Hidrogel polimeric cu poteniale aplicaii n ingineria tisular

-Chitosanul-

Introducere

Polimerii utilizai n medicin trebuie s ndeplinesc o serie de condiii

eseniale. n principal acestea sunt: biocompatibilitatea, non-toxicitatea, non-
imunogenicitatea i biodegradabilitatea. Aceste caracteristici variaz n funcie de
sursa i proprietile fizico-chimice ale polimerilor n discuie i devin indispensabile
n elaborarea de sisteme de eliberare de medicamente. Exist numeroase situaii cnd
medicamentele de mas molecular mic administrate clasic nu reuesc s
ndeplineasc profilele terapeutice impuse datorit cilor fiziologice de aprare a
organismului uman. Astfel apare necesitatea elaborrii unor structuri complexe care
s rspund punctual n mediul cu care sunt puse n contact. Aceste structuri au la
baz polimeri reticulai fizic i/sau chimic i se prezint sub diferite forme: burei,
filme, nanoparticule, etc. Reticularea polimerilor confer materialelor obinute
proprieti distincte fa de cele ale constituienilor macromoleculari. De aceea, se
poate spune c posibilitile de combinare a acestora i a agenilor de reticulare sunt
infinite. Dintre aceste biomateriale hidrogelurile simple i multicomponent ce
formeaz reele interpenetrate sau semi-interpenetrate au luat amploare n domeniul
eliberrii controlate de medicamente dar i n domenii ca ingineria tisular unde
biomaterialele polimerice ndeplinesc numeroase funcii.
Pentru controlul proprietilor fizice al acestor hidrogeluri se recurge la
reticularea polimerilor liniari att prin metode chimice ct i fizice.
Hidrogelurile au captat tot mai mult interesul cercettorilor n ultimul deceniu
datorit proprietilor intrinseci pretabile aplicaiilor medicale. Biocompatibilitatea
acestora, capacitatea de a elibera din reeaua polimeric compui hidrosolubili i
versatilitatea n modelarea proprietilor fizicochimice permit generarea de noi
biomateriale cu aplicaii n domeniul eliberrii controlate de medicamente.
Principalele metode de obinere a hidrogelurilor pe baz de polimeri naturali
sau/i sintetici sunt identificate i sunt enumerate proprietile i aplicaiile poteniale
ale acestor materiale. Hidrogelurile pot fi obinute prin dou mecanisme principale:
hidrogeluri cu legturi covalente sau ireversibile i hidrogeluri cu legturi reversibile
sau fizice. Cea de-a doua categorie cuprinde subclase variate cum ar fi interaciunile
ionice (hidrogeluri reticulate ionic sau complexe polielectrolitice) i interaciuni
secundare (hidrogeluri nclcite, hidrogeluri grefate sau complexate, etc.).
Procesul de reticulare reprezint o metod prin care hidrogelurile se pot adapta
cerinelor fiecrei aplicaii (viteza de biodegradare, proprietile mecanice, gradul de
umflare, capacitatea de includere/eliberare principii active, porozitatea, etc.).
Chitosanul

Chitosanul, poli-(1,4)-2-amino-2-deoxi--D-glucan (Fig. 1), este un copolimer

policationic, constituit din uniti de glucozamin i N-aceti l-glucozamin legate
glicozidic n poziia 1-4, derivat de chitin cu diferite grade de deacetilare (de la 70 la
95%) i cu mas molecular medie ce variaz de la 10 la 1.000 de kDa.

FIGURA. 1. Structura chitosanului

Acest polizaharid natural este lipsit de toxicitate i prezint o bun

biocompatibilitate i biodegradabilitate, care-i asigur o gam larg de aplicaii,
printre care amintim: formulri topice n oftalmologie, implanturi sau ca soluii
injectabile i ca agent ce faciliteaz ptrunderea substanelor hidrofile prin mucoasa
epitelial. Totodat, chitosanul i-a dovedit eficacitatea ca agent antimicrobian,
hemostatic, antioxidant, regenerant tisular i cicatrizant, biocompatibilitatea acestuia
fiind un element important n reducerea inflamaiei locale. Este studiat, de asemenea,
cu rezultate ncurajatoare n medicaia antitumoral, precum i n reducerea nivelului
de colesterol seric. Cea din urm proprietate a fost explicat printr-o serie de
mecanisme, printre care: interaciunea electrostatic dintre lipide i
aminopolizaharide, ceea ce duce la inhibarea absorbiei lipidelor, precum i creterea
excreiei acizilor biliari, fapt ce duce la creterea cantitilor de grsimi eliminate prin
fecale.

Tehnici de lucru

Metoda de preparare a hidrogelurilor CG obinute prin dubl reticulare

Metoda de preparare a hidrogelurilor obinute prin dubl reticulare se poate
observa schematic n Figura 2. Pe scurt, hidrogelurile pe baz de CG i CP au fost
preparate printr-o reticulare covalent parial cu AG urmat de o reticulare ionic cu
Na2SO4/TPP. Condiiile de obinere au fost urmtoarele: polimerii, ntr-o cantitate
total de 125 mg, au fost dizolvai timp de 24 de ore n 5 mL soluie acid acetic 2%
(v/v), la temperatura camerei. Cantitatea specific de AG necesar pentru a reticula
20% dintre gruprile aminice libere ale chitosanului i gelatinei a fost adugat, n
picturi, sub agitare energic, peste soluia de polimeri. Gruprile aminice libere ale
gelatinei au fost calculate innd cont de compoziia aproximativ a aminoacizilor
diamino monocarboxilici din gelatina de tip B.
Gruprile aminice ale polizaharidului au fost calculate n funcie de gradul de
deacetilare al acestuia. Cantitatea minim optim de AG pentru ca filmele s prezinte
stabilitate mecanic minim a fost fixat n urma unor teste preliminare. Amestecul
obinut a fost supus ultrasonrii la baia de ultrasunete pentru a se ndeprta bulele de
aer formate n timpul agitrii manuale. Ulterior, hidrogelurile au fost introduse n
etuv timp de o or la temperatura de 40C pentru a usca parial hidrogelurile i a
permite umflarea n soluia de reticulant ionic. Apoi, acestea au fost imersate n soluii
apoase de sulfat de sodiu/tripolifosfat de sodiu de concentraii diferite timp de 30 de
minute. Cantitatea corespunztoare de agent de reticulare ionic a fost dizolvat n 10
mL ap distilat. Pentru optimizarea proprietilor hidrogelurilor s-a urmrit influena
raportului masic ntre polimeri, a tipului de reticulant ionic i a cantitii acestora.

FIGURA. 2. Reprezentare schematic a procesului de obinere a hidrogelurilor

complexe dublu reticulate
 Metoda de preparare a hidrogelurilor CP obinute prin dubl reticulare
Au fost obinute hidrogeluri dublu reticulate pe baz de CP prin aceeai metod
descris anterior (Figura 2) cu meniunea c hidrogelurile reticulate covalent au fost
imersate n soluii de reticulant ionic de concentraie 1% n toate cazurile. Parametrii
variai au fost tipul de reticulant ionic i raportul ntre cei doi polimeri.

Studiul comportrii la umflare n PBS a hidrogelurilor dublu reticulate

Hidrogelurile pe baz de chitosan/gelatin i chitosan/poli(alcool vinilic) au
fost caracterizate din punct de vedere al capacitii de umflare n soluie tampon fosfat
pH=7.4, dat fiind c aceast caracteristic influeneaz semnificativ procesul de
eliberare prin difuzie a medicamentelor incluse. Capacitatea de umflare a
hidrogelurilor obinute, evaluat prin gradul maxim de umflare atins dup 48 ore, este
dependent de tipul i cantitatea de agent de reticulare ionic, dar i de natura
polimerului partener la co-reticulare cu chitosanul.
n cazul hidrogelurilor pe baz de CG, gradul maxim de umflare dup 48 de ore
depete valoarea de 1200% ajungnd pn la 1700% pentru sistemele reticulate cu
sulfat de sodiu. De asemenea, umflarea este mai redus cu creterea cantitii de
chitosan, pe de o parte datorit densitii de reticulare mai mari determinat de
numrul mai ridicat de grupe aminice (respectiv ioni amoniu) participante la
reticulare, pe de alt parte datorit hidrofiliei mai reduse a polizaharidului.
Hidrogelurile reticulate cu TPP, la care densitatea de reticulare este mult mai
mare ca n cazul sulfatului de sodiu, se constat o reducere substanial a capacitii
de umflare.
n cazul hidrogelurilor pe baz de CP se remarc, pentru ambele tipuri de ageni
de reticulare ionici, amplificarea gradului maxim de umflare (la 48h). n cazul
hidrogelurilor reticulate cu Na2SO4 gradul de umflare depete 7000%, ajungnd
pn la 9000%. Explicaia const n faptul c poli(alcoolul vinilic), care substituie
gelatina, nu poate participa la reticularea ionic astfel nct densitatea de reticulare a
reelei obinute este mai joas dect la hidrogelurile omoloage pe baz de CG.
Creterea cantitii de chitosan conduce i n acest caz la o reea mai dens,
reducnd ca urmare i gradul maxim de umflare. n cazul hidrogelurilor obinute prin
reticulare cu TPP, gradul maxim de umflare este inferior celui obinut prin reticulare
cu anioni sulfat, consecin a unei densiti de reticulare mai ridicate, dar nu variaz
practic cu parametrii procesului de preparare.
 Glosar:
AG: Aldehid glutaric sau glutaraldehid
CP: Chitosan/poli(alcool vinilic)
CG: Chitosan/gelatin
PBS: soluie tampon fosfat
TPP: tripolifosfat de sodiu
Bibliografie

1. Malafaya P.B., Silva G.A., Reis R.L. Natural-origin polymers as

carriers and scaffolds for biomolecules and cell delivery in tissue
engineering applications. Adv Drug Deliv Rev 2007; 59: 20 7-233
2. Esmaeili F., Heuking S., Junginger H.E. Progress in CS-based
vaccine delivery systems. J Drug Del Sci Tech 2010; 20: 53-61
3. Muzzarelli R.A.A. Human enzymatic activities related to the
therapeutic administration of chitin derivatives. Cell Mol Life Sci 1997; 53:
131-140
4. Patashnik S., Rabinovich .L, Golomb G. Preparation and
evaluation of CS microspheres containing biphosphonates. J Drug Target
1997; 4: 371-380
5. Song J.S., Such C.H., Park Y.B. A phase I/IIa study on intra-arti
cular injection of holmium-166-CS complex for the treatment of knee
synovitis of rheumatoid arthritis. Eur J Nucl Med 2001; 28: 489-497
6. Xie Y., Liu X., Chen Q. Synthesis and characterization of water-
soluble chitosan derivate and its antibacterial activity. Carbohydr Polym
2007; 69: 142-147
7. Yang T.-C., Chou C.-C., Li C.-F. Anti bacterial activity of N-
alkylated disaccharide chitosan derivatives. Int J Food Microbiol 2005;
97(3) 237-245
8. Okamoto Y., Yano R., Miyatake K. Effects of chitin and chitosan
on blood coagulation. Carbohydr Polym 2003; 53: 337-342
9. Xie W., Xu P., Liu Q. Antioxidant activity of water-soluble
chitosan derivatives. Bioorg Med Chem Lett 2001; 11: 1699-1701
10. Ueno H., Mori T., Fujinaga T. Topical formulations and wound
healing applications of CS. Adv Drug Deliv Rev 2001; 52: 105-115
11. Dash M., Chiellini F., Ott enbrite R.M., Chiellini E. Chitosan
a versatile semisynthetic polymer in biomedical applications. Prog Polym
Sci 2011; 36: 981-1014
 12. Gallaher C.M., Munion J., Hesslink R.Jr. Cholesterol
Reduction by Glucomannan and Chitosan Is Mediated by Changes in
Cholesterol Absorption and Bile Acid and Fat Excretion in Rats. J Nutr
2000; 130: 2753-2759
13. Jtariu A. D., Danu M., Peptu C. A., Ioanid C., Ibnescu C. i
Popa M., Ionically and Covalently Cross-Linked Hydrogels Based on
Gelatin and Chitosan, Soft Materials, 2013, 11, 4554.
14. Jtariu (Cadinoiu) A. N., Holban M. N., Peptu C. A., Sava A.,
Costuleanu M. i Popa M., Double crosslinked interpenetrated network in
nanoparticle form for drug targeting-preparation, characterization and
biodistribution studies, Int. J. Pharm., 2012, 436, 66-74.
15. Schrieber R. i Gareis H.,Gelatine Handbook, Theory and
Industrial Practice, Weinheim, Germany.WILEY-VCH Verlag GmbH & Co.
KgaA, 2007.
16. Jones A. i Vaughan D., Hydrogel dressings in the management
of a variety of wound types: A review, Journal of Orthopaedic Nursing,
2005, 9, S1-S11.
17. Loh X. J., Peh P., Liao S., Sng C. i Li J., Controlled drug
release from biodegradable thermoresponsive physical hydrogel
nanofibers, Journal of Controlled Release, 2010, 143,175182.
18. Popa M., Aelenei N. i Hritcu D., Medical applications of
Polymers, American Scientific Publishers, California, USA, Popa M.,
Ottenbrite R.M. i Uglea C.V., Pharmacokinetics and Pharmacodynamics
of Drug Delivery by Polymer Systems, 2, 383-412.
19. Aelenei N., Popa M. I., Novac O., Lisa G. i Balaita L., Tannic
acid incorporation in chitosanbased microparticles and in vitro controlled
release, J Mater Sci: Mater Med, 2009, 20, 10951102.
20. Bogdan C. Ciobanu, Anca N. Cadinoiu, Marcel Popa, Jacques
Desbrires i Ctlina A. Peptu, Chitosan/poly(vinyl alcohol) hydrogels
for entrapment of drug loaded liposomes, trimis spre publicare la revista
Cellulose Chemistry and Technology - revist cotat ISI.
21. Bogdan C. Ciobanu, Simona Bci, Marcel Popa, Jacques
Desbrires i Maricel Agop, Time evolution of drug release mechanism
from chitosan based hydrogels, trimis spre publicare la revista Journal of
Physical Chemistry - revist cotat ISI