COSTO DE INSTALACIÓN DE UN LABORATORIO DE MICROPROPAGACIÓN

INTRODUCCION

El laboratorio es un local preparado para realizar en él experimentos e investigaciones. Local

dispuesto y equipado para la investigación, experimentación u otras tareas científicas y técnicas.
Los laboratorios de biotecnología y de tipo biológico han de reunir unas condiciones, que si bien
pueden variar notablemente en función de su finalidad, todos ellos deben estar acordes con las
disposiciones mínimas de seguridad y salud en los lugares de trabajo.

Para definir las distintas condiciones ambientales que los laboratorios de biotecnología y de tipo
biológico deben reunir conforme a lo establecido en las disposiciones legales vigentes. A este
respecto, se pueden considerar las siguientes actividades laborales:

 Tareas docentes y de administración

 Trabajos de investigación propiamente dichos, incluyendo las operaciones preparatorias
previas, mantenimiento de equipos, etc.

DISEÑO DEL LABORATORIO

Espacios de trabajo por trabajador

Para que puedan darse unas buenas condiciones de orden y limpieza es necesario también
respetar las dimensiones mínimas de los espacios de trabajo, permitiendo a trabajadores
realizar sus actividades sin riesgos para su seguridad y salud y en condiciones ergonómicas
aceptables. Las dimensiones mínimas que deben reunir tales espacios son las siguientes:

 Altura desde el suelo hasta el techo: 2 metros.

 Superficie libre por trabajador: 2 metros cuadrados.
 Volumen (cubicaje) no ocupado por el trabajador: 10 metros cúbicos.

La separación entre los elementos materiales existentes en el laboratorio deberá ser suficiente
para que los trabajadores puedan realizar su labor en condiciones de seguridad, salud y
bienestar.

Cuando el espacio libre de que se disponga en el laboratorio no permita a los trabajadores la

libertad de movimientos requerida para el desarrollo de su actividad, deberá disponerse de un
espacio adicional suficiente en las inmediaciones del puesto de trabajo.

El laboratorio de micropropagación debe contar con salas de:

 Almacén
 Siembra
 Preparación de medio de cultivo
 Cámara de crecimiento
 Vivero
 Baños
 DIAGRAMA DE DISTRIBUCION DE LAS AREAS DEL LABORATORIO
Diseño e instalaciones del laboratorio de biotecnología vegetal

Venta
na

Preparación Cámara
Venta

de de
almacén Siembra
crecimie
na

medio
nto

Puerta Puerta Puerta

Puerta

Normas operativas para su utilización

 El laboratorio debe ser un lugar seguro para trabajar donde no se deben permitir
descuidos o bromas. Para ello se tendrán siempre presente los posibles peligros
asociados al trabajo con materiales peligrosos. Nunca hay excusa para los accidentes en
un laboratorio bien equipado en el cual trabaja personal bien informado. Normas que
deben conocerse y seguirse en el laboratorio:

 Durante la estancia en el laboratorio el personal debe ir provisto de bata, gafas de

seguridad, tapabocas, guantes de látex. La bata, el tapabocas y las cofias deberán
emplearse durante toda la estancia en el laboratorio. Las gafas de seguridad siempre
que se manejen productos peligrosos, se realice siembra de tejidos en cámara y durante
la calefacción de disoluciones. Los guantes deben utilizarse obligatoriamente en la
manipulación de productos tóxicos o cáusticos y para la siembra y manipulación de
material sujeto a estudio o investigación.
 Quítese todos los accesorios personales que puedan comprender riesgos de accidentes
mecánicos, químicos o por fuego, como son anillos, pulseras, collares y sombreros, y
además, para crear un ambiente aséptico adecuado. La responsabilidad por las
consecuencias de no cumplir esta norma dentro del laboratorio es enteramente del
estudiante.
 Está prohibido fumar, beber o comer en el laboratorio, así como dejar encima de la mesa
del laboratorio algún tipo de prenda.
 Mantenga las uñas recortadas. El pelo largo se llevará siempre recogido, cuando realice
la siembra de material vegetal u otro en la cámara de flujo laminar.
 Debe conocerse la toxicidad y riesgos de todos los compuestos con los que se trabaje.
Debe ser práctica común consultar las etiquetas y libros sobre reactivos en busca de
información sobre seguridad.
 Como regla general no se debe pipetear nunca con la boca. Los volúmenes de ácidos,
bases concentradas y disolventes orgánicos se medirán con probetas, en el caso de que
se deban medir los volúmenes exactos, estos se succionarán empleando micropipetas.
  Mantenga sólo el material requerido para la sesión, sobre la mesa de trabajo. Los frascos
de reactivos deben permanecer en los estantes respectivos. Los demás objetos
personales o innecesarios deben guardarse o colocarse lejos del área de trabajo.
 Los frascos de los reactivos deben cerrarse inmediatamente después de su uso, durante
su utilización los tapones deben depositarse siempre boca arriba sobre la mesa.
 No deben manipularse jamás productos o disolventes inflamables cerca a mecheros.
 Si algún reactivo se derrama, debe retirarse inmediatamente dejando el lugar
perfectamente limpio. Las salpicaduras de sustancias básicas deben neutralizarse con
un ácido débil (por ej. ácido cítrico) y las de sustancias ácidas con una base débil
(bicarbonato sódico).
 No deben verterse residuos sólidos en los fregaderos, deben emplearse los recipientes
para residuos que se encuentran en el laboratorio.
 Los ácidos y bases concentrados se encuentran en la vitrina del laboratorio. En ningún
caso deben sacarse de la vitrina, cuando se requiera un volumen de estos reactivos se
llevará el recipiente adecuado a la vitrina para tomar allí mismo la cantidad necesaria.
 Cuando se tengan dudas sobre las precauciones de manipuación de algún producto
debe consultarse al profesor antes de proceder a su uso.
 Los recipientes utilizados para almacenar disoluciones deben limpiarse previamente,
eliminando cualquier etiqueta anterior y rotulando de nuevo inmediatamente.
 No calentar nunca enérgicamente una disolución. La ebullición debe ser siempre suave.
 El mechero debe cerrarse, una vez utilizado, tanto de la llave del propio mechero como
la toma del gas de la mesa o si es manual tapándolo.
 Las disoluciones y recipientes calientes deben manipularse con cuidado. Para la
introducción y extracción de recipientes de hornos y estufas deben utilizarse las pinzas
y guantes adecuados (asbesto).
 Las heridas y quemaduras deben ser tratadas inmediatamente. En el caso de
salpicaduras de ácidos sobre la piel lavar inmediatamente con agua abundante,
teniendo en cuenta que en el caso de ácidos concentrados la reacción con el agua puede
producir calor. Es conveniente retirar la ropa para evitar que el corrosivo quede
atrapado entre la ropa y la piel.
 Deben conocerse la situación específica de los elementos de seguridad (lavaojos, ducha,
extintor, salidas de emergencia) en el laboratorio así como todas las indicaciones sobre
seguridad expuestas en el laboratorio.
 No debe llevarse a la boca ningún material de laboratorio; si algún reactivo es
accidentalmente ingerido, avise de inmediato al Profesor o a la persona encargada.

EQUIPAMIENTO BÁSICO DEL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA VEGETAL

 Flujo laminar horizontal

 Autoclave  mesas
 estantes  sistema de laminación
 microonda  termómetro
 computadora  timer
 refrigerador  Sistema de suministro de agua
 balanza analítica destilada.
 peachimetro  Sistema de aire acondicionado.
 lavaderos
ÁREA DE ALMACENAMIENTO

El área de almacenamiento es un área disponible y adecuada para guardar reactivos, materiales,

etc. La operación de bodegas es la organización que se le da a estas para que el material que se
va a resguardar se haga de una forma ordenada, con facilidad de movilidad y un estricto control.
Los materiales que se guardan aquí son:
Reactivos

 NH4NO3  Ácido nicotínico

 KNO3  Piridoxina
 Mg SO4. 7H2O  Tiamina
 Mn SO4. H2O  Glicina
 Zn SO4. 7H2O  Mioinositol
 Cu SO4. 5H2O  Sacarosa
 Ca Cl2. 2H2O  Agar
 Co Cl2. 6H20  Hidróxido de sodio
 K H2 PO4  Ácido clorhídrico
 H3 BO3  Hipo clorito de sodio
 Na2MoO4. 2H2O  Alcohol etílico
 Fe SO4. 7H2O  Detergente
 Na2 EDTA

Materiales
 Pipetas: 10 ml, 0,5ml  Plástico embalaje (rollo pack)
 Pipeteador  Bandejas
 Probetas: 1000 ml; 100 ml.  Pinzas
 Vasos de precipitación: 1000 ml;  Espátulas
100ml.  Bisturí
 Frascos de 150 ml  Fósforos
 Caja Petri: de vidrio Pírex  Rociador de alcohol
 Porta y cubre objetos  Escobilla para lavar frascos
 Recipientes plásticos para pesar  Estropajo
reactivos  Macetas de 1litro
 Papel aluminio  Aspersor de agua
 Servilletas estériles

ÁREA DE PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO

Utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo, pero debe proveer también uno
espacio para almacenar los materiales de vidrio y de plástico, y los reactivos químico. Este
ambiente debe contar con mesas de trabajo para la preparación de los medios y para colocar las
balanzas, el medidor de pH, los platos caliente con agitación, y otros elementos; también debe
incluir vitrinas, estanterías y espacio para el equipo de refrigeración, y para la incubadora o la
cámara de crecimiento.
Materiales:
 Servilletas de papel estériles  Tacho de basura
 Agitadores magnéticos  Vasos de precipitación
 Erlenmeyer  Tratamiento de reactivos de
 Pipetas laboratorio
 Buretas  Instalaciones de luz y agua
 Guantes

Equipos
 Microonda  Medidor de Ph
 Autoclave  Balanza analítica
 refrigerador  Agua destilada
 mesa  Aire acondicionado
 lavaderos

Reactivos
 Agar  Carbón Activado
 Sacarosa  Levadura
 Agua  NH4NO3
 Alcohol 90%  KNO3
 Legía  Mg SO4. 7H2O

 Mn SO4. H2O  Na2MoO4. 2H2O

 Zn SO4. 7H2O  Fe SO4. 7H2O
 Cu SO4. 5H2O  Na2 EDTA
 Ca Cl2. 2H2O  Ácido Nicotinico
 KI  Piridoxina
 Co Cl2. 6H20  Tiamina
 K H2 PO4  Glicina
 H3 BO3  Mioinositol

ÁREA DE TRASFERENCIA
En esta área del laboratorio se realiza el trabajo de escisión, inoculación y trasferencia de los
espantes a los medios de cultivo. Dado que este trabajo demanda los más alto nivel de limpieza
ambiental, se recomida la estalación de gabinetes de flujo horizontal o vertical de aire filtrado
bajo presión, o la construcción de cuartos de trasferencia. Sin embargo ciertas operaciones de
inoculación como la escisión y el cultivo de ápices y meristemos en tubo de ensayo de boca
angosta, se pueden realizar sobre una mesa limpia, ubicada en un lugar del laboratorio libre de
corrientes de aire y polvo. Los gabinetes de flujo laminar deben ubicarse, en lo posible, en un
lugar alejado de las puertas y con un mínimo de corriente de aire, con el fin de prolongar la vida
útil de los filtros.

Materiales:
 Placas petry  Guantes
 Probetas  Tacho de basura
 Erlenmeyer  Pinzas
 Servilletas  Frascos estériles
Equipos Reactivos
 Cámara de flujo laminar  Hipoclorito de Sodio 5%
 Mecheros  Alcohol 95%
 Campana  Agua estéril
 Autoclave  Ácido clorhídrico al 1%
 Cámaras de filtros EPA con presión
positiva

ÁREA DE INCUBACIÓN O CÁMARA DE CRECIMIENTO

Los cultivos se incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o cámaras de crecimiento; estas

pueden ser más eficientes en cuanto al control ambiental, pero son más costosas.
El área de incubación o crecimiento in vitro debe proporcionar un buen control de la
temperatura (20-28 oC), de la iluminación (variables según las necesidades: 1000 a 5000 lux) y
de la humedad relativa (70-80%).
En el cuarto de incubación se instalan estanterías metálica o de madera para colocar los cultivos.
Estas estanterías puede tener dimensiones variables: el ancho entre 0.30m y 1.00 m, el largo de
acuerdo con el tamaño del cuarto, y la altura total de 1.80 a 2.20 m; la distancia entre entrápanos
es de 0.20 a .50 m. Esta área debe incluir, además uno espacio para cultivos en agitación y para
cultivos estático en oscuridad.
Es necesario propiciar una buena distribución del aire en este cuarto para evitar zonas de
recalentamiento por efecto de las luces. Cuando se utilizan tubos fluorescentes, es conveniente
sacar los balastros fuera de este cuarto. Las regulación de la temperatura se puede lograr por
medios de aparato de aire acondicionado de pared o de sistema central. En cualquier caso, es
necesario tomas precauciones para evitar el calentamiento excesivo, instalando alarmas y
controles para cortar la iluminación cuando falle el aire acondicionado.

Equipos:
 estantes
 termómetro
 Instalaciones de luz y agua
 timer
Reactivos:
 Alcohol 95%

ÁREA DE CRECIMIENTO

Durante el período de incubación, los cultivos son expuestos a condiciones ambientales disímiles
al ambiente externo.
La atmósfera interna se caracteriza por presentar una considerable variación diurna en la
concentración de CO2, humedad relativa elevada, temperatura constante e intensidad lumínica
baja. A su vez, el medio de cultivo compuesto por concentraciones elevadas de azúcares (en
aquellos sistemas heterótrofos y semiautótrofos de micropropagación), sales y reguladores del
crecimiento, sumado a la ausencia de microorganismos, generan anormalidades morfológicas,
anatómicas y fisiológicas que las plantas deberán corregir cuando son transferidas al ambiente
externo. Este período de adaptación al nuevo hábitat es llamado fase o etapa de aclimatación.
La estrategia a implementarse durante el mencionado ciclo deberá contemplar el control
minucioso de los parámetros ambientales (humedad, temperatura y luz) de tal manera que
permita disminuir la deshidratación y, al mismo tiempo, estimular la fotosíntesis con el objeto
de generar un rápido crecimiento de los plantines.
El retraso en el desarrollo de la cutícula y la escasa funcionalidad del aparato estomático que
presentan las hojas de la mayoría de las especies cultivadas in vitro, determinan una alta tasa
de transpiración que puede ocasionar la muerte por deshidratación.

Instalaciones:
 Invernadero
 Suministro de agua y electricidad
 Luz natural
Materiales:
 Macetas, bandejas
 Camas de crecimiento
 Sustratos
 Fundas plásticas
 Tamiz para sustratos
 Pala, rastrillo
 Basurero
Equipos:
 Nebulizadores
 Cámaras de alta humedad
 Mesa