DIAGNOSTICO LABORATORIAL DE LAS

ENFERMEDADES AUTOINMUNES
Christian la Rosa Fabin
Mdico Patlogo clnico
AREA AUTOINMUNIDAD - LABORATORIO HOSPITAL DOS
DE MAYO
 Autoinmunidad
Respuesta inmune especifica contra
un antgeno o una serie de
antgenos propios. Es un proceso
normal y fisiolgico del organismo.

Enfermedad Autoinmune
Es la manifestacin no controlada
de un proceso autoinmune que
presenta manifestacin clnica.
MOSAICO DE AUTOINMUNIDAD

Gentico

HLA
GM
Estados de Alotipo
Ambiental
Inmunodeficiencia Idiotipo
(Infeccion,Farmaco,UV,f
umar)
Def. IgA, Treg ,Def C,NK

Hormonal

(Estrogeno ,Testosterona )

Yehuda Shoenfeld
Mimetismo molecular
 ENFERMEDADES AUTOINMUNES
rgano especficas Tiroiditis de Hashimoto
Mixedema primario
Tirotoxicosis
Anemia Perniciosa
Gastritis atrfica inmune
Enfermedad de Addison
Diabetes Mellitus insulinodependiente
Miastenia Gravis
Pnfigo Vulgar
Esclerosis mltiple
Anemia Hemoltica autoinmune
Prpura trombocitopnico idioptico
Cirrosis biliar primaria
Colitis ulcerosa
Artritis Reumatoide
Dermatomiositis
Esclerodermia
Lupus Eritematoso Discoide
No rgano especficas Lupus Eritematoso Sistmico (LES)
AUTOANTICUERPOS
Fenmeno Fisiolgico: Natural Autoanticuerpos
Fenmeno Patolgico: Enfermedades Autoinmunes
Autoanticuerpos Autoanticuerpos
Natural Patolgico

Inmunoglobulina Predominante IgM Predomnate IgG

Afinidad Baja Usualmente Alta

Ttulos Usualmente Bajo Usualmente Alto

Especificidad Baja Alta

Autoanticuerpos Patolgicos

Umbral de significancia clnica

Concentracin de autoanticuerpos y avidez

Autoanticuerpos Naturales
Mtodos con limitada sensibilidad

Umbral de significancia clnica

Umbral de deteccin analtica

Concentracin de autoanticuerpos y avidez

Mtodos con limitada sensibilidad

Umbral de significancia clnica

Umbral de deteccin analtica

Mtodos con alta sensibilidad

Umbral de significancia clnica

Concentracin de autoanticuerpos y avidez

Umbral de deteccin analtica
Mtodos con alta sensibilidad

Umbral de significancia clnica

Umbral de deteccin analtica

METODOS PARA LA DETECCION DE AUTOANTICUERPOS
INMUNOFLOURESCENCIA INDIRECTA
INMUNODIFUSION
HEMAGLUTINACION
INMUNOENSAYO ENZIMATICO
INMUNOFLUOROMETRIA
QUIMIOLUMINISCENCIA
INMUNOBLOT
MULTIPLEX ASSAYS
Luminex Platform
Microarray
Porque Solicitar un Autoanticuerpos en la Practica Clnica?
Como es til un autoanticuerpo?

1. Para excluir un diagnstico

2. Para hacer un diagnstico

3. Para definir un subgrupo especial en una enfermedad o sndrome

4. Definir pronstico

5. Acceder a la actividad de la enfermedad

 CCP
DNAds
ANA
FR
Jo-1 Ribosomal
ANCA

ASCA PCNA Centrmero

ASMA
NOR ACL
PM-Scl
Scl70
SSa 2GPI
AMA
FI
SSb
ACPA AGA
Rnp
Sm
Histonas TTG
Nucleosomas
 ANA CCP
Ribosomal
FR
DNAds PCNA
Sm Histonas
SSa Scl70
Nucleosomas SSb
Centrmero
Rnp
NOR
PM-Scl FI
ACL
Jo-1 ACPA
ANCA 2GPI

TTG
ASCA AGA AMA
ASMA
 COMPLEMENTO

Evaluacin funcional de la casa cada del complemento

Niveles bajos= activacin de la va clsica o deficiencia de uno de los componentes
CH50bajo: dosar C2, C3, C4
Seguimiento clnico y monitoreo terapeutico de enfermedades autoinmunes (LES)
C2
Evala la activacin de la va clsica: Enfermedades Autoinmune
til en el diagnostico precoz de reactivacion de LES
Deficiencias mas comun ( heterocigota 1:100)
CH50bajo, C3 y C4 normales Dosar C2
C3
Consumo predominantemente selectivo: Glomerulonefritis aguda post estreptococia,
glomerulonefritis mensagiocapilar tipp II y otras nefritis
Niveles Muy bajos pueden deverse a la activacion de la via alterna o de deficiencia congenita
de C3
Niveles elevados de C3: procesos inflamatorios e infecciosos agudos
 Electroforesis de protenas

Alb 1 2 Alb 1 2
Patron. inflamatorio autoinmune
Normal
ARTRITIS REUMATOIDE
FACTOR REUMATOIDE
o Anticuerpos contra fragmento Fc IgG
(Dominios CH2 y CH3, IgG3 )
o IgG, IgM, IgA o IgE
o Waaler Rose: trabajoso, manual , baja
reproducibilidad
o Aglutinacin del ltex: mas sensible, fcil
realizacin, pero poco especifico
o Titulacin (ltima dilucin del suero
positiva)
FACTOR REUMATOIDE
Factor Reumatoide Practica Clnica
Presente en el 75-90%% de los
adultos con AR, pero apenas 33%
en fase inicial de la enfermedad
Sd. Sjgren
En poblacin sana 1-5 % ttulos bajos
Positivo en otras condiciones:
Factor Reumatoide
Factor Reumatoide
Indicacin: Cuando existe una sospecha clnica de la
artritis reumatoide.
Debido al gran nmero de patologas asociadas con
FR, el valor de un resultado positivo depende de la
probabilidad pre test.
Un resultado negativo no EXCLUYE la artritis
reumatoide.
Hasta el 30% de los pacientes son seronegativos
Se asocia con enfermedad erosiva y extraarticulares
Pptido Citrulinado
Anticuerpos Anti-pptido cclico citrulinado (CCP)
Otro marcador, relativamente nuevo e importante en el
diagnstico de la AR.
Anticuerpos anti-CCP tienen una sensibilidad para la AR que es
similar a la del FR, pero son mucho ms especficas (95% de
especificidad).
Utilidad considerable de anticuerpos anti-CCP en el
establecimiento de:
o Los pacientes seronegativos con sospecha de AR
o Los pacientes con otras formas de enfermedades
autoinmunes que son FR positivo
o Los pacientes con infecciones que se asocian a menudo con la
positividad de FR
Pptido Citrulinado
Anticuerpos anti-CCP son a menudo detectados en
la AR temprana.
Una prueba negativa para anti-CCP no excluye
la AR (en la presentacin inicial, el 50% de los
pacientes carecen de detectar anticuerpos anti-
CCP).
Anti-CCP niveles no son tiles en el
seguimiento longitudinal de la actividad de la
enfermedad.
 Anti-CCP curso de la enfermedad

Suwannalai P, Trouw LA, Toes RE, Huizinga TW Modern Rheumatoly . 2011 Jul
Anti-citrullinated protein antibodies (ACPA) in early rheumatoid arthritis.
LUPUS ERITEMASO
SISTEMICO
ANTICUERPOS ANTINUCLEARES
 Qu es la Clula LE?
PMN con material nuclear alterado de otra clula.
Hargravez, 1946

Jos Antonio Martn Fajardo. Octubre 2007.

 Cultivo clulas Humanas

Clulas Tejido Animal

LE

1948 1950 Coons & 1980

Hargraves Kaplan

Anti-tissue antibodies in rheumatic disease. Standardization and nomenclature. Arthritis Rheu.

1977;20:141920.
 Anticuerpos Antinucleares
Los ANA son inmunoglobulinas que
reaccionan contradiferentes componentes
autologos nucleares( ADNds, SSA/Ro,
protenas del centromero, etc.)y
citoplasmicos (aminoacil tRNA sintetasa o
Jo-1,mitocondrias,etc.)

anticelulares MEXICO 2009

Javier Cabiedes y Carlos A.Nuez-Alvarez .Anticuerpos antinucleares Reumatol Clin.2010;6(4):224

230
Yashwant Kumar , Alka Bhatia. Antinuclear antibodies and their detection
methods in diagnosis of connective tissue diseases: a journey revisited
Diagnostic Pathology 2009
 AMERICAN COLLEGE OF RHEUMATOLOGY 2009

Pier Luigi Meroni and Peter H Schur ANA screening: an old test with new
Recommendations Ann Rheum Dis 2010 69: 1420-1422
 ANA EN PERSONAS SANAS

Racoubian et al. Prevalence of antinuclear antibodies in healthy Lebanese

subjects, 2008-2015: a cross-sectional study involving 10,814 subjects. Rheumatol
Int. 2016 Jul 13.
PATRON TITULO
ESTRUCTURA CELULAR
 Sm
dsDNA U1/U2-snRNP,
ssDNA U4/U6-snRNP
Histonas
Nucleosomas

Patrn Homogneo Moteado Grueso

CENP A
CENP B SS-A (Ro)
CENP C SS-B (La).
CENP D

Centromerico Moteado Fino

 MOTEADO FINO DENSO

Dellavance A, Leser PG, Andrade LEC. Importncia do padro de fluorescncia na interpretao do teste do fan - o caso do padro
pontilhado fino denso. Rev Assoc Med Bras 2007; 53(5): 439-45.
 Patrn Centromrico

CENP A
CENP B
CENP C
CENP D
Principal asociacin clnica:
Esclerosis sistmica (sndrome de
CREST 95%),
Asociaciones:
Cirrosis biliar primaria
Hipertensin pulmonar
LES y AR (<5%), Sndrome de
Sjgren primario
Esclerodermia difusa (8%).
Importancia del Patrn
Asociacin clnica con Enfermedades reumticas
autoinmunes sistmicas

Posibles auto anticuerpos involucrados --

>Direccionar el test segn el algoritmo para Anti-
DNAds y anticuerpos especficos (ENA)
 TITULO

Prevalencia de ANA en sujetos sanos

Dilucin Frecuencia (+)

1:40 31.7 %
1:80 13.3 %
1:160 5.0 %
1:320 3.3 %
 PORCENTAJE

TITULO

Individuos sanos : 12,9% ANA positivo

Enfermedad autoinmune reumtica (ARD): 90.2% ANA positivo
Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibodyHEp-2 test is a critical parameter
for discriminating antinuclear antibodypositive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis
Rheum 2011; 64: 191200.
 PORCENTAJE

PATRON

Individuos sanos : 12,9% ANA positivo

Enfermedad autoinmune reumtica (ARD): 90.2% ANA positivo
Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibodyHEp-2 test is a critical parameter
for discriminating antinuclear antibodypositive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis
Rheum 2011; 64: 191200.
 Moteado Fino

Personas sanas muestran ttulo inferior a Pacientes con Enfermedad reumtica autoinmune

Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibodyHEp-2 test is a critical parameter
for discriminating antinuclear antibodypositive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis
Rheum 2011; 64: 191200.
ANTI-DNAds
 Anti DNAds
DNA de doble hebra (dsDNA)
Se usan para el diagnstico de LES
alta especificidad (95%)
baja sensibilidad (30-70%)
Metodos
o ELISA detecta Acs de alta y baja avidez .
o IFI detecta Acs de alta y baja avidez.
o Farr solamente detecta anticuerpos de alta
avidez. No identifica el isotipo.
Son raros en otras enfermedades y personas
sanas ( ttulo baja)
Ausente en la mayora de las formas de lupus
inducido por medicamentos
Reflejar la actividad de la enfermedad en
pacientes con lupus eritematoso sistmico .
Negativo

Positivo
Anti DNAds

Diagnstico: Marcador de LES

Pronstico: Formas graves (Nefropata)
Seguimiento: Marcador de actividad en
ciertos pacientes
ANTIGENOS NUCLEARES EXTRACTABLES
ANTIGENOS NUCLEARES EXTRACTABLES
nRNP
Sm
SS-A (SS-A nativo y Ro-52)
SS-B
Scl-70
PM-Scl
Jo-1
CENP B
PCNA
dsDNA
Nucleosomas
Histonas
Proteina P-ribosomal
AMA-M2
ANTI SM
Sm. (1966) los autoanticuerpos
reconocen los complejos snRNP; .
pte 30% pctes c/LES y especifico
de Lupus.
No se correlacionan
c/sntomas clnicos.
20% de las Igs en un paciente
con LES se unen a eptopos Sm
Asociada a nefritis lpica . No es til para supervisar la
Anti Rnp
Prueba cuando exista una
sospecha clnica de la EMTC.
Ocurren en el 30-40% de los
pacientes con lupus.
El diagnstico de la
EMTC requiere la presencia
de anticuerpos contra RNP.
100% de los pacientes
con EMTC tienen efectos anti-
RNP
actividad de la enfermedad
Anti Histonas
Casi siempre presente en lupus inducido por drogas.
Tambin es comn en el LES (50-70%)
Ocurren con una frecuencia baja en otras enfermedades
reumticas.
Ausencia de anticuerpos es una fuerte evidencia en
contra del diagnstico de lupus inducido por
medicamentos.
Anti SSA
Anti SSB
Tambin conocido como anti Ro Tambin conocido como anti La
Poco comn en la poblacin Anti-SSB se producen en
normal y en otras enfermedades
reumticas que Sjogren y LES. casi siempre en asociacin
Anti-SSA presente en: con anti-SSA.
Sjogren primario (40-50%)
75% de Sjogren primario
10-15% de la AR con Sjogren LES (10-15%)
secundario.
50% de esta enfermedad y se Bloqueo cardaco
asocia con fotosensibilidad, lupus completo congnito (90%)
cutneo subagudo, y enfermedad
pulmonar intersticial, el Lupus cutneo neonatal (70%)
lupus neonatal, y el
bloqueocardaco
completo congnito.
ESCLERODERMIA
Piel dura

Relacin 7:1 Mujer: varn

Generalmente manifestada entre 35 y 50 aos de
edad.
Ms grave en personas de piel negra e indios
americanos.

Alteracin vascular
Factores genticos,
ambientales, FIBROSIS DE
infeccin LOS TEJIDOS
Autoinmunidad
 DIFERENCIAS ENTRE AFECTACIN DIFUSA Y
LIMITADA
LIMITADA DIFUSA
CUTNEO
CARA Y PARTE DISTAL DE EXTR. ADEMS, TRONCO Y PARTE PROXIMAL DE EXTR.
RAYNAUD
LARGUISIMA EVOLUCION DE COMIENZO RELATIVAMENTE RECIENTE
CURSO
LENTAMENTE PROGRESIVO RPIDAMENTE PROGRESIVO

CLINICA CREST, AFECTACIN VISCERAL PULMONAR (FIBROSIS E HTP), RENAL, CARDACA

EN 10% CBP, HTP. Y DIGESTIVA

AC ANTICENTRMERO ANTITOPOISOMERASA I

CAPILAR ASAS DILATADAS PERO DESAPARICIN DE ASAS, MEGACAPILARES

OSCOPIA PRESENTES

PRON. ACEPTABLE DESFAVORABLE

Anti Scl70
Tambin conocido como anti-topoisomerasa I.
Se debe medir cuando hay sospecha clnica de la
esclerodermia difusa.
Ocurren en el 40% de los pacientes con esclerodermia.
Especificidad cercana al 100%.
Tiene valor pronstico en la esclerodermia y lleva a una
mayor probabilidad de afectacin cutnea difusa y
enfermedad pulmonar intersticial.
No es til para supervisar la actividad de la enfermedad.

Anti Centrmero
Ocurren en el 60% de los pacientes
con esclerodermia limitada (CREST) y en el
15% de los pacientes con esclerodermia difusa con
una especificidad muy elevada (> 98%).
Muy poco frecuente en otras enfermedades
reumticas y las personas sanas.
Una prueba positiva es un argumento muy fuerte para
la presencia del sndrome de CREST o esclerodermia
difusa
ANTI-Jo1(HISTIDIL-tRNA-SINTETASA)

ANA: Patrn Citoplasmtico

moteado Fino
Significado Clinico:
Sndrome Antisintetasa:
Anti-Jo (His) 80%
PM + EPID+ Raynaud + Manos de
Mecnico + fiebre + artritis
Solo PM 30% / DM 10%
Mejor pronstico en EPID
Sus ttulos se asocian con actividad
Perfil Autoinmune Completo

Anti-tissue antibodies in rheumatic disease. Standardization and nomenclature. Arthritis

Rheu. 1977;20:141920.
ANCA
VASCULITIS
Grupo heterogneo de procesos
que se caracterizan por inflamacin
y necrosis de los vasos sanguneo
determinando as deterioro u
obstruccin al flujo de sangre y
dao a la integridad de la pared
vascular
Pueden afectar cualquier tipo de
vaso y el compromiso puede ser de
uno o varios rganos o sistemas
Se clasifican segn el consenso de
1992 ( Conferencia de Chapell Hill)
 ESTRUCTURA

Antgenos:
Proteinasa - 3 PR-3
Mieloperoxidasa
MPO-
Azurocidina
BPI (inhibidor
bactericida de la
permeabilidad)
Catepsina G
Elastasa
Lactoferrina.

Bosch X etal. Lancet 2006;368:404-18.

 ANCA
Marcadores serolgicos de un grupo de vasculitis de pequeos
vasos
Vasculitis asociada a ANCA
Poliangetis -Granulomatosis
Poliangetis -Microscopica
Poliangetis Eosinofila granulomatosis
Vasculitis Renal Limitada
Mtodos de deteccin
Inmunofluorescencia Indirecta neutrfilos fijados con etanol
Inmunofluorescencia -Indirecta neutrfilos fijados con formalina
ELISA antigeno especfico
 ANCA
Son autoanticuerpos dirigidos contra ciertas
proteinas de los granulos citoplasmicos de los
neutrofilos y monocitos del organismo
Tienen valor diagnostico (pero no eximen de
realizar la biopsia): C-ANCA
IFI 2 patrones :
perinuclear (p-ANCA) y el citoplasma (c-
ANCA).
Dos antgenos en las pruebas
ELISA: PR3 y MPO
PR3 se asocia generalmente con c-ANCA
MPO se asocia generalmente con p-ANCA

P-ANCA
 Granulomatosis con poliangeitis
Llamada anteriormente Granulomatosis de
Wegener
Inflamacin granulomatosa del tracto respiratorio
y los glomrulos renales y una vasculitis
necrotizante de vasos de pequeo y mediano
calibre (capilares, vnulas, arteriolas y arterias).
Aproximadamente 90% de los pacientes con GW
activa y generalizada tienen ANCA positivos.
ANCA-C
80% a 90% tienen ANCA-PR3.
10 20 % tienen ANCA-MPO .
La inflamacin granulomatosa necrotizante ha
sido reportada tanto en pacientes con ANCA-
PR3 como con ANCA-MPO.
 Sndrome Antifosfolipidico(SAF)
Tromboembolismo, complicaciones obsttricas y presencia de
uno de los anticuerpos antifosfolipidos(aFL) circulantes en dos
ocasiones, con un intervalo de mas de 3 meses y menos de 5
aos
3 anticuerpos principales:
Anticoagulante lpico (AL)
Test Funcional
Anticuerpos Anticardiolipina(aCL) (IgM e IgG)
Puede dar titulos bajos en presencia de FR y crioglobulinas
Anti-2 glicoprotena I (IgM e IgG)
Puede ser el nico anticuerpo detectado en el 3 al 10% de los
casos de SAF
AL y aCL presentes en el 70% de los pacientes con SAF

El evento de trombosis puede interferir con los niveles de aFL, el

test no debe ser solicitado con menos de 12 semanas despus de
un episodio de trombosis.
GRACIAS
Fecha actualizada (da, mes y ao) Nombres y apellidos del docente.