NUTRICIN BACTERIANA

Contenidos de la pgina:
CONCEPTOS BSICOS | CLASES DE NUTRIENTES | NUTRIENTES
UNIVERSALES | NUTRIENTES PARTICULARES | FIJACIN DE
NITRGENO | FACTORES DE CRECIMIENTO | MEDIOS DE
CULTIVO | GLOSARIO | BIBLIOGRAFA | ENLACES | AUTO
EVALUACIN

Barra de exploracin:
[ Principal ] [ Arriba ] [ Procariotas ] [ Ncleo bacteriano ][ Citopla
sma bacteriano ] [ La pared bacteriana ] [ Flagelos y pili ][ Sustanc
ias de reserva ] [ Endsporas ] [ Cpsulas y Limos ] [ Pigmentos ][
Nutricin ]

CONCEPTOS BSICOS | Contenidos

Cualquier ser vivo, por su actividad vital (crecimiento,

mantenimiento y reproduccin) requiere continuos aportes de
energa para reponer las prdidas y, para que todo el sistema pueda
funcionar. La nutricin es el proceso por el que los seres vivos toman
del medio donde habitan las sustancias qumicas que necesitan para
crecer. Dichas sustancias se denominan nutrientes, y se requieren
para los dos objetivos que comprende el metabolismo:

1. fines energticos o catabolismo (reacciones de mantenimiento)

2. fines biosintticos o anabolismo (reacciones plsticas ).

Las biosntesis de nuevos componentes celulares son procesos que

requieren energaprocedente del medio ambiente. Anteriormente
sealamos los principales modos de captacin y obtencin de energa
existentes en las bacterias.

El estudio de la nutricin microbiana se puede desglosar en varios

apartados: as, podemos considerar los tipos de nutrientes
requeridos, los aspectos cuantitativos, e incluso podemos abordar los
aspectos ambientales (en cuyo caso entramos dentro del campo de la
Ecofisiologa). Igualmente podemos estudiar la aplicacin prctica de
la nutricin bacteriana, que se plasma sobre todo en el diseo de
medios de cultivo para manejar los microorganismos en el
laboratorio.

Es importante tener claros desde el principio una serie de conceptos

y nomenclaturas relacionados con los principales tipos de nutricin
bacteriana. Puesto que, como acabamos de ver, la nutricin presenta
un aspecto de aprovisionamiento de energa y otro de suministro de
materiales para la sntesis celular, podemos hablar de dos
"clasificaciones" de tipos de nutricin:

Desde el punto de vista de los fines de aprovisionamiento de

energa, las bacterias se pueden dividir en:

1. litotrofas (del griego lithos = piedra): son aquellas que slo

requieren sustancias inorgnicas sencillas (SH2 , S0, NH3, NO2-,
Fe, etc.).
2. organotrofas: requieren compuestos orgnicos (hidratos de
carbono, hidrocarburos, lpidos, protenas, ......).

Desde el punto de vista biosinttico (o sea, para sus necesidades

plsticas o de crecimiento), las bacterias se pueden dividir en:

1. auttrofas: crecen sintetizando sus materiales a partir de

sustancias inorgnicas sencillas. Ahora bien, habitualmente el
concepto de autotrofa se limita a la capacidad de utilizar una
fuente inorgnica de carbono, a saber, el CO2.
2. hetertrofas: su fuente de carbono es orgnica (si bien otros
elementos distintos del C pueden ser captados en forma
inorgnica).

Otros conceptos:
auttrofas estrictas: son aquellas bacterias incapaces de crecer usando
materia orgnica como fuente de carbono.
mixtrofas son aquellas bacterias con metabolismo energtico littrofo,
pero requieren sustancias orgnicas como nutrientes para su metabolismo
biosinttico.

Sean auttrofas o hetertrofas, todas las bacterias necesitan captar

una serie de elementos qumicos, que se pueden clasificar (segn las
cantidades en que son requeridos) como

macronutrientes (C, H, O, N, P, S, K, Mg)

micronutrientes o elementos traza (Co, Cu, Zn, Mo...)

En la naturaleza, estos elementos se encuentran combinados,

formando parte de sustancias orgnicas y/o inorgnicas. Algunos de
los nutrientes sern incorporados para construir macromolculas y
estructuras celulares; otros solo sirven para la produccin de energa,
y no se incorporan directamente como material celular; finalmente,
otros pueden ejercer ambos papeles.

El mundo bacteriano, como conjunto, exhibe una gigantesca

versatilidad metablica de uso de nutrientes: desde auttrofos que
obtienen su carbono por reduccin del CO2 y los dems elementos a
partir de fuentes igualmente inorgnicas, hasta hetertrofos capaces
de usar amplia gama de fuentes orgnicas de carbono.

A su vez, dentro de los hetertrofos, podemos encontrar muchos

tipos de nutricin muy distintos, desde bacterias metilotrofas que
slo usan metano o metanol como fuente de carbono y energa, hasta
los muy verstiles Pseudomonas, que pueden recurrir a degradar ms
de 100 tipos de fuentes de C, incluyendo sustancias tan "exticas"
como hidrocarburos alifticos y cclicos. De cualquier modo, entre los
hetertrofos, una de las fuentes ms tpicas de carbono consiste
en glucosa.

En los hetertrofos- organotrofos, los sustratos carbonados (con un

nivel de oxidacin no muy distinto del material celular -CH2O-)
entran simultneamente al:

metabolismo energtico (o catabolismo, donde la fuente de C se

transforma en CO2, o en CO2 junto con otras sustancias no totalmente
oxidadas);
metabolismo plstico (anabolismo = biosntesis de nuevo material celular).

Aunque dentro del mundo de los procariotas se encuentre tanta

variedad de nutriciones, las bacterias que pueden nutrirse solamente
de sustancias inorgnicas sencillas (H2O, CO2, N2, NO3--, NH3, SO4=,
fosfatos, etc.) son minora, pero sus procesos metablicos son muy
interesantes. De hecho, existen tipos metablicos que slo
han evolucionado en procariotas.

Como paradigma de esto citaremos los

microorganismos quimioauttrofos (o quimiolitoauttrofos): obtienen
su energa de la oxidacin de sustancias inorgnicas sencillas, el
carbono procede del CO2, y el resto de elementos a partir de sales
inorgnicas, por lo que pueden vivir en soluciones de sales minerales.

Lo habitual, sin embargo, es que muchas bacterias recurran, siempre

que puedan, a tomar del medio ciertos compuestos ms complejos,
ya que carecen de ciertas rutas biosintticas.
CLASES DE NUTRIENTES | Contenidos

Podemos clasificar los nutrientes en las siguientes categoras:

1. universales: agua, CO2, fosfatos y sales minerales;

2. particulares
3. factores de crecimiento

NUTRIENTES UNIVERSALES | Contenidos

El agua

Las bacterias necesitan grandes cantidades de agua. De hecho, salvo

excepciones, se pueden considerar como organismos acuticos.
Requieren cierto grado de humedad para crecer. Desde el punto de
vista de sus posibles papeles, el agua es:

el principal constituyente del protoplasto bacteriano;

el medio universal donde ocurren las reacciones biolgicas;
un reactante en exceso (es decir, un producto resultante de algunas
reacciones bioqumicas).

Las fuentes de agua pueden ser:

endgena: procedente de procesos de oxido-reduccin;

exgena (la ms importante): procedente del medio, y que difunde a travs
de las membranas.

Ahora bien, no toda el agua de un ambiente est disponible para la

bacteria:

Existen determinadas sustancias y superficies que absorben y adsorben

(respectivamente), de modo ms o menos intenso, molculas de agua,
dejndolas inasequibles a la bacteria.
Los solutos disueltos en agua (p. ej. , sales, azcares) tienen afinidad por las
molculas de H2O que los rodean, por lo que stas tampoco estarn a
disposicin del microorganismo.

La disponibilidad de agua se mide por un parmetro llamado

actividad de agua o potencial de agua, indicativo del agua libre, y
que se expresa como

aW= PS/PW

donde PS es la presin parcial de vapor de agua en la solucin

problema y PW es la presin parcial de vapor del agua destilada.
Cmo medir el potencial de agua de un medio lquido determinado?
Se mide la humedad relativa del aire que hay encima del medio (en
frascos), y este valor se refiere al valor de 100, que es la humedad
del aire encima del agua destilada. O sea, la aW = humedad
relativa/100).

Las bacterias tienen valores de aW normalmente entre 0.90 y 0.99.

Bacterias de hbitats oligotrficos (como Caulobacter, Spirillum) tienen aW

cercanos a 1.
Bacterias como Escherichia y Streptococcus, que viven en sangre y fluidos
corporales, tienen aW de alrededor de 0.995.
Bacterias marinas como ciertos Vibrio y Pseudomonas encuentran valores de
0.980.
Ciertos bacilos Gram-positivos que resisten mejor la sequedad poseen
valores de 0.950.

En el extremo de resistencia encontramos ciertas bacterias xerfilas,

capaces de vivir a aW muy bajos (en torno a 0.75). Muchas de estas
bacterias viven de hecho en medios acuosos, pero donde gran parte
del agua no est disponible por las razones arriba citadas:

bacterias halfilas extremas, como la arqueobacteria Halobacterium, que

habita lagunas hipersalinas;
bacterias (y sobre todo, ciertos microorganismos eucariticos como
levaduras) sacarfilas, que viven en jugos y zumos con altas concentraciones
de azcares.

El anhdrido carbnico (CO2)

El anhdrido carbnico es requerido por todo tipo de bacterias:

Las auttrofas lo requieren como fuente de carbono, y lo reducen usando

como fuente de energa la luz (en el caso de las fotoauttrofas) u
oxidaciones de determinadas sustancias inorgnicas
(los quimioautolitotrofos).
Las arqueobacterias metanognicas pueden usar el CO2 como aceptor de los
electrones procedentes de la oxidacin del H2, proceso por el que obtienen
su energa:

CO2 + 4H2 ---------> CH4 + 2H2O ( DG'0<0)

Los hetertrofos, aunque no usan el CO2 como fuente de C ni como aceptor

de electrones, necesitan pequeas cantidades para las carboxilaciones en
determinadas rutas anablicas y catablicas.

El origen del CO2 puede ser:

 endgeno: procedente de descarboxilaciones que ocurren al degradar la
fuente orgnica de carbono;
exgeno: el CO2 de la atmsfera o disuelto en las soluciones acuosas.

Normalmente, las bacterias crecen a la concentracin de

CO2 atmosfrico (0.03%), pero algunas bacterias (Neisseria, Brucella),
cuando se aslan por primera vez, requieren atmsferas enriquecidas,
con 5-10% de CO2. Ello parece deberse a que poseen alguna enzima
con baja afinidad hacia el CO2; sin embargo, tras varios subcultivos,
suelen adaptarse a crecer a tensiones normales.

Fsforo

Suele requerirse en forma de fosfatos, sea orgnicos o inorgnicos.

Las bacterias que pueden usar los fosfatos orgnicos (merced a la
posesin de fosfatasas) no dependen absolutamente de ellos, ya que
pueden recurrir igualmente a los fosfatos inorgnicos. Los fosfatos
orgnicos son hidrolizados por fosfatasas extracelulares o (en las
Gram-negativas) periplsmicas (p.ej., la fosfatasa alcalina).

El fsforo se usa principalmente para la sntesis de los cidos

nucleicos y los fosfolpidos, pero aparece tambin en coenzimas y en
protenas.

Sales minerales

Las sales minerales son la fuente de aniones (p. ej. el Cl-) y de

cationes para la clula. Los siguientes cationes, concretamente, se
necesitan en cantidades relativamente grandes: K+, Mg++, Ca++, Fe++.

El in potasio (K+):

El in potasio interviene en la activacin de una variedad de enzimas,

incluyendo las que participan en la sntesis de protenas.
En Gram-positivas est asociado con los cidos teicoicos de la pared.

El in magnesio (Mg++):

estabiliza ribosomas, membranas y cidos nucleicos;

como cofactor en muchas reacciones, especialmente las que implican
transferencia de grupos fosfato. Por ejemplo, en las reacciones que
requieren ATP, el Mg++ puede unir la enzima al sustrato durante el
mecanismo de accin de la primera.
Participa de las clorofilas y bacterioclorofilas de bacterias fotosintticas.

El in calcio (Ca++): es un cofactor de ciertas enzimas, como

proteinasas.
El hierro (principalmente como in ferroso, Fe++) suele estar
acomplejado en la naturaleza, formando sales insolubles. Las
bacterias disponen de una serie de molculas, denominadas
siderforos, capaces de captar ese hierro. El hierro:

participa en muchas molculas implicadas en procesos de respiracin, como

citocromos y ferroprotenas no hmicas (protenas con Fe-S);
interviene como cofactor en ciertas enzimas.
forma parte de los magnetosomas, de los cuales depende el comportamiento
magnetotctico capacidad de orientarse en el campo magntico de ciertas
bacterias. Se encuentra bajo la forma de magnetita (xido de hierro
ferromagntico) Fe3O4

Aparte de estos iones que se requieren en cantidades relativamente

grandes, las bacterias necesitan minsculas cantidades de otros
elementos (oligoelementos), a los que tambin se denomina como
micronutrientes o elementos traza.

El manganeso (Mn++) es un cofactor de ciertas enzimas, y a veces puede

sustituir al Mg++.
El cobalto (Co++) se requiere casi exclusivamente para la vitamina B12 (de
hecho, si suministramos esta vitamina al medio, la bacteria se vuelve
independiente del Co++libre).
El zinc interviene en la estabilizacin de complejos enzimticos como las
ADN- y ARN-polimerasas.
El molibdeno participa en las llamadas molibdoflavoprotenas, implicadas en
la asimilacin de nitratos. Por otro lado, participa como cofactor, junto con
el Fe, en el complejo nitrogenasa de las bacterias fijadoras de
N2 atmosfrico.
El nquel participa en hidrogenasas, enzimas que captan o liberan H 2.

NUTRIENTES PARTICULARES | Contenidos

Se trata de elementos que pueden ser cubiertos de modo muy

distinto, dependiendo del tipo de bacteria que consideremos.
Concretamente, los elementos N y S (que requieren todos los seres
vivos) pueden ser captados por las bacterias de modos muy distintos,
dependiendo de sus capacidades biosintticas.

Tanto el N como el S se encuentran en la clula en estado reducido:

el radical -NH2 forma parte de los aminocidos (que a su vez son los sillares
de las protenas) y de las bases nitrogenadas (que participan en los cidos
nucleicos y en algunas coenzimas);
el radical -SH interviene en determinados aminocidos y en coenzimas como
la CoA.

En qu formas qumicas entran N y S a las bacterias?

La mayora de bacterias fotosintticas y muchas heterotrofas asimilan
estos elementos en forma combinada inorgnica oxidada:

como NO3--, merced a la actuacin secuencial de nitrato- reductasas y

nitrito- reductasas asimilatorias
como SO4=. Este sulfato se activa con ATP, y luego se reduce hasta sulfito y
finalmente sulfhdrico, que ya tiene el estado de reduccin adecuado para
la incorporacin del S.

Muchas bacterias hetertrofas pueden usar alguna forma reducida:

de N inorgnico: amonio (NH4+)

de S inorgnico: sulfuros (S=, SH-)
de N orgnico: aminocidos, pptidos
de S orgnico: cistena.

Muchas de las bacterias que pueden usar amonio como nica fuente
de nitrgeno tambin pueden usar nitratos.

FIJACIN DE NITRGENO | Contenidos

La atmsfera contiene enormes cantidades de nitrgeno no

combinado (libre) en estado gaseoso: el nitrgeno molecular o
dinitrgeno (N2), que procede de microorganismos denitrificantes
(vase el captulo 15). Sin embargo, esta gran reserva slo puede
servir de fuente de nitrgeno a ciertos procariotas, las llamadas
bacterias fijadoras de nitrgeno o diazotrofos. Esta notable
capacidad bioqumica no ha evolucionado en eucariotas. (Lo ms a
que ha llegado la evolucin es a seleccionar ciertos tipos de
asociaciones simbiticas entre procariotas diazotrofos y ciertos
eucariotas). En una poca todo el nitrgeno de los seres vivos fue
procesado por estas bacterias, que toman el nitrgeno atmosfrico
(N2) y lo modifican en manera tal que pueden ser utilizados por los
organismos vivos como nitratos o amonaco NH3.

Desarrollo de un ndulo en una raz de ciertas plantas (en

generalleguminosas) donde viven bacterias en simbiosis con ella
Va metablica que fija el nitrgeno atmosfrico
N2, y lo convierte en amonaco NH3
La fijacin del N2, es un proceso de reduccin que convierte el
nitrgeno molecular en amoniaco, segn la siguiente ecuacin:

N2 + 8H+ + 8e + 18 ATP -->2NH3 + H2 + 18 (ADP + Pi)

Esta reaccin est catalizada por un complejo enzimtico

denominado nitrogenasa o dinitrogenasa, que consta de dos
componentes:

Componente I o nitrogenasa propiamente dicha; posee un cofactor de hierro

y molibdeno (FeMoCo) que forma parte del centro activo. Por ello, a este
componente tambin se le conoce como molibdoferroprotena. (En realidad
existen dos copias del cofactor, cuya estequiometra es MoFe 7S9-
homocitrato)
 Componente II o nitrogenasa- reductasa, que posee tomos de Fe
acomplejados con S de determinadas cistenas (por lo que este componente
se denomina a veces ferroprotena).

Dos cosas llaman la atencin de la ecuacin anterior:

Obsrvese que la reaccin requiere un gran aporte de energa en forma de

al menos 18 ATP (en ocasiones puede llegar a 24 ATP). Ello se debe a que el
dinitrgeno (N=N) es una molcula extremadamente inerte (su energa de
disociacin es de 940 kJ), y su reduccin precisa una gran energa de
activacin para transferirle 6 electrones.
Parte de la actividad nitrogenasa (as como ATP y electrones) "se pierden"
en reducir dos iones H+ hasta H2. Se desconoce la razn de este "despilfarro",
pero se sabe que es un efecto intrnseco de este complejo enzimtico.

Los electrones para la reduccin llegan al complejo por medio de una

ferredoxina, que los transfiere al componente II, que queda reducido
al tiempo que por cada dos electrones transferidos se hidroliza una
molcula de ATP. La nitrogenasa-reductasa reducida se asocia
entonces con la nitrogenasa (=componente I), y le transfiere los
electrones. Una vez reducida la molibdoferroprotena, sta transfiere
los electrones (y los protones) al N2, hasta convertirlo en dos
molculas de amoniaco. (El centro activo es FeMoCo).

Un aspecto muy importante del complejo nitrogenasa es su extrema

sensibilidad al oxgeno, de modo que queda rpida e
irreversiblemente inactivado por este gas. Ahora bien, esto no
significa que la capacidad de diazotrofa est relegada a bacterias
anaerobias, ya que, la evolucin ha "inventado" distintas estrategias
para proteger a la nitrogenasa en fijadores aerobios como las
cianobacterias que han confinado el sistema al interior de clulas con
gruesas paredes (los heterocistos).

Debido a lo "caro" que resulta fijar nitrgeno, no es extrao

comprobar que este proceso est regulado de forma muy estricta
ante la presencia en el medio de fuentes combinadas de nitrgeno
(nitratos, amonio, aminocidos):

la actividad nitrogenasa se ve inhibida ante la presencia de N combinado;

ante N combinado,
se reprime la transcripcin de los genes codificadores de la nitrogenasa y
dems funciones relacionadas (genes nif, fijadores de nitrgeno).

La nitrogenasa es una enzima relativamente "inespecfica", ya que

puede reducir otras pequeas molculas provistas de triples enlaces,
como cianuros (N=C-) y acetileno (HC=CH). La reduccin de acetileno
a etileno sirve de base al mtodo ms usual de medir la actividad
nitrogenasa, el llamado ensayo de reduccin del acetileno, que se
registra mediante aparatos de cromatografa gaseosa.

FACTORES DE CRECIMIENTO | Contenidos

Los factores de crecimiento son molculas orgnicas especficas que,

en muy pequea cantidad, algunas bacterias necesitan para crecer.
Salvo excepciones no tienen funcin plstica (no son sillares de
macromolculas) ni sirven como fuente de energa. Suelen ser
coenzimas o sus precursores, vitaminas, que determinadas bacterias
no pueden fabricar por s mismas, al carecer de parte o toda de una
ruta biosinttica.

Ejemplos:

las bacterias del gnero Brucella requieren como factores de crecimiento en

sus medios de cultivo la biotina, niacina, tiamina y cido pantotnico.
Haemophilus necesita suplementos de grupos hemo y piridn-nucletidos.
En la siguiente tabla se muestran algunas de las vitaminas y cofactores
requeridos por algunas bacterias:

Factor o vitamina Funciones principales

p-aminobenzoico (PABA)
cido flico
Biotina
Cobalamina (vitamina B12)
Niacina (cido nicotnico)
Riboflavina
cido pantotnico
Tiamina (vitamina B1)
Complejo B6 (piridoxal, piridoxamina)
Grupo Vitamina K, quinonas
Precursor del cido flico
Metabolismo de compuestos C1,
transferencia de grupos metilo.
Biosntesis de cidos grasos; fijacin de
CO2
Reduccin y transferencia de
compuestos C1; sntesis de desoxirribosa
Precursor del NAD; transferencia de
electrones en reacciones redox
Precursor de FAD y FMN
Precursor de la CoA
Descarboxilaciones; transcetolasas
Transformaciones de aminocidos y
cetocidos
Transportadores de electrones
(ubiquinonas)

MEDIOS DE CULTIVO Y CONDICIONES DE CRECIMIENTO | Contenidos

El conocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los
microorganismos en el laboratorio. Como acabamos de ver, en
general, todos los microorganismos tienen parecidos requerimientos
de macro- y micronutrientes, aunque ha quedado claro que la forma
en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas
bacterias y otras, as como la cantidad relativa de cada nutriente.
Los microbilogos, en su trabajo cotidiano, estn acostumbrados a
manejar multitud de "recetas" o frmulas correspondientes a muchos
tipos de medios de cultivo.

Un medio de cultivo es una solucin acuosa (bien como tal, o bien

incorporada a un coloide en estado de gel) en la que estn presentes
todas las sustancias necesarias para el crecimiento de un (os)
determinado (s) microorganismo (s). Los medios de cultivo se pueden
clasificar, en primera instancia, en tres grandes tipos:

1) Medios complejos o indefinidos: su composicin qumica exacta

se desconoce, ya que son el producto de realizar infusiones y
extractos de materiales naturales complejos:

Ejemplos:

Extracto de carne
Extracto de levadura
Autolizado de levadura
Peptona de carne o de soja
Digeridos de casena (de la leche).
Digeridos de embrin de semilla de algodn

Con ellos se logra un tipo de medio rico nutricionalmente, aunque

indefinido qumicamente. Si lo que pretendemos simplemente es
obtener un buen crecimiento bacteriano, este tipo de medios es
ideal, ya que su confeccin es fcil y rpida (basta pesar una cierta
cantidad del extracto desecado, suministrado por casas comerciales,
disolverlo en agua y esterilizar en autoclave, antes de inocular e
incubar la bacteria con la que queramos trabajar). Estos medios
contienen fuentes variadas de C y N orgnicos, sales minerales y
micronutrientes. Sin embargo, con ellos no podemos tener un control
nutricional preciso, ya que desconocemos la composicin qumica y
proporcin exacta de los distintos nutrientes.

2) Medios sintticos o definidos: se obtienen disolviendo en agua

destilada cantidades concretas de distintas sustancias qumicas
puras, orgnicas y/o inorgnicas. La composicin concreta de un
medio sinttico depender de la bacteria que queramos cultivar:
lgicamente, un medio definido para una bacteria con grandes
capacidades biosintticas ser ms sencillo que el medio definido de
otra bacteria con menores posibilidades biosintticas.

3) En tercer lugar, podemos fabricar un tipo de medio "mezcla" de los

anteriores, denominado medio semisinttico: llevan algunas
sustancias qumicas cuya naturaleza y cantidad conocemos, junto con
sustancias de naturaleza y composicin indefinidas.

Cualquiera que sea el tipo de medio, de los tres que acabamos de

citar, podemos elaborar dos tipos de "versiones", segn su estado
aparente:

medios lquidos
medios slidos: derivan de los lquidos simplemente aadiendo a la solucin
nutritiva un coloide en estado de gel, que solidifica (da consistencia) a esta
solucin.

En los primeros tiempos de la Bacteriologa slo se conoca como

sustancia gelificante incorporable a los medios la gelatina. Sin
embargo, presenta muchos inconvenientes, ya que funde a 25oC (por
encima de esta temperatura el medio se licua), y adems, muchas
bacterias presentan gelatinasas que hidrolizan la gelatina.

El gelificante ms usado es el agar-agar, extrado de algas rojas (p.

ej. Gelidium), del cual existen versiones ms o menos purificadas (las
ms puras estn ms enriquecidas en el polisacrido agarosa; son las
que se emplean para los medios definidos, con objeto de evitar la
introduccin de sustancias "contaminantes" inadvertidas que falseen
las interpretaciones sobre el comportamiento nutricional de la
bacteria).

El agar presenta la gran ventaja de que una vez gelificado, no funde

hasta cerca de los 100 oC, lo que permite su uso para la inmensa
mayora de bacterias, que son mesfilas.

Para cultivar ciertas bacterias (sobre todo los quimioauttrofos) se

suele recurrir a un gelificante inorgnico, el silicagel o gel de slice.

Finalmente, introduciremos otra serie de conceptos relativos a

medios de cultivo, que al igual que los anteriores, sern tratados con
la suficiente amplitud en las sesiones de clases prcticas:
 Concentracin de iones hidrgeno

El establecimiento de un pH inicial ptimo y en muchos casos su

mantenimiento durante el crecimiento es de gran importancia, sobre
todo para aquellos microorganismos que a pesar de producir cidos
no los toleran. La mayora de los microorganismos desarrolla a pH 7
(Alcaligenes, Pseudomonas), tan solo unos pocos lo hacen a valores
de pH bajos por lo cual se denominan acido tolerantes
(Lactobacillus, Acetobacter) o realmente acidfilas (Thiobacillus,
Sulfolobus, Helicobacter) que medran a pH alrededor de 2, la figura
que sigue muestra un esquema de distribucin de preferencias de
algunas
bacterias.

Temperatura: Los microorganismos presentan distintos

comportamiento en cuanto a temperatura requerida para su
incubacin. La mayora de las bacterias del agua o del suelo son
mesfilas crecen entre 20 oC y 42 oC. Otros comportamientos en
referencia la temperatura son: psicrfilo, por debajo de 20 oC;
termfilo: entre 40 y 70 oC; termfilos extremos: por encima de los
70 oC; hipertermfilos: por encima de 80 y 100 oC. La figura muestra
algunos ejemplos de bacterias que crecen a diferentes temperaturas.

RELACIONES DE LAS BACTERIAS CON EL OXGENO | Contenidos

Dependen en buena medida de la disponibilidad de las enzimas

eliminadoras de perxidos y superxidos. Veamos los tipos de
bacterias segn sus relaciones con el oxgeno:

Bacterias aerobias: Necesitan O2 para crecer, ya que lo usan (al

menos en algunas ocasiones) como aceptor final de electrones para la
captacin de energa qumica.

Algunos aerobios requieren para crecer tensiones de oxgeno inferiores a la

atmosfrica (del 2 al 10% de O2, en lugar del 20%). A estas bacterias se las
califica como microaerfilas.
Algunas microaerfilas lo son permanentemente (microaerfilas estrictas).
Otras se comportan como microaerfilas slo cuando crecen usando
determinadas fuentes de energa qumica o de nitrgeno (microaerfilas
condicionales).

Bacterias anaerobias: Son aquellas que pueden crecer en ausencia

de oxgeno, debido a que pueden usar aceptores finales distintos del
oxgeno, o porque poseen metabolismo estrictamente fermentativo.

Anaerobias estrictas: El oxgeno les resulta txico ya que carecen de

catalasa y peroxidasa. Por lo tanto, no pueden eliminar los productos
nocivos resultantes del oxgeno. (Por ejemplo, las especies de Clostridium, y
las arqueobacterias metanognicas).
Anaerobias aerotolerantes: Al igual que las anteriores, presentan un
metabolismo energtico anaerobio, pero soportan el oxgeno debido a que
poseen enzimas detoxificadores. Ejemplos tpicos son las bacterias del cido
lctico, como Streptococcus, Leuconostoc, Lactobacillus). Tambin se les
llama anaerobios indiferentes.
Anaerobios facultativos: Pueden realizar metabolismo energtico aerobio o
anaerobio, dependiendo del ambiente y la disponibilidad de aceptores
finales de electrones. Ejemplos son las enterobacterias como Escherichia
coli.

Algunos tipos de medios de cultivo | Contenidos

Medios selectivos son aquellos que permiten seleccionar un tipo (o

unos pocos tipos) de microorganismos. En el laboratorio se emplean
mucho medios selectivos slidos que incorporan ciertas sustancias
que inhiben el crecimiento de ciertas bacterias, pero permiten el
crecimiento de otras. (P. ej. medios que llevan violeta cristal inhiben
el crecimiento de bacterias Gram-positivas).

Medios diferenciales son aquellos que permiten distinguir a simple

vista dos o ms tipos de bacterias en funcin de su distinto
comportamiento respecto de algn nutriente del medio. Ese
comportamiento diferencial se traduce normalmente en un viraje de
color de una sustancia indicadora presente en el medio.

Ejemplos:

en el medio EMB (eosina-azul de metileno) ciertos tipos metablicos de

bacterias producen cambios de color y precipitacin de sales cuando
producen cidos por fermentacin de ciertas fuentes de carbono.
El medio llamado agar-sangre lleva un 5% de sangre de caballo o carnero, lo
cual revela la capacidad (y el tipo) de hemlisis de ciertas bacterias.

Algunos medios son simultneamente selectivos y diferenciales.

P. ej., el agar de MacConkey, que el alumno manejar en los

prcticos. Se trata de un medio de color rosado y transparente, que
posee, entre otras sustancias, lactosa, peptonas, el colorante vital
rojo neutro, sales biliares y violeta cristal.

Este medio es selectivo contra muchas bacterias Gram-positivas

debido al violeta cristal, y tambin contraselecciona muchas Gram-
negativas debido a las sales biliares (que son agentes tensioactivos
que desorganizan muchas membranas externas). En cambio, las
Enterobacterias estn evolutivamente adaptadas a soportar sales
biliares en su hbitat natural (el intestino de vertebrados superiores),
y pueden crecer en este medio. En su faceta de medio diferencial, el
agar MacConkey permite visualizar dos tipos de Enterobacterias segn
que puedan o no fermentar la lactosa, con produccin de cidos. Las
bacterias fermentadoras de lactosa (Lac+), excretan al medio gran
cantidad de cidos orgnicos, lo que provoca que sus colonias, y sus
alrededores aparezcan de color rojo intenso, debido al viraje del rojo
neutro; adems, se forma un halo turbio a cierta distancia de estas
colonias, fenmeno ocasionado por la precipitacin de las sales
biliares inducida por la acidez. En cambio, las bacterias Lac-, al no
poder usar la lactosa, recurren como fuente de C a las peptonas, a
las que desaminan: incorporan el esqueleto carbonado, excretando
iones NH4+, que alcalinizan el medio de cultivo, lo cual se traduce en
que el indicador rojo neutro vira a amarillo.

Cultivos sobre soporte slido inerte

Desde hace un tiempo estamos utilizando en la ctedra un soporte
poroso inerte las "perlitas" material que tiene la caracterstica de ser
barato, fcilmente esterilizable y con una gran capacidad de
retencin de lquidos en sus oquedades lo cual permite variados
cultivos.

Microscopa Electrnica de Barrido (EMB) de levaduras cultivadas

sobre "perlitas"

Microscopa Electrnica de Barrido (EMB) de Mucor sp. cultivado

sobre "perlitas"

BIBLIOGRAFIA| Contenidos

BAGG, A., J.B. NEILANDS (1987): Molecular mechanism of regulation of

siderophore-mediated iron assimilation. Microbiol Rev. 51: 509-518.
BASTARRECHEA, F., L. SERVIN-GONZALEZ, A.A. COVARRUBIAS (1986):
Regulacin de la asimilacin de compuestos nitrogenados en Escherichia
coli. En: Bioqumica y Biologa Molecular (coordinador: L. Cornudella).
Salvat, Barcelona, pgs. 192-197.
CAMPBELL, W.H., J.R.KINGHORN (1990): Functional domains of assimilatory
nitrate reductases and nitrite reductases. Trends Biochem. Sci. 15:315-319.
CROSA, J.H. (1989): Genetics and molecular biology of siderophore-
mediated iron transport in bacteria. Microbiol. Rev. 53: 517-530.
MATIN, A. (1978): Organic nutrition of chemolithotrophic bacteria. Ann. Rev.
Microbiol. 32: 433-468.
NEIDLANS, J.B. (1982): Microbial envelope proteins related to iron. Ann.
Rev. Microbiol. 36: 285-309.
SPENCER, M.E., J.R. GUEST (1987): Regulation of citric acid cycle genes in
facultative bacteria. Microbiol Sci. 4: 164-168.
TABITA, F.R. (1988): Molecular and cellular regulation of autotrophic carbon
dioxide fixation in microorganisms. Microbiol. Rev. 52: 155-189.
WOOD, H.G., S.W. RAGSDALE, E. PEZACKA (1986): The acetyl-CoA pathway:
a newly discovered pathway of autotrophic growth. Trends Biochem. Sci. 11:
14-17.
ZAL, FRANCK (1999): Riftia pachyptila, el gusano gigante de las zonas
abisales. Mundo Cientfico, 200: 50-55
GARBISU, CARLOS et al (1999): Biotecnologa con Cianobacterias,
Investigacin y Ciencia, Mayo: 64 -71.
GIBSON, EVERETT K. et al (1998) Hay vida en Marte?, Investigacin y
Ciencia, Febrero,10-17
MADIGAN, MICHAEL T. et al (1997) Extremfilos, Investigacin y Ciencia,
Junio, 60- 66
FREDRIKSON, JAMES K. et al (1996) Vida en las profundidaes de la Tierra,
Investigacin y Ciencia, Diciembre,22-28
Inmovilizacin de clulas en un slido poroso; Glibota G.; Garro O.; Raisman
J.; Judis, M.A.- Reunion de Comunicaciones Cientficas y Tecnologicas-
Universidad Nacional del Nordeste-1996
Fermentacin alcohlica en sustrato slido: Simulacin sobre soporte inerte;
Castro M.; Garro O.; Gimenez, M.C.; Raisman J.- Reunin de
Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas-Universidad Nacional del
Nordeste-1996
Pellizari, M.E.; Raisman J.S., Cultivo de Mucor sp. sobre soporte inerte,
observaciones no publicadas

ENLACES| Contenidos

BIOTECNOLOGIA EN LA DISOLUCION Y RECUPERACION DE

METALES http://www.mobot.org/jwcross/phytoremediation/Biotecnologia.
htm
IDENTIFICACION DE UNA CEPA
BACTERIANA http://bilbo.edu.uy/~microbio/identificacion.html
FIJACIN DEL NITRGENO POR MICROORGANISMOS
LIBRES http://scriptusnaturae.8m.com/Articulos/FijN/libre.html
Microorganismos Fijadores de Nitrgeno: Familia
Rhizobiaceae http://www.microbiologia.com.ar/suelo/rhizobium.html
Larga vida al salmn http://www.chilemed.cl/biotecno/reportaje-
salmones.htm

Glosario| Contenidos

Adaptacin (del latn adaptare = acomodar): Tendencia de un organismo a

"adecuarse" a su medio ambiente; uno de los principales puntos de la teora
de la evolucin por la seleccin natural de Charles Darwin: los organismos se
adaptan a su medio ambiente. Aquellos organismos mejor adaptados
tendrn mayor probabilidad de sobrevivir y pasar sus genes a la siguiente
generacin.
Aminocidos (del griego Ammon = dios egipcio cerca de cuyo templo se
prepararon por primera vez las sales de amonio a partir de estircol de
camello): Las subunidades (monmeros) que forman
las protenas (polmeros). Cada aminocido posee por lo menos un grupo
funcional amino ( bsico) y un grupo funcional carboxilo (cido) y difiere de
otros aminocidos por la composicin de su grupo R.
Anabolismo (del griego ana = sobre, metabole = cambio): en un organismo
el conjunto de reacciones biosintticas o sea las reacciones en que
molculas pequeas forman molculas ms grandes.
Arqueobacterias (del griego arkhaios = antiguo; bakterion = bastn: grupo
de procariotas de unos 3.500 millones de aos de antigedad, presentan
una serie de caractersticas diferenciales que hicieron que Carl Woese,
profesor de la Universidad de Illinois, Urbana, U.S.A., proponga su
separacin del reino Moneras y la creacin de uno nuevo: Archea, propuesta
que hoy es cada vez mas aceptada.
Auttrofos (del griego autos = propio; trophe = nutricin, que se alimenta
de): termino utilizado para nombrar a organismos que sintetizan sus propios
nutrientes a partir de materia prima inorgnica. Opuesto a hetertrofo.
ATP (adenosn trifosfato): El principal producto qumico utilizado por los
sistemas vivientes para almacenar energa, consiste en un una base
(adenina) unida a un azcar (ribosa) y a tres fosfatos.
Catabolismo (del griego katabole= derribar) en un organismo, todas las
reacciones qumicas en las cuales las molculas grandes se desintegran en
partes mas pequeas.
Catalizador (del griego katalysis = disolucin): Sustancia que disminuye
la energa de activacin de una reaccin qumica, acelerando la velocidad
de la reaccin.
Cianobacterias: o algas verde-azuladas, procariotas con
capacidad fotosinttica , algunas de ellas asimilan nitrgeno atmosfrico.
Organismos que se encuentran entre los ms antiguos conocidos existiendo
depsitos fsiles de cerca de 3.000 millones de aos.
Clorofila: (del griego khloros = verde claro, verde amarillento; phylos =
hoja): Pigmento verde que interviene en la captacin de la energa lumnica
durante la fotosntesis.
Coenzima (del griego co = juntos): molcula o cofactor no proteico que
colabora con la enzima en su funcin cataltica , con frecuencia actan en
reacciones de oxido-reduccin.
Coloide: Suspensin permanente de partculas finas
Cortex 1) La parte externa de un rgano, p.ej. la corteza adrenal de las
suprarrenales 2) en plantas la regin del tronco o raz rodeada
externamente por la epidermis e internamente por el cilindro central de
tejido vascular, formado por tejidos fundamentales, parnquima,
colnquima o esclernquima.
Energa de activacin: La menor cantidad de energa requerida para que
ocurra una determinada reaccin qumica. Vara de reaccin en reaccin.
Enzima (del griego en = en; zyme = levadura): Molcula de protena que
acta como catalizador en las reacciones bioqumicas.
Energa: la capacidad de producir trabajo
EMB : siglas derivadas del ingls donde MB va por Methilen Blue (azul de
metileno) y la E por eosina.
Eucariotas (del griego eu = bueno, verdadero; karyon = ncleo, nuez):
organismos caracterizados por poseer clulas con un ncleo verdadero
rodeado por membrana. El registro arqueolgico muestra su presencia en
rocas de aproximadamente 1.200 a 1500 millones de aos de antigedad
Evolucin (del latn e- = fuera; volvere = girar): Cambio de los organismos
por adaptacin ,variacin, sobrerreproduccin y reproduccin/sobrevivencia
diferencial, proceso al que Charles Darwin y Alfred Wallace se refirieron
como seleccin natural.
Exoenzimas (del griego ex = fuera, en = en, zyme = levadura): Enzimas que
salen fuerade la clula
Fsiles (del latn fossilis = enterrado): Los vestigios o restos de vida
prehistrica preservadas en las rocas de la corteza Terrestre. Cualquier
evidencia de vida pasada.
Fotosntesis (del griego photos = luz; syn = juntos; tithenai = ubicar):
Conversin de energa lumnica en energa qumica. Sntesis de compuestos
orgnicos a partir de anhdrido carbnico y agua utilizando la energa
lumnica captada por la clorofila. Tema ampliado
Genes (del griego genos = nacimiento, raza; del latn sgenus = raza, origen):
segmentos especficos de ADN que controlan las estructuras y funciones
celulares; la unidad funcional de la herencia. Secuencia de bases de ADN
que usualmente codifican para una secuencia polipetdica de
aminocidos. Tema ampliado
Glucosa: Azcar comn, con seis tomos de carbono
(C6H12O6), monosacrido ms frecuente en la mayora de los organismos.
Halfilas (del griego halos = sal, mar; philios = amigo): bacterias que
medran en ambientes salinos
Hetertrofos (del griego heteros = otro, diferente; trophe = nutricin, que
se alimenta de): Organismos que obtienen sus alimentos rompiendo
molculas orgnicas sintetizadas por otros organismos para obtener energa,
opuesto a auttrofo. Incluyen a muchas bacterias, hongos y animales.
Hidratos de carbono: Cumplen funciones de almacenamiento energtico,
estructurales e intervienen en procesos de regulacin y de reconocimiento.
Compuesto orgnico en el cual por cada tomo de carbono se encuentra
hidrgeno y oxgeno en una proporcin 2:1, p.ej. el azcar. .
Hidrocarburo : compuesto orgnico formado solo por carbono e hidrgeno
Lpidos (del griego lipos = grasa): Intervienen en el almacenamiento a largo
plazo de la energa celular, aislamiento, forman parte de estructuras (p. ej.
membranas) y en ciertos casos en funciones de control. Este grupo incluye a
las grasas, aceites, los esteroides (p.ej. el colesterol), los fosfolpidos y los
carotenoides. Molculas orgnicas no polares insolubles en agua y soluble en
solventes orgnicos (tambin no polares).
Magnetita: Las magnetitas fsiles se consideran de origen bacteriano.
Curiosamente cadenas de magnetizas se encontraron en el meteorito
marciano ALH84001 con un patrn semejante al de las bacterias terrestres.
Mesfilo (del griego mesos = intermedio): referido a la temperatura de
desarrollo bacteriano, entre 20 oC y 42 oC. Otros comportamientos en
referencia la temperatura son: psicrfilo, por debajo de 20 oC; termfilo:
entre 40 y 70 oC; termfilos extremos: por encima de los 70 oC;
hipertermfilos: por encima de 80 y 100 oC.
Metabolismo (del griego metabole = cambio): El conjunto de reacciones
qumicas que se producen en las clulas vivas
Minerales: Elemento o compuesto inorgnico que ocurre naturalmente
Monmero (del griego monos = uno, solo; meros = parte): Molcula que
constituye la unidad que se repite en un polmero.
Monosacrido (del griego monos= sencillo; del rabe skkar = azcar):
azcar simple que no puede ser hidrolizado a molculas de azcar ms
pequeas.
Nutricin (del latn nutritio: accin y efecto de nutrir): Nutrir: del
latn nutrireaumentar la sustancia viva del organismo
Oligotrficos (del griego oligo = poco; trophe = nutricin, que se alimenta
de): literalmente "poco alimento"
Paradigma del griego paradeigma : modelo, ejemplo
Periplsmico: En bacterias gram negativas el espacio que va desde
membrana plasmtica a membrana externa. Aparentemente tiene una
consistencia gelatinosa. Contiene abundantes enzimas
Pelo radical: tricoma en la epidermis de la raz que es una simple extensin
de una clula epidrmica .
Polmero (del griego polys = muchos, meros = parte): Molcula compuesta
por muchas subunidades idnticas o similares.
Protenas: (del griego proteios = primario, del griego Proteo, dios
mitolgico que adoptaba numerosas formas). Polmeros constituidos por
aminocidos que intervienen en numerosas funciones celulares. Una de las
clases de macromolculas orgnicas que tienen funciones estructurales y de
control en los sistemas vivientes. Las protenas son polmeros
de aminocidos unidos por uniones peptdicas.
Procariota (del latn pro = antes, del griego karyon = ncleo, nuez): Tipo de
clula que carece de ncleo rodeado por membrana, posee un solo
cromosoma circular y ribosomas que sedimentan a 70 S (los de los eucariotas
lo hacen a 80S). Carecen de organelas rodeadas por membranas. Se
consideran las primeras formas de vida sobre la Tierra, existen evidencias
que indican que ya existan hace unos 3.500.000.000 aos.
Quimiolitoauttrofos (del griego lithos = piedra; autos = propio; trophe =
nutricin, que se alimenta de): un ejemplo singular lo constituye una
bacteria capaz de oxidar el cido sulfdrico (SH2) y transformar el anhdrido
carbnico en molculas orgnicas utilizando la energa qumica de esta
oxidacin, vive en simbisis con un gusano: Riftia pachyptila en los medios
hidrotermales profundos.
Simbiosis( del griego syn = junto, con; bioonai = vivir) Asociacin entre dos
o ms organismos de diferentes especies. Incluye 1) mutualismo donde la
asociacin es beneficiosa para ambos 2) comensalismo donde uno se
beneficia y el otro no es daado ni beneficiado 3) parasitismo uno se
beneficia y el otro es daado.
Teicoicos (del griego teichos = muro): cadenas de molculas de glicerina o
ribitol esterificadas entre s por puentes fosfato, portan una fuerte carga
negativa (probablemente sirvan para "secuestrar cationes" ). Se unen a la
murena a travs del fosfato formando una amida.
Tincin de Gram
La propiedad de teirse o no de violeta oscuro por la Tincin de Gram
es un criterio de clasificacin importante correlacionable con otras
propiedades bacterianas.

1. El procedimiento se inicia fijando a la llama las

bacterias extendidas en un portaobjetos.
2. Las mismas se tien con una solucin del colorante
bsico cristal violeta.
3. El paso siguiente consiste en un tratamiento con
solucin de Lugol (iodo/ioduro de potasio). El yodo
forma una laca con el cristal violeta, que es
insoluble en agua y soluble en alcohol o acetona
4. El preparado se trata despus con alcohol o acetona
5. Finalmente se procede a realizar una coloracin de
contraste (diferenciacin) con otro colorante
(fucsina).
6. Como consecuencia de este tratamiento las
bacterias que retienen el complejo colorante-yodo
durante el paso 4 quedan azules y se denominan
Gram positivas.
7. Las clulas que NO retienen el complejo colorante-
yodo durante el paso 4 al tomar el colorante de
contraste (paso5) quedan rojas y se denominan
Gram negativas

Vitamina (del latn vita = vida): Sustancias orgnicas relacionadas que no

pueden ser sintetizadas por un organismo en particular y son esenciales , en
cantidades pequeas, para su funcionamiento y crecimiento.
Xerfilas (del griego xerox = seco; phyton = planta): plantas adaptadas a
ambientes secos, por extensin, bacterias adaptadas a actividades de agua
baja.

Basado en un texto del: Curso de Microbiologa General, de Enrique

Iez