent
Kirchneriella cornuta Korshikov 25
K. obesa (West) West & G.S. West 25
K. subsolitaria G.S. West 25
Scenedesmus acuminatus (Lagerheim) Chodat 25
S. acutiformis Schrder 25
S. acutus f. alternans Hortobagyi 25
S. acutus Meyen 25
S. bijugatus Ktzing 22
S. brasiliensis var. quadrangularis (Corda) Borge 25
S. carinatus (Lemmermann) Chodat 25
S. dactylococcoides Chodat 25
S. dimorphus (Turpin) Ktzing 25
S. dispar Brbisson 25
S. ecornis (Ehrenberg) Chodat 25
S. falcatus Chodat 25
S. longus var. naegelii Brbisson 25
S. obliquus (Turpin) Ktzing 25
S. obtusiusculus Chodat 25
S. quadricauda (Turpin) Brbisson in Brbisson & 25
Godey
S. quadricauda var. abundans (Kirchner) Hansgirg 25
S. serratus (Corda) Bohlin 25
Scenedesmus sp. 25
Staurastrum punctulatum Brbisson in Ralfs 25
Stichococcus chodati (Bialosuknia) Heering 15-20
Stichococcus minor Ngeli 20
S. mirabilis Lagerheim in Wittrock & Nordstedt 20
Stichococcus sp. 20
Tetradron bitridens Beck-Mannagetta 25
T. caudatum (Corda) Hansgirg 25
T. minimum (A.Braun) Hansgirg 25
Trentepohlia annulata F.Brand 25

ALGE DIATOMEE (Bacillariophyta)


Specia Temperatura optim, C
Nitzschia communis Rabenhorst 22

158
ALGE ROII (Rhodophyta)
Specia Temperatura optim, C
Porphyridium cruentum (S.F.Gray) Ngeli 25

ALGE EUGLENINE (Euglenophyta)


Specia Temperatura optim, C
Euglena gracilis Klebs 25
E. proxima Dang 25
E. clara Skuja 22-25
E. oblonga Schmitz 25

159
Anexa nr.4

Date de contact privind coleciile de alge


EUROPA
Armenia
Denumirea instituiei: Colecia naional de culturi microbiene a Republicii Ar-
menia
Coresponden: Prof. Evrik Afrikian, tel. (37410) - 65 08 83, email: microbio@
sci.am; afrikian2002@yahoo.com.
Pagina electronic: http://www.sci.am/resorgs.php?oid=41&langid=1
Austria
Denumirea instituiei: Colecia de alge a Institutului de botanic
Coresponden: Prof. asociat G.Gaertner, tel. (43) 512-507-2715; email: georg.
gaertner@uibk.ac.at
Pagina electronic: http://botany.uibk.ac.at/
Belgia
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge cianofite (sub)polare
Coresponden: Prof. asociat Annick Wilmotte, tel. (32) 4-366 33 87; email:
BCCM.ULC@ulg.ac.be; awilmotte@ulg.ac.be
Pagina electronic: http://bccm.belspo.be/about/ulc.php
Bulgaria
Denumirea instituiei: Colecia de alge a Universitii din Sofia
Coresponden: Dr. Blagoy Uzunov, tel. (359) 888-22-3165, email. blagoy_uzu-
nov@abv.bg
Pagina electronic: -
Cehia
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge a Universitii Charles din Praga
Coresponden: Prof. asociat Pavel Skaloud, tel. (42) 0-221951648; email: ska-
loud@natur.cuni.cz
Pagina electronic: http://botany.natur.cuni.cz/algo/caup.html

Denumirea instituiei: Colecia de culturi de organisme autotrofe


Coresponden: Josef Jur, tel. (420) 384-721 156, email: josef.juran@ibot.cas.cz
Pagina electronic: http://ccala.butbn.cas.cz/
Danemarca
Denumirea instituiei: Colecia de culturi scandinave de alge i protozoare
Coresponden: Prof. asociat Gert Hansen, tel. (45) 35-322303, email: gerth@
bio.ku.dk, sccap@bio.ku.dk
Pagina electronic: http://www.sccap.dk/

160
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge (NIVA)
Coresponden: Jesper H. Andersen, tel. (45) 8896 9670, email: post@niva-den-
mark.dk
Pagina electronic: www.niva-denmark.dk

Denumirea instituiei: Centrul de Alge din Danemarca


Coresponden: Dr. Michael Bo Rasmussen, tel. (45) 30783168, email: mir@
bios.au.dk
Pagina electronic: mir@bios.au.dk
Finlanda
Denumirea instituiei: Colecii de culturi algale
Coresponden: Pekka Oivanen, tel. (358) 2-94159311, email: pekka.oivanen@
helsinki.fi
Pagina electronic: http://www.helsinki.fi/hambi/
Frana
Denumirea instituiei: Algotehnic, laborator de criptogamie
Coresponden: Prof. Alain Coute, tel. (33) 1-40793196, email: acoute@mnhn.
fr; yep@mnhn.fr
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Algobanc Caen, Universitatea Caen Basse-Normandia


Coresponden: Prof. asociat Benoit Veron, tel. (33) 2 31 56 64 27, email: algo-
bank@unicaen.fr, benoit.veron@unicaen.fr
Pagina electronic: http://www.unicaen.fr/algobank

Denumirea instituiei: Centrul de resurse biologice al Institutului Pasteur


Coresponden: Dr. Chantal Bizet, tel. (33) 1-45688775, email: crbip@pasteur.fr
Pagina electronic: http://www.crbip.pasteur.fr/
http://www.wfcc.info/index.php/collections/display/

Denumirea instituiei: Colecia de culturi Nantes


Coresponden: Prof. asociat Vona Meleder, tel. (33) 2-51125656, email: vona.
meleder@univ-nantes.fr; laurent.barille@univ-nantes.fr
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge cianofite. Pasteur


Coresponden: Rosmarie Rippka, tel. (33) 1-45-68-84, email: collectionpcc@
pasteur.fr
Pagina electronic: http://cyanobacteria.web.pasteur.fr/

161
Denumirea instituiei: Colecia de culturi Roscoff
Coresponden: Dr. Daniel Vaulot, tel. (33) 2-98 29 23 23, email: rcc@sb-rosco-
ff.fr
Pagina electronic: http://www.sb-roscoff.fr/Phyto/RCC/
Germania
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge a Universitii Cologne
Coresponden: Dr. Barbara Melkonian, tel. (49) - 221 470 8097, email: barbara.
melkonian@uni-koeln.de
Pagina electronic: http://www.ccac.uni-koeln.de

Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge criofile


Coresponden: Dr. Thomas Leya, tel. (49) 331 58187 304, email: thomas.leya@
izi-bb.fraunhofer.de
Pagina electronic: http://cccryo.fraunhofer.de

Denumirea instituiei: Colecia de culturi algale a Universitii Gttingen


Coresponden: Dr. Maike Lorenz, tel. (49) - 551-395740, email: epsag@uni-
goettingen.de; mlorenz@uni-goettingen.de
Pagina electronic: http://epsag.uni-goettingen.de

Denumirea instituiei: Colecia de alge i Zighematophyceae din Hamburg


Coresponden: Prof. asociat Klaus von Schwartzenberg, tel. (49) 40-42816-599,
email: fbsi001@rrz.uni-hamburg.de
Pagina electronic: http://www.biologie.uni-hamburg.de/bzf/zeph/zephsvcke.htm
Colecie: Microalge
Italia
Denumirea instituiei: Centrul de cercetri ale microorganismelor autotrofe
Coresponden: Prof. G. Florenzano
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Mycotheca Universitatea Taurinensis


Coresponden: Prof. asociat Giovanna Cristina Varese, tel. (39) - 011 670 5984,
email: cristina.varese@unito.it; info.mut@unito.it
Pagina electronic: www.mut.unito.it/
Colecie: Alge
Norvegia
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge (NIVA)
Coresponden: Camilla H. C. Hagman, tel. (47) 90615679, email: culturecol-
lection@niva.no; camilla.corneliussen@niva.no
Pagina electronic: http://niva-cca.no/

162
Denumirea instituiei: Institutul de cercetri marine
Coresponden: Petter Fossum, tel. (47) 55 23 84 77, email: petter.fossum@imr.no
Pagina electronic: http://www.imr.no/

Denumirea instituiei: Centrul de piscicultur i acvacultur NTNU


Coresponden:Trine Galloway, tel. (47) 73595000, email: trina.galloway@sin-
tef.no
Pagina electronic: https://www.ntnu.edu/marine/sealab/about
Polonia
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge baltice a Univerisitii Gdansk
Coresponden: Prof. Adam Latala, tel. (48) 58-523-6894, email: oceal@univ.
gda.pl
Pagina electronic: http://ccba.ug.edu.pl/
Portugalia
Denumirea instituiei: Colecia de alge Coimbra
Coresponden: Prof. Lilia Santos, tel. (351) - 239 855 230, email: liliamas@
ci.uc.pt
Pagina electronic: http://acoi.ci.uc.pt
Federaia Rus
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge din Siberia
Coresponden: Prof. asociat Igor Kozhevnikov, tel. (7) 391-2445906, email:
ikozhevnikov@inbox.ru; nell69@mail.ru
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Colecia de alge a Institutului de biologie a apelor interi-


oare, Academia de tiine a Rusiei
Coresponden: Dr. Evgeniy Gusev, tel. (+7) 08547-24042, email: evsergus@
yahoo.com; algogus@yandex.ru
Pagina electronic: http://www.ibiw.ru/index.php?p=sub&id=1&lang=ru

Denumirea instituiei: Colecia de alge a Universitii din St. Petersburg


Coresponden: Prof. Alexander V. Pinevich, tel. (7) 812-4506740, email:
A.Pinevich@spbu.ru; k.kulichihin@spbu.ru
Pagina electronic: http://microbio.museums.spbu.ru/?q=collection

Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge a Institutului de fiziologie a


plantelor
Coresponden: Elena S. Kuptsova, tel. (7) 95-9039380, email. kuptsova@ip-
pras.ru; losnet@ippras.ru
Pagina electronic: http://www.ippras.ru/

163
Denumirea instituiei: Peterhof, colecia genetic de microalge
Coresponden: Prof. asociat Alexander S. Chunayev, tel. (7) 812-4278851
Pagina electronic: -
Slovacia
Denumirea instituiei: Departamentul de genetic al Universitii din Bratislava
Coresponden: Prof. asociat Vlckova Viera, tel. (42) 1-2-60296302, email: vl-
ckova@fns.uniba.sk
Pagina electronic: -
Spania
Denumirea instituiei: Banca Naional a Algelor din Spania
Coresponden: Dr. Antera Martel Quintana, tel. (34) 928-133290, email: amar-
tel@marinebiotechnology.org; antera.martel@ulpgc,es
Pagina electronic: http://bea.marinebiotechnology.org/
Suedia
Denumirea instituiei: Chalmers Universitatea de Technologii, Gteborg
Coresponden: Dr. Eva Albers, tel. (46) 31 772 38 44, email: eva.albers@chal-
mers.se
Pagina electronic: http://www.chalmers.se/

Denumirea instituiei: Universitatea Linnaeus


Coresponden: Prof. Catherine Legrand, tel. (46)480-44 7309, email: catherine.
legrand@lnu.se
Pagina electronic: http://lnu.se/

Denumirea instituiei: Universitatea Mlardalen


Coresponden: PhD. Emma Nehrenheim, tel. (46) 21-101484, email: emma.
nehrenheim@mdh.se
Pagina electronic: http://www.mdh.se

Denumirea instituiei: Universitatea suedez de tiine agricole


Coresponden: Francesco Gentili, tel. 090-7868196, email: francesco.gentili@
slu.se
Pagina electronic: http://www.slu.se
Elveia
Denumirea instituiei: Colecia de culturi algale din Elveia
Coresponden: Prof. Martin Sievers, tel. (41) 58-9345716, email: martin.sie-
vers@zhaw.ch; dasen@ccos.ch
Pagina electronic: http://www.ccos.ch/

164
Turcia
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de microalge
Coresponden: Meltem CONK- DALAY, tel. (90) 232-3884955, email: melte-
mconkdalay@gmail.com; meltemconkdalay@egemacc.com
Pagina electronic: http://www.egemacc.com/

Denumirea instituiei: Colecia de culturi de microalge a Institutului Soley


Coresponden: Prof. asociat Nazan Calisir, tel. (90) 216-6140997; email: ncali-
sir@soley.cn
Pagina electronic: http://www.algaeinstitute.com
Regatul Unit al Marii Britanii i al Irlandei de Nord
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge i protozoare
Coresponden: Rachel Saxon, tel. (44) 1631-559000, email: ccap@sams.ac.uk
Pagina electronic: http://www.ccap.ac.uk

Denumirea instituiei: Colecia de culturi a asociaiilor biologice marine


Coresponden: Angela Ward, tel. (44) 1752-63334, email: MBACC@mba.ac.uk
Pagina electronic: http://www.mba.ac.uk/culturecollection
Ucraina
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de microalge herbarul Universitii
din Harkov
Coresponden: Prof. Tatjana Dogadina, tel. (380) 57-707-55-29, email: bo-
tany.100.years@gmail.com; Tatjana.V.Dogadina@univer.kharkov.ua
Pagina electronic: http://botany.univer.kharkov.ua/cwu-macc.html
Republica Moldova
Denumirea instituiei: Colecia laboratorului de cercetri tiinifice Algologie,
Universitatea de Stat din Moldova
Coresponden: Prof. V.V. alaru, tel. (373) 22 57-77-92, email: salaruvictor@
yahoo.com
Pagina electronic: http://usm.md/?page_id=10083

Denumirea instituiei: Colecia naional de microorganisme nepatogene


Coresponden: Acad. Valeriu Rudic, tel. (373) 22 73-98-78, email: acad.rudic@
mail.md, acadrudic@yahoo.com
Pagina electronic: http://www.imb.asm.md/pages0-20-0-ro.htm
Romnia
Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge cianofite i alge a Institutului de
cercetri biologice din Cluj-Napoca
Coresponden: Prof. Drago Nicolae, tel. (+4)0264598084, email: ndragos@
hasdeu.ubbcluj.ro
Pagina electronic: http://www.icbcluj.ro/about-us/departamentul-de-taxono-
mie-si-ecologie/domenii-de-activitate
165
AMERICA
Argentina
Denumirea instituiei: Banca Naional a Microorganismelor
Coresponden: Dr. Montecchia Marcela S, tel. (54) - 11 4524 8061; email:
mmontecc@agro.uba.ar
Pagina electronic: http://www.agro.uba.ar/investigacion/inba/banco
Brazilia
Denumirea instituiei: Colecia brazilian de alge cianofite Universitatea Sao
Paulo
Coresponden: Prof. Maria C. Bittencourt-Oliveira; tel. (55) 19-342-94169;
email: mbitt@esalq.usp.br
Pagina electronic: http://www.esalq.usp.br

Denumirea instituiei: Colecia de culturi de microalge marine


Coresponden: Prof. asociat Ana Maria Pires-Vanin, tel. (55) 11-818-6541,
email: secrdob@netuno.io.usp.br
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Coelcia culturilor de microalge acvatice


Coresponden: Prof. Armando a. HeNr.iques Vieira, tel. (55) 16-33066682,
email: ahvieira@ufscar.br
Pagina electronic:-
Canada
Denumirea instituiei: Colecia Centrului de cercetri n infeciologie
Coresponden: Prof. asociat Maurice Boissinot, tel. (1) 418-555-4444-42705;
email: maurice.boissinot@crchul.ulaval.ca; michel.g.bergeron@crchul.ulaval.ca
Pagina electronic: http://www.cri.ulaval.ca/

Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge i alge cianofite a Universitii


din Toronto
Coresponden: Heather Roshon, tel. (1) 519-746-0614, email: hdroshon@uwa-
terloo.ca
Pagina electronic: http://www.phycol.ca/

Denumirea instituiei: Colecii de culturi ale Pacificului de Nord-Est


Coresponden: Donna Dinh, tel. (1) 604-822-4825, email:cccm@interchange.
ubc.ca
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Universitatea Alberta, Colecia de microfungi i herbarum


Coresponden: Dr. Connie Gibas, tel. (1) 780-987-4811, email: cgibas@ualber-
ta.ca; lynne.sigler@ualberta.ca
Pagina electronic: http://www.uamh.devonian.ualberta.ca/
166
Statele Unite ale Americii
Denumirea instituiei: Centrul National pentru alge marine i microbiot Pro-
vasoli-Guillard
Coresponden: Sara Yentsch, tel. (1) 207-315-2567, email: syentsch@bige-
low.org
Pagina electronic: http://ncma.bigelow.org/

Denumirea instituiei: Colecia de culturi a Serviciului de cercetri agricole


Coresponden: Dr. Todd Ward, tel. (1) 309-681-6394, email: Todd.Ward@ars.
usda.gov
Pagina electronic: http://Nr.rl.ncaur.usda.gov/

Denumirea instituiei: Colecia de culturi de alge a Universitii Texas Austin


Coresponden: Prof. asociat Jerry Brand, tel. (1) 512-471-4019, email: utal-
gae@uts.cc.utexas.edu; jbrand@mail.utexas.edu
Pagina electronic: http://www.utex.org

OCEANIA
Australia
Denumirea instituiei: Universitatea de culturi microbiene din Queenslandco-
lecia
Coresponden: Prof. asociat L. I. Sly, tel. (61) 7-377-3694, email: l.sly@
uq.edu.au.
Pagina electronic: http://www.biosci.uq.edu.au/micro

Denumirea instituiei: Laboratorul Naional de referin n micologie medical


a Australiei
Coresponden: K.A. Weeks, tel. (61) 2-99267135, email: RNSPO01.KWe-
eks@doh.health.nsw.gov.au
Pagina electronic:

Denumirea instituiei: Colecia naional de culturi algale a Australiei


Coresponden:Ian Jameson, tel. (61) 3-62325222; email: ian.jameson@csiro.
au; cathy.johnston@csiro.au
Pagina electronic: http://www.csiro.au/ANACC

Denumirea instituiei: Colecia de culturi algale a Universitii Murdoch.


Coresponden: Prof. asocit Michael A. Borowitzka, tel. (61) 89-332-2333;
email: borowitz@possum.murdoch.edu.au
Pagina electronic: -

167
ASIA
China
Denumirea instituiei: Centrul Chinezesc pentru colecii de culturi tipice
Coresponden: Prof. asociat Fang Peng, tel. (86) 27-68752056, email: cctcc@
whu.edu.cn; fangpeng2@yahoo.com.cn
Pagina electronic: http://www.cctcc.org/

Denumirea instituiei: Colecia de biologie marin germiplasm


Coresponden: Xiao-Yan Hu, tel. (86) 532-2879062, email: xyhu@ms.qdio.
ac.cn
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Centrul Naional de colecii de culturi medicale


Coresponden: Prof. asociat Li Fengxiang, tel. (86) 10-67017755
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Colecia culturilor de alge acvatice a Academiei de tiine


a Chinei
Coresponden: Prof. Lirong Song, tel. (86) -2768780806, email: lrsong@ihb.
ac.cn; fachb@ihb.ac.cn
Pagina electronic: http://algae.ihb.ac.cn
India
Denumirea instituiei: Facilitatea naional pentru alge cianofite marine
Coresponden: Prof. Lakshmanan UMA, tel. (91) 431-2407084, email: luma-
prabakar@yahoo.com; dharmarpraba@yahoo.com
Pagina electronic: http://www.nfmc.res.in

Denumirea instituiei: Colecia de culturi de ciuperci i uniti de cercetare a


Universitii din Goa
Coresponden: Dr. Nandkumar Kamat, tel. (91) 0832-6519349, email: nandka-
mat@gmail.com; nkamat@unigoa.ac.in
Pagina electronic:

Denumirea instituiei: Colecia naional de microorganisme industriale


Coresponden: Prof. asociat D.V. Gokhale, tel. (91) 20-25902670, email: ncim@
ncl.res.in
Pagina electronic: http://www.ncl-india.org/ncim/

Denumirea instituiei: Tehnologii de alimentare i fermentare, Universitatea


Mumbai
Coresponden: Prof. asociat P. R. Kulkarni, tel. (91) 22-4145616, email: prk@
fft.udct.ernet.in
Pagina electronic: -

168
Denumirea instituiei: Colecia de culturi algale din VISVA-BHARATI
Coresponden: Prof. asociat Jnanendra Rath, tel. (91) 947-4766362, email: vbc-
ca@visva-bharati.ac.in; jrath@visva-bharati.ac.in
Pagina electronic: http://www.visva-bharati.ac.in/
Indonezia
Denumirea instituiei: Colecia de culturi biotehnologice a Institutului de tiine
Coresponden: Harmastini, tel. (62) 21-8754587
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Colecia de culturi de microorganisme i celule


Coresponden: Prof. asociat Dwi Andreas Santosa, tel. (62) 251-510927, email:
dsantosa@indo.net.id; icbb@bogor.indo.net.id
Pagina electronic: http://www.icbb.org

Denumirea instituiei: Colecia de culturi a Institutului de tehnologii Bandung


Coresponden: Prof. asociat Ibrahim Sastramihardja, tel. (62) 22-2506454
Pagina electronic: -
Iran
Denumirea instituiei: Colecia de culturi a Institutului de cercetri i biotehno-
logii agricole
Coresponden: Dr. Hassan Salimi, tel. (98) 261-2709485, email: hasan_salimi@
yahoo.com; sara_am57@yahoo.com
Pagina electronic: http://www.abrii.ac.ir

Denumirea instituiei: Colecia de culturi tipice persane


Coresponden: Dr. Farzaneh Azizmohseni, tel. (98) - 21 5627 5510, email: mo-
hseni@irost.ir; ptcc@irost.ir
Pagina electronic: http://ptcc.irost.org
Japonia
Denumirea instituiei: Colecia de culturi a Institutului de biotiin molecular
i celular
Coresponden: Prof. asociat Akira Yokota, tel. (81) 3-5841-7827, elami: uayo-
ko@mail.ecc.u-tokyo.ac.jp
Pagina electronic: http://www.iam.u-tokyo.ac.jp/misyst/ColleBOX/IAMcol-
lection.html

Denumirea instituiei: Colecia japonez de microorganisme


Coresponden: Dr. Moriya Ohkuma, tel. (81) 29-836-9556, email: inquiry@
jcm.riken.jp
Pagina electronic: http://www.jcm.riken.jp/

169
Denumirea instituiei: Colecia de culturi a Institutului de biotehnologie marin
Coresponden: Prof. asociat Hiroaki Kasai, tel. (81) 193-26-6581, email: mbic@
mbio.jp; hiroaki.kasai@mbio.jp
Pagina electronic: http://www.mbio.jp/mbic/

Denumirea instituiei: Colecia culturilor microbiene a Institutului naional de


studii de mediu
Coresponden: Prof. asociat Fumie Kasai, tel. (81) 298-50-2556, email: mcc@
nies.go.jp
Pagina electronic: http://mcc.nies.go.jp/
Coreea
Denumirea instituiei: Colecia de culturi tipice din Coreea
Coresponden: Dr. Doo-sang Park, tel. (82) 42-8604600, email: dspark@kribb.
re.kr, sales@kribb.re.kr
Pagina electronic: http://kctc.kribb.re.kr/English/index.aspx

Denumirea instituiei: Centrul de culturi de microalge marine Coreea


Coresponden: Prof. Sung Bum Hur, tel. (82) 51-620-6132, email: hurs@pknu.
ac.kr; algae@kmcc.re.kr
Pagina electronic: http://www.kmcc.re.kr
Malaysia
Denumirea instituiei: Departamentul de Biochimie, Facultatea de medicin,
Universitatea Malaya
Coresponden: Prof. asociat Chee Woon Wang, tel. (60) 3-7595745, email:
wangcw@medicine.med.um.edu.my
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Coleciia de culturi industriale


Coresponden: Prof. asociat Marco Antonio Ortiz, tel. (52) 5-6223855,
email:mao@servidor.unam.mx
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Colecia microbian cepas


Coresponden: Prof. asociat M. J. Quintero, t
Pagina electronic:
Pakistan
Denumirea instituiei: Colecii de culturi - tip din Pakistan
Coresponden: Prof. asociat Shahjahan Baig, tel. (92) 42-5757323-7
Pagina electronic: -

170
Filipine
Denumirea instituiei: Colecia culturilor de alge
Coresponden: Prof. asociat Milagrosa R. Martinez
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Institutul dezvoltrii tehnologiilor industriale


Coresponden: Prof. asociat Claro M. Santiago, tel. (63) 823-8071
Pagina electronic:

Denumirea instituiei: Colecia naional de microorganisme din Filipine


Coresponden: Dr. Rosario G. Monsalud, tel. (63) 49-536-2884, email: pncm@
uplb.edu.ph; rgm_pncm@yahoo.com
Pagina electronic: http://www.laguna.net/biotech/
Sri Lanka
Denumirea instituiei: Universitatea Jaffna Botany
Coresponden: Prof. asociat K. Theivendirarajah, tel. (94) 25283
Pagina electronic: -
Thailanda
Denumirea instituiei: Departamentul Biologie aplicat, Facultatea de tiine
Coresponden: Prof. asociat Suree Nanasombat, tel. (66) 2-7373000, email: kn-
suree@kmitl.ac.th
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Ramura Bacteriologie i microbiologie a solului, Departa-


mentul Argicultur
Coresponden: Yenchai Vasuvat.
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Departamentul Microbiologie, Facultatea de tiine


Coresponden: Prof. asociat Tanapat Palaka, tel. (66)2-218 5071, email:
Tanapat.P@chula.ac.th
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Departamentul Biologie, Facultatea de tiine


Coresponden: Sumonthip Bunnag, tel. (66) 241331-34
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Institutul de Cercetri Alimentare i dezvoltare de produ-


se, Universitatea Kasetsart
Coresponden: Chakamas Wongkhalaung, tel. (66) 2-5795552; email: ifrcmw@
nontri.ku.ac.th.
Pagina electronic: -

171
Denumirea instituiei: Colecii de culturi de soia Rizobii i de alge cianofite
Coresponden: Dr. Kanjana Chansa-ngavej, tel. (66) 2-513-4852, email: kanja-
nachansa@hotmail.com
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Institutul de biologie molecular i genetic, Universitatea


Mahidol
Coresponden: Piengchan Sonthayanon, tel. (66) 2-441-9003-1234, email: st-
prj@mahidol.ac.th
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Secia microbiologie, Universitatea Chiang Mai


Coresponden: Abhinya Plikomol, tel. (66) 53-943346-1507, email: scboi016@
chiangmai.ac.th
Pagina electronic: -

Denumirea instituiei: Institutul de cercetri tiinifice i tehnologice din Thai-


landa
Coresponden: Dr. Chatrudee Suwannachart, tel. (66) 2-577-9028, email: mir-
cen@tistr.or.th; chatrudee@tistr.or.th
Pagina electronic: http://www.tistr.or.th/tistr_culture

172
Sergiu Dobrojan, Victor alaru,
Vasile alaru, Victor Melnic, Galina Dobrojan

CULTIVAREA ALGELOR
Monografie

Redactor Ariadna Strungaru


Asisten computerizat Maria Bondari

Bun de tipar 18.12.2015. Formatul 70x100 1/12.


Coli de tipar 14,5. Coli editoriale 15,0.
Comanda 132/15. Tirajul 50 ex.

Centrul Editorial-Poligrafic al USM


str. Al. Mateevici, 60, Chiinu, MD 2009