ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
PRCTICA N 02

INSTRUMENTACIN DEL LABORATORIO, ESTERILIZACIN, MTODOS

FSICOS Y QUMICOS

I.OBJETIVOS

Entrenar al estudiante en el reconocimiento de los diferentes equipos y materiales de

laboratorio, as como en el uso de los mismos y que sern utilizados en la realizacin de
los ejercicios de laboratorio.
Adiestrar al estudiante en la limpieza y preparacin del material para su esterilizacin
Trabajar con curiosidad cientfica y previniendo todo tipo de enfermedades.

II. PRINCIPIOS TERICOS

GENERALIDADES:
Esterilizacin: eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un
objeto o sustancia, y que se encuentran acondicionados de tal forma que no pueden
contaminarse nuevamente.

Sanitizante: agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es

seguro para la salud de la poblacin. Slo es aplicable sobre objetos inanimados.

Desinfectante: agente que elimina la carga microbiana total en superficies

inanimadas tales como habitaciones.

Antisptico: agente que controla y reduce la presencia de microorganismos

potencialmente patgenos sobre piel y/o mucosas (slo pueden aplicarse externamente
sobre seres vivos).
Se denomina esterilizacin al proceso por el cual se obtiene un producto libre de
microorganismos viables. El proceso de esterilizacin debe ser diseado, validado y
llevado a cabo para asegurar que es capaz de eliminar la carga microbiana del producto
o un desafo ms resistente. Dado que la esterilidad no puede demostrarse de manera
absoluta sin causar la destruccin completa de todas las unidades del lote de producto
terminado, se define la esterilidad en trminos probabilsticos, en donde la probabilidad
de que una unidad de producto est contaminada es aceptablemente remota. Se
considera que un producto crtico es estril cuando la probabilidad de que un
microorganismo est presente en forma activa o latente es igual o menor de 1 en
1.000.000 (coeficiente de seguridad de esterilidad 10^-6).
Los agentes que matan microbios son denominados microbicidas (cida= matar) o ms
comnmente denominados germicidas. Si el agente especficamente destruye
bacterias, es llamado bactericida; si mata hongos es denominado fungicida. Tras una
exposicin del objeto esterilizado al aire o a sus alrededores, ste se habr contaminado
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de nuevo con microorganismos. Los mtodos trmicos de esterilizacin son comnmente

los ms utilizados para eliminar los microorganismos, incluyendo las formas ms
resistentes como lo son las endoesporas.

III.MATERIAL DE VIDRIO Y OTROS

Aparte del instrumental y variado equipo que se requiere en todo laboratorio de
Microbiologa, el material de vidrio constituye una de las principales herramientas de
esta disciplina
-Matraces y balones (graduados)
-Kitasatos
-Probetas graduadas
-Pipetas: serolgicas: terminales y subterminales, volumtricas, Pasteur, automticas y
Micro pipetas
-Tubos de ensayo: 16x150, 15x125, 13x100, 10x75
-Cpsulas o placas Petri
-Esptulas de Drigalsky
-Fiolas
-Varillas de Vidrio
-Beaker o vasos de precipitacin
-Jeringas y agujas hipodrmicas
-Frascos viales para Hemocultivos, vacunas, cultivos de tejidos
-Perlas de vidrio

MATERIAL DE OTRA NATURALEZA

-Trpodes
-Estuches cilndricos
-Canastillas o cestos de metal
-Soportes universales

EQUIPOS DE LABORATORIO
-Estufa - Incubadora
-Horno Esterilizador
-Autoclave
-Bao Mara
-Mechero de Bunsen (gas)
-Mechero de alcohol
-Asa de siembra
-Microscopios Binocular y Monocular
-Campanas de Anaerobiosis
-Centrfugas
-Potencimetro
-Refrigeradoras y congeladoras
REACTIVOS

- Formol acuoso al 4 %
- Fenol
- Cresol
- Hexaclorofeno
- Amonio
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- Alcohol 96

A. DETALLES EXPERIMENTALES:

ACTIVIDAD N 1
Los estudiantes atendern las explicaciones de parte del docente sobre la Esterilizacin,
tambin se dar nfasis a los puntos ms importantes del reglamento de higiene y
seguridad que se deben observar en el laboratorio. Adems se explicar en la primera
parte, sobre la esterilizacin por medios fsicos.

ESTERILIZACIN.- Es el procedimiento por el cual se destruyen los microrganismos y sus

formas resistentes, mediante el uso de agentes fsicos y qumicos

MTODOS DE ESTERILIZACIN:

A.-ESTERILIZACIN POR AGENTES FSICOS

- Esterilizacin por medio del calor

1.- Esterilizacin por accin del flameado:
El material se somete a la accin directa de la llama de un mechero, sin que se altere ni
sufra deterioro. Ejemplos: Asas de siembra, material de diseccin
2.- Esterilizacin por el calor seco:
Se hace actuar el aire caliente sobre el material a esterilizar, por ejemplo el vidrio seco y
protegido se coloca en un horno a 180 C por 30 a 45 minutos
3.- Esterilizacin por el calor hmedo:
Actan coagulando las protenas del protoplasma microbiano en tiempo menor a la
esterilizacin por aire caliente ejemplo, la esterilizacin de los medios de cultivo o
soluciones en Autoclave a 121 C por 15 libras de presin por 15 minutos

- Esterilizacin en frio
1.- Esterilizacin en frio por filtracin
Por este mtodo se esterilizan los medios de cultivo lquidos o sustancias orgnicas que
sufren alteraciones de sus propiedades fsicas y qumicas por accin del calor. Ejemplo:
solucin de antibiticos
2.- Esterilizacin por centrifugacin
Mediante la fuerza centrfuga es posible conseguir esterilizacin de algunas sustancias y
productos a grandes revoluciones por minuto, por un tiempo prolongado
3.-Esterilizacin por accin de la luz UV
Corresponde al tiempo de radiacin de la luz solar en la que su corta longitud de onda se
emplea para esterilizar medios de cultivo a base de minerales, ambientes para siembras
bacterianas, salas de ciruga
4.-Flujo laminar
El sistema de flujo laminar evita las turbulencias, regulando la velocidad de circulacin de
aire. En el sistema horizontal, el aire estril es impulsado desde el fondo hacia el
manipulador.

ACTIVIDAD N 2

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En la segunda parte los estudiantes atendern la explicacin sobre la esterilizacin por

agentes qumicos, teniendo en cuenta las normas de bioseguridad, cuidando su propia
salud y la de los dems, hacindose responsables de sus actos.

B.-ESTERILIZACIN POR AGENTES QUMICOS

Sustancias germicidas que actan por efectos qumicos, inactivando protenas. El
proceso en s puede ser de poder bactericida, antisptico o bacteriosttico en algunos
casos
-Sustancias qumicas aldehdos: ejemplo: -formol acuoso al 4 % en 24 horas de
inmersin. Irrita los tejidos, tiene baja penetrabilidad, desagradable olor y deja un residuo
blanco sobre los materiales tratados
-Fenol y sus derivados: actan a nivel de las membranas celulares, inactivando enzimas
y desnaturalizando protenas; es irritante y tiene mal olor, se usa para desinfectar mesas
de trabajo. Los derivados como el cresol y hexaclorofeno mantienen su actividad en
presencia de compuestos orgnicos, son estables y persistentes, tiles en presencia de
saliva, pus y heces.
Ejemplos: Halgenos, Alcoholes, Metales pesados, Agentes tensoactivos, Compuestos
de amonio cuaternario, cidos orgnicos

IV. CUESTIONARIO

Los estudiantes finalizada la prctica resolvern el siguiente cuestionario.

1.-Realizar grficas del material de vidrio presentado y fundamentos: para que sirven
2.-Realizar grficas de los equipos de laboratorio. Fundamentos
3.- Fundamente la esterilizacin por agentes qumicos

V. BIBLIOGRAFA

1. AQUIAHUATI, M. Manual de Prcticas de Laboratorio de Microbiologa General;

Universidad Autnoma Metropolitana; Mxico; 2004.
2. GARZN, G.G. Fundamentos de Qumica general, 211 ed. Mxico: Mc. Graw-Hill, 1986.
144p.
3. WILLEY Y OTROS., Microbiologa de Prescott, Harley Klein. 7 ed. Madrid: Interamericana
de Espaa S. A.2009. 1086 p. ISBN: 978-84-481-6827-8
4. TORTORA.FUNKE.CASE. Introduccin a la microbiologa. 9 ed. Madrid: Editorial Mdica
Panamericana S.A. 2007. 931p. ISBN:978-950-06-0740-7
5. MADIGAN, M. Martinko, J. y J. PARKER. Biologa de los microorganismos. 10a ed. Espaa:
Editorial Pearson educacin, S. A. 2006. 1008p.ISBN: 0-13-066271-2.
6. KARP, G. Biologa celular y Molecular: Conceptos y experimentos. 4a ed. Mxico: Mc. Graw-
Hill Interamericana Editores. 2011. 765p. ISBN: 978-607-15-0504-0
7. AQUIAHUATI, M. Manual de Prcticas de Laboratorio de Microbiologa General; Universidad
Autnoma Metropolitana; Mxico; 2004.
8.
9. SAWWYER, C. McCARTY, P. PARKIN, G. Qumica para Ingeniera Ambiental. 4 ed.
Editorial McGraw Hill. 2001, 716 p. ISBN: 9584101641
10. SHARPE, A. Qumica Inorgnica. 1 ed. Editorial Reverte S.A. 2008. 584 p. ISBN:
8429175016.

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REDACCIN DEL INFORME DE LABORATORIO

Culminada La Prctica de Laboratorio, el estudiante debe realizar un informe de la experiencia

realizada segn la Gua utilizada, dicho informe debe tener el siguiente contenido;
CARATULA; El informe debe indicar en la caratula los siguientes datos:
Nombre de la Universidad, escuela acadmica profesional.
Nombre del Laboratorio del curso.
N y ttulo de PRCTICA REALIZADA,
Integrantes DEL GRUPO O NOMBRE individual.
Ciclo de estudios- TURNO - AULA.
Nombre del profesor que dirige la prctica. (Mg. Segundo Marter Baca)
Ciudad y fecha.
1. OBJETIVOS
Indicar los objetivos logrados al realizar las experiencias en el laboratorio, en funcin a lo
sealado en la gua
2. MARCO TERICO O PRINCIPIOS TERICOS
Se realizara un resumen de los principios, leyes, teoras, mtodos o fundamentos que se
ilustran o aplican en la experiencia respectiva, no copiar de la gua, e investigue y
fundamente.
3. DETALLES EXPERIMENTALES ( es la parte ms importante del informe)
3.1. Materiales y reactivos: Colocar solo los usados en laboratorio
3.2. Procedimiento Experimental:
Describir CON SUS PROPIAS PALABRAS las experiencias realizadas detalladamente as
como las observaciones, cantidades usadas, los datos, los reactivos qumicos (elementos
y/o compuestos), y los valores numricos con sus respectivas unidades de medida, usar
grficos, dibujos, fotografas, CLCULOS REALIZADOS, % error, etc.

4. TABLA DE REPORTE DE RESULTADOS FINALES.

Cuadro Final RESUMEN de los datos utilizados y resultados obtenidos, clculos finales,
%error. Aqu no se realizaran los clculos.
5. CONCLUSIONES
Sealar las conclusiones Finales respecto a cada una de las experiencias realizadas.
De los resultados obtenidos en la experiencia Prctica, comparndolos con sus principios
Tericos al respecto, si existiera % error analizarlo e indicar el porqu del resultado, Indicando
las causas de las diferencias y el posible origen de los errores.
6. RECOMENDACIONES
Que recomiendan para obtener los resultados esperados en la Prctica

7. DESARROLLO DEL CUESTIONARIO ENUMERADO SEGN LA GUA DE PRCTICA

USADA
Contestar segn la enumeracin de la gua, DEBE ESCRIBIRSE LA PREGUNTA JUNTO CON
UNA RESPUESTA CLARA, coherente, investigada y fundamentada. Se revisara
especialmente el criterio, anlisis y sntesis al contestar.

8. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Las referencias se deben colocar segn el estilo APA deben ordenarse alfabticamente,
sangra en la segunda lnea para diferenciar del dato principal; Apellido y Nombre del autor,
edicin, ao, titulo, editorial, Pas, etc.,
Electrnica (digital); Direccin del enlace completa.

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