Transcripcin (Proceso de sntesis de ARN)

Como en la mayora de las reas de la biologa molecular, el estudio de E. coli ha

proporcionado el modelo para posteriores investigaciones acerca de la transcripcin en
eucariotas.
La principal enzima responsable de la sntesis de ARN es la ARN polimerasa, que cataliza la
polimerizacin de ribonuclesidos 5'-trifosfato (NTP) dirigida por un molde de ADN. La
sntesis de ARN es similar en ciertos aspectos a la de ADN, as por ejemplo al igual que la
ADN polimerasa, la ARN polimerasa cataliza el crecimiento de la cadena de ARN en
direccin 5'3'. Sin embargo, a diferencia de la ADN polimerasa, la ARN polimerasa no
requiere un cebador preformado para iniciar la sntesis de ARN. En lugar de ello, la
transcripcin empieza de novoen secuencias especficas al principio de los genes. El
proceso de iniciacin es especialmente importante porque es el primer paso que regula la
transcripcin.
La ARN polimerasa, es una enzima compleja compuesta de mltiples cadenas
polipeptdicas. La enzima se compone de distintos tipos de subunidades denominadas: , ,
, , . La secuencia de ADN a la que se une la ARN polimerasa para iniciar la transcripcin
de un gen se denomina promotor.
La ARN polimerasa se une al ADN de forma no especfica y con baja afinidad. La funcin de
los factores de transcripcin, los cuales son molculas de naturaleza proteica, es dirigir a la
polimerasa a los promotores para iniciar la transcripcin en el principio del gen. El conjunto
formado inicialmente entre la polimerasa, factor de transcripcin y el promotor se denomina
complejo promotor cerrado, dado que el ADN no est desenrollado. La polimerasa despus
desenrolla unas 12-14 bases de ADN alrededor del sitio de inicio para dar un complejo
promotor abierto en el que ya est disponible una hebra nica de ADN para servir como
molde para su transcripcin, la cual comienza con la incorporacin de dos NTP.
Tras la adicin, contina la elongacin de la cadena de ARN de a un nucletido cada vez.
Durante la elongacin, la polimerasa permanece asociada con su molde mientras contina la
sntesis de ARN.
La sntesis de ARN contina hasta que la polimerasa encuentra una seal de terminacin,
tras lo cual sede tiene la transcripcin, se separan el ARN y la polimerasa y la enzima se
disocia del molde de ADN.
Modificaciones postranscripcionales.Una parte de las molculas de ARN de bacterias y
prcticamente todas las de ARN eucariota, son modificadas en mayor o menor medida
despus de su sntesis.
La maduracin del ARNm presenta importantes diferencias entre clulas procariotas y
eucariotas. En las bacterias, los ribosomas acceden inmediatamente al ARN, y la traduccin
comienza en el ARNm naciente mientras an est en marcha la Transcripcin. En eucariotas
el ARNm sintetizado, que recibe el nombre de transcrito primario, es ampliamente modificado
al interior del ncleo antes de ser transportado hacia el citoplasma para ser usado como
molde en la sntesis de protenas.
El procesamiento, o maduracin, del transcrito primario incluye: la modificacin del extremo
5 mediante la adicin de un casquete, la modificacin del extremo 3 mediante la
poliadenilacin y la eliminacin de los intrones mediante corte y empalme; siendo stos tres
procesos acoplados a la transcripcin, de modo que la sntesis del ARNm y la maduracin
constituyen pasos estrechamente coordinados en la expresin gnica.
La modificacin del extremo 5, se da mediante la adicin de una estructura denominada
casquete, caperuza (o Cap de 7-metilguanosina), que es aadida tras la transcripcin de los
primeros 20-30 nucletidos de ARN. Es iniciada por la adicin de una molcula de GTP al
nucletido 5 terminal del ARN. Luego, se aaden grupos metilo a este residuo de G y a las
formas de ribosa de uno o dos nucletidos 5 de la cadena de ARN. La caperuza estabiliza el
ARN, adems de alinear los ARNm eucariticos sobre el ribosoma durante la traduccin.
Mientras tanto, el extremo 3 de la mayora de los ARNm eucariticos se forma, no por la
terminacin de la transcripcin, sino por el corte del transcrito primario y la adicin de una
cola de poli-A, una reaccin de maduracin denominada
poliadenilacin.
Las seales para la poliadenilacin incluyen varias secuencias. La ms conservada en las
clulas animales es el hexanucletido AAUAAA que se localiza de 10 a 30 nucletidos
situada unos 11-30 nucletidos antes del extremo 3' original, es decir, del sitio de
poliadenilacin. Estas son reconocidas por un grupo de protenas que incluyen una
endonucleasa que corta la cadena de ARN y una poli-A polimerasa que aade una cola de
aproximadamente 200 nucletidos de A al transcrito de ARN.
La escisin y poliadenilacin sealiza la finalizacin de la transcripcin, que
Habitualmente ocurren varios cientos de nucletidos hacia el extremo 5 (corriente abajo) del
sitio de adicin de la cola de poli-A. La mayora de los ARNm eucariticos estn
poliadenilados y se sabe que las colas de poli-A regulan la traduccin y estabilidad del
ARNm.
Un transcrito primario de ARNm eucariota contiene las secuencias que corresponden a un
gen, aunque las secuencias que codifican el polipptido pueden no ser contiguas. En un
proceso denominado splicing (corte y empalme)
fragmentos de ARN denominado intrones son eliminados y los fragmentos restantes
denominados exones son unidos para formar una secuencia continua que especifica un
polipptido funcional.
El papel central de los mecanismos de corte y empalme en la maduracin del pre-ARNm
abre la posibilidad de regular la expresin gnica por medio del control de la maquinaria
celular que los lleva a cabo. Dado que muchos pre-
ARNm contienen mltiples intrones, pueden producirse distintos ARNmpartiendo del mismo
gen combinando los sitios de corte 5 y 3. La posibilidad de combinar los exones aporta un
nuevo modo de controlar la expresin gnica generando mltiples ARNm (y por lo tanto
mltiples protenas) a partir del mismo pre-
ARNm.
Este proceso, denominado corte y empalme alternativo(o splicing alternativo)
ocurre de forma habitual en los genes de eucariotas superiores. Por ejemplo, se
Estima que el corte y empalme alternativo puede resultar en la produccin de tres o ms
ARNm de un gen promedio de mamfero, incrementando considerablemente la diversidad de
protenas que pueden codificarse por los 30000-40000 genes estimados de los genomas de
mamferos.

Traduccin (Descodificacin del mensaje)

Las protenas se sintetizan a partir de un molde de ARNm mediante un proceso

altamente conservado a lo largo de la evolucin. Todos los ARNm se leen en
direccin 5'3', y las cadenas polipeptdicas se sintetizan desde el extremo amino terminal
al carboxilo terminal. Cada aminocido viene codificado por tres bases (un codn) en el
ARNm, de acuerdo con el carcter casi universal del cdigo gentico.
El mecanismo fundamental de la sntesis de protenas es bsicamente el mismo en todas las
clulas: la traduccin tiene lugar en los ribosomas, siendo los ARNt los adaptadores entre el
molde de ARNm y los aminocidos incorporados a la protena.
La sntesis de protenas implica la interaccin entre tres tipos de molculas de ARN (el molde
de ARNm, ARNt y ARNr que hace parte estructural de los ribosomas) adems de varias
protenas necesarias para la traduccin.
Durante la traduccin, cada uno de los 20 aminocidos debe ser alineado con su
correspondiente codn del ARNm molde. Todas las clulas contienen distintas
molculas de ARN de transferencia que sirven como adaptadores en este proceso.
Como es de esperar, dada su funcin en la sntesis de protenas, los distintos ARNt
presentan una estructura similar. Sin embargo, tambin poseen secuencias nicas que
permiten la unin de un aminocido especfico con su codn en el ARNm.
Los ARN de transferencia (ARNt) tienen una longitud de aproximadamente 70-80
nucletidos, con una estructura que en dos dimensiones tendra la forma de una hoja de
trbol que es debida a la complementariedad de bases entre distintas regiones de la
molcula.
Todos los ARNt poseen una secuencia CCA en su extremo 3 a la cual los
aminocidos se unen covalentemente -en concreto a la ribosa de la adenosina
terminal-. La secuencia del ARNm denominada codn es reconocida por una tripleta de
nucletidos del ARNt denominada anticodn y que est localizada en el otro extremo de la
molcula de ARNt plegada. La unin adecuada entre el codn y el anticodn se da mediante
puentes de hidrgeno siguiendo la complementariedad de bases, es decir T-U, G-C. La
incorporacin de los aminocidos correctos en la protena depende de la unin de cada uno
de ellos a su ARNt, as como de la especificidad del apareamiento de bases entre codn y
anticodn.
La unin del aminocido a su ARNt especfico es mediada por un grupo de enzimas
llamadas aminoacil-ARNt-sintetasas (3). Cada una de estas enzimas reconoce un nico
aminocido, y tambin al ARN de transferencia al cual se debe unir ese aminocido. La
reaccin ocurre en dos etapas.
Primero el aminocido es activado mediante una reaccin con ATP formndose un
intermediario aminoacil AMP. Este aminocido activado se une posteriormente al extremo 3'
del ARNt. Las aminoacil-ARNt-sintetasas deben ser enzimas muy selectivas que reconozcan
especficamente tanto los aminocidos individuales como la secuencia de bases especfica
en los ARNt aceptores. En algunos casos la alta fidelidad del reconocimiento del aminocido
es debido en parte a una actividad correctora o lectora de pruebas, por la cual el aminoacil
AMP incorrecto es hidrolizado antes de unirse al ARNt en la segunda etapa de la reaccin. El
reconocimiento del ARNt correcto por la aminoacil-ARNt-sintetasa tambin es un proceso
muy selectivo: la sintetasa reconoce secuencias de nucletidos especficas (en la mayor
parte de los casos incluye el anticodn) que identifican como nica a cada especie de ARNt.
Tras la unin al ARNt, el aminocido se alinea en el ARNm molde por la
Complementariedad de bases entre el codn del ARNm y el anticodn del ARNt.
Este reconocimiento codn-anticodn es mucho menos estricto que la
Complementariedad A-U y G-C. El significado de este apareamiento de bases
Atpico entre el codn y el anticodn est relacionado con la redundancia del cdigo
gentico.
Los ribosomas son el lugar donde se sintetizan las protenas tanto en clulas
procariotas como eucariotas. Tanto los ribosomas procariotas como eucariotas
estn formados por dos subunidades distintas, compuestas por protenas y por ARN
ribosmicos. El hecho de que una clula contenga muchos ribosomas re
fleja la importancia de la sntesis de protenas en el metabolismo celular.
Aunque los mecanismos de la sntesis de protenas en clulas procariotas y
eucariotas son similares, hay algunas diferencias, en particular en las seales que
determinan el sitio del ARNm molde a partir del que se debe iniciar la sntesis de una cadena
polipeptdica. La traduccin no empieza simplemente en el extremo 5' del ARNm, sino que
tiene lugar en un sitio de iniciacin especfico. La regin 5' terminal de los ARNm de
procariotas y eucariotas son secuencias no codificadoras, conocidas como regiones 5' no
codificantes (UTR). Tanto en clulas eucariotas como procariotas, la traduccin siempre
comienza con el aminocido metionina, normalmente codificado por la tripleta AUG. En
algunas bacterias existen codones de iniciacin alternativos, como GUG, pero cuando esto
ocurre al principio de una cadena polipeptdica, estos codones incorporan metionina en lugar
del aminocido que codifican normalmente (GUG generalmente codificapara Valina). En la
mayora de las bacterias, la sntesis de protenas se inicia con un residuo de metionina
modificado (N-formilmetionina), mientras que la metionina sin modificar inicia la sntesis en
eucariotas (con excepcin de las mitocondrias y cloroplastos, orgnulos cuyos ribosomas
tienen muchas semejanzas con los ribosomas de bacterias).
La traduccin generalmente se divide en tres etapas: iniciacin, elongacin y
terminacin. Tanto en eucariotas como en procariotas el primer paso de la fase de iniciacin
es la unin de un metionilARNt especfico y del ARNm a la subunidad menor del ribosoma. A
continuacin, la subunidad mayor del ribosoma se une al complejo, formando un ribosoma
funcional sobre el que tiene lugar la elongacin de la cadena polipeptdica.
Tras la formacin del complejo de iniciacin, la traduccin contina con la
elongacin de la cadena polipeptdica. El mecanismo de la elongacin en clulas procariotas
y eucariotas es muy similar. El ribosoma tiene tres sitios para la unin del ARNt,
denominados lugar P (peptidil), A (aminoacil) y E (liberacin). El metionilARNt iniciador se
une al sitio P.
La primera etapa de la elongacin es la unin del siguiente aminoacilARNt al sitio A
mediante emparejamiento con el segundo codn del mensajero. El aminoacilARNt es guiado
hacia el ribosoma por un factor de elongacin, (EF-Tu en procariotas y eEF1en eucariotas)
unido a GTP. La seleccin del aminoacilARNt para su incorporacin en la cadena
polipeptdica creciente es un paso crtico que determina la precisin de la sntesis proteica.
A pesar de que sta seleccin se basa en la complementariedad de bases entre el codn del
ARNm y el anticodn en el ARNt, el apareamiento de las bases no es suficiente para
responsabilizarse de la precisin de la sntesis de protenas, que posee una tasa de error
inferior a 10-3. Esta precisin la proporciona un centro descodificador en la subunidad
pequea del ribosoma, que reconoce los pares de bases codn-anticodn correctos y
discrimina los errores.
La insercin de un aminoacilARNt correcto en sitio A da lugar a un cambio conformacional
que induce la hidrlisis del GTP unido a eEFly la liberacin del factor de elongacin unido a
GDP. Una vez que eEFl
ha salido del ribosoma, se forma un enlace peptdico entre el metionilARNt iniciador en el
sitio P y el segundo aminoacilARNt en el sitio A. Esta
reaccin est catalizada por la subunidad ribosmica grande, realizando esta
actividad el ARNr. El resultado es la transferencia de la metionina al aminoacilARNt en el
sitio A del ribosoma, formndose un peptidilARNt en esta posicin y dejando un ARNt libre
en el sitio P.
La etapa que sigue a la elongacin es la translocacin, que requiere otro factor de
elongacin (EF-G en procariotas y eEF-2 eucariotas), y tambin est acoplada a la hidrlisis
de GTP. Durante la translocacin, el ribosoma se desplaza tres nucletidos sobre el ARNm,
colocndose un nuevo codn en un sito A libre. En esta etapa se transloca el peptidilARNt
desde el sitio A al sitio P, y el ARNt libre desde el sitio P al sitio E. De esta manera el
ribosoma tiene un peptidilARNt en el sitio P y un sito vaco. La unin de un nuevo
aminoacilARNt al sitio A induce la liberacin del ARNt libre del sitio
E, dejando al ribosoma preparado para la insercin de otro aminocido
a la cadena polipeptdica en crecimiento. La elongacin de la cadena polipeptdica contina
hasta que un codn de terminacin (UAA, UAG o UGA) se coloca en el sitio A del ribosoma.
Las clulas no contienen ARNt con anticodones complementarios de los tripletes de
terminacin, pero s tienen factores de liberacin (de naturaleza proteica) que los reconocen
y terminan la sntesis de protenas.