ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS
INGENIERA EN BIOTECNOLOGA AMBIENTAL

PROYECTO DE BIORREMEDIACIN

DOCENTE: ING. KARLA GUERRA

TEMA: CARACTERIZACIN INICIAL DE SUELOS CONTAMINADOS CON

HIDROCARBUROS PROVENIENTES DEL CENTRO DE SERVICIOS
TCNICOS Y TRANSFERENCIA TECNOLGICA AMBIENTAL (CESTTA).

INTEGRANTES:
KATTY ANGULO
CATHERINE CABRERA
DIEGO CUJILEMA
MNICA HIDALGO
RHITA INCA
SILVANA MORETA
KLEVER NIQUINGA
JEIMY PREZ
STEPHANIE PINTADO
ANDREA RUIZ

SEMESTRE: OCTAVO A
RIOBAMBA ECUADOR

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 1. OBJETIVOS
1.1. OBJETIVO GENERAL
Desarrollar la caracterizacin inicial de suelos contaminados con hidrocarburos
provenientes del Centro de Servicios Tcnicos y Transferencia Tecnolgica
Ambiental (CESTTA).
1.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
Realizar la determinacin de parmetros fsico qumicos como; pH, temperatura
y humedad.
Determinar el porcentaje de nitrgeno y de fsforo asimilable en la muestra de
suelo contaminado.
Preparar un medio de cultivo y posteriormente realizar la siembra de la muestra
de suelo contaminado.
Ejecutar el conteo de microorganismos de la siembra realizada.
Identificar los metales pesados presentes en la muestra de suelo contaminado.
Determinar la cantidad de azufre elemental presente en la muestra de suelo
contaminado.
Efectuar la determinacin de pH y conductividad elctrica de la muestra de suelo
contaminado.
Reconocer los TPH Y HAPS presentes en la muestra de suelo contaminado.
2. INTRODUCCIN
Uno de los mtodos de biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos son las
biopilas que tambin se conocen como bioceldas, biomontculos o pilas de composteo. Se
utilizan para reducir las concentraciones de los hidrocarburos totales del petrleo (HTP) en
suelos contaminados con hidrocarburos a travs de la biodegradacin. La biopila se define
como un proceso biolgico controlado donde los contaminantes orgnicos son
biodegradados y mineralizados. El proceso consiste en formar pilas con el suelo
contaminado y estimular la actividad microbiana, aireando y/o adicionando nutrientes y
humedad. El incremento de la actividad microbiana es proporcional a la reduccin de las
concentraciones de HTP.
La tecnologa de biopilas utiliza el oxgeno contenido en el aire y estimulan el crecimiento
de bacterias aerobias, las cuales degradan los constituyentes del petrleo adsorbido por el

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 suelo; la forma de suministrar el oxgeno, el aire se inyecta o extrae a travs de tubos
perforados que atraviesan la pila.
Uno de los principales problemas de la biodegradacin, es que, en presencia de altas
concentraciones del contaminante en el suelo, pueden existir efectos de toxicidad sobre la
poblacin microbiana. Otro, es la insuficiencia de nutrientes en el suelo; sin embargo, la
presencia de cantidades mnimas de nitrgeno y fsforo permiten la biodegradacin en el
suelo, aunque a velocidades muy bajas. Los factores ambientales que afectan la actividad
microbiana y por lo tanto la biodegradacin son: contenido de humedad, temperatura,
nutrientes inorgnicos (principalmente nitrgeno y fsforo), aceptores de electrones
(oxgeno, nitrato, sulfato), pH, presencia de metales pesados, tipo y cantidad de material
orgnico presente.
La biodegradacin de los hidrocarburos se lleva a cabo principalmente por dos grupos de
microrganismos: las bacterias y los hongos. Las bacterias tienen un crecimiento muy rpido
y una mayor capacidad de adaptacin a los medios contaminados. La biodegradacin
depende de un adecuado suministro de agua, por lo que es importante conocer la porcin
de agua disponible para los microrganismos. Esta puede conocerse indirectamente a travs
de la capacidad de campo que depende de la textura y porosidad del suelo. La
biodegradacin de los hidrocarburos es ptima con un contenido de humedad entre 70 y 95
% de la capacidad de campo.
Los nutrientes inorgnicos principales para la biodegradacin son el nitrgeno y el fsforo.
El primero es necesario para la sntesis de protenas y la pared celular, mientras que el
fsforo es necesario para formar los cidos nucleicos y para el ATP. El nitrgeno puede
perderse rpidamente en el suelo debido a la lixiviacin del amonio y nitratos y por la
desnitrificacin del suelo. El fsforo se encuentra frecuentemente limitado debido, a su baja
solubilidad y biodisponibilidad. El fsforo orgnico en suelos se encuentra principalmente
en los cidos hmicos mientras que el fsforo inorgnico se encuentra en combinacin con
el Fe, Al, Ca, F.
La biorremediacin depende principalmente de la actividad de los microrganismos aerobios
por lo que se requiere un suministro adecuado de oxgeno al suelo. Aproximadamente se
requieren de 3Kg de O2/ Kg de HC para asegurar una buena degradacin. Cuando los poros
del suelo se encuentran ocupados por molculas de agua, la difusin del oxgeno es menor

3
 y se pueden presentar condiciones anxicas. Para tener una degradacin aerobia es
necesario tener aproximadamente 10% de poros libres en la matriz del suelo. Los
contaminantes orgnicos presentes en el suelo, son la fuente de carbono que los
microrganismos requieren para la biodegradacin.

3. MARCO TERICO
EL SUELO
Qu es?
El suelo est compuesto por minerales, materia orgnica, diminutos organismos
vegetales y animales (microorganismos), aire y agua. Es una capa delgada que se ha
formado muy lentamente, a travs de los siglos, con la desintegracin de las rocas
superficiales por la accin del agua, los cambios de temperatura y el viento. Las
plantas y animales que crecen y mueren dentro y sobre el suelo son descompuestos
por los microorganismos, transformados en materia orgnica y mezclados con el
suelo.
Composicin del suelo
La matriz de un suelo est compuesta por los siguientes componentes principales:
Minerales: Los materiales minerales constituyen los principales componentes
estructurales de los suelos y suponen ms del 50% del volumen total.
Aire agua: Conjuntamente constituyen el volumen de poros, que, por lo
general, ocupa entre el 25 y 50% del volumen total. La proporcin aire agua
vara considerablemente con la humedad del suelo.
Organismos vivos: Ocupan menos del 1% del volumen.
Materia orgnica: Oscilan entre el 3 y 6% del volumen, con valor medio.(Cando,
2011)

Caractersticas de los suelos agrcolas

No todos los suelos son iguales para la agricultura, los hay mejores o peores segn
sus caractersticas.

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 Fuente:(Jorajuria, 2000)

Un buen suelo agrcola debe ser:

a) Lo suficientemente poroso para permitir la circulacin del aire y del agua en su interior.
b) Acidez neutra que permita el desarrollo de la mayor parte de las plantas y a su vez
favorezca la descomposicin de la materia orgnica.
c) Rico en materia orgnica (humus) que favorezca la vida de los microorganismos, aire el
suelo y favorezca la retencin del agua.
d) Rico en microorganismos (insectos, hongos, bacterias.) que descompongan la materia
orgnica y la transformen en minerales para las plantas.

As pues los suelos no slo estn formados por tierra, sino que junto a sta ha de haber materia
orgnica en descomposicin y muchsimos microorganismos.
Otras caractersticas del suelo agrcola es que se encuentra en zonas de clima que favorecen
el desarrollo y crecimiento de cultivos, teniendo en cuenta principalmente la variacin de
precipitaciones (lluvias), temperatura, vientos, periodicidad de sucesos como fenmenos
climticos (tormentas elctricas, vientos fuertes, etc.); por otra parte, el suelo debe ser rico
en nutrientes, y tambin influye la pendiente del suelo que para el caso de suelos aptos para
la agricultura debe ser igual o menor a 5% (se puede medir mediante un proceso determinado
con herramientas especficas). (Jorajuria, 2000)

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 CARACTERSTICAS, COMPOSICIN Y PROPIEDADES FISICOQUMICAS DE
LOS HIDROCARBUROS
Los principales componentes del petrleo son los hidrocarburos, los cuales representan el
50-98% en relacin a la composicin total.
El carbono (80-87%) y el hidrgeno (10-15%) son los principales y ms abundantes
elementos en el petrleo, aunque otros como el azufre (0-10%), nitrgeno (0-1%) y el
oxgeno (0- 5%) estn presentes en cantidades menores ya sea en su forma elemental o bien
como constituyentes heterocclicos y grupos funcionales. Tambin se reportan algunos
metales traza como Vanadio, Nquel, Hierro, Aluminio y Cobre, cuya concentracin va
dependiendo del tipo de petrleo crudo y la regin en donde se form.
As, los hidrocarburos del petrleo consisten en compuestos saturados de cadena lineal
(alcanos), compuestos acclicos (ciclo alcanos) y compuestos aromticos conteniendo
cuando menos un anillo bencnico en su estructura molecular. Los alcanos a su vez pueden
ser saturados de cadena lineal o isoalcanos de cadena ramificada con la formula general
(CnH2n+2) y con tomos de carbono desde C1 hasta C40 y en ocasiones se han reportado
cadenas con ms de 60 tomos de carbono. (Botello, 2005)

FUNDAMENTO BIOQUMICO DE LA BIODEGRADACIN

El fundamento bioqumico de la biorremediacin se basa en que en la cadena respiratoria, o
transportadora de electrones de las clulas, se van a producir una serie de reacciones de
xido-reduccin cuyo fin es la obtencin de energa. La cadena la inicia un sustrato orgnico
(compuestos hidrocarburados) que es externo a la clula y que acta como dador de
electrones, de modo que la actividad metablica de la clula acaba degradando y
consumiendo dicha sustancia.(Arroyo, 2004)

Fuente: (Arroyo, 2004)

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La concentracin y composicin de la comunidad microbiana y la tasa de transformacin de
contaminantes est influenciada por diversos factores:

Necesidad de nutrientes: El metabolismo microbiano est orientado a la reproduccin de

los organismos y stos requieren que los constituyentes qumicos se encuentren disponibles
para su asimilacin y sintetizacin. Los nutrientes principalmente requeridos son el fsforo
y el nitrgeno. Por lo general suele haber en el suelo una concentracin de nutrientes
suficiente, sin embargo, si estos no se encontrasen en el rango normal se puede adicionar
mayor cantidad al medio. El rango normal de C: N: P depende del sistema de tratamiento a
emplear, siendo de modo habitual 100:10:1.

pH del suelo: afecta significativamente en la actividad microbiana. El crecimiento de la

mayor parte de los microorganismos es mximo dentro de un intervalo de pH situado entre
6 y 8. As mismo el pH tambin afecta directamente en la solubilidad del fsforo y en el
transporte de metales pesados en el suelo. La acidificacin o la reduccin del pH en el suelo
se puede realizar adicionando azufre o compuestos del azufre.

Temperatura: generalmente las especies bacterianas crecen a intervalos de temperatura

bastante reducidos, entre 15 y 45C (condiciones mesfilas), decreciendo la biodegradacin
por desnaturalizacin de las enzimas a temperaturas superiores a 40C e inhibindose a
inferiores a 0C.

Humedad: los microorganismos requieren unas condiciones mnimas de humedad para su

crecimiento. El agua forma parte del protoplasma bacteriano y sirve como medio de
transporte a travs del cual los compuestos orgnicos y nutrientes son movilizados hasta el
interior de las clulas. Un exceso de humedad inhibir el crecimiento bacteriano al reducir la
concentracin de oxgeno en el suelo. El rango vara en funcin de la tcnica.

Estructura qumica del hidrocarburo: la inherente biodegradabilidad de un hidrocarburo

depende, en gran medida, de su estructura molecular. Siendo los parmetros que ms van a
afectar la halogenacin, la existencia de ramificaciones, la baja solubilidad en el agua y la
diferente carga atmica.

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 UTILIZACIN DE BIOPILAS EN EL PROCESO DE BIORREMEDIACIN

La tcnica de biopilas es un tratamiento de biorremediacin de tipo ex situ en condiciones no

saturadas, consistente en la reduccin de la concentracin de contaminantes derivados del petrleo
en suelos excavados mediante el uso de la biodegradacin.

La tcnica consiste en la formacin de pilas de material biodegradable de dimensiones variables,

formadas por suelo contaminado y materia orgnica (compost) en condiciones favorables para el
desarrollo de los procesos de biodegradacin de los contaminantes.

Estas pilas de compost pueden ser aireadas de forma activa, volteando la pila, o bien de forma
pasiva, mediante tubos perforados de aireacin.

En principio, las biopilas se pueden aplicar a la mayora de los compuestos orgnicos, siendo ms
eficaz en los compuestos de carcter ms ligero.

Entre los factores que influyen en la aplicacin de las biopilas destacan:

Los hidrocarburos deben ser no halogenados y deben encontrarse en el suelo en

concentraciones menores a 50.000 ppm.
Necesidad de una densidad de poblaciones microbianas (>1.000 CFU/gramo de suelo),
condiciones de humedad (40-85% de capacidad de campo), temperatura (10 y 45C),
textura (baja proporcin de arcillas), pH del suelo adecuadas (6 y 8) y baja presencia de
metales pesados (< 2.500 ppm).
La concentracin de nutrientes en el suelo cuyo rango normal de C: N: P sea de 100:10:1.
El tiempo de actuacin puede ser alto (meses a aos) y el coste bajo.

Atenuacin natural

La atenuacin natural, aunque no est considerada como una tcnica de descontaminacin

propiamente dicha, est englobada dentro de las tcnicas de remediacin in situ de muy bajo coste.
Su caracterstica principal es la utilizacin de los procesos fisicoqumicos de interaccin
contaminante-suelo y los procesos de biodegradacin que tienen lugar de forma natural en el
medio. Estos procesos se conocen como procesos de biorremediacin natural.

Los procesos de biorremediacin natural son aquellos que van a reducir la concentracin de los
contaminantes y entre los que se encuentran la dilucin, dispersin, volatilizacin, adsorcin,

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biodegradacin y aquellas reacciones qumicas que se producen en el suelo o en el agua y que
contribuyen de alguna forma a la disminucin de la contaminacin.

Entre los factores que influyen en la eficacia y viabilidad de la atenuacin natural destacan:

La exigencia de proteccin y el riesgo de los potenciales receptores durante el tiempo que

dura la atenuacin.
La existencia de unas condiciones geolgicas y geoqumicas favorables.
Las necesidades de reduccin de la masa contaminante en un intervalo razonable de tiempo
(meses a aos), tanto en la superficie del suelo como en la zona ms subsuperficial del
mismo, as como de la calidad de las aguas subterrneas.
Confirmacin de la existencia de los tipos y nmero de poblaciones de microorganismos
que puedan biodegradar los contaminantes.
Produccin y conservacin en el medio de subproductos de carcter persistente o ms
txico que los iniciales, durante y despus de la atenuacin natural.
Para condiciones aerobias la condicin ambiental ptima de concentracin de oxgeno
disuelto en el agua debe ser superior a 0,5 mg/l. (Arroyo, 2004)

ANLISIS REALIZADOS EN EL CESTTA

Recuento de microorganismos

Se trata de conocer el nmero total de microorganismos presentes en el suelo. Este

nmero no guarda relacin con el de microorganismos patgenos por lo que no puede
usarse como ndice de su presencia y slo debe considerarse un indicador de las
caractersticas.

Dependiendo de las caractersticas del medio utilizado (medio rico, medio limitado
en nutrientes para medida de la flora no lctica de alimentos fermentados) y de las
condiciones de incubacin (mesfilos, psicrfilos) los microorganismos analizados
sern miembros de poblaciones diferentes. En general se investiga la presencia de
microorganismos aerobios o aerotolerantes (anaerobios facultativos); aunque, en
ciertas situaciones, puede ser de inters hacer recuentos de anaerobios totales.

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 Se han desarrollado tcnicas que hacen posible la automatizacin del proceso. Hay
cuatro tcnicas biolgicas bsicas tcnicas de recuento de viables:

1. - Conteo en placa Standard (Standard Plate Count).

2.- Determinacin del nmero ms probable.

3.- Mtodos basados en la reduccin de colorantes por viables.

4.- Contaje microscpico directo. (Rodrguez, 2007)

Conductividad elctrica del suelo

Todos los suelos frtiles contienen por lo menos pequeas cantidades de sales
solubles. La acumulacin de sales solubles en el suelo se atribuye principalmente a
problemas de drenaje y a la accin de riegos continuados, seguidos de evaporacin y
sequa.

Cuando un suelo tiene un exceso de sales solubles se le denomina suelo salino. La

medida de la conductividad elctrica (CE) del suelo y de las aguas de riego permite
estimar en forma casi cuantitativa la cantidad de sales que contiene. El anlisis de la
CE en suelos se hace para establecer si las sales solubles se encuentran en cantidades
suficientes como para afectar la germinacin normal de las semillas, el crecimiento
de las plantas o la absorcin de agua por parte de las mismas.

Las sales solubles que se encuentran en los suelos en cantidades superiores al 0.1 %
estn formadas principalmente por los cationes Na+, Ca2+ y Mg2+ asociados con los
aniones Cl-, SO42-, NO3- y HCO3-. (Ruz, 2009)

Medicin de la humedad del suelo

Para la medicin de la humedad del suelo se tienen mtodos de laboratorio y mtodos

de campo. Los mtodos de laboratorio se caracterizan por que determinan
directamente la humedad del suelo.

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 Mtodo gravimtrico.

Este mtodo determina el contenido de humedad del suelo como el peso del agua
dentro de la matriz del suelo. Se evala como la diferencia de peso entre una muestra
de suelo hmeda y seca. Implica la recoleccin de la muestra del suelo, pesndola de
ser posible en ese momento para determinar su peso hmedo. Luego se lleva al
laboratorio donde se seca en un horno a 105 C durante 24 horas, momento en que es
pesada nuevamente. La humedad de la muestra. (Martnez, 2001)

Medicin del pH del suelo

En los suelos, el pH es usado como un indicador de la acidez o alcalinidad de stos y

es medido en unidades de pH. El pH es una de las propiedades ms importantes del
suelo que afectan la disponibilidad de los nutrimentos, controla muchas de las
actividades qumicas y biolgicas que ocurren en el suelo y tiene una influencia
indirecta en el desarrollo de las plantas.

Procedimiento de Extraccin: se mide una cantidad definida de suelo seco y molido

y se coloca en un vaso de extraccin. Se agrega agua desionizada en proporcin 1:25
y se agita durante 10 minutos.

Procedimiento Analtico: el pH-metro debe ser calibrado previamente con las

soluciones buffer de pH 4.00, 7.00 y 10.00. Luego, se introduce el electrdo en la
muestra y se proceda a realizar la lectura de pH. (Jarpa, 2003)

Compuestos no Hidrocarburos presentes en el suelo

Varios de estos compuestos se encuentran en el crudo y en las corrientes refinadas. Los ms
importantes son sulfuros orgnicos, compuestos de nitrgeno y de oxgeno. Tambin hay
trazas de compuestos metlicos que pueden ser causa de problemas en ciertos procesos
catalticos. (Ferrera, 2006)
Compuestos de Azufre
Los compuestos de azufre determinan la corrosividad potencial del crudo. En las naftas
presentan dificultades en cuanto a corrosin, olor y explosiones deficientes de las mismas.

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 El crudo que contiene SH2 se denomina "Crudo cido", pero algunas tecnologas se refieren
descuidadamente a crudo "High sulphur" como crudo cido. En el crudo "High sulphur", el
SH2 puede ser bajo, pero el porcentaje de compuestos que contienen azufre es alto. El crudo
cido tiene mucho SH2, el crudo agrio tiene muchos mercaptanes, por ejemplo y es muy
corrosivo.
Los compuestos de azufre son complejos y generalmente trmicamente inestables. Los
cclicos como el tiofeno son ms estables. Se eliminan craquendolos durante el proceso de
refinacin en el cual se forma SH2 y compuestos orgnicos simples de azufre.
Ciertos compuestos de azufre que son corrosivos por su acidez como SH2 y mercaptanos,
se eliminan con tratamientos qumicos. Los compuestos de azufre no cidos se transforman
en SH2 durante el tratamiento. (Ferrera, 2006)
Compuestos de Nitrgeno
El contenido de nitrgeno en la mayora de los crudos existentes, es relativamente bajo,
generalmente menor que 0,1% en peso aumentando en las fracciones de alto punto de
ebullicin.
Hay varios tipos de hidrocarburos nitrogenados y son considerablemente ms complejos
que los compuestos hidrocarbonados de azufre. Son completamente estables trmicamente
y por esta razn en los cortes livianos solo aparecen trazas de nitrgeno. Se cree que son
derivados de las protenas presentes en los materiales a partir de los cuales se form el
crudo. Una pequea cantidad presente en el gasoil de la alimentacin para cracking
cataltico tiene un efecto adverso sobre la selectividad de la catlisis. En los petrleos
crudos no existen compuestos bsicos de N2, estos se forman por descomposicin en la
destilacin.
Compuestos Metlicos
Los compuestos metlicos deben conocerse dado trazas de metales tales como Fe, Na, Ni,
V, Pb, y As tienen efectos adversos sobre los procesos de refinacin.
El que se encuentra en forma ms abundante es el vanadio junto con menores niveles de
nquel y hierro. El Bosque de Venezuela por ejemplo, tiene 1200 ppm de V y 150 ppm de
Ni. El mayor problema es que aun en pequeas cantidades estos elementos son veneno en
varias etapas del procesamiento.

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 La presencia de vanadio es indeseable por ser veneno del catalizador. La misma se
comprueba mediante pruebas de absorcin o emisin atmica. El Na puede causar
problemas en el enladrillado de los hornos. Se encuentran generalmente como sales
disueltas en el agua suspendida o como compuestos organometlicos y jabones metlicos.
Existen numerosas tcnicas para su determinacin, siendo las ms utilizadas las de
absorcin atmica. Tambin existen en el petrleo trazas de metales en solucin o en
suspensin como entidades inorgnicas. (Ferrera, 2006)

4. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS Y SUSTANCIAS

4.2.Calculo de temperatura (T):

Materiales:

Termmetro

Sustancias

Suelo contaminado (Biopila)

4.3.Calculo de pH:

Materiales:

Vaso de precipitacin
Varilla de agitacin
Esptula
Papel aluminio

Equipos:

Balanza analtica
pH metro

Sustancias:

Agua destilada
100g de suelo

13
 4.4.Calculo de la humedad:

Materiales:

Mortero
Pistil
Crisol
Esptula
Papel aluminio

Equipos:

Horno de secado
Desecador
Balanza analtica

Sustancias:

Agua destilada
3g de suelo
4.5.Clculo del porcentaje de fsforo (P):

Materiales:

Vasos de precipitacin
Matraz Erlenmeyer de 250 ml
Soporte Universal
Frascos
Fibra de vidrio
Muestra de suelo

Equipos:

Espectrofotmetro UV

Reactivos:

Vanadato

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 Fenolftalena
Olsen

Sustancias:

Agua destilada

4.6.Clculo del porcentaje de nitrgeno (N):

Materiales:
Mortero
Pistilo
Esptula
Papel aluminio
Tamizador pequeo
Fundas plsticas
Muestra de suelo

Equipos:

Balanza elctrica
Digestor
Equipo para destilar
Equipo de titulacin

Reactivos:

Sulfato de cobre
Sulfato de potasio
cido sulfrico
cido Brico
Rojo de metilo
Verde de bromocresol

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 Sustancias:

Agua
5.7.Preparacin de medio de cultivo, siembra y conteo de microorganismos:

Preparacin del medio de cultivo

Materiales

Tubos de ensayo
Gradilla
Mechero de alcohol
Varilla de agitacin
Pipetas
Erlenmeyer de 250 ml.
Vasos de precipitacin 250mL
Toallas absorbentes.
Una franela.
Guantes.
Mascarilla.
Mandil.
Papel aluminio.
1 Pera.
Equipos
Autoclave
Agitador mecnico
Balanza elctrica

Siembra y conteo de microrganismos:

Materiales
Micropipeta regulada de 1mL
Placas petrifilm
Tubos de ensayo

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 Vasos de precipitacin 250mL
Toallas absorbentes.
Una franela.
Guantes.
Mascarilla.
Mandil.
Mechero de alcohol
Equipos
Incubadora
Flujo Lamina

5.8.Identificacin de metales pesados:

Materiales:

Pera de succin
Pipeta graduada
Vasos de precipitacin
Papel filtro
Pipeta graduada

Equipos:

Espectrofotmetro de emisin atmica

Digestor de suelos

Reactivos:

cido ntrico

Sustancias:

Agua destilada

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 5.9.Determinacin del contenido de Azufre elemental:

Materiales:

Frasco estril
Pera de succin
Pipeta graduada
Muestra de suelo

Equipos:

Espectrofotmetro UV
Agitador mecnico

Reactivos:

Reactivo de sulfato SulfaVer 4

Sustancias:

Agua destilada
5.10. Clculo del pH y conductividad elctrica

Materiales

Mortero
Tamizador
Esptula
Envase de muestra (muestra de orina)

Equipos

Balanza
Agitador
pH metro multifuncional

Sustancias

Agua destilada

18
 5.11. Anlisis de TPH Y HAPS

Sustancias y Reactivos:

Agua ionizada
Solvente (Diclorometano)
Solvente( Diclorometano + hexano)
Acetonitrato
Materiales
Tubos de ensayos
Pipeta volumtrica
Peras de succin
Esptula
Equipos
Generador ultrasnico con potencia de 300 W
Aparato Agitador con movimiento horizontal (de 200 a 300 oscilaciones por
minuto)
Centrfuga
Evaporador rotatorio provisto de un bao de agua con control adecuado de
temperatura
Balanza analtica

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 4. PROCEDIMIENTO
4.1. Clculo de Temperatura:

Insertar el termmetro
en la rea del suelo Esperar unos minutos,
hasta la lnea marcada en aproximadamente entre
el medidor (12 cms. 3 o 4 minutos.
aprox.)

Se puede repetir las Registrar el dato de

mediciones en varios temperatura obtenido
puntos. del termmetro.

4.7.Clculo de pH:

Tomar una muestra de Pesar 100 g de suelo con la Colocar 100mL de agua
suelo contaminado, ayuda de una balanza destilada en un vaso de
porcedente del CESTTA. analtica. precipitacin de 250 mL.

Al cabo de 24 horas, medir Dejar reposar la solucin

el pH de la solucin por un lapso de tiempo de
utilizando adecuadamente 24 horas. Agregar los 100g de suelo
el pH metro. en el vaso de precipitacin y
mezclar correctamente.

Registrar el valor obtenido.

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 4.8.Clculo de porcentaje de Humedad:

Tomar una muestra de suelo

Pesar el crisol de porcelana
hmedo representativo en
en la balanza analtica.
una bolsa de ziploc

Despus pesar 3 gramos de

Colocar los 3 gramos de suelo
suelo con la ayuda de la
hmedo en el crisol y pesar.
balanza analitica .

Colocar la muestra en el
Dejar enfriar la muestra en el
horno de secado durante 12
desecador y pesar la muestra
horas a una temperatura de.
seca.
105C.

Hacer tres veces este

procedimeinto para tres
muestras de suelo.

21
 4.9.Clculo del porcentaje de nitrgeno (N):

Se toma un mortero y pistilo, para

posteriormente triturar la
Tamizar la muestra de suelo,
muestra de suelo, con el objetivo
para de esta manera separar
de lograr una textura arenosa.
el grnulo grueso del grnulo
Esto se podr realizar solamente
fino.
cuando ya haya existido un
secado previo.

Una vez colocado en los tubos Se pesa de 1 a 2 gramos de

Realizar dos muestras con
del digestor, se aade suelo aproximadamente y se
pesos similares, los mismos
aproximadamente 2 gramos coloca en una canasta que se
que despus son colocados en
de un catalizador (sulfato de la realiza utilizando como
el digestor.
cobre y de potasio). material papel aluminio.

Se lleva al digestor los tubos,

donde la temperatura variar Llevar a enfriar y aadir 8
Colocar Ac. Sulfrico
hasta 500 grados centgrados gotas de un indicador mixto
aproximadamente 30 ml a
y esperar 3 horas, con la de rojo de metilo y verde de
cada una de las muestras.
finalidad de extraer metales y bromocresol.
que se neutralice.

Colocar en el erlenmeyer una

Para la titulacin el receptor
base en la varilla volumtrica Colocar en el tubo de detilado
es el Ac. brico (50 ml para
y dejar caer por goteo, hasta de 50 ml de agua.
cada muestra) al 2%.
que el cido cambie de color.

Reportar los volumenes de

cido utilizado.

22
 4.10. Clculo del porcentaje de fsforo (P):

Triturar la muestra del suelo

Pesar 10 g de suelo Aadir 25 ml de olsen con el
en un mortero, para
previamente tamizado y fin de extraer los macro y
posteriormente llevarlo a
colocar en un frasco. micronutrientes
tamizar.

Colocar en un nuevo frasco,

Filtrar a travs de una fibra de Agitar por aproximadamente
aadiendo 10 ml de muestra
vidrio. una hora.
filtrada.

Elaborar muestra en blanco

En el mismo frasco, aadir 10
con una diluci 1:10, para
ml de vanadato, 1 gota de
esto se coloca 10 ml de olsen Colocar la muestra en blanco
fenoftalena, aforar a 20 ml
con 1 gota de fenoftalena, en el espectrofotmetro UV
con agua destilada y agitar
aadir 10 ml de vanadato y visible para calibrar.
por aproximadamente una
aforar a 20 ml con agua
hora.
destilada.

Colocar la muestra a analizar

Anotar dichas observaciones. Observar los resultados. en el espectrofotmetro UV
visible.

23
 4.11. Clculo del porcentaje de microorganismos:
4.11.1. Preparacin del medio de cultivo
1. Rotular todo el material
indicando dilucin, o
tcnica de siembra, medios
de cultivo.
2. Realizar los clculos y
relaciones necesarias para
la preparacin del medio
de cultivo (Peptona) que es
necesario para la dilucin.
3. Diluir 3gr de Peptona en
200mL de agua destilada
4.11.2. Siembra y conteo de microrganismos.
1. Rotular todo el material
indicando dilucin, o tcnica
de siembra, medios de
cultivo.
2. Tomamos 1mL del flujo
laminar de la muestra de
suelo, la agitamos,
colocamos la muestra en un
tubo de ensayo y la
rotulamos como tubo 10-1.
3. Tomamos 1mL del tubo 1
y lo transferimos al tubo 2,
agitamos la mezcla al
menos diez veces y esa ser
la disolucin 10-2
24
7. Llevar a esterilizacin las
6. Colocar 90ml de la
soluciones hasta los 121C,
solucin en un vaso de
luego dejar enfriar por 15
precipitacin.
min.
8. Pesar 10gr de una
5. Colocar con una pipeta
muestra de suelo S-198 y
9mL de la solucin en 10
colocarla en una funda
tubos de ensayo
ziploc
9. Colocar los 10gr de la
4. Agitar la dilucin con
muestra de suelo en los
una varilla de agitacin
90mL de la solucin y
hasta su completa
llevarlo a un agitador
homogenizacin.
mecnico por 10 a 15 min.
6. A medida que se siembra
7. Observar las colonias
las disoluciones de suelo
formadas en cada uno de
contaminado se rotula las
los medios y reportar el
placas petrifilm e incubar a
conteo en UFC.
35 C por 72 horas.
5. Al obtener ya todas las
disoluciones procedemos a
8. Cuantificar las unidades
sembrar las mismas en las
formadoras de colonia en
placas petrifilm con el
cada una de las cajas.
medio de Peptona, las
soluciones 10-4 10-5 10-6
9. Desechar
4. Repetimos el
cuidadosamente las placas
procedimiento hasta
obtener la disolucin 10-6 en contenedores
apropiados.
 4.12. Identificacin de metales pesados

Secar la muestra Tamizar la

Triturar la
de suelo en una muestra de suelo
muestra de suelo.
estufa a 100 C. triturada.

Colocar la masa de Pesar

Aadir 10 ml de
suelo en un tubo aproximadamente
cido ntrico. (1:1).
para digestin. 1,0005 g de suelo.

Realizar la
digestin de la Realizar las mediciones
muestra mediante del contenido de metales
microondas pesados en el
(Programa: EPA espectrofotmetro de
3051: especfico emisin atmica.
para suelos).

4.13. Determinacin del contenido de Azufre elemental:

Tamizar la muestra
Triturar la muestra de suelo Pesar 5,0029 g de
de suelo. previamente suelo.
triturada.

Tapar el frasco y
llevarlo al agitador Aadir los 20 ml de
Filtrar al vaco. por el trasnscurso de reactivo de Azufre
una hora (S).
aproximadamente.

Realizar dilusion
Realizar la medicin Leer el valor del
solamente si es
en el equipo HACH. sulfato.
necesario.

25
 4.14. Clculo del pH y conductividad elctrica

Triturar los grumulos

Pesar 10 gramos de la
del suelo en el Tamizar el suelo.
muestra.
mortero.

Colocar 20 ml de agua Colocar en un vaso

Agitar 10 minutos.
destilada. estril.

Observar los datos del

Empapar de nuestra pH y conductividad en
Lavar los electrodos
muestra los la pantalla del equipo
con agua destilada.
electrodos. cuando ya se haya
estabilizado.

4.2.Clculo de HAPS

Realizar el mismo
Colocar al suelo
procedimiento de Somete a limpiador
solvente Agitar 1 minuto.
extraccin de suelo 2 ultrasnico.
(diclorometano).
veces ms.

Repetir el Extraer en la fase

Sacar y dejar enfriar 5
procedimiento liquida y reservar en Llevar a la centrifuga.
minutos.
anterior una vez ms. un tubo de ensayo.

Para concentrar la
muestra evaporando
todo el solvente y la
Unir los lquidos fase slida colocar en Filtrar, rotular y
Sacar la muestra y
extrados en un tubo el rotaevaporador 10 reservar hasta llevarlo
colocar acetonitrilo.
de ensayo. minutos a equipo de anlisis de
aproximadamente (o HAPS.
hasta que ya no se
observe fase lquida).

26
 4.3.Clculo de THP

Pesar una muestra de 4 Con ayuda de una pipeta

g aproximadamente de volumtrica agregar 5ml
Colocar en el agitador
suelo contaminado de solvente
por 1 minuto.
previamente triturado (diclorometano +
en un tubo de ensayo. hexano) a la muestra.

Para iniciar la
Sacar y dejar enfriar en extraccin: meter al
Meter al limpiador
el periodo de 5 a 10 limpiador ultrasnico a
ultrasnico 5 minutos.
minutos. 52C por en tiempo de 5
minutos.

Colocar 5 ml ms de Retirar el lquido en otro

Someter a agitacin por
solvente al tubo que tubo, reservar y dejar el
1 minuto.
contiene el slido. slido en el mismo tubo.

Introducir a la
Centrifugar para obtener centrifuga por 5 minutos
Sacar del limpiador,
una segunda separacin para lograr una mejor
dejar enfriar 5 minutos.
de fases. separacin de la fase
slida con la lquida.

Retirar la fase lquida y

colocar donde estaba la Filtrar para evitar el Colocar en un tubo vial,
anteriormente paso de material slido. codificar y reservar para
reservada. realizar el anlisis en el
equipo de TPH.

27
6. RESULTADOS Y ANLISIS
6.7.RESULTADOS
6.7.1. DETERMINACIN DE TEMPERATURA

1er Anlisis - Da de anlisis: 2/12/2016

Temperatura de la superficie = 30C

Temperatura a 20cm de profundidad = 22C

2do. Anlisis - Da de anlisis: 8/12/2016

Temperatura = 26C

3er. Anlisis - Da de anlisis: 9/12/2016

Temperatura = 27C

6.7.2. DETERMINACIN DE pH

1er. Anlisis -

N.- MUESTRA Da pH
1 2/12/2016 8.9
Nota: para la determinacin de este elemento se utiliz el pH metro

2do. Anlisis -

N.- MUESTRA Da pH
2 7/12/2016 9.48
Nota: para la determinacin de este elemento se utiliz el pH metro

3er. Anlisis

N.- MUESTRA Da pH
2 9/12/2016 9.53
Nota: para la determinacin de este elemento se utiliz el pH metro

28
 6.7.3. DETERMINACIN DEL % DE HUMEDAD

1er Anlisis

Da de anlisis: 2/12/2016

Muestra Peso de Masa de Mth=Mc + Masa de MTs=Mth-

crisol (Mc) suelo Mh suelo seco Ms
normal (Ms)
(Mh)
1 39.54 3.0164 42.5564 41.7202 0.8362
2 38.95 3.0631 42.0131 41.1650 0.8481
3 39.32 3.0598 42.3798 41.546 0.8333

Frmula general:

% = 100%
Mh

Muestra 1

3.0164 0.8362
= 100% = 72.27%
3.0164

Muestra 2

3.0631 0.8481
= 100% = 72.31%
3.0631

Muestra 3

3.0598 0.8333
= 100% = 72.76%
3.0598

Humedad total

72.27 + 72.31 + 72.76

= = 72.444%
3

Humedad total= 72.44%

29
2do. Anlisis

Da de anlisis: 9/12/2016

Muestra Peso de Masa de Mth=Mc + Masa de MTs=Mch-

crisol (Mc) suelo Mh suelo seco Ms
normal (Ms)
(Mh)
1 38.72 3.0493 41.7693 41.4062 0.3631
2 34.37 3.0278 37.3978 37.0487 0.3491
3 38.49 3.0215 41.5115 41.1614 0.3501
Frmula general:

% = 100%
Mh

Muestra 1

3.0493 0.3631
= 100% = 88.09%
3.0493

Muestra 2

3.0278 0.3491
= 100% = 88.47%
3.0278

Muestra 3

3.0215 0.3501
= 100% = 88.41%
3.0215

Humedad total

88.09 + 88.47 + 88.41

= = 88.32%
3

Humedad total= 88.32%

30
 6.7.4. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE FSFORO
N.- MUESTRA ABSORBANCIA CONCENTRACION (mg/l)
1 0.274 0.4622
Nota: para la determinacin de este elemento se utiliz el espectrofotmetro
UV visible

6.7.5. DETERMINACIN DEL % DE NITRGENO

MUESTRA 1 (M1) MUESTRA 2 (M2)

Peso de Suelo en la Balanza.

M1 = 2.0002 g
M2 = 2.0001 g

TITULACIONES
MUESTRA 1 (M1) MUESTRA 2 (M2)

Concentracin del H2SO4

Normalidad [N]= 0.02
Normalidad Real [N Real]= 0.0212
Datos de Volmen.

31
M1. Volmen = 13.6 mL de H2SO4
M2. Volmen = 13.5 mL de H2SO4
Frmula General.

=
.

=

MUESTRA 1
(13.6)( 14 )(0.021224) 1000
= = . /
2.0002

2018.038196 /
= = . % . %
10000

MUESTRA 2
(13.5)( 14 )(0.021224) 1000
= = . /
2.0001

. /
= = . % . %
10000

6.7.6. CONTEO DE MICROORGANISMOS

Da de la siembra: viernes 02/12/016
Da del conteo: lunes 05/12/016
El conteo se realiz a las 72 Horas

DILUCIONES UFC/g Suelo

DILUCIN 10-4 Imposible Conteo
DILUCIN 10-5 480 X 105
DILUCIN 10-6 35 X 106

32
 6.7.7. IDENTIFICACIN DE METALES PESADOS Y AZUFRE
ELEMENTAL Y DEMS PARMETROS

PARMETRO RESULTADO
HIDROCARBUROS TOTALES 0.37 ug/g
pH 8.26 unidades de
pH
CONDUCTIVIDAD ELCTRICA 6820 uS/m
ARSNICO <0.5 ug/g
AZUFRE ELEMENTAL 1652.37 ug/g
BARIO 616.63 ug/g
BORO 10.2 ug/g
CADMIO <0.5 ug/g
COBALTO <10 ug/g
COBRE 27.61 ug/g
CROMO 15.42 ug/g
CROMO HEXAVALENTE 0,09 ug/g
CIANURO 0,053 ug/g
ESTAO 1,86 ug/g
FLUORUROS 2,78 ug/g
MERCURIO 0,23 ug/g
MOLIBDENO 0,94 ug/g
NIQUEL 17,53 ug/g
PLOMO 17,32 ug/g
SELENIO <0,5 ug/g
VANADIO <50 ug/g
ZINC 157,36 ug/g
HUMEDAD 6,96%
RAS 1,54
CONTEO DE MICROORGANISMOS 48x106
NITRGENO 0,20%

6.7.8. DETERMINACIN DE PH Y CONDUCTIVIDAD

N.- MUESTRA PH CONDUCTIVIDAD

1 (S198) 8.26 6820
Nota: Se utiliz 10 gramos de suelo y es un solo proceso para las dos
parmetros

6.7.9. DETERMINACIN DE TPH Y HAPS

33
 PARMETRO ANALIZADO Valor ug/g
Hidrocarburos totales 332,3
Hidrocarburos aromticos 0,37
policclicos

6.8.ANLISIS DE RESULTADOS
7. DATOS OBTENIDOS DE LOS RESULTADO Criterios de
ANLISIS REALIZADOS EN LOS Calidad de Suelo
Agrcola
LABORATORIOS DEL CESTTA Libro VI Anexo 2
TULSMA
HIDROCARBUROS TOTALES332.3 ug/g 0 ug/g
pH
8.26 6a8
CONDUCTIVIDAD ELCTRICA
6820 uS 2mmhos/cm
ARSNICO
<0,5 12
BARIO
616,63 750
BORO
10,2 2
CADMIO
<0.5 2
COBALTO
<10 40
COBRE
27,61 63
CROMO
15,42 65
CROMO HEXAVALENTE 0,09 0,4
ESTAO
1,86 5
MERCURIO0,23 0,8
MOLIBDENO0,94 5
NIQUEL
17,53 50
PLOMO
17,32 20
SELENIO<0,5 2
VANADIO
<50 130
ZINC
157,36 200
HAPs
0.37 ug/g <2 ug/g
FSFORO0.4622 mg/L 0.1- 0.3 mg/L
%NITRGENO 0.20% -
AZUFRE ELEMENTAL 1652.37 mg/Kg 250 mg/Kg

CANTIDAD MICROBIANA RECOMENDADA PARA UN TRATAMIENTO DE

DESCOMPOSICIN ES DE: 1 milln al menos de UFC/g Suelo. (CESTTA)
CANTIDAD OBTENIDA EN EL LAB. DEL CESTTA ES DE: (480 x105 o 48x106 ) UFC/g Suelo
Dentro de lo que est marcado con color amarillo indica que esta fuera del lmite permisible segn el
Libro VI Anexo 2 del TULSMA que nos trata especficamente para suelos agrcolas donde se puede
justificar que el suelo no est apto para esa actividad y requiere de un tratamiento que permita reducir

34
su concentracin o a su vez eliminarlos. Y lo que tambin nos preocupa es la deficiencia de ciertos
nutrientes como el nitrgeno para el metabolismo microbiano que debe estar disponible para poder
llegar a nuestro objetivo.
El nitrgeno presente en el Suelo es del 0.20% por lo que si puede ser aceptable esta cantidad pero si
queremos tratar un suelo que contiene HAPs y TPH se requiere de ms cantidad de Nitrgeno para
poder alcanzar la fase exponencial microbiana de crecimiento y se logren degradar todos esos
contaminantes por lo que se tendra que adicionar Nitrgeno y eso se lo podra hacer aadiendo Urea
(CH4N2O) al Suelo donde ah tendramos el Nitrgeno disponible.
La proveniencia del Suelo indica que es de alguna Industria petrolera, adems existen valores bajos
en lo que respecta a metales dentro de los cuales se logr identificar: Arsnico (As), Cadmio
(Cd), Cobalto (Co), Cromo (Cr), Cobre (Cu), Mercurio (Hg), Nquel (Ni), Plomo (Pb), Estao
(Sn) y Cinc (Zn) en comparacin con los parmetros permisibles ,pero s un pH bsico de 8.26
que indica la presencia de los Hidrocarburos segn como nos testifica el Libro de TULSMA estamos
tratando de un suelo que est gravemente afectado ya que segn la ley debera existir 0 ug/g o hasta
0.1 ug/g por la cual no cumple ya que nuestro suelo esta con 332.3 ug/g.
En la carga microbiana del Suelo obtenida en los Laboratorios del CESTTA pues indica que estamos
dentro de lo que se dira conveniente para tratar ese Suelo, pero resulta que la cantidad de Azufre
elemental est demasiado alto por lo que requiere ser disuelto y consumido por los microorganismos
por lo que la opcin sera realizar una Bioaumentacin para que el proceso de disminucin de azufre
se lo efecte en menor tiempo. De los microorganismos que se analizaron fueron Aerobios totales y
de los que se utilizara para hacer la Bioaumentacin estn los gneros de: Pseudomonas, Azotobacter
catalogadas como las ms eficientes para procesos de tratamiento de Hidrocarburos presentes en el
suelo.

8. OBSERVACIONES
8.7.Observaciones de la determinacin de concentracin de fsforo.
El olsen es utilizado para la extraccin de macro y micronutrientes que en
nuestro caso es el fsforo.
Se observ que para la extraccin de este elemento es necesario esperar que
las sustancias reaccionantes tengan el tiempo suficiente para reaccionar en
toda la muestra.
El vanadato es un indicador que cambia de color de la muestra a amarillo
segn la concentracin de fsforo presente.
Se utiliz el espectrofotmetro UV visible para la determinacin del mismo.
8.8.Observaciones de la Determinacin de %Nitrgeno.
El uso del catalizador (Sulfato de Cobre y de Potasio) acelera la reaccin que
ayudar a obtener en menor tiempo los resultados de determinacin de
Nitrgeno en la muestra de suelo no influye este catalizador en el anlisis.

35
 La tierra que se dio uso para este proceso debe estar seca
En el digestor le permite un calor variable que llega hasta 550C es por rangos
de temperatura primero lo que es el calentamiento luego la digestin
completa y luego empieza a bajar la temperatura.
En el programado del digestor, cuando se digesta el suelo se elevan vapores
cidos llegan a una solucin de Hidrxido de color azul y se neutraliza en un
tiempo de 3 Horas y media hasta que se enfre.
En el equipo de destilacin se coloc el Erlenmeyer con la solucin color rosa
por el indicador (rojo de metilo y verde de bromocresol) donde el gas sube se
condensa y cae y se tiene un receptor que es el cido brico se produce una
reaccin y se vuelve de color verde la solucin
Durante la titulacin se deja caer una base a la solucin de color verde y se
produce en cierto tiempo por goteo de una base una reaccin donde ste
cambia a color rosa que fue su color original.
El cido Sulfrico presenta dos Normalidad, pero para los clculos se trabaja
con la Normalidad Real ya que es la ms cercana a tener datos precisos como
lo realizamos en la prctica.
8.9.Observaciones Microbiolgicas
La preparacin del medio de Peptona se lo realiza sin calor porque solo con
agitacin lleg a disolverse homogneamente.
Todo el material debe estar debidamente esterilizado.
En el autoclavado a los 90C se deja escapar el vapor con la finalidad de que
se oxigene dentro de l y no ocurra derrames de las soluciones.
La tierra que se usa para este proceso debe tener un porcentaje de humedad.
Para el conteo se puso en la incubadora las diluciones de 10-4 10-5 10-6 a 35C
ya que se tratan de mesfilos con la finalidad es de tener una poblacin mayor
de 1 milln para poder determinar que mtodo de Biorremediacin se puede
aplicar para el suelo.
La dilucin10-4 tena una excesiva cantidad de aerobios totales por lo que se
descart esa placa y slo se cont las diluciones de 10-5 y 10-6

36
 El conteo se nos facilit porque cada consorcio microbiano tena un color
rojo que era visible.
Para el reporte de resultados se usa el elevado a la 10 con nmero positivo de
poblaciones, no se usa el negativo porque no estamos quitando poblaciones
de microorganismos.
8.10. Observaciones de TPH, HAPS, pH y conductividad elctrica.

HAPS TPH pH CONDUCTIVIDAD

Al colocar el -Al colocar el Mezcla Mezcla homognea de
solvente y agitar se solvente y homognea color grisceo
observa una mezcla agitar se de color
homognea. observa una grisceo
mezcla
-Despus de colocar homognea.
en la centrifuga se
puede observar una -Despus de
separacin de colocar en la
componentes en dos centrifuga se
fases. puede observar
una separacin
-La fase lquida se de
presenta con un componentes
color amarillento. en dos fases.

-La fase slida se -La fase

observa un color lquida se
caf. presenta con
un color
-Al momento de la amarillento.
extraccin en el
evaporador -La fase slida
rotatorio el lquido se observa un
se evapora. color caf.
-La fase lquida
final se observa una
consistencia pastosa
color caf

9. CONCLUSIONES
Se realiz la determinacin de parmetros fsico qumicos como: pH, temperatura
y humedad, de la muestra de suelo contaminado procedente del CESTTA,

37
 siguiendo los pasos adecuados para llevar a cabo estas mediciones, mismas que
fueron realizadas con una frecuencia de 2 veces por semana. El parmetro de
temperatura fue variando respecto a las condiciones climticas del lugar, dando
un valor de 30C la primera semana y 26 y 27C la segunda semana. El pH del
suelo medido en la en la primera semana (moderadamente alcalino, pH=8.9),
como el de la segunda semana (muy fuertemente alcalino, pH=9.53)no cumplen
con los valores mximos permisibles establecidos en la NORMA DE CALIDAD
AMBIENTAL DEL RECURSO SUELO Y CRITERIOS DE CALIDAD DE
REMEDIACINPARA SUELOS CONTAMINADO, LIBRO VI Anexo 2,TULSMA;
para un suelo de uso agrcola, esto debido a la relacin suelo solucin, donde el
efecto de humedecer el suelo regularmente aumenta el pH de la suspensin del
mismo, por lo que se pueden obtener diferencias superiores a una unidad de pH.
La humedad de la muestra de suelo en la primera semana fue 72.44% mientras
que al cabo de dos semanas fue de 88.32%, esto debido a que se procedi a
humedecer regularmente el suelo.
Se determin el porcentaje de nitrgeno y de fsforo asimilable en la muestra de
suelo contaminado procedente del CESTTA, que dependi principalmente del
tipo de material madre y de las condiciones climtica del lugar. El fsforo que se
constituye como nutriente esencial de suelo, present una concentracin de
0.4622mg/L (igual a 0.4622mg/kg), lo que significa que este suelo sobrepasa los
lmites en los que el fsforo se encuentra plenamente disponible para plantas y
animales (entre 0,1 y 0,3 mg/L). El porcentaje de nitrgeno fue de 0.20% en
ambas muestras, lo que demuestra que este suelo presenta una concentracin
deficiente de nitrgeno total. Estos parmetros no se encuentran establecidos en
la Norma Tcnica del Suelo.
Se prepar un medio de cultivo a partir de Peptona, medio de alta calidad
nutricional y uno de los ms adecuados para el cultivo de diferentes colonias
bacterianas, posteriormente se realiz la siembra de las diluciones de suelo
contaminado (10-4,10-5 y 10-6) en las respectivas cajas Petri film, que rotuladas
correctamente fueron incubadas a 35C por un periodo de 48 horas.

38
 Se ejecut el conteo de microorganismos de la siembra realizada al cabo de 72
horas; mismo que fue reportado con un valor de 480x105 UFC/g Suelo en la
dilucin 10-5, un valor de 35x106 UFC/g Suelo en la dilucin 10-6, sin embargo en
la dilucin 10-4 fue imposible realizar el conteo, pues el medio se encontraba
totalmente cubierto de colonias.
Se identific los metales pesados presentes en la muestra de suelo contaminado,
dentro de los cuales se logr identificar: Arsnico (As), Cadmio (Cd), Cobalto
(Co), Cromo (Cr), Cobre (Cu), Mercurio (Hg), Nquel (Ni), Plomo (Pb), Estao
(Sn) y Cinc (Zn), todos presentes en concentraciones relativamente bajas,
cumpliendo con los valores mximos permisibles establecidos en Norma Tcnica
del Suelo.
Se determin la cantidad de azufre elemental presente en la muestra de suelo
contaminado, siendo un valor de 1652,37 ug/g, lo que significa que la cantidad de
azufre presente en este suelo excede considerablemente los lmites permisibles
establecidos en la Norma Tcnica Ecuatoriana, correspondiente a un valor de
250mg/Kg. De tal forma que se debe incrementar la actividad microbiana de la
biopila para con ello aumentar la mineralizacin del azufre.
Se efectu la determinacin de pH (en el CESTTA) de la muestra de suelo
contaminado, dando como resultado un pH moderadamente alcalino igual a 8.26;
es decir que no cumple los valores mximos permisibles establecidos en la norma
ecuatoriana, esto debido a la relacin suelo solucin, donde el efecto de
humedecer el suelo regularmente hace aumentar el pH de la suspensin del
mismo, por lo que se pueden obtener diferencias superiores a una unidad de pH.
La conductividad elctrica fue de 682.0 uS/m (igual a 1.46 mmhos/cm), lo que
significa que este no excede los valores mximos permisibles respecto a la
conductividad elctrica establecida por la Norma Tcnica del Suelo., con un valor
de 2 mmhos/cm para un suelo de uso agrcola.
Se reconoci los TPH Y HAPS presentes en la muestra de suelo contaminado, en
un valor de 332,3 ug/g y 0,37 ug/g respectivamente, lo que significa que el
contenido de HAPS excede los valores mximos permisibles establecidos en la
Norma Tcnica del Suelo, cuyo valor es de 0.1 ug/g para suelo de uso agrcola.

39
 Respecto a los TPH, existe una abundancia de los mismos, excediendo los valores
mximos permisibles.

10. RECOMENDACIONES
Evitar la entrada accidental de agua lluvia a la biopila, se recomienda proteger
bien el techo y la base aislante de la biocelda.
Se debe homogenizar y humedecer correctamente el suelo, esto se recomienda
hacerlo diariamente.
Tamizar completamente el suelo, evitando dejar piedras u otros materiales que
afecten la degradacin biolgica de la biopila.
Al medir la temperatura de la biopila, si la tierra es muy dura o pedregosa,
recomendamos que previamente haga un agujero con un clavo largo o varilla de
madera para facilitar la introduccin posterior del termmetro.
Se recomienda repetir las mediciones de temperatura en varios puntos.
Para los anlisis de humedad se recomienda usar el horno a 105 C, para no falsear
la humedad en suelos que contienen cantidades significativas de materia orgnica,
yeso o ciertos tipos de arcillas.
Los datos obtenidos de la medicin de muestras, se debe hacer con una balanza
analtica y los valores a tomarse en cuenta deben estar en cuatro decimales dando
el ltimo decimal un valor de 2. (ej. 2.0002)
Para acelerar las reacciones qumicas de las muestras de nitrgeno se utiliza el
sulfato de cobre y el sulfato de potasio como catalizador de las reacciones.
Usar el medio de agar peptona para el desarrollo adecuado de microrganismos
aerobios totales, ya que es un agar ptimo para las muestras de suelo.
Se debe usar correctamente guantes, mascarilla para evitar la contaminacin
accidental de nuestras muestras de suelo.
Usar los instrumentos necesarios para remover el suelo constantemente.
Usar proteccin en las manos (guantes) para evitar daos en la piel.

40
11. BIBLIOGRAFA

Andrade, C. M. (29 de 10 de 2011). Ensayo de biorremediacin asistida de suelos

contaminados con hidrocarburos de petrleo en la Patagonia Sur de la Argentina.
Obtenido de: Ensayo de biorremediacin asistida de suelos contaminados con
hidrocarburos de petrleo en la Patagonia Sur de la Argentina:
http://www.petrotecnia.com.ar/octubre2011/pdfs/Ensayo.pdf
Ibarra, M. M. (31 de 10 de 2007). PROYECTO LIFE DE DEMOSTRACIN DE LA
TECNOLOGA DE BIORREMEDIACIN CON COMPOSTAJE PARA LA
RECUPERACIN Y GESTIN URBANSITICA SOSTENIBLE DE ZONAS
CONTAMINADAS. Obtenido de: PROYECTO BIOSOIL :
http://ec.europa.eu/environment/life/project/Projects/index.cfm?fuseaction=home.sh
owFile&rep=file&fil=LIFE04_ENV_ES_000263_LAYMAN_ES.pdf
Riesco, R. A. (29 de junio de 2012). Proyecto de recuperacion de suelos contaminados
por hidrocarburos-Universidad autonoma de barcelona. Obtenido de: PROYECTO
FINAL DE CARRERA-Ingeniera Tcnica Industrial, Especialidad Qumica
Industrial:
https://ddd.uab.cat/pub/trerecpro/2012/hdl_2072_206396/PFC_RaquelAlonsoRiesc
o.pdf

Botello. (2005). Caracteristicas composicin y propiedades fisicoqumicas del

petrleo. Diagnostico y tendescias, 261, 268. Obtenido de: Golfo de Mexico
comtaminacin e Impacto Ambiental:
https://www.researchgate.net/profile/Maricusa_Agraz/publication/280446298_Golf
o_de_Mexico_Contaminacion_e_Impacto_ambiental_Diagnostico_y_Tendencias/li
nks/55b555b208aed621de02dca8.pdf#page=287
Cando. (2011). Determinacin y anlisis de un proceso de biorremediacin de suelos
contaminados por hidrocarburos. Obtenido de:
http://www.dspace.ups.edu.ec/bitstream/123456789/1520/11/UPS-CT002143.pdf
Ferrera-Cerrato, R. R.-A.-V.-V. (2006). Procesos de biorremediacin de suelo y agua
contaminados por hidrocarburos del petrleo y otros compuestos orgnicos. Revista
Latinoamericana de Microbiologa, 179-187. Obtenido de:
http://www.medigraphic.com.pdfs/lamicro/mi-2006/mi062s.pdf
Jarpa. (2003). Medicin del pH de 12 preparaciones distintas de pasta de tabaco de
mascar, relacionndolas con la adicin a la nicotina. Revista de la Facultad de
Farmacia, 7-11. Obtenido de: http://www.saber.ula.ve/handle/123456789/23846
Jorajuria. (2000). Sobrecompactacin del suelo agrcola parte influencial de peso y
numero de pesadas. Brasileira de Engrnharia Agrcola e Ambiente, 445. Obtenido
de: http://www.scielo.br/pdf/rbeaa/v4n3/v4n3a22.pdf

41
 Maroto, A. (s.f.). Geocisa. Divisin de Proteccin Ambiental.Guadalajara-Mexico.
Obtenido de: Aplicacin de sistemas de biorremediacin de suelos y aguas
contaminadas por hidrocarburos:
http://unicienciaa.ambientalex.info.infoCT/Aplsisbiossueaguconhidint.pdf
Martnez, F. (2001). Temas de investigacin de la zona no saturada: Universidad
Pbica de Navarra, Cobierno de Navarra, Pamplona. Obtenido de Diseo y
validacin de una sonda TDR para la medicin de humedad del suelo:
http://abe.ufl.edu/faculty/carpena/files/pdf/zona_no_saturada/temas_de_investigacio
n_v5/10.pdf
Rodrguez, H. (2007). Evolucin de la calidad de cuatro variedades de espinaca.
Obtenido de Cultivos en bandejas flotantes y mnimamente procesadas en fresco:
http://repositorio.upct.es/handle/10317/493
Ruz. (2009). Produccin mas limpieza. Obtenido de Influencia de la conductividad
elctrica en la electrocoagulacin de aguas residuales de la industria lctea:
http://boletines.secv.es/upload/198726235.pdf
TULSMA. (2003). NORMA DE CALIDAD AMBIENTAL DEL RECURSO SUELO Y
CRITERIOS DE REMEDIACIN PARA SUELOS CONTAMINADOS. Obtenido de
file:///C:/Users/Usuario/Desktop/LIBRO%20VI%20Anexo%202%20Remediacion
%20de%20suelos.pdf

42