DEFINICION DE BACILOSCOPA

La baciloscopia es la tcnica de eleccin para el diagnstico rpido y el control del tratamiento de la

tuberculosis pulmonar del adulto. Es simple, econmica y eficiente para detectar los casos
infecciosos. Por eso es la herramienta fundamental de un programa de control de la tuberculosis.

COLORACIN DE ZIEHL NEELSEN

La cido-alcohol resistencia es la propiedad que tienen las micobacterias de captar en su

pared fucsina fenicada (de color fucsia) o auramina (amarillo fluorescente) y retenerla aun
con la accin de decolorantes, como la mezcla de cido y alcohol. Esta caracterstica se
debe al alto contenido en lpidos, particularmente a los cidos miclicos, que poseen en la
pared celular. As, utilizando una tcnica adecuada es posible identificar al bacilo de la
tuberculosis en la muestra del enfermo como un bastoncito rojo fucsia o fluorescente sobre
una coloracin de fondo que facilita su visualizacin.
La propiedad de cido-alcohol-resistencia se debe a la capsula gruesa y cerosa que rodea a
las clulas de las micobacterias. Para que la carbolfucsina acuosa penetre atravez de la
cera , la cpsula debe estar reblandecida. Esto se hace con calor en el procedimiento de
Ziehl Neelsen . El colorante que penetra la cpsula reblandecida por el calor se une ala
pared celular ; cuando las clulas bacterianas se enfran luego de eliminado el calor , la cera
se endurece otravez , lo que protege al colorante unido de la accin decolorante del alcohol
acido (alcohol acido resistente) .

PREPARACIN DE COLORANTES Y REACTIVOS

Fucsina bsica fenicada

Fucsina 3%
- Fucsina bsica 3 g
- Etanol 95 100 ml
Disolver por agitacin suave.

Fenol 5%
- Cristales de fenol 5 g
- Agua destilada 100 ml

Disolver los cristales en el agua (puede ser preciso calentar suavemente)

Manipular el fenol con guantes y cuidadosamente.

Fucsina fenicada. Solucin de trabajo

Combinar 10 ml de la solucin de fucsina al 3% con 90 ml de la solucin de fenol 5%, filtrar
pasando por un embudo con papel de filtro antes de usar.
Guardar todas las soluciones en frascos muy limpios, con cierre hermtico
Rotularlos con el nombre del reactivo y con las fechas de preparacin y vencimiento.
Almacenar a temperatura ambiente, al abrigo de la luz.

Solucin decolorante
Agregar siempre el cido al alcohol, suavemente, y no al revs porque la temperatura de la
solucin aumenta explosivamente
- cido clorhdrico (35%) 30 ml
- Etanol 95 970 ml
Mantener el envase hermticamente tapado.
 Donde sea difcil adquirir alcohol, puede utilizarse la siguiente solucin decolorante a base
de cido sulfrico:
- cido sulfrico concentrado (calidad tcnica) 25 ml
- Agua destilada csp 100 ml

Agregar el cido al agua, lentamente, agitando suavemente.

Rotular la botella con el nombre del reactivo y con las fechas de preparacin y vencimiento.
Almacenar a temperatura ambiente.

Azul de metileno
- Cloruro de azul de metileno* 3 g
- Agua destilada 1000 ml

* Cloruro de metiltionina, Methylthionine Chloride. Contenido de colorante 82%

Disolver el azul de metileno en el agua agitando suavemente, guardar la solucin resultante
en una botella color mbar. Rotular la botella con el nombre del reactivo y con las fechas de
preparacin y vencimiento. Almacenar a temperatura ambiente y filtrar antes de usar.

FUNCIN DE LOS COLORANTES

Fucsina bsica fenicada: Es el colorante primario, debe aplicarse con calor para que el
colorante penetre las paredes de las Mycobacterias, que tienen altas cadenas de lpidos y
ceras.
Solucin decolorante: Retira el exceso de fucsina- fenicada , al aplicarse el cido-alcohol,
las bacterias acido-alcohol resistentes no se desteirn, mientras que otras que tal ves se
tieron se decoloraran, mostrando al microscopio solo las BAAR.
Azul de metileno: Se aplica como colorante de contraste.

MODS

El mtodo de MODS (Microscopic Observation Drug Susceptibility assay) se basa en un cultivo

directo de muestras de esputo en medio lquido, que detecta Mycobacterium tuberculosis y evala
la susceptibilidad frente a isoniacida y rifampicina directamente de dichas muestras. El mtodo se
basa en que el crecimiento bacteriano en forma de cordones se visualiza tempranamente en medio
lquido a travs de un microscopio de luz invertida. Empleando un microscopio ptico de luz
invertida y una placa de 24 pozos con muestras de esputo decontaminadas y resuspendidas en
caldo Middlebrook 7H9 suplementado, se puede examinar y detectar las microcolonias en un
promedio de siete das. Es un mtodo mucho ms rpido que la deteccin del crecimiento
macroscpico de las colonias en medio slido. La incorporacin de isoniacida y rifampicina en el
proceso permite analizar rpida y directamente la deteccin de TB MDR. La simplicidad de la
tcnica, la gran sensibilidad del medio y el crecimiento caracterstico de M. tuberculosis, la
evaluacin de la su .

FUNDAMENTO DEL MTODO El mtodo se basa en la observacin de cordones caractersticos

de Mycobacterium tuberculosis cuando crece en medio lquido, los cuales son visualizados
tempranamente mediante el uso de un microscopio luz invertida. El mtodo, ha sido diseado para
la deteccin del crecimiento de MTB y la susceptibilidad a INH y RIF. La simplicidad de la tcnica,
la gran sensibilidad, la especificidad y el bajo costo son las mayores ventajas para su uso en pases
en vas de desarrollo. sceptibilidad frente a drogas en un corto tiempo y el bajo costo de los
reactivos, son sus mayores ventaja