AISLAMIENTO DE DNA PLASMÍDICO

RIVERA SANCHEZ MELIZA ZOE; SANDOVAL OLVERA CLAUDIA SECCION: 1 GRUPO 3FM1
INTRODUCCIÓN: La extracción de ácidos nucleicos es el primer paso para la mayoría de los estudios en biología
molecular y para las técnicas del ADN recombinante. En la actualidad, se dispone de múltiples metodologías de
extracción, lo que permite que los biólogos moleculares puedan seleccionar la técnica que más se ajuste a sus
necesidades. Para su estudio los ácidos nucleicos deben aislarse del resto de los componentes celulares, como
lípidos y proteínas, más abundantes que los ácidos nucleicos. Asimismo, dependiendo del objeto de estudio debe
aislarse de preferencia el ADN o ARN; así, para estudios de niveles de expresión génica se extraerá ARN, mientras
que,
OBJETIVO: para
Aislar la
DNA búsqueda de
plasmídico bacteriano modificaciones
y con menos o proteínas.
alteraciones génicas,
Posteriormente se ADN
comprobando dicho aislamiento mediante procede a precipitar el DNA genómico.
electroforesis en gel de agarosa.
RESULTADOS: Y con el sobrenadante saliente de la
centrifugación anterior se precipita el DNA
plasmídico con isopropanol y se procede a
realizar la electroforesis (ver anexo 1)

En esta se puede observar en el carrilo de la

7 la presencia de DNA plasmídico, en cambio en
Ilustración 1 resultados de electroforesis
ANÁLISIS DE RESULTADOS:
Para poder aislar exitosamente el DNA
plasmídico es necesario seguir una serie de
procedimientos que en cualquier caso de
aislamiento de DNA deben realizarse. En este
caso se deben inhibir las enzimas que degradan
el DNA (DNAsas) lo que se logra con la sol. Tris-
EDTA el cual inhibe estas enzimas debido a que
es un agente quelante que captura a los
cationes divalentes como Ca ++, Mg++ y la
enzima se inactiva.
fosa numero 7 correspondiente a nuestra
muestra el corrimiento de la electroforesis
realizada por la que podemos concluir que aún
tenemos la presencia de DNA genómico,
aunque la mayor concentración de muestra se
encuentra al final del carril en donde se confirma
el foso 8 solo se observan 3 bandas que
corresponden a las isoforma del DNA
plasmídico
CONCLUSIONES: se realizó el aislamiento de DNA
plasmídico bacteriano se identificó por electroforesis, también
se identificaron isocoras como la circular relajada y lineal, así
como DNA genómico
BIBLIOGRAFIA:
1. 1.- Campbell M., Farell S., Bioquímica, cuarta edición,
Editorial Thomson, México, 2004, pág. 221.

Posteriormente gracias a la lisis alcalina con sol. 2. Yáñez J., Villar J., Dislipemias, lipoidosis, lipodistrofias y
De NaOH y SDS, se rompe la membrana obesidad, Universidad de Sevilla, España, 2002, págs.
plasmática de la célula procariota ya que el SDS 9qq
es un detergente que disuelve los lípidos de la
membrana y se libera el ácido nucleico
correspondiente, en este punto el DNA
genómico se desnaturaliza por la acción del
detergente SDS, y el DNA plasmídico
permanece intacto por ser mucho más pequeño

1
GEL DE AGAROSA

ESTRUCTURA:

En su estado natural, el agar-agar se presenta como un

carbohidrato estructural de la pared celular de las algas
agarofitas, donde existe en la forma de sales de calcio o
de una mixtura de sales de calcio y magnesio. Es una
mixtura compleja de polisacáridos compuesta por dos
fracciones principales: la agarosa, un polímero neutro, y
la agaropectina, un polímero con carga sulfatado.
La agarosa, fracción gelificante, es una molécula lineal
neutra, esencialmente libre de sulfatos, que consiste en
cadenas repetidas de unidades alternadas β-1,3 D-
galactosa y α-1,4 3,6-anhidro-L-galactosa. La
agaropectina, fracción no-gelificante, es un polisacárido
sulfatado (3% a 10% de sulfato) compuesto de agarosa y
porcentajes variados de éster sulfato, ácido D-glicurónico
y pequeñas cantidades de ácido pirúvico. La proporción de
estos dos polímeros varía de acuerdo con la especie del
alga, y en la agarosa representa, normalmente, por lo
menos dos tercios del agar-agar natural.