UNIVERSIDAD NACIONALDE

JAN

CARRERA PROFESIONAL:
INGENIERA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

TRABAJO MONOGRFICO

CURSO: Microbiologa

TEMA: Reproduccin Bacteriana

DOCENTE: Juan Javier Pedro Huamn

ALUMNA: Mileidy Guevara Benavides

CICLO: III

FECHA: 22 -05 -2014

JAEN-PERU

INGENIERIA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS 1

 INDICE

INTRODUCCION.3

REPRODUCCION BACTERIANA4

TIPOS DE REPRODUCCION BACTERIANA4

FORMACION DE ENDOESPORAS6

CULTIVOS PUROS8

TECNICAS PARA LA OBTENCION DE CULTIVOS PUROS.8

METODOS PARA LA OBTENCION DE CULTIVOS PUROS.8

CONSERVACION DE CULTIVOS PUROS...10

INGENIERA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

 INTRODUCCIN

Las bacterias constituyen un grupo taxonmico muy importante en la naturaleza por

su papel de microorganismos descomponedores que cumplen, el alto nmero de especias
identificadas y la gran diversidad de ambientes que ocupan: suelo, agua, aire, manantiales
calientes, pozos de petrleo, dentro y sobre el cuerpo de humanos y animales.
No todas las bacterias son perjudiciales, existe una gran cantidad de especies
benficas que intervienen en el ciclo del carbono y del nitrgeno, como descontaminantes
del medio ambiente y como control biolgico de plagas; mientras algunas especies si son
patgenas llegando a originar enfermedades como el clera, la fiebre tifoidea e
intoxicaciones alimenticias.

Figura 1

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I. Reproduccin Bacteriana

En las bacterias, el aumento en el tamao de las clulas (crecimiento) y la

reproduccin por divisin celular estn ntimamente ligados, como en la mayor parte de los
organismos unicelulares. Las bacterias crecen hasta un tamao fijo y despus se
reproducen por fisin binaria, una forma de reproduccin asexual .En condiciones
apropiadas, una bacteria Gram-positiva puede dividirse cada 2030 minutos y una Gram-
negativa cada 1520 minutos, y en alrededor de 16 horas su nmero puede ascender a
unos 5.000 millones (aproximadamente el nmero de personas que habitan la Tierra). Bajo
condiciones ptimas, algunas bacterias pueden crecer y dividirse muy rpido, tanto como
cada 9,8 minutos.105 En la divisin celular se producen dos clulas hijas idnticas. Algunas
bacterias, todava reproducindose asexualmente, forman estructuras reproductivas ms
complejas que facilitan la dispersin de las clulas hijas recin formadas. Ejemplos incluyen
la formacin de cuerpos fructferos (esporangios) en las mixobacterias, la formacin de hifas
en Streptomyces y la gemacin. En la gemacin una clula forma una protuberancia que a
continuacin se separa y produce una nueva clula hija.

Tipos de reproduccin bacteriana

Tenemos:

1 Asexualmente, por biparticin o divisin binaria. Es la forma ms habitual. En sta,

despus de la replicacin del ADN, dirigida por la ADN polimerasa de los mesosomas, la
pared bacteriana crece hasta formar un tabique transversal que separa las dos nuevas
bacterias.

a) Fisin binaria (biparticin)

El mecanismo de reproduccin habitual en

bacterias es la biparticin. Mediante este mecanismo se
obtienen dos clulas hijas, con idntica informacin en
el ADN circular, entre s y respecto a la clula madre, y
de contenido citoplsmico celular similar. Las clulas
hijas son clones de la progenitora. Por este sistema de
reproduccin se puede originar una colonia de clulas
con material idntico; sin embargo, esto no ocurre
debido al alto ndice de mutaciones que se producen en
las bacterias. La biparticin se produce cuando la clula
ha aumentado su tamao y ha duplicado su ADN. El
ADN bacteriano se une a un mesosoma, que separa el

FIGURA 2

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citoplasma en dos y reparte cada copia del ADN duplicado a cada lado. Al final del proceso
el mesosoma se ha unido al resto de la membrana plasmtica y se han formado dos clulas
hijas genticamente iguales.

b) Gemacin

Se forman dos ncleos, uno de ellos se desplaza hacia la membrana y forma una
especie de yema o botones en la superficie del organismo unicelular que se rodea de
citoplasma formndose dos clulas de diferentes tamaos. Ej. Noctiluca sp.

c) Esporulacin
Consiste en una serie de divisiones por mitosis del ncleo que se rodea de
citoplasma se forma la membrana de cada una y al romperse la clula original quedan en
libertad numerosas clulas llamadas esporas. Ej. Plasmodium sp. Agente que provoca el
paludismo o malaria.

2 Mecanismos parasexuales
En ocasiones, la clula bacteriana tiene la oportunidad de intercambiar informacin
gentica por procesos de recombinacin. Estos procesos son la transformacin, la
transduccin y la conjugacin. En estos procesos no hay formacin de ningn tipo de
gametos, por lo que no es reproduccin sexual.

a) Transformacin:

Consiste en el intercambio gentico producido cuando una

bacteria es capaz de captar fragmentos de ADN, de otra bacteria
que se encuentran dispersos en el medio donde vive

b) Transduccin: FIGURA 3

En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a

otra se realiza a travs de un virus bacterifago, que se
comporta como un vector intermediario entre las dos bacterias.

FIGURA 4

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c) Conjugacin

Este proceso se lleva a cabo si la clula presenta el

plsmido F, que contiene la informacin gentica para formar
Pili, puentes que sirven de unin citoplsmica entre dos
bacterias. La clula que presenta el plsmido se denomina
F+; la clula que no lo contiene se llama F-. La bacteria
F+(donadora de informacin) se une a una bacteria F-
(receptora) mediante uno de sus Pili. A travs de l introduce
una hebra del plsmido F, de forma que la bacteria F- se
FIGURA 5
convierte en bacteria F+.
En ocasiones el plsmido se introduce en el anillo del ADN bacteriano. Entonces, la
bacteria donadora se denomina Hfr (High frequency of recombination). De esta forma la
bacteria Hfrpuededonar a otras clulas cualquier gen de su ADN.

II. Formacin De Endoesporas

Diversas bacterias Gram positivas pueden formar una estructura latente, de especial
resistencia, denominada endoesporas. Las endoesporas se desarrollan dentro de clulas
bacterianas vegetativas de tan slo algunos gneros como: Bacillus y Clostridium (bacilos),
y Sporosarcina (cocos). Estas estructuras son extraordinariamente resistentes a situaciones
estrechamente ambientales, como calor, radiacin ultravioleta, desinfectantes qumicos y
desecacin. De hecho, algunas endoesporas han permanecido viables durante unos 100
000 aos, habindose recuperado vivas endoesporas de actinomicetos (que no son
autnticas endoesporas), despus de haber estado enterradas en el barro durante 7500
aos. Debido a su resistencia y al hecho de que varias especies de bacterias formadoras de
endoesporas son agentes patgenos peligrosos.

Las endoesporas tienen una gran importancia en microbiologa alimentaria, industrial

y mdica. Las endoesporas sobreviven a menudo la coccin durante una o ms horas; por
ello, hay que emplear autoclaves, para esterilizar muchos materiales. Las endoesporas
tienen tambin un inters teortico considerable. Como las bacterias producen estas
entidades intrincadas de una manera muy organizada, en pocas horas, la formacin de
endoesporas es un tema muy conveniente para investigar la construccin de estructuras
biolgicas complejas. En el ambiente, las endoesporas permiten la supervivencia de las
bacterias cuando la humedad o los nutrientes son escasos. Resistencia de endoesporas a
temperaturas elevadas. Las endoesporas pueden estar situadas centralmente, cerca de un

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extremo (subterminal), o claramente terminales .La endoesporas est a menudo rodeada
por una capa delicada y delgada, denominada exosporio

Formacin de una Endoesporas en un Bacilo Gram Positivo

Etapa0 La clula se encuentra en la etapa final de crecimiento exponencial y

contiene dos cromosomas.

Etapa 1 El DNA celular se hace ms denso y ocupa el centro de la clula.

Comienza un importante recambio intracelular de protenas.

Etapa 2 Se forma un tabique (septo) cerca del polo celular a causa de la

invaginacin de la membrana citoplasmtica. El DNA es segregado en dos
compartimentos (la espora en desarrollo y la clula madre).

Etapa 3 El citoplasma de la espora en formacin queda delimitado por dos

membranas debido al crecimiento de la membrana citoplasmtica alrededor
del protoplasto.

La membrana ms interna se transformar en la membrana citoplasmtica de

la espora en germinacin

Etapa 4 Comienza a formarse la corteza de la espora por el depsito de un

peptidoglicano esporoespecfico entre la membrana externa e interna. La
espora aparece como un cuerpo refractario, comienza a acumularse calcio, y a
sintetizarse Acido Dipicolnico.

Etapa 5 Aparece el exosporio. La membrana exterior se transforma en la capa

cortical por la incorporacin de protenas ricas en cistena. Esta etapa le
confiere a la espora resistencia frente a los agentes antimicrobianos.
Resistencia frente a los agentes antimicrobianos.

Etapa 6 Maduracin de la espora. Su citoplasma se vuelve homogneo y

electrodenso. La capa cortical se completa.

Etapa 7 La endoesporas es liberada por la lisis de la clula.

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III. CULTIVOS PUROS

Son aquellos que contienen un solo tipo de microorganismo. El modo de obtener

estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola clula (son
clones).

Obtencin de un cultivo puro

La obtencin de un cultivo puro se hace mediante una tcnica de aislamiento. La

tcnica de aislamiento ms utilizada consiste en sembrar en un medio de cultivo slido en
placa de tal manera que los microorganismos generen colonias separadas ("Aislamiento por
agotamiento en estras").
Se sabe que cada colonia procede de una sola clula. Por lo tanto el cultivo descendiente
de una colonia es un cultivo puro.

Caractersticas de los cultivos puros

Las colonias deben ser iguales en forma, tamao y color

Que no existan formas inhibidas.
Al microscopio deben tener un aspecto comn.
Tiene que tener iguales propiedades tintoriales
Deben ser bioqumicamente y fisiolgicamente iguales.
Una regla importante es no coger nunca de la primera colonia.

IV. TCNICA DE LA SIEMBRA

La tcnica para el aislamiento comienza preparando un inculo de siembra, que es

la deposicin de una pequea porcin de la muestra en el medio o en los medios de cultivo
adecuado, en funcin de las especies microbianas que se espera encontrar. Por eso existen
distintos mtodos o tipos de siembra, en funcin de la muestra de partida, del medio en el
que se siembra y de la finalidad del estudio. Describiremos la siembra para inoculacin y la
siembra para aislamiento.

a) Siembra para inoculacin: la inoculacin consiste en tomar una pequea porcin de la

muestra y diluirla para dispersarla y que crezca con ms facilidad en el medio de cultivo. Se
puede inocular en medio lquido o en medio slido.

b) Siembra para aislamiento: la finalidad de este tipo de siembras es la de obtener cultivos

puros. Se siembra en placa de Petri que contienen medios de cultivo slidos.

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1 Mtodos para obtener los cultivos puros

A. Mtodo de siembra para aislamiento por agotamiento o en estra

Estra nica: depositamos la muestra lo ms

alejado de nosotros y realizamos la siembra en forma
de zig-zag. De esta forma vamos descargando la
muestra del asa. Es importante no volver a repasar el
trozo de medio de cultivo que ya hemos sembrado. Para
conseguir que al final de la estra tengamos colonias
aisladas es importante que al principio hagamos la
estra ms junta y que la cantidad de muestra tomada
en el asa sea la adecuada.

Estra mltiple: en esta tcnica de aislamiento por agotamiento se realizan varias

estras. Esto se puede llevar a cabo flameando el asa de paso en paso, es decir, de estra
en estra, o sin flamear el asa. Adems, dependiendo de la forma en la que hagamos las
estras, existen varios tipos de estriados:

Estriado sobre cuatro

cuadrantes: Se utiliza cuando queremos
conservar algn microorganismo que nos
interesa. Consiste en sembrar uno a uno
los cuadrantes, sin flamear el asa entre
estra y estra, de tal forma que en el
cuarto cuadrante, al ir agotando la muestra
del asa, tendremos los microorganismos
aislados.

B. Mtodo de siembra para aislamiento por diluciones sucesivas

1) Siembra por dilucin: Se toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldo
simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con
el material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados.
Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas clulas que, tras inocularse en
un medio de cultivo, generen colonias aisladas.

2) Siembra por estras en superficie: Se siembra el material en la superficie del agar

inclinado en un tubo de ensayo, all se extiende por toda la superficie con el asa
bacteriolgica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo

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estras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte ms profunda
de la superficie inclinada y se termina la estra en la parte ms cerca de la boca del tubo.
Medio de cultivo: agar base inclinado
Instrumento: asa o aguja bacteriolgica

3) Siembra por estra por agotamiento: Con ste procedimiento se puede conseguir una
buena separacin de las colonias y aislarlas fcilmente. Para ello se funde el medio de
cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada
se toma material de un cultivo heterogneo y se descarga sobre la superficie del medio
formando estras. Esto puede realizarse de varias formas:

Al comienzo se coloca el inoculo, luego se contina con las estras. Cuando se

quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo
cual se repite la operacin sin tomar con el asa nuevo material.

Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el

material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estra luego
en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en el ltimo
cuadrante aparecern las colonias aisladas
El inculo se extiende sobre una pequea zona de la placa, prxima al borde, se
esteriliza el asa y se traza otra estra a partir del depsito y as sucesivamente.
Medio de cultivo: solido en placa de Petri

Por picadura o puncin: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y
se lo introduce en el tubo, con medio semislido. Introducir la aguja hasta el fondo,
formando un canal de puncin, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este mtodo se
utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.
Medio de cultivo. Semislido
Instrumento: aguja bacteriolgica
Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias

Siembra en TSI: (Por picadura y estras en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron) es
un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el rojo
fenol.
En este medio sembraremos por picadura y estras en superficie, como ya conocemos, para
estudiar los cambios que ocurrirn en superficie y profundidad. A lo largo del canal se
desarrollan los microorganismos, y segn lo hagan en la parte superior o inferior del tubo,
estarn indicando su comportamiento frente a los azucares.

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Tcnica del cultivo por enriquecimiento

Consiste en ajustar las condiciones de cultivo para seleccionar el microorganismo que nos
interesa aislar. Ejemplo: nos interesa aislar bacterias fotoauttrofas. Tomamos un matraz
con agua y sales y lo incubamos a la luz, de manera que crezcan las bacterias
fotoauttrofas. Ejemplo: queremos aislar bacterias quimiolittrofas del azufre; ponemos
azufre, CO2 como fuente de carbono (disuelto en agua) e incubamos en la oscuridad para
eliminar fotoauttrofas. Para incubar enterobactrias como enterobacter hay que incubar a
37, mientras que para incubar otra enterobacteria, E. Coli, hay que incubar a 45.

V. CONSERVACIN DE CULTIVOS PUROS

Almacenamiento a temperaturas bajas. Ponemos las bacterias con glicerol al 20 -

50% a -70 y podemos mantenerlas as durante aos y dcadas.

Liofilizacin: es un mtodo ms eficaz. En un vial de liofilizacin ponemos leche

desnatada y las bacterias, lo congelamos, lo llevamos al liofilizador y lo sometemos al
proceso de liofilizacin. La liofilizacin es una evaporacin por condensacin. Se basa
en el punto triple del agua; podemos pasar de slido a gas.
El agua se evapora y queda un polvillo formado por la leche y las bacterias. Cerramos el
bote y podemos almacenar el cultivo durante dcadas.

Colecciones de cultivo: en todos los pases hay organizaciones que preparan o

almacenan colecciones de cultivos puros o tipo. En Espaa existe la C.E.C.T (Coleccin
espaola de cultivos tipo), que est en Valencia. La ms grande del mundo es la
americana, A.T.C.C. (American type cultive collection).

Mantenimiento

1. Debemos transferir peridicamente, ya que los tubos de agar se secan, se evapora el

agua.
2. Se debe cubrir con parafina, con lo cual la transferencia se puede hacer ms tarde,
disminuye el metabolismo y tardan en envejecer.
3. Se disminuye la temperatura, congelamos las clulas. Para proteger las clulas y que no
se formen cristales que las daen se usa el glicerol
4. La liofilizacin es la sublimacin a alto vaco de las muestras congeladas con rapidez.

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