UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

Facultad de Ingeniería Ambiental

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

USO DEL MICROSCOPIO

SEGUNDO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGÍA – SA323

LEÓN LEÓN, BRUNO DIEGO- 20160726D

DOCENTE: ING. TELLO CEBREROS, JORGE

Lima, Perú
2017

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2. ÍNDICE

o RESUMEN (PAG.)

o INTRODUCCIÓN (PAG)

o OBJETIVOS (PAG5)

o MARCO TEÓRICO (PAG )

o RESULTADOS (PAG)

o DISCUSIÓN DE RESULTADOS (PAG)

o CONCLUSIONES (PAG)

o RECOMENDACIONES (PAG)

o CUESTIONARIO (PAG)

o FUENTES DE INFORMACIÓN (PAG )

o ANEXOS (PAG)

o APÉNDICE (PAG )

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3. OBJETIVOS
 Reconocer el microscopio como herramienta útil para los diversos tipos
de observaciones de microorganismos.
 Observar que estén presentes todas las lentes del microscopio par tener
una mejor visión.
 Aprender la utilización y manipulación meticulosa del microscopio.

4. MARCO TEÓRICO

Este aparato, insustituible en cualquier investigación científica, fue ideado y

construido en el siglo XVII por el holandés Antón van Leeuwenhoek (1632-1723),
siendo constantemente perfeccionado por su continua utilidad, hasta llegar al
poderoso microscopio electrónico que hoy se utiliza.

La construcción de este aparato está basada en un fenómeno físico que es la

refracción de la luz. Consta de dos partes: una mecánica y otra óptica.

ParteSmecánica
Está formada por un pie o soporte, que sirve para la estabilidad del aparato; por
la platina, que es una pieza movible por dos tornillos laterales, donde se coloca
la preparación microscópica, que se fija mediante dos pinzas o resortes y que
posee un orificio circular en el centro por donde pasa la luz que ilumina la
preparación; y por el brazo o columna, que es articulado y sirve para inclinar el
microscopio o para trasportarlo.

Parte óptica
Consta de dos partes principales (ocular y objetivo) y de partes accesorias
(espejo, condensador, diafragma, tornillos micrométricos y tornillos
micrométricos).
El ocular es el lugar por donde se mira y está formado por dos lentes ubicados
en el extremo superior del tubo óptico.
El objetivo es también un sistema de lentes ubicado en el extremo inferior del
tubo. Cada microscopio suele tener varios objetivos con lentes de distintos
aumentos, que se disponen sobre una pieza giratoria llamada revólver.

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Et espejo es móvil y está situado debajo de la platina, tiene una cara cóncava
(que se utiliza si se trabaja con luz artificial) y una cara plana (que se utiliza si se
trabaja con luz natural). Este espejo se adapta a la luz y la refleja hacia el objeto
que se observa.
El diafragma, colocado entre la platina y el espejo, gradúa la cantidad de luz que
ilumina el objeto.
El condensador es un lente que concentra la luz sobre el preparado.
Los tornillos micrométricos y micrométricos sirven para acercar o alejar el tubo
óptico del preparado, para su perfecto enfoque. El primero es de movimientos
más rápidos, y el segundo, más sensible, es de movimientos lentos.

Figura1: Partes del microscopio

ELEMENTOSpNECESARIOS
Lupa: Es un lente de aumento más grueso en el centro que en los bordes,
montado sobre un pie o soporte, o sobre un aro provisto de un mango. Sirve

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para observar piezas pequeñas pero macroscópicas, es decir, visibles a simple
vista, porque posee muy poco aumento.
Portaobjetos (Fig. B): Son laminillas rectangulares de vidrio, de 8 cm de largo por
2 cm de ancho, donde se colocan los preparados.
Cubreobjetos (Fig. C): Son laminillas cuadradas o circulares de vidrio muy
delgado, que sirven para cubrir las preparaciones microscópicas.

Figura 2: Elementos externos para el debido uso del microscopio

Tipos de microscopios: Además del microscopio tradicional, que es el descrito

anteriormente, existen otros dos más sofisticados que han ido evolucionando en
las últimas décadas.

Si bien en los microscopios clásicos la imagen a observar se forma de una vez,

en los métodos más modernos la imagen se va obteniendo punto a punto al
hacer nadir un delgado haz del iluminante que va explorando poco a poco la
preparación. Es lo que se denomina barrido oscanning. La señal que la
preparación transmite o refleja se dirige a un detector que la convierte en imagen
visible a través de un sistema de vídeo o televisión o, más modernamente, de
ordenador. Ejemplos de estos microscopios son el de rayos X y el acústico.
Ambos se describen brevemente a continuación.
El microscopio de rayos X se basa en el hecho de que al disminuidla longitud
de onda de la radiación incidente aumenta el poder resolutivo del aparato.
Existe, sin embargo, una dificultad, y es que la mayor parte de los materiales
presentan para los rayos X un índice de refracción ligeramente inferior a la

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unidad, con lo cual no se puede en fabricar lentes convergentes capaces de
focalizarlos.
La solución está en operar por reflexión y por difracción, pero para ello es
necesario disponer de una fuente de rayos X lo más puntual, monocromática y
intensa posible.
El microscopio acústico funciona como uno óptico pero con ondas ultra-
acústicas (se llega a secuencias de 5 GHz). La venta de este equipo radica en
que las ondas acústicas penetran fácilmente en materiales opacos a otras
radiaciones; por ello es especialmente útil en microelectrónica, por ejemplo, para
poder observar en profundidad circuitos electrónicos sin dañarlos. La información
que proporciona este tipo de microscopios no la proporciona ningún otro aparato
óptico.
ACTUALMENTE SIGLO XXI: En el transcurso del siglo XX, las técnicas
microscópicas han evolucionado considerablemente: de la lupa usual, con
menos de 10 aumentos, se ha pasado al microscopio de efecto túnel, que
permite ver —o, mejor, «palpar»— los átomos (a la escala de la diez mil
millonésima de metro), pasando por los microscopios ópticos, los mejores de los
cuales no superan los 2.000 aumentos, y los microscopios electrónicos, con
500.000 aumentos.
Microscopio óptico. Consta de un objetivo y un ocular. El primero está formado
por un conjunto de pequeñas lentes, de distancia focal muy corta, que da una
imagen real aumentada de un pequeño objeto situado muy cerca del foco. El
ocular, a menudo constituido por dos lentes convergentes, funciona como una
lupa y da una imagen virtual aumentada de la imagen suministrada por el
objetivo. La distancia del objetivo al ocular es invariable.
Microscopio electrónico. La imagen aumentada de un objetivo se obtiene
utilizando su interacción con los electrones. Los trabajos de L. de Broglie
demostraron que, al igual que la luz posee un carácter corpuscular, las partículas
como los electrones pueden manifestar propiedades ondulatorias. La longitud de
onda asociada a un haz de electrones es del mismo orden de magnitud que la
de los rayos X. Además, dado que, a diferencia de estos últimos, los electrones
poseen carga eléctrica, es posible desviarlos y focalizarlos por medio de
«lentes» magnéticas o electrostáticas.
Microscopio de transmisión. Está formado por un cañón de electrones
obtenidos ya sea calentando un filamento ya sea por medio de una fina punta

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metálica sometida a un campo eléctrico; una vez acelerados con uno o varios
ánodos llevados a potenciales adecuados, los electrones atraviesan una serie de
«lentes» formadas por electroimanes atravesados por un canal cuyo eje es el del
microscopio.
Microscopio de emisión. Este instrumento existe en dos versiones. En la
primera, el objeto, situado en el seno de un campo electrostático, recibe un haz
de electrones, de iones o de fotones y emite electrones secundarios, que son
acelerados. Un objetivo, llamado «de inmersión», da una imagen aumentada de
la superficie del objeto. En la segunda versión (microscopiode barrido), se
focaliza un fino pincel de electrones sobre una muestra. La corriente de
electrones secundarios creada es recogida por un conjunto fotomultiplicador. Se
pueden observar así, en un monitor, superficies biológicas, defectos superficiales
de metales, etc.
Microscopio de efecto túnel. De micros copio sólo tiene el nombre, ya que su
fundamento estriba en controlar, con una precisión de 10 nanómetros, la
posición de una micro-sonda que se mueve por encima de la superficie
estudiada. A distancias de este orden, los electrones pueden atravesar el
intervalo entre la capa atómica superficial y la sonda, pero no pueden ascender
desde la capa subyacente. Se obtiene así una imagen de la superficie del objeto
a escala atómica.

PASOSAPARAAELAMANEJOADELAMICROSCOPIO
1° Se coloca la preparación sobre el orificio de la platina y se fija con los
resortes.
2″ Se hace girar el espejo hasta que la luz incida sobre la preparación.
3° Se baja el tubo óptico por medio del tornillo macrométrico hasta que toque
levemente la preparación.
4° Se mira por el ocular con el ojo izquierdo, tratando de mantener el ojo derecho
abierto, y con el tornillo macrométrico se va subiendo poco a poco el tubo óptico
hasta que se observe la preparación lo más clara posible.
5° Con leves movimientos del tornillo micrométrico se obtiene una imagen nítida
del objeto.

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5. RESULTADOS

GRUPO n°1

-OCULAR: 10X

-OBJETIVO: 10X

-CARACTERÍSTICAS

Solo se pudo observar el abdomen de la

muestra y los pelos de sus patas.

Figura 3: Muestra de la pulga común

(Imagen referencial)

GRUPO n°2

-OCULAR: 10X

-OBJETIVO: 10X

-CARACTERÍSTICAS

Se observan células de forma hexaédricas

alargadas de un color grisáceo.

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Figura 4: Muestra de cáscara de cebolla

GRUPO n°3

-OCULAR: 10X

-OBJETIVO: 10X

-CARACTERÍSTICAS

Se observan células hexaédricas

alargadas de un color gris claro.

Figura 5: Muestra de cáscara de cebolla

GRUPO n°4

-Aumento: 100X y 430X

-CARACTERÍSTICAS

Estómago reventado (aplastado).

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Figura 6: Muestra de la pulga común

(Imagen referencial)

GRUPO n°5

-OCULAR: 10X

-OBJETIVO: 10X

-CARACTERÍSTICAS

Sólo se pudo apreciar el rastro del insecto.

Se observan los pelos de las patas.

Figura 7: Muestra de la pulga común

6. DISCUCIÓN DE RESULTADOS

Los grupos 1, 4 y 5 fueron los encargados de observar la muestra de la pulga

común y los grupos 3 y 4 son los encargados de observar la muestra de la
cáscara de cebolla.

Los grupos responsables de la muestra de la pulga coincidieron en que no se

observa de una manera clara la muestra en sí, sin embargo se puede diferenciar
el abdomen y los pelos de las patas.

Los grupos 3 y 4 (encargados de la cáscara de cebolla) si pudieron notar con

mucha claridad las células, coincidiendo en que son hexaédricas y alargadas.

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7. CONCLUSIONES
 En la muestra de la pulga se observa con dificultad el abdomen del insecto y
los pelos de las patas.
 Se distingue muy claramente las células hexaédricas de la cáscara de
cebolla.
 El enfoque más nítido con el tornillo micrométrico depende mucho de la visión
de capa persona.

8. RECOMENDACIONES

 No se debe usar luz solar directa como fuente de iluminación.

 Se debe hacer un centrado adecuado de la muestra para una mejor visión.
 El uso cuidadoso y meticuloso del microscopio hará que se obtengan
mejores resultados.
 El microscopio debe siempre llevarse agarrándolo con las dos manos; una
de ellas en el brazo y la otra con la palma hacia arriba sosteniendo la base
o pie.
 Los tornillos macrométricos y micrométricos deben moverse siempre con
cuidado y sin apresuramiento, para evitar que los lentes se rompan o
rayen.
 Nunca debe bajar el tubo portapapeles mientras se observa por él.
 Para limpiar las lentes deberá usarse solo papel lente, puesto que otro
material puede rayarlos.
 Ningún líquido debe mojar la pieza del microscopio.
 Las láminas que se colocan en el microscopio deben estar casi siempre
secas.
 Cuando se use el microscopio de preferencia es que no apunte hacia el
norte magnético.

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9. CUESTIONARIO
1) Establecer la diferencia entre poder de resolución y abertura numérica.
 Apertura Numérica (AN): El ángulo θ determinado por el eje óptico y los
rayos más externos que aun capta el objetivo es una medida de la
apertura del objetivo; es la mitad del ángulo de apertura. La magnitud de
este ángulo se expresa como un valor seno. El valor seno de la mitad del
ángulo de apertura se multiplica por el índice de refracción “n” del medio
que llena el espacio entre el cubreobjetos y el objetivo, da la apertura
numérica: AN =n*senθ. Capacidad de captación de la luz por la lente.
 Poder de resolución: Es una función de la longitud de onda de la luz
utilizada y de una característica propia de las lentes denominada apertura
numérica. En general, hay una correlación entre la capacidad de aumento
de una lente y su apertura numérica: las lentes de mayor aumento
poseen generalmente mayores aperturas numéricas. Es la capacidad que
posee un microscopio para separar dos puntos muy próximos entre sí.
2) Completar la siguiente tabla.

Partes del microscopio Función(es)

Lente situada cerca del ojo del
Ocular observador. Capta y amplía la imagen
formada en los objetivos.
Representan el componente óptico
más importante del microscopio. Su
principal función consiste en colectar
la luz proveniente del espécimen y
proyectar una imagen nítida, real,
Objetivo invertida y aumentada hacia el cuerpo
del microscopio (Lente situada cerca
de la preparación). Si se utiliza el
aumento 100x es necesario agregar a
la preparación aceite de inmersión,
cuya función es evitar la dispersión de
los rayos luminosos.
Es un sistema de lentes situado
Condensador debajo de la platina que concentra la

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Diafragma de iris
Tornillo de ajuste fino
(Tornillo micrométrico)
Tornillo de ajuste grueso
(Tornillo macrométrico)
luz sobre la preparación,
consiguiéndose así una iluminación
más intensa.
Está formado por un conjunto de
laminillas que dejan un orificio en su
centro. El diámetro del orificio puede
ser variado mediante una palanca,
con lo que se regula la cantidad de luz
que llega a la preparación.
El tornillo micrométrico permite
desplazamientos muy cortos, para el
enfoque más preciso.
El tornillo macrométrico permite hacer
un movimiento rápido hacia arriba o
hacia abajo del tubo o la platina, y se
utiliza para localizar la imagen a
observar.

-Las siguientes preguntas 3, 4 y 5 se desarrollarán en el siguiente laboratorio

“TINCIÓN DE GRAM”.

10. FUENTES DE INFORMACIÓN

 https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/observacion-microscopica (18/042017)
 https://miranda26.wordpress.com/pasos-para-el-uso-del-microscopio/
(17/04/2017)
 http://www.eumed.net/libros-gratis/ciencia/2013/22/microscopio.html
(17/04/2017)
 GRAN LIBRO DEL MICROSCOPIO (Kirsteen Rogers, 2007)
 MANUAL DE MICROSCOPIA (Bruno P. Kremer, editorial OMEGA)

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11. ANEXOS

Figura 8: Microscopio utilizado en clase

Figura 9: Desarrollo del laboratorio

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12. APÉNDICE

ENFOQUE

Buscar el objeto de menor aumento Acomode la cara del espejo (plana para
(10X), y ponerlo en el tope del revolver. luz natural y cóncava para luz artificial).

Aclarar con el tornillo micrométrico y

abrir o cerra el diafrágma

Preparar el objeto a observar.

Bajar el tornillo macrométrico hasta la

lámina, levantar el objetivo hasta ver la
imágen.

Poner la lámina en la abertura de la

platina y centrar.

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