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Isolation and characterization of Pseudomonas sp.

NAF1 and its application in biodegradation of crude oil

ABSTRACT
Se realizó un screening de bacterias que pueden degradar petróleo crudo. El estriado
bacteriano NAF1se aisló y caracterizó a un pH de 7 y a 30°C. La cepa fue capaz de
utilizar varios hidrocarburos aromáticos y alifáticos. La cepa tuvo una alta actividad
emulsificante, lo que nos indica la producción de biosurfactantes. El estriado bacteriano
mostró una eficiencia de remoción de entre 91 y 97% de petróleo crudo en 28 días
cultivado con >.5% (W/V) de pretratado de CSL y SWD. La secuenciación mostró una
similitud de 98% con P. aeruginosa PA01.

INTRODUCCIÓN

La derrama de petróleo es una de las amenazas ambientales más graves en el mar


Mediterraneo, por eso se busca un proceso medio ambiental seguro que elimine este
tipo de contaminaciones. Biorremediación por medio de bacterias para remover
contaminantes es el método mas adecuado debido a que tiene un buen costo-beneficio,
también porque produce subproductos menos dañinos y actúa de manera más rápida.
P. aeruginosa es la mejor biodegradando petróleo crudo (Lal and Khanna 1996;
Saadoun 2002; Banat et al. 2000), lo utiliza como principal fuente de carbono y lo tolera
a altas concentraciones (arriba de 50% v/v).

MATERIALES Y MÉTODOS

Muestreo y preparación del medio

Fue un muestreo simple. Las muestras fueron transferidas inmediatamente a un


laboratorio para ser guardadas a 4°C. El agua de mar fue utilizado como medio de cultivo.
Medio Mineral Basal (BSM) ajustado a un pH de 7 mezclado con >0.5% (w/v) de petróleo
crudo. El medio líquido fue solidificado con 2% de agar.

10 ml de cada muestra se mezcló con 90 ml de medio de enriquecimiento. Las muestras


se incubaron en matraces a 30ºC durante 168 h a 150 rpm velocidad de agitación. Se
retiraron aproximadamente 10 ml de cada matraz y se añadió a 90 ml de medio de
enriquecimiento. Se realizaron diluciones (10-1) De cada muestra transferida se
inyectaron en placas de medio TGY para enumerar la formación total de colonias (CFU)
y en placas de aceite crudo BSM para contar BDM y se incubaron a 30ºC. Se separaron
las colonias de las placas de aceite crudo BSM fueron seleccionadas y purificadas.

Identificación y caracterización de la bacteria

Se realizaron pruebas morfológicas, fisiológicas y bioquímicas de los cultivos puros para


paosteriormente amplificar y secuenciar el gen 16S rRNA y compararlo .También se
hicieron ensayos acerca de la biodegradibilidad del petróleo crudo y del hidrocarburo.

Resultados y discusiones

Se obtuvo una degradación del medio con hidrocarburo de entre 91 y 97% en un lapso
de 28 dìías. Se observó un crecimiento paralelo entre la utilización de sustrato y la
actividad emusificante. Los resultados indicaron que P. Aeruginosa es mas efectiva en
la biodegradación de compuestos del petróleo crudo comparado con otras especies de
bacterias.