A continuacin, describimos la generacin de repeticiones palindrmicas cortas agrupadas y

regularmente interespaciadas (CRISPR) -Cas9 diseando el indicador knock-in en lneas de

clulas madre embrionarias en la que tdTomato y una nica protena de la superficie celular,
THY1.2, se expresan bajo el control de las clulas ganglionares de la retina (RGC) enriquecida
del gen BRN3B. El uso de estas lneas celulares indicadoras, mejora en gran medida la
diferenciacin de clulas madre adherentes al linaje RGC mediante la optimizacin de una
combinacin nueva de molculas pequeas y se estableci anti Thy1.2 basados en un
protocolo que permite a gran escala la immunopurificacin de RGC. La secuenciacin de RNA
confirm la similitud de las clulas madre derivadas de RGCs para sus homlogos humanos
endgenos. Adicionalmente, hemos desarrollado un modelo in vitro de lesin axonal
adecuado para estudiar las vas y mecanismos de muerte celular RGC humana de sealizacin
y para el cribado de alto rendimiento para compuestos neuroprotectores. El uso de este
sistema en combinacin con el RNAi based knockdown, mostramos que el knockdown de
doble cremallera de leucina quinasa (DLK) promueve la supervivencia de RGCs en humanos,
ampliando con los informes previos del sistema humano que la inhibicin DLK es
neuroprotector para RGCs murinos. Estas mejoras facilitarn el desarrollo y el uso a gran
escala de paradigmas experimentales que requieren nmeros de RGC puros que no se podan
obtener previamente.

Thy1.2 CD90.2 is a 25-35 kD immunoglobulin superfamily member also known as Thy-1.2,

a GPI-linked membrane molecule. It is expressed on hematopoietic stem cells and
neurons, all thymocytes, and peripheral T cells in Thy1.2 bearing mouse strains (Balb/c,
CBA/J, C3H/He, C57BL/-, DBA, NZB/-). CD90.2 is a glycosylphosphatidylinositol (GPI)-
anchored membrane glycoprotein involved in signal transduction. CD90.2 is involved in
costimulation of lymphocyte proliferation and induction of hematopoietic stem cells
differentiation. CD90.2 has been shown to interact with CD45.

clulas de la retina ganglionares (RGCs), un tipo de clula esencial para la visin del tallo

inhibicin DLK

los cientficos muestran que una protena llamada doble leucina cremallera quinasa (DLK)
regula las seales que le indican a la clula nerviosa que result herido - a menudo la
comunicacin a distancia de varios metros. La protena regula si la neurona se activa su
programa de regeneracin.
Si un axn se corta por la mitad entre el cuerpo de la clula en la mdula espinal y el msculo,
el trozo de axones que ya no est conectado al cuerpo de la clula comienza a desintegrarse.
Trabajos anteriores ha demostrado que ayuda a regular el DLK esta degeneracin axonal. Y en
gusanos y moscas, DLK tambin se conoce para gobernar la formacin de cono de crecimiento
de un axn, la estructura responsable de extender el extremo de un axn si despus de una lesin
o durante el desarrollo.
Pero en ratones, a diferencia de los gusanos y las moscas, DiAntonio y sus colegas encontraron
que DLK no est involucrado en la respuesta temprana a una lesin axonal. Incluso sin DLK,
forma en el cono de crecimiento. Pero la falta de DLK significa que el cuerpo de las clulas
nerviosas, en la mdula espinal de distancia de la lesin, que no recibe el mensaje de que est
lesionado. Sin las seales de reinstalacin de la lesin mensaje, el cuerpo de la clula no se
enciende su programa de regeneracin y el progreso del cono de crecimiento para ampliar la
gama de los axones.
El ARN interferente (en ingls interfering RNA), es una molcula de ARN que suprime la
expresin de genes especficos mediante mecanismos conocidos globalmente
como ribointerferencia o interferencia por ARN (RNA interference, RNAi).

Tipos de ARN interferente[editar]

Los ARN interferentes son molculas pequeas (de 20 a 25 nucletidos) que se generan
por fragmentacin de precursores ms largos. Se pueden clasificar en tres grandes grupos
de molculas:2

siRNA[editar]
Artculo principal: SiRNA

El acrnimo siRNA proviene del ingls small interfering RNA: en espaol, ARN
interferente pequeo. Son molculas de ARN bicatenario perfectamente
complementarias de aproximadamente 20 o 21 nucletidos (nt) con 2 nucletidos
desemparejados en cada extremo 3'. Cada hebra de ARN tiene un grupo fosfato 5' y un
grupo hidroxilo (-OH) 3'. Esta estructura proviene del procesamiento llevado a cabo
por Dicer, una enzima que corta molculas largas de ARN bicatenario (dsRNA, double
stranded RNA) en varios siRNA.3 Una de las hebras del siRNA (la hebra 'antisentido') se
ensambla en un complejo proteico denominado RISC (RNA-induced silencing complex),
que utiliza la hebra de siRNA como gua para identificar el ARN mensajero
complementario. El complejo RISC cataliza el corte del ARNm complementario en dos
mitades, que son degradadas por la maquinaria celular, bloqueando as la expresin del
gen. Los siRNA pueden ser tambin introducidos de forma exgena en las clulas
utilizando mtodos de transfeccin basndose en la secuencia complementaria de un gen
en particular, con la finalidad de reducir significativamente su expresin.
reduccin de la presin intraocular (PIO) a travs de medios farmacolgicos o quirrgicos,
pero el control de la PIO no siempre es factible, e incluso con significantes reduccin de la PIO,
la prdida de RGC puede progresar.