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TCNICA DE SIEMBRA PARA HONGOS Y BACTERIAS

El cultivo de microorganismos es una

actividad que requiere del conocimiento de
tcnicas de siembra o inoculacin y de
aislamiento para transferirlos de un medio a
otro, o mantener su crecimiento y actividad.
Es indispensable para realizar diversos
estudios morfolgicos, de identificacin,
bioqumicos, de patogenicidad y ecolgicos,
entre otros.

Existen diferentes tcnicas de siembra: por suspensin de la muestra en medios

lquidos; extensin de diluciones de un cultivo en superficie de medios en caja de Petri;
por estra en caja de Petri y tubos con medios solidificados en forma inclinada; por piquete
o picadura en tubos con medios slidos o semislidos. Con la aplicacin de cada tcnica
se obtiene informacin de importancia para el estudio bsico o aplicado de los
microorganismos de inters. En la naturaleza, los microorganismos generalmente se
encuentran en poblaciones, formando parte de comunidades de gran complejidad, por lo
que uno de los objetivos de estudio ms importantes en microbiologa es aislarlos. El
aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayora de los
casos, mediante la tcnica de estra cruzada para producir colonias aisladas en cultivos
slidos y as, obtener un cultivo puro o axnico, tambin conocido como cepa, que
contiene un solo tipo de microorganismo con la misma composicin gentica.

Diferentes Mtodos de Siembra

Sembrar: Es el acto de colocar el material bacteriolgico en el medio de cultivo para

promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicacin.

El resultado de una siembra se llama: Cultivo. Las siembras pueden ser:

Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez.

Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria.

NOTA: Se conoce como cultivo en medio slido al que se hace en una caja Petri o tubo
de ensayo con medio slido inclinado.
 CUESTIONARIO

1. EN RELACIN A LAS TCNICAS DE SIEMBRA EN CAJAS DE PETRI.

DESCRIBIR LAS SIGUIENTES TCNICA.
a. Siembra en cajas de Petri por la Tcnica de agotamiento, aislamiento o
de estra cruzada.

Con ste procedimiento se puede conseguir una buena separacin de las

colonias y aislarlas fcilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se
vuelca en caja de Petri y se deja solidificar.

Con el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo

heterogneo y se descarga sobre la superficie del medio formando estras. Esto
puede realizarse de varias formas:

- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se contina con las estras.

Cuando se quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o
tres placas de Petri, para lo cual se repite la operacin sin tomar con el asa
nuevo material.
- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado
el material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se
hace una estra luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar
nuevamente el asa; en el ltimo cuadrante aparecern las colonias aisladas
- El inculo se extiende sobre una pequea zona de la placa, prxima al
borde, se esteriliza el asa y se traza otra estra a partir del depsito y as
sucesivamente.

Medio de cultivo: solido en placa de Petri

FUNCION: Es un buen mtodo para el aislamiento de colonias; mediante esta

tcnica buscamos obtener colonias separadas a partir de un inculo.
b. Siembra en cajas de Petri por la Tcnica de siembra en cuadrantes.

Se utiliza cuando queremos conservar algn microorganismo que nos interesa.

Consiste en sembrar uno a uno los cuadrantes, sin flamear el asa entre estra y
estra, de tal forma que en el cuarto cuadrante, al ir agotando la muestra del
asa, tendremos los microorganismos aislados.

Se divide la parte inferior de la caja Petri en cuatro partes iguales con un

marcador. Se esteriliza el asa y se estra el 1er cuadrante con el procedimiento
bsico de S. Se trabaja en el sentido de las agujas del reloj, estriando cuadrante
por cuadrante, esterilizando el asa antes de seguir a otro.

FUNCIN: El objetivo de esta tcnica es diluir el inculo a medida que se

realizan estras en la superficie del agar.

c. Siembra en cajas de Petri por la Tcnica de siembra masiva.

 Se toma un hisopo estril e introdzcalo en el tubo que contiene la muestra a
sembrar, luego frote toda la superficie del agar. Le evaluacin del crecimiento
en las placas de agar se hace a travs de la observacin de colonias en la
superficie.

FUNCIN: Este mtodo es utilizado para obtener un gran nmero de

microorganismo (incremento de inculo) en la superficie de un agar.

d. Siembra en cajas de Petri por la Tcnica de puncin.

Con una aguja se toma el material que se

quiere sembrar y se lo introduce en el tubo,
con medio semislido. Introducir la aguja
hasta el fondo, formando un canal de
puncin, trayecto por el cual la retiraremos
luego. Este mtodo se utiliza para estudiar
la movilidad de las bacterias.

FUNCIN: Es utilizado para observar el crecimiento de hongos y as ms

adelante establecer su morfologa; as como; para la transferencia o subcultivo
de cepas previamente almacenadas y/o conservadas.

2. DESCRIBIR LAS TCNICAS DE SIEMBRA EN MEDIOS CONTENIDOS

EN TUBOS.
a. Siembra en tubos por estra simple.

Los medios en tubo pueden presentarse slidos en forma

inclinada, caldo o bien como medios semislidos. De
acuerdo al procedimiento de inoculacin puede emplearse
el asa o la aguja para inoculacin. Generalmente se emplea
el asa para inocular especmenes en placa y la aguja de
inoculacin para la transferencia de cultivos puros de
placas a tubos con medio slido.

Existen muchas frmulas de caldos, dependiendo de la bacteria que se desee

crecer. En los tubos con medio slido, el tubo se pone a enfriar en posicin
inclinada, de manera que al solidificar queda la superficie inclinada. Los
tubos inclinados son tiles para el cultivo de aerobios y anaerobios
facultativos. Las caractersticas del cultivo tales como pigmento son fciles
de observar en este tipo de cultivo.

Se realiza en un tubo con medio slido inclinado y deslizando el asa sobre la

superficie expuesta del agar de manera que se marquen surcos o estras.

b. Siembra mixta en tubos.

Se realiza sobre medios inclinados, haciendo una picadura

hasta el fondo del tubo con asa recta y luego haciendo una
siembra en estra sobre la superficie expuesta del agar,
deslizando el asa por la superficie inclinada marcando las
estras; de tal manera que, con el asa cargada se realizan
los dos tipos de siembra y sin retirarla del tubo.
c. Siembra en tubos por picadura.

Se realiza con asa recta en tubos con medios slidos y

semislidos generalmente sin inclinar. Se realiza
introduciendo el asa argollada con el microorganismo al
medio del cultivo por el centro de la superficie y llegando
con el extremo del asa al fondo del tubo.

d. Siembra en tubo de medio lquido.

Para transferir material a partir de un medio lquido o solido

a otro lquido, puede usarse el asa bacteriolgica o en
algunos casos, pipetas estriles o hisopos. Si se utiliza asas
bacteriolgicas, inocule el microorganismo en el medio
lquido hacindola rotar del mango.