Diagnostic de laborator

in neuroviroze
2 aspecte clinice
• Meningite virale

• Encefalite virale

Definitie de caz – meningita virala

• Febra ≥ 38.5 C asociata cu minim un simptom dintre:
• Cefalee severă şi persistentă;
• Redoare de ceafa
• Durere de ceafa asociata cu minim 2 din urmatoarele:
– Fotofobie
– Greata
– Vărsături;
– Faringita exudativa
– Dureri abdominale

La sugari si copii mici semnele principale sunt febra ≥ 38.5 C asociata cu iritabilitate si
pulsarea fontanelei

Algoritm de diagnostic virusologic

SINDROM ETIOLOGIE Produs IZOLARE Dg. Dg.
POSIBILA Patologic + DIRECT INDIRECT
IDENTIFICARE =detectie =serologie
directa
80% MF De electie PCR DA
Enterovirusuri SNF • Culturi
• Polio LCR celulare
• Cocsackie • Animal de
MENINGITA A si B laborator
ASEPTICA • E.C.H.O.
20% LCR De electie PCR DA
alte virusuri: • Culturi
VVZ-VZV celulare
V. URLIAN • Animal de
VHS-HSV laborator
VCM-CMV
V.
PARAGRIPALE
Enterovirusuri
Polioviruses 1, 2, 3

Coxsackie A1-24/ B1-6

ECHO - 33 (Enteric cytopatogenic human orphans)

Enteroviruses 68-71

Herpangina - A2, 3, 4, 5, 6, 8, 10
Rinofaringita – A21;
Conjunctivită hemoragică A24;
Stomatită veziculoasă – A şi B;
Pleurodinie Bornholm – B;
Miocardita – B3,B4; infecţia mamei în primele luni de sarcină duce la malformaţii cardiace
ale fătului.
Pericardita – B3, B4, B5
Meningita acută seroasă - A şi B; cu faringita sau herpangina.
Encefalita – B3, B5, este letală;
Nevrite – paralizii faciale -A şi poliradiculonevrite - B;
Boală diareică acută – B4, B5
Hepatita virală -B3, B5 .

V. Poliomielitice
• Paralizie flasca
• Distala
• Asimetrica
• Sesibilitate pastrata
Produse patologice
Suspensia de Materii Fecale(MF)
Recoltare.
• ca atare in cantitate de 4-8 grame ( falanga distala index)
in solutie 1 M de Mg SO4 suspensie 20% (stabilizeaza infectivitatea)
• tuseu rectal cu un mic tampon umectat in mediu de transport viral
Precizari.
enterovirusurile se excreta saptamani la rand , dar sansele de izolare scad, se
recomanda recoltarea a 2 -3 probe la interval de 24-48 ore
Stocare si transport. la 2-4° C, maxim 2 ore
Prelucrare.
• Se amesteca MF cu 15 ml de solutie Hanks si bile de sticla sterile
• Se centrifugheaza la 1500- 10’ si se recolteaza supernatantul
• Se adauga de gentamicina 100 ug/ml.

Lichid cefalorahidian (LCR)

Recoltare.
• punctie la nivelul L4-L5, cat mai rapid posibil de la debutul simptomatologiei, inainte
de inceperea tratamentului antibiotic, asepstic. - 5-6 ml in 3 tuburi sterile
• se determina numarul de celule, proteine totale, glicorahia, clorurorahia si presiunea
LCR.
pleiocitoza (cresterea nr. de celule limfo-monocitare in LCR)
1 ml de LCR este suficient pentru investigatii virusologice.

Stocarea. la 2-8° C, fara mediu de transport – 1ora

Transportul. Rapid. Daca se depaseste 1 ora de la recoltare se face obligatoriu pe gheata sau
la -70° C.
Prelucrare. se utilizeaza ca atare.

Spalatura nazo faringiana(SNF)

Recoltare.
• tampoan steril cu coada introdus in cornetul nazal inferior, secretii de la nivelul
peretelui posterior al nazofarinxului.
• tampon prin cavitatea bucala pentru secretii de pe peretele posterior al faringelui cu
evitarea atingerii tamponului de limba, obraji sau buze.
Stocare si transport.
optim imediat dupa recoltare (cand nu este posibil: -70° C, cu transport pe zapada carbonica)
Prelucrare.
• tamponul – se dispune in tub steril cu 15 ml mediu pt. 1 ora
• centrifugare la 2500 - 15 minute, la 4° C
• supernatantul este indepartat si sedimentul se resuspendat in 3-4 ml TFS
INFECŢII CU VIRUSURI COXSACKIE
1. Izolarea virusului pe culturi celulare (exceptând unele virusuri Coxsackie grup A)
se face în culturi primare de rinichi de maimuţă (Macaccus rhesus) sau în culturi
diploide umane.
2. Izolarea pe animale prin inoculare pe diverse căi (intracerebral, intramuscular,
intraperitoneal) la şoarece sau hamster, nou-născut,
– pentru virusurile Coxsackie grup A (paralizie flasca geeralizata) şi
– unele virusuri Coxsackie grup B (paralizie localizata cu tonus pastrat).

IZOLAREA ENTEROVIRUSURILOR IN CULTURI DE

CELULE
ECP PICNOTIC LITIC
(microscop cu inversie de faza)
Reactia de seroneutralizare
• Capacitatea anticorpilor de a neutraliza infectivitatea virusurilor
Identifica :
- Virusurile (virus neutralizare) : se folosesc dilutii de virus; serul este constant
- Titreaza anticorpii (seroneutralizare) : dilutii de ser; virusul este constant

RSN: IDENTIFICAREA VIRUSURILOR=VIRUS NEUTRALIZARE

TITRAREA ANTICORPILOR= REACTIA DE SERONEUTRALIZARE
• VIRUSNEUTRALIZARE = VIRUS NECUNOSCUT/ANTICORPI CUNOSCUTI
(SER IMUN DE REFERINTA)

SE FOLOSESC DILUTII DE VIRUS SI SE MENTINE SERUL IMUN DE REFERINTA

CONSTANT

• REACTIA DE SERONEUTRALIZARE= ANTICORPI NECUNOSCUTI/ VIRUS

CUNOSCUT
SE FOLOSESC DILUTII DIN SERUL IMUN DE REFERINTA SI SE MENTINE
VIRUSUL CONSTANT

ETAPE
1. TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE

TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE – metoda plajelor

Dilutii seriale ale virusului

Insamantare pe celule
susceptibile
dupa adsorbtie, 1h la 37,
se acopera cu agar

Restrictia raspandirii virusului determina liza focalizata a

monostratului celular vizibila sub forma plajelor, PFU

Metoda plajelor

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE

= Repetarea etapei 1 cu amestecurile antigen-anticorp
Tabla de sah
Primul set : 8 amestecuri A-H cuprind antiseruri anti 42 serotipuri de enterovirusuri ce pot fi
izolate in culturi celulare
• A,B,C,D,G si H cate 10 antiseruri specifice
• E si F cate 11
Al doilea set : 7 amestecuri J-P cu antiseruri anti 19 virusuri Coxsackie A
`

ENCEFALITE Algoritm de diagnostic virusologic

SINDROM ETIOLOGIE Prod. IZOLARE Dg. Dg.
POSIBILA Patologic DIRE INDIRECT
CT =serologie
 =detec
t.
directa
HERPESVIRUSURI: PCR NU
• HSV1 LCR Culturi IF
• HSV2 celulare
• VZV BIOPSIE Animal de
ENCEFALITA • EBV CEREBRALA laborator
ACUTA • CMV
ARBOVIRUSURI: SALIVA, PCR De electie
MENINGO- AMPRENTE Culturi IF pt. ARBO
ENCEFALITA TOGAVIRUSURI DERMICE, celulare VIRUSURI
FLAVIVIRUSURI CORNEENE, Animal de
ENCEFALO- BUNYAVIRUSURI LCR laborator
MIELITA V. RABIC SANGE
BIOPSIE
CEREBRALA
POSTINFECTIOASE: SNF PCR NU
Culturi IF
• V. RUJEOLOS LCR celulare
• V. URLIAN
• V. GRIPALE BIOPSIE
• VVZ CEREBRALA