Bio​-​Type AHG
Para pruebas de Coombs Directa e Indirecta
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PRINCIPIO
El reactivo de Coombs o prueba de Antiglobulina
Humana Poliespecífica, es una prueba utilizada de
rutina en la detección de aloanticuerpos, pruebas de
compatibilidad y pruebas de Coombs Directo.
Sueros de Coombs poliespecíficos contienen
anticuerpos dirigidos hacia IgG de origen humano y el
componente C​3​d del complemento humano.
Indudablemente, la detección de la fracción IgG es la
de mayor importancia.
La importancia en la detección de fracciones de
complemento como C​3​d se manifiesta principalmente en
las pruebas de Coombs Directo, en la investigación de
anemias hemolíticas autoinmunes.
Pruebas de Coombs Directo positivas, generalmente son
indicativas de glóbulos rojos sensibilizados ​in vivo, ​por
inmunoglobulinas y/o complemento.
REACTIVO
La tarjeta ​Bio​-Type AHG contiene suero de Coombs
Poliespecífico con fracción anti-IgG obtenida de
conejos inmunizados con IgG humana purificada, y
anticuerpos Monoclonales Murinos Anti-C​3​d. (BRIC 8).
Glóbulos rojos sensibilizados con fracción de
complemento C4d no reaccionan con este reactivo.
Este reactivo ha sido formulado para uso en Detección e
Identificación de anticuerpos irregulares, Pruebas de
Compatibilidad y Coombs Directo.
PRECAUCIONES
Este reactivo contiene 0.1% p/v Azida de Sodio.
Puede ser tóxico al ser ingerido y reacciona con las
tuberías de plomo y cobre.
ALMACENAGE
Almacenar entre 18-25ºC.
El reactivo se mantendrá estable por todo el período
indicado.
TOMA DE LA MUESTRA
La muestra de sangre debe ser extraída en forma
aséptica y preferentemente en Citrato, EDTA, Heparina
o CPD-A. Para obtener resultados confiables se
recomienda el uso de sangre fresca.
Se puede utilizar suero o plasma frescos. Reacciones de
Hemólisis dependientes de complemento podrían pasar
desapercibidas al utilizar plasma en vez de suero.
La muestra de suero o plasma, una vez separada, puede
ser almacenada durante 48 horas a temperatura de
refrigeración (2-8º C), o congelarse entre –20 a –80ºC
por períodos mayores.
Al utilizar suero, este debe ser aclarado mediante
centrifugación a 1.500 g por 10 minutos, para evitar
residuos de fibrina que pudieran interferir con la
reacción.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Preparar una suspensión de Glóbulos Rojos al 1% en la
solución I de la siguiente forma:
En un tubo de ensayo limpio, colocar 1 ml de ​“Solución
I”​( Dispensar 1 volúmen) y 10 ul de sedimento de
Glóbulos Rojos.
PROCEDIMIENTO.
No utilizar tarjetas que presenten deshidratación o
variación en su presentación al examen ocular.
No utilizar muestras hemolizadas o contaminadas.
1.- Coombs Directo.
1.1.- Marcar cada pocillo con la identificación del
paciente. Retirar el sello que recubre el pocillo.
1.2- Añadir 50 ul de la suspensión de glóbulos rojos.
1.3-Centrifugar por 10 minutos a la velocidad indicada.
1.4-Leer y anotar los resultados.
2.-Detección e Identificación Ac Irregulares.
2.1-Idem 1.1
Diluir los glóbulos rojos de la siguiente manera:
En un tubo colocar 6 gotas de Ac Screen y/o Ac Identif
y un volúmen de ​Solución I. ​(1 ml​)
2.2-Añadir 50 ul (una gota) de Ac Screen y/o Ac Identif
a cada pocillo, según corresponda.
2.3-Añadir 25 ul de plasma o suero del paciente a cada
pocillo.
2.4-Incubar 15 minutos a 37ºC.
2.5- Centrifugar por 10 minutos a la velocidad indicada.
2.6- Leer y anotar los resultados.
3.-Prueba de Compatibilidad​.
3.1- Marcar cada pocillo con la identificación del
donante y del receptor.
Retirar el sello que recubre el pocillo.
3.2- Añadir 50 ul de la suspensión de glóbulos rojos del
donante al pocillo correspondiente.
3.3- Añadir 25 ul de plasma o suero del receptor al
mismo pocillo.
3.4- Incubar 15 minutos a 37ºC.
3.5- Centrifugar por 10 minutos a la velocidad indicada.
3.6- Leer y anotar los resultados.
INTERPRETACIÓN
Las muestras positivas se presentan como una línea roja
en la superficie del reactivo, (4+) o dispersadas a través
del pocillo (1-3 +).
Las muestras negativas forman un botón compacto en el
fondo del pocillo.
Una reacción de hemólisis debe ser interpretada como
positiva.
BIBLIOGRAFÍA
-Coombs R.R.A., Mourant.E. & Race R.R. Detection of
Weak and “incomplete “ Rh agglutinins; A new test.
Lancet 1945, ii: 15.
-Walker R.H. ED. Technical Manual . 10​th​ ed.
Washington , D.C.
AABB, 1990; 147-157.
-Garratty G. “The significance of IgG on the Red Cell
Surface.
Transfusion Medicine Reviews Vol. 1Nº 1. (April
1987)pp. 47-57.