La queratina es una protena presente en cabello, uas, cuernos, piel, pesuas y dems.

Es rica en
azufre y presenta una estructura fibrosa. De acuerdo a la secuencia de aminocidos, puede ser
rgida o blanda, como la encontrada en las pezuas o en el cabello, respectivamente. sta protena
tiene mucha utilidad en el rea de esttica y salud, ya que su presencia hidrata, mantiene firme y
protege la estructura en la que se encuentre.

El mtodo de clonacin de DNA consiste en insertar un fragmento de DNA en un plsmido de

manera que los extremos sean compatibles.

Un plsmido, llamado vector en ingeniera gentica, es un fragmento de ADN o ARN presente

principalmente en las clulas bacterianas, que tiene la particularidad de estar aislado de la
estructura principal cromosomtica y se pueden replicar independientemente. Debido esta
caracterstica es que son aptas para realizar clones.

Utilizando una endonucleasa se obtiene un segmento de ADN. La endonucleasa es una enzima

que provoca la ruptura de los enlaces fosfodiester. Las endonucleasas ideales para esta tarea son
llamadas endonucleasas de restriccin tipo II, ya que estas pueden identificar un fragmento de
ADN especfico y realizar dos cortes, separndolo as del resto de la cadena de informacin. ste
fragmento naturalmente tiende a unirse de nuevo, por
lo que es necesaria la intervencin de la enzima
fosfatasa alcalina; sta, mediante el proceso de
desfosforilacin (eliminar un grupo fosfato de los
extremos) evita que las molculas se vuelvan a atraer.

Al plsmido se le debe aplicar el mismo tratamiento con la endonucleasa de restriccin.

Si el prodcedimiento se realiza correctamente, la endonucleasa debe recortar una seccin de la

doble hlice del ADN que se desea clonar y una seccin anloga en el plsmido, con lo cual el
espacio en el plsmido coincidir con el fragmento de ADN a clonar, esto quiere decir que sus
extremos son compatibles y se puede realizar la insercin.

sta insercin no es espontanea, ya que el fragmento de ADN se modific para no volver a unirse a
la secuencia de ADN, es necesaria la presencia de la enzima ADN ligasa. sta precipita la formacin
de un enlace covalente entre el extremo 5 y 3 de dos cadenas polinucletidas.
 Imagen tomada y modificada de inx.futuremedicos .com
Ilustracin de los polinucletidos compatibles, posibilitando
la unin mediante ADN ligasa.

Ahora, ste plsmido con el fragmento de DNA a replicar debe ubicarse en el entorno apropiado
para su replicacin. Las bacterias presentan un buen entorno para la replicacin, as que es
conveniente introducir el plsmido (de ahora en ms llamado vector de clonacin) en una clula
bacteriana, por ejemplo E.coli.

El proceso de electroporacin es utilizado con ste fin. Consiste en aplicar

un campo elctrico a la membrana que supere su rigidez dielctrica, esto
es, que se sobrepase la tensin mxima que soporta el material sin
agujerearse, o que siendo el material naturalmente aislante, pase a ser
conductor. Teniendo la membrana poros, sta no presenta agujeros, sino
que sus poros se expanden, permitiendo la entrada del vector de
clonacin. ste mtodo ha de ser muy preciso, pues debe superarse la
rigidez dielctrica, que es diferente para cada tipo de clula,
cuidadosamente para no provocar apoptosis. Se suelen aplicar diferencias
de potencial de pocos Kilovoltios en una cubeta de electroporacin de capacidad para unos
cuantos microLitros, como las ilustradas en el grfico. La probabilidad de que un vector entre a
una clula bacteriana por ste mtodo es de 0.1%.

Ya dentro de la clula bacteriana, o husped, el plsmido est en un entorno amigable e ideal para
replicarse.