- INTRODUCCIÓN

Un cultivo es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como lo son

bacterias en el que se prepara un medio optimo para favorecer el proceso deseado; también es
una solución de varios nutrientes requeridos por los microorganismos tales como agua,
carbono, energía, nitrógeno, minerales, factores de crecimiento y concentración de ion
hidrogeno H+.
Desde su descubrimiento por el médico Alexander Ogston en 1880, Staphylococcus aureus es
considerado un pató- geno con gran potencial para causar múltiples infecciones en el humano
y en los animales. S. aureus es la especie tipo del grupo, considerada la más virulenta,
responsable de un amplio espectro de enfermedades, que van desde infecciones de la piel y
tejidos blandos hasta infecciones graves que amenazan con la vida. El impacto de las cepas de
S. aureus sobre la salud es la resistencia que puede presentar a múltiples antibióticos, sobre
todo a la meticilina. A través de los años se ha incrementado la tasa de morbilidad y mortalidad
a pesar del gran número de antibióticos disponibles que existen. (Elianne J, et al 2003).
La incubación prolongada es un factor importante para detectar la presencia de colonias
pequeñas, cuyo tamaño es 10 veces menor a las cepas originales de S. aureus que desarrollan
en medios de agar sangre. Son colonias que no producen pigmentación, no son hemolíticas,
además para su crecimiento requieren de mayor tiempo de incubación, como un mínimo de 48
horas, que son difíciles de distinguir y por lo general se descartan erróneamente como
contaminantes. (Moreillon P, 2005).
Esto se debe a mutaciones en la cadena respiratoria y posiblemente a otro tipo de mutaciones
que son desconocidas. Las mutantes en la cadena respiratoria tienen poco potencial, lo que las
hace resistentes a aminoglucósidos, por una baja acumulación de éstos. Este tipo de colonias
son auxótrofas para hemina y menadiona, utilizan pocos carbohidratos como fuente de
energía, son cepas resistentes a gentamicina, a betalactámicos y glicopéptidos. (Moreillon P,
2005)
Bajo condiciones normales, S. aureus no produce infecciones, esto sólo ocurre en pacientes,
inmunocomprometidos, es decir, la persistencia de la bacteria en el huésped conlleva a riesgos
de enfermedad. La sintomatología durante la infección por S. aureus es ocasionada por las
toxinas pirógenas consideradas como superantígenos, que se unen a regiones invariables del
complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) clase II, moléculas presentadoras del antígeno y
a los receptores de las células de linfocitos T. Esto conduce a la liberación de citocinas por
ambas células causando daño en los tejidos y liberación de la toxina del síndrome de choque
tóxico, dando como resultado hipotensión y liberación de gran cantidad de
citocinas. (Lencastre H et al, 2005)

S. aureus contiene un DNA exógeno, móvil, constituido por secuencias de inserción,

transposones, bacteriófagos e islas de patogenicidad, que contienen determinantes específicos
responsables del desarrollo de la enfermedad y resistencia a múltiples antibióticos, de estos
elementos móviles confirma la capacidad que tiene S. aureus para intercambiar genes por
transferencia horizontal, tanto con los del mismo género como con otros géneros. El
intercambio de los genes es la clave de S. aureus en la evolución, la peculiar plasticidad
genética es una explicación del éxito de S. aureus para colonizar como para el desarrollo de
enfermedades en el humano.
Las bacterias regulan muchos procesos en respuesta a la señalización célula-célula. Estos
procesos incluyen factores de virulencia, producción de antibióticos y formación de
biopelículas (biofilm). A menudo las bacterias utilizan la señalización célula-célula para regular
la densidad de la población conocida como percepción de quórum. (Lencastre H et al, 2005)

- JUSTIFICACIÓN
 La presente técnica para la detección de Staphylococcus aureus, consiste en los siguientes
pasos:
1.Aislamiento selectivo, se utiliza un medio selectivo sólido, el cual inhibe el desarrollo de
géneros diferentes al Staphylococcus, pero además permite reconocer el desarrollo
característico del microorganismo buscado.

2. Recuperación de la cepa, este paso permite restaurar las células dañadas de Staphylococcus
aureus. 3. Identificación bioquímica, en este punto se identifica el género y especie de
Staphylococcus aureus enterotoxigénico.

El aspecto cuantitativo en la investigación de Staphylococcus aureus es de suma importancia,

no sólo desde el punto de vista económico, sino en el de salud pública; la Norma establece un
límite máximo
para que éste pueda ser no dañina. Desde este punto de vista y de acuerdo con la técnica
mencionada, la sensibilidad mínima de detección en el recuento en placa, utilizando el método
de extensión de superficie.
Para determinar Staphylococcus aureus

- MARCO TEORICO

OBSERVACION GENERAL:
El medio manitol salado es un medio altamente selectivo debido a su alta concentración
salina; los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las
colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante como en el caso del
estafilococcus aureus.
Los estafilococcus coagulasa negativo, presentan colonias rodeadas de una zona roja o
purpura como en el caso de los estafilococcus epidermis
Los medios de cultivo se clasifican según su origen

a- Naturales: Son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o

vegetal como ser extracto de tejidos o infusiones y cuya composición química no se
conoce exactamente
b- Sintéticos: son los medios que contienen una composición química definida cualitativa
y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c- Semisintéticos: son los sintéticos a los que se le añaden factores de crecimientos bajo
una forma de extracto orgánico complejo, por ejemplo, extracto de levadura

- Según su consistencia:

a- Líquidos: Se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.

b- Solidos: Se preparan añadiendo un agar a un medio liquido (caldo) a razón de 15gr/Lt.
El agar es una sustancia inerte polisacárido (hidrato de carbono) que se extrae de las algas.
Como estas sustancias no es dirigida por las bacterias no constituye ningún elemento
nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de petri
o tubos de ensayo y presenta la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias “procesos que
antes no eran posibles en medio liquido”
d- Semisólidos: Sostienen 7.5 gr/Lt de caldo se utilizan para calcular la motilidad entre
las especies en estudios
 - Según su composición a causa de los requerimientos químicos del mundo
microbiano, a veces es necesario eliminar o agregar componentes químicos del
medio.

a- Comunes o universales: Su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los

microorganismos como existentes. Es el medio más frecuentemente utilizado para
mantener colonias microbianas. Por ejemplo: agar común o caldo común.
b- Enriquecidos: Están compuesto de un medio base como apoyo del crecimiento al cual
se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por
ejemplo: sangre, suero, liquido ascético, etc. Se utiliza para microorganismos que
tienen grandes exigencias nutricionales.
c- Selectivos: Son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones
físicas del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos específicos con el
fin de inhibir el crecimiento de especies químicas cuyo crecimiento no interesa. Este
tipo de medio solo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos a partir de
poblaciones mixtas. Por ejemplo: agar salado- manitol o chapman (permite el
crecimiento de ciertos estafilococos).

(Jablonskin L.M. & Bohach G:A. 2001)

SOLUCION SALINA FISIOLOGICA

Formada por agua destilada y cloruro de sodio (NaCl) diluido, la solución salina se define como
una sustancia isotónica en la sangre, incluso si tiene un nivel de osmolaridad superior que la
sanguínea. Se utiliza sobre todo para la limpieza de lentes de contacto (solución fisiológica
salina), la nariz y los oídos de los recién nacidos (solución fisiológica en aerosol). En la
medicina, se utiliza como un líquido para el llenado de las prótesis mamarias o para la
rehidratación de los sujetos deshidratados.

PLACA DE PETRI

 Es utilizado para poder observar diferentes tipos de muestras tanto biológicas como
químicas. Las cuales se encuentran encerradas dentro de la placa.
 Es utilizado para el cultivo de bacterias y otras especies relacionadas.
 También es utilizado para masar sólidos en una balanza.

MECHERO

Mechero Alcohol Vidrio es un instrumento de laboratorio que se utiliza para calentar objetos
que sean necesarios para calentar, porque si no pueden explotar y pude hacer reaccionar
químicos dañinos

PIPETAS

Para el cultivo celular y el trabajo con soluciones estériles en el rango de los mililitros
disponemos de pipetas serológicas con los siguientes volúmenes: 1 ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml, 25 ml
y 50 ml. Están fabricadas de poliestireno transparente con escala impresa positiva y negativa,
adaptándose a los más diversos usos. Las pipetas serológicas son compatibles con todos los
dispositivos de pipeteado corriente, incorporan el código de color internacional para su
diferenciación y se envasan de forma estéril unitaria o en bolsas de 25 unidades.
PROPIPETA
 Para expeler el aire se debe presionar la válvula “A” sobre la parte superior del bulbo.
 Succione el líquido hacia arriba presionando la válvula “S” ubicada en la parte inferior.
 Para descargar presione la válvula “E” que se encuentra al costado de la válvula “S”.

PROBLEMA

Conocer el género y especie de la bacteria estudiada

- OBJETIVOS
El objetivo de este trabajo fue conocer el estatus de los factores de virulencia del
Staphylococcus aureus.

Realizar adecuadamente la cuantificación de Staphylococcus aureus en suelo de manglar,

mediante la técnica de colonias.

Explicar el fundamento de todas las etapas del método de detección de Staphylococcus aureus
en suelo de manglar.

- MATERIALES Y PROCEDIMIENTO
 Placa Petri
 Mechero
 Pipetas graduadas estériles de 1 mL con tapón de algodón a, c. (se debe utilizar
una
 pipeta para cada dilución)
 Pipetas graduadas estériles de 10 mL con tapón de algodón. a. (en caso de que
la muestra sea líquida.
 Propipeta. a, b, c, d Varillas de vidrio de 3.5 mm de diámetro aproximadamente
y 20 cm. de largo, dobladas en ángulo recto (forma de “L”), estériles (se debe
utilizar una por dilución).
- METODOLOGIA

1- Observe el diagrama en el que se describe el método aséptico de transferencia de

microorganismos.
2- Utilizando este método realice la siembra desde los cultivos de Staphylococcus aureus
que se describe a continuación
3- Observe detalladamente los cultivos bacterianos que se les proporcionara, así como los
medios estériles con los que va a trabajar
4- Tomar la caja con el cultivo bacteriano que va a utilizar
5- Marcar e identificar las cajas/tubos a los que va a transferir, poner numero de grupo,
fecha, microorganismos utilizado
6- Tomar un hisopo estéril y realizar el inoculo primario, luego con el asa de meta estéril
realizar el inoculo secundario, terciario y cuaternario.
7- Esterilizar el asa luego de casa inoculo y proceder a realizar la siembra según lo
indicado en los diafragmas utilizando el método aséptico.
8- Una vez finalizada la transferencia, esterilizar el asa y colocarla en un lugar seguro.
9- Incubar a 37º C POR 18-24 horas.
10- Asegúrate que las tapas de las cajas Petri estén hacia abajo.
11- Observar los resultados al día siguiente y graficar en la tabla de resultados.
Patronos de crecimiento
Reconocer diferentes morfologías de crecimiento de las bacterias en medios de cultivo es jun
paso usualmente crucial en los procesos de identificación de microorganismos, las bacterias
muestran a menudo distintas morfologías, color y textura en medio de cultivo.

a- Las características básicas de crecimiento incluyen, forma de la colonia, forma del

margen, elevación, color y textura. Las formas de las colonias puedes ser descritas
como circulares, irregulares o puntiformes.
b- El margen puede ser entera (liso, sin irregularidades), ondular (ondulado), lobulada
(lóbulos)), filamentos o rizoide (ramificado como raíces)
c- De acuerdo a la elevación de las colonias, se incluyen plana y elevada, convexa,
pulvinado (muy convexa), y umbonate (elevada en el centro). La textura de la colonia
puede ser húmedo, mucoso, o seco. La producción de pigmentos es otra caracteriza
útil y se puede combinar con propiedades ópticas tales como opaco, translucido,
brillantes o mate. (Anderson, Cindy, 2013)
- DISCUSION

1- Las infecciones por S. aureus pueden diagnosticarse fácilmente por medio de la tinción de
Gram y por el examen microscópico del contenido del absceso o del tejido infectado. El aspecto
de los estafilococos es el de grandes cocos gram-positivos que se encuentran aislados, en
parejas o formando cúmulos. El cultivo sistemático del material infectado suele generar
resultados positivos, y los cultivos de sangre son a veces positivos incluso cuando la infección
se localiza en zonas extravasculares. (Pascual M. y V. Calderón. 2000)

2- S. aureus es uno de los patógenos más importantes a nivel mundial, bacteria oportunista
que forma parte de la microflora humana: poco después del nacimiento, los neonatos son
colonizados por S. aureus, los sitios de colonización incluyen el muñón del cordón umbilical, el
área perineal, la piel y, a veces, el tracto gastrointestinal. También puede contaminar la
vestimenta y la ropa de cama. La colonización más frecuente por S. aureus es la mucosa nasal,
el principal reservorio lo constituye el hombre enfermo o el portador.

(Madigan, Michael T, 2012)

3- S. aureus puede producir choque séptico mediante la activación del sistema inmunológico y
del sistema de coagulación mediado por el peptidoglicano, los ácidos teicoicos y la toxina-alfa.
El síndrome de choque tóxico (SST-1) es un cuadro grave debido a la producción de la toxina
TSS-1, inicialmente se describió en niños y posteriormente en mujeres jóvenes que usaban
tampones. En la actualidad, la mayor parte de los casos son secundarios a infecciones
estafilocócicas diversas. (Anderson, Cindy, 2013)

- CONCLUSION

1-Los resultados señalan que todas las superficies que nos rodean están expuestas a la
colonización de distintos microorganismos, entre ellos Staphylococcus aureus, el cual puede ser
muy riesgoso para la salud humana. Sin embargo, el Reglamento Sanitario de Alimentos señala
que aún siendo considerado un patógeno, en bajos niveles puede aceptarse, debido a que es
de difusión limitada si la producción se rige bajo este reglamento.

2- se aplico el método de siembra con la asepsia requerida se observo la diferencia morfológica

que existen entre las colonias bacterianas de la misma especie, de diferentes especies y
sembradas en diferentes medios de cultivo
- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 Nami TS, Le Dell

KH, Sabet K, Borchadt SM, Boxrud DJ, Elianne J. Comparison of community and health
care associated methicillinresistant Staphylococcus aureus infection. JAMA. 2003; 290:
2976- 2984

 Moreillon P, Que Y, Glauser M. Staphylococcus aureus. In Mandell GL, Bennett

JE, Olin R. Principles and practice of infectious diseases. 6a ed. Philadelphia, Churchill
Livingston; 2005.

 González-Gómez C, Acosta J, Villa J, Sanz F. Clinical and

molecular characteristics of infections with CO2-Dependant small-colony variants of St
aphylococcus aureus. J Clin Micobiol. 2010; 48: 2878- 2884.

 Lencastre H, Oliveira D, Tomasz A. Antibiotic resistant Staphylococcus aureus: a

paradigm of adaptative power. Curr Opin Microbiol. 2007; 10: 1-8.

 Pascual M. y V. Calderón. 2000. Microbiología Alimentaria: metodologíaanalítica para

alimentos y bebidas. Editorial Díaz de Santos. Segundaedición. Madrid-España.

 James M. Jay. 2002. Microbiología moderna de los alimentos. EditorialAcribia S.A. Cuar
ta edición. Zaragoza-España.

 Dirección general de Salud Ambiental (DIGESA). Manual de Análisis Microbiológico de

Alimentos. 2001. Lima-Perú. (Jablonskin L.M. & Bohach G:A. 2001.)

 Jablonskin L.M. & Bohach G:A. 2001. “Staphylococcus aureus” In: Doyle M. Beuchat. L:
R. & Montville T:J. (Eds.) Food Microbiology Fundamentals & Frontiers. ASM.

 USA: 411-434. NOM-115-SSA1-1994. Bienes y servicios. Método para la determinación

de Staphylococcus aureus

 Madigan, Michael T. (2012). Brock biology of microorganismos (13th ed.). San

Francisco: Benjamín Cummings.

 Anderson, Cindy (2013). Great Adventures in the microbiology

Laboratory. Pearson. P. 175-176
ANEXOS