CINTICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO

Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los

mismos comienzan a dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta
el medio de cultivo para "fabricar" nuevos microorganismos. Este proceso contina
hasta que algn nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el
crecimiento se detiene. Tambin puede detenerse el crecimiento por acumulacin
de alguna substancia inhibidora formada por los mismos microorganismos, pero
supngase por ahora que ste no es el caso y que la primera alternativa es la vlida.
Luego hay dos aspectos claramente diferenciables que hacen al crecimiento
microbiano: uno estequiomtrico, por el cual la concentracin final de
microorganismos obtenidos depender de la concentracin y composicin del
medio de cultivo, y el otro cintico, el que dir con qu velocidad se lleva a cabo el
proceso.

Importancia:

Es importante conocer la cintica de crecimiento de los cultivos microbianos porque

es necesario poder predecir cmo va a evolucionar un cultivo, cmo va a ir
consumindose el substrato y cmo se va a ir acumulando el producto de una
fermentacin. Sin conocer estos factores es muy imprudente iniciar el cultivo en un
fermentador de 10.000 litros, por ejemplo, con el coste que ello supone, puesto que
no podemos predecir qu va a pasar, cundo va a completarse el crecimiento, cmo
se va a acumular el producto, etc.

En los sistemas cerrados (que pueden ser lquidos o slidos), no existe aporte
continuo de nutrientes, ni drenaje de clulas ni de sustancias de desecho.

En estos sistemas la fase exponencial de crecimiento balanceado no restringido

dura slo unas cuantas generaciones, debido al agotamiento de nutrientes y/o a la
acumulacin de desechos
CURVA DE CRECIMIENTO EN UN SISTEMA CERRADO EN MEDIO LQUIDO
CURVA DE CRECIMIENTO (BATCH)
 Como se puede constatar en el anterior grfico, el crecimiento en un
sistema cerrado consta de varias fases, que pasamos a comentar:

1. Fase de retardo (fase lag)

Es el perodo de tiempo durante el que el inculo se adapta a las condiciones del

medio fresco sobre el que se ha sembrado. Se trata de un perodo de ajuste
metablico. Su duracin depende de varios factores:

Tamao del inculo;

Bondad del inculo (estado metablico previo del inculo): si el inculo
procede de clulas en fase estacionaria de un cultivo anterior, la fase lag es
larga. Ello se debe a que los contenidos en coenzimas y otros constituyentes
de las clulas son bajos, y las clulas deben reponerlos en el medio fresco.
Si las clulas estn daadas por algn agente, el lag tambin es largo, ya
que necesitan un tiempo para la reparacin de los daos.
Si las clulas del inculo se tomaron de un cultivo previo en fase logartmica,
el lag es ms corto.
Medio del que procede el inculo:
Si el medio es similar al medio fresco, el lag es ms corto;
Si el medio del inculo era un medio rico y el medio fresco es ms pobre, la
fase de retardo se hace ms larga, porque las bacterias necesitan un tiempo
adicional para activar la sntesis de las enzimas biosintticas que estaban
reprimidas en el medio rico.

Pero aun cuando la inoculacin se hace desde un cultivo previo en fase logartmica,
cuyo medio sea idntico al medio fresco, se observa siempre una fase lag. Por
qu?:

Necesidad de neutralizar sustancias txicas en el medio fresco;

Porque se produce dilucin de ciertos metabolitos intracelulares al
inocular las bacterias en el medio nuevo; por lo tanto, hasta que no se
vuelva a alcanzar una concentracin de esos metabolitos adecuada para
el crecimiento, ste no arranca.

Ejemplo: Supongamos que inoculamos una bacteria heterotrfica en un medio

ligeramente cido, sometido a aireacin: en un principio, se produce dilucin de
CO2, por lo que se retardan reacciones de carboxilacin que requieren este CO2, y
se produce un retardo.
 2. Fase de crecimiento exponencial (= fase logartmica).

La fase 2 se debe a que cada clula entra en la fase exponencial con desfase
respecto de sus compaeras. Ello demuestra que las clulas del inculo no estn
todas en las mismas condiciones fisiolgicas.

Durante la fase logartmica se da un crecimiento balanceado no restringido durante

unas pocas generaciones (normalmente menos de 10). El tiempo de generacin (g)
es caracterstico para cada especie o cepa, en cada medio concreto:

El valor del tiempo de generacin (g) depende de:

Composicin del medio

Temperatura
pH
Osmolaridad (tonicidad), etc.
Fase de aceleracin negativa, de crecimiento desequilibrado, que conduce a

3. Fase estacionaria:

Esta fase se caracteriza porque el coeficiente neto de crecimiento se hace nulo (m

= 0), pero an existe crecimiento. Lo que ocurre es que el crecimiento bruto se
equilibra con las muertes celulares.

En este perodo se agotan nutrientes especiales y se acumulan sustancias de

desecho. Incluso el pH del medio empieza a hacerse inadecuado para el crecimiento
celular.

Si la bacteria crece en un medio complejo, la fase 4 de transicin (de aceleracin

negativa) puede ser relativamente larga, debido a que va recurriendo a fuentes
alternativas (p. ej., puede recurrir a aminocidos como fuente de C una vez
agotados los hidratos de carbono).

En la fase estacionaria an existen reacciones metablicas, pero el metabolismo

general es diferente al de la fase logartmica:

Las clulas son ms pequeas, debido a que existe divisin celular

despus de que se haya detenido el incremento de masa.
Suelen ser ms resistentes a agentes fsicos y qumicos;
Existe reciclado de ciertos materiales intracelulares;
aja el contenido en ARN.

Fase de transicin hacia

4. Fase de muerte exponencial:

Se da muerte y lisis masiva, exponencial, del cultivo. Se debe a agotamiento de

reservas de energa. Algunas veces las clulas aparecen grandes, hinchadas,
distorsionadas (formas fantasmas, ghost). La pendiente de esta parte de la curva
depende de las especies (por ejemplo, en bacterias entricas es suave, mientras
que en Bacillus es ms acentuada).

Te recuerdo que puedes hacer un experimento "virtual" con la curva de crecimiento

de una bacteria. Que disfrutes.
EXPRESIN MATEMTICA DE LA CINTICA DEL CRECIMIENTO DE
MICROORGANISMOS:

N=X

CRECIMIENTO LOGARTMICO EN CULTIVOS POR LOTES:

En cultivos por lotes, tal y como se ha descrito con anterioridad, existe una fase de
crecimiento, llamada fase de crecimiento logartmico. La velocidad de crecimiento
para esta fase es directamente proporcional a la concentracin de las clulas y est
dada por la siguiente relacin:

Si quitamos el signo de proporcionalidad = = = (1)

= Velocidad o tasa de crecimiento bacteriano en la fase de crecimiento

logartmico

=Velocidad especifica de crecimiento

X= concentracin de microorganismos

CRECIMIENTO CON SUSTRATO LIMITADO:

Si el sistema tiene un limitante y este es el sustrato, una vez que ste empiece a
escasear el cultivo de microorganismos termina de crecer, por lo que su crecimiento
tiene un lmite. En un cultivo continuo su crecimiento tambin es limitado, y el
comportamiento del cultivo de microorganismos, sigue experimentalmente la
siguiente relacin propuesta por Monod.

= .. (2)
+

=Velocidad especifica de crecimiento

=mxima velocidad de crecimiento
=Constante promedio de velocidad. Concentracin de sustrato a la mitad del
mximo de velocidad de crecimiento. Masa/unidad de volumen
=concentracin del sustrato. Masa/unidad de volumen

Sustituyendo (1) en (2)

=
+

Graficando en el plano:

Estas ecuaciones nos permiten predecir cul ser el nmero de clulas, masa
celular, etc. despus de un cierto tiempo de cultivo (t) si conocemos ; o bien, poder
calcular la tasa de crecimiento a partir de medidas experimentales del incremento
en el nmero de clulas, biomasa, etc.

Basado en el concepto que una clula se divide dando dos clulas hijas, y stas a
su vez se vuelven a dividir dando dos clulas cada una de ellas, se presenta en el
siguiente cuadro la proliferacin de una poblacin de clulas a partir de una sola,
con un tiempo de generacin de 30 minutos.
Al graficar en un sistema de coordenadas el tiempo (abscisas) y el nmero de
clulas (ordenadas) se obtiene una grfica como la que se muestra en el siguiente
esquema:

Los tiempos de duplicacin varan segn el microrganismo del que se trate. Por
ejemplo:
Escherichia coli 0,35 hs
Rhizobium meliloti 1,8 hs
Nitrobacter sp aproximadamente 20 hs

Rendimiento de la utilizacin del substrato

El rendimiento de utilizacin de diferentes substratos puede ser diferente (hay

substratos, o alimentos, que "engordan" ms que otros), vara entre diferentes
microorganismos (en un smil antropomrfico: hay personas que engordan ms que
otras comiendo lo mismo) y vara tambin en funcin de otras condiciones
ambientales o fisiolgicas (no engorda lo mismo uno al comer algo si est sano o
enfermo o si est en verano o en invierno). Tambin vara el rendimiento en funcin
de que el metabolismo sea oxidativo o fermentativo.
Podemos calcular el rendimiento de la utilizacin
del substrato en funcin de la cantidad de
substrato aadido al cultivo, o en funcin de la
cantidad de carbono presente en ese substrato
(por ejemplo). Asimismo, podemos calcular la
cantidad de biomasa total 8gramos de clulas,
por ejemplo) o de carbono presente en las
clulas (aproximadamente el 505 de la masa
celular corresponde a carbono).

Haciendo las transformaciones que se indican a

=
la derecha sobre la frmula que relaciona la
variacin de biomasa con la de substrato,
1 1
llegamos a la definicin de un nuevo =

concepto qs denominado tasa especfica de
consumo de substrato por el organismo. =

La tasa especfica de consumo de substrato la podemos considerar la "velocidad"

con la que el organismo consume el substrato. Evidentemente, cuanto mayor sea la
tasa de consumo mayor ser la velocidad de crecimiento (). Asimismo, cuanto
mayor sea el rendimiento del substrato consumido, tambin mayor ser la tasa de
crecimiento.

Sin embargo, hay una cierta compensacin entre la tasa de consumo del substrato
y el rendimiento de forma que los microorganismos que tienen altas tasas de
consumo de substrato tienen rendimiento ms bajo (o cuando se dan las
condiciones para una alta tasa, el rendimiento disminuye). A esta correlacin inversa
se le conoce con el nombre de efecto Pasteur.
Relacin entre la tasa de crecimiento () y la concentracin de substrato (S)

En condiciones de substrato abundante, la concentracin de este no afecta al valor

de ; pero cuando el substrato se hace limitante, s existe ese efecto. La expresin
matemtica que relaciona ambos parmetros se conoce con el nombre de ecuacin
de Monod y es la siguiente:

En esta ecuacin la tasa de crecimiento ()

depende de la mxima que puede alcanzar el

microorganismo, de la concentracin de =

substrato y de un valor Ks que representa la
concentracin de substrato a la que se
alcanza una tasa de crecimiento igual a la
mitad de la mxima.

La ecuacin de Monod tendr mucha importancia al tratar de cultivos continuos.

Para que se cumpla esta ecuacin el rendimiento debe ser independiente de la
concentracin de substrato.