UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

ESCUELA DE FORMACIÓN PROFESIONAL DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

ESPECTROSCOPIA VISIBLE

Introducción
Desde hace muchos años se ha usado el color como ayuda para reconocer las sustancias
químicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de radiación se puede
estudiar la absorción de sustancias, no solamente en la zona del espectro visible, sino
también en ultravioleta e infrarrojo.
Se denomina espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía radiante
que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de la radiación,
y a las mediciones a una determinada longitud de onda.

Transmitancia
La transmitancia T de la solución es entonces la fracción de la radiación incidente
transmitida por la solución:
I
T La transmitancia se expresa a menudo como porcentaje:
Io
I
%T  x 100
Io
Absorbancia
La absorbancia A de una solución se define mediante la ecuación:

Io
A  - log T  log A = 2 – log %T
I
La mayor parte de los trabajos analíticos se realizan con soluciones de manera que
vamos a desarrollar la relación que existe entre la concentración de la solución y su
capacidad de absorber radiación.

A, T

Figura 1: (a) Absorbancia y Transmitancia versus concentración a una determinada longitud de onda y
espesor de celda.

Medición de Transmitancia y Absorbancia

La transmitancia y la absorbancia se miden en un instrumento llamado

espectrofotómetro, la solución del analito se debe contener en algún recipiente
transparente, tubo o celda.
Los espectrofotómetros, están a menudo, equipados con un dispositivo que tiene una
escala lineal que se extiende de 0 a 100%. De manera que para realizar la lectura directa
en porcentaje de transmitancia, se efectúan dos ajustes preliminares, llamados 0%T y
100%T.
Los instrumentos actuales poseen un sistema electrónico que realiza la operación
matemática y da la respuesta directamente absorbancia. También hay que hacer una
calibración previa con el solvente o blanco.

Absortividad y Absortividad Molar

La absorbancia es directamente proporcional a la longitud del camino b a través de la

solución y la concentración c de la especie absorbente. Estas relaciones se dan como:
A= a·b·c
Siendo a una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a
dependerá de las unidades empleadas para b y c. A menudo b es dada en términos de cm
y c en gramos por litro, entonces la absortividad tiene unidades de L. g-1 . cm-1.
Cuando la concentración se expresa en moles por litro y la longitud de la celda en
centímetros, la absortividad se llama absortividad molar, se designa como є y tiene
unidades de L . mol-1. cm-1 , entonces la absorbancia es:
A = є· b · c
Curva de Calibración
Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de
calibración;
absorbancia (A) en función de concentración (c), para lo cual se preparan soluciones de
la sustancia de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la longitud de
onda elegida.
Si es válida la ley de Beer, para esa sustancia a esas concentraciones, la relación debe
ser una recta, que pase por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan
desviaciones debidas a diversos factores.

Las desviaciones pueden deberse a factores instrumentales y químicos:

Factores Instrumentales
 Empleo de luz no monocromática
 Presencia de radiación parásita

Factores Químicos
 Asociación o disociación de las especies absorbentes. (Desviaciones positivas)
 Adición insuficiente de reactivo cromógeno. (Desviaciones negativas)
 Fluorescencia ó turbidez