Criopreservación de embriones

estandar

en equilibrio tradiciolal de un paso

Criopreservación
tranferencia
rápida
directa
no equilibrada

vitrificacion

Fuente: (CÓRDOBA, 2010)

Editado por Christian Heredia

Criopreservación en equilibrio

Este método de criopreservación se basa principalmente en cuidar el equilibrio del agua

intercelular que sale, es decir su deshidratación, con respecto al agua que ingres a los
cristales extracelulares, el tiempo que conlleva esto es muy crucial para que el método
funcione debido a que la velocidad de deshidratación debe ser acorte a la incorporación del
crioprotector en los cristales extracelulares (CÓRDOBA, 2010).

La técnica que se usa es la técnica tradicional:

En esta técnica los crioprotectores permeables más usados son el glicerol y el etilenglicol,
esto se aplica más en mamíferos, la idea de aplicar esto es poder tener una congelación
lenta sin embargo para conservar la viabilidad de los embriones es necesario una
descongelación rápida de los embriones durante máximo 30 segundos (CÓRDOBA, 2010).

La acción de los crioprotectantes es especialmente el la fase de equilibrio, las técnicas de

criopreservacion de embriones son los siguientes:

Estandar

Es este proceso se debe procurar someter al embrión a un medio de congelación (PBS + G) debe
realizarse a temperatura ambiente (20 - 22 °C), en un solo paso, de 10 a 30 minutos de duración.
No se debe inducir una cristalización sino más bien tener al embrión a 7 grados centígrados
dur5ante 5 minutos para lograr una adaptación y equilibrio para poder criopreservar(
Ochoa,2011).

De un paso

Este procedimiento se basa en el uso de un crioprotector no permeable, como la sacarosa, que

permite la remoción de un crioprotector permeable, como el glicerol. Con esta técnica, se pueden
transferir los embriones directamente a la hembra receptora sin la necesidad de una evaluación
microscópica previa a la transferencia y sin el repetido shock osmótico que sufren las células
cuando se usa el método en etapas; de esta manera se erradica el procedimiento de dilución o
extracción del crioprotector. No obstante, al prescindir de la evaluación morfológica post
descongelación, es razonable esperar que los resultados de preñez sean inferiores. En este caso,
los medios de congelación (1,5 M de glicerol) y dilución (0,5 a 1,0 M de sucrosa) son incluidos en la
misma pajuela, pero separados por burbujas de aire. Después de la descongelación, la pajuela se
agita con el fin de mezclar ambas soluciones y de esta forma el glicerol abandona el embrión como
resultado del gradiente de concentración causado por la solución de sacarosa. Como la sacarosa
no es permeable, el embrión se contrae a medida que el agua y el glicerol salen de las
blastómeras. El embrión eventualmente se rehidrata con los fluidos del útero de la hembra
receptora una vez que ha sido transferido y alcanza nuevamente su volumen osmótico (CÓRDOBA,
2010).

Criopreservación no equilibrada

Esta técnica es no equilibrada pues conciste en someter al embrión a altas cantidades de

criopresevante,

El término no equilibrada, se usa para describir la criopreservación por procedimientos en los

cuales las células y los tejidos no están en equilibrio con las altas concentraciones de
crioprotectores permeables y no permeables, antes de un enfriamiento rápido. Las altas
concentraciones de crioprotectores causan una rápida deshidratación de las células y el
enfriamiento ocurre antes del equilibrio osmótico entre el medio y el embrión. Los procedimientos
de criopreservación no equilibrada, difieren de los procedimientos equilibrados en el logro de una
mayor deshidratación y penetración de los crioprotectores previo al inicio del enfriamiento,
logrando este enfriamiento en un solo paso. Los procedimientos no equilibrados de
criopreservación poseen dos variantes: la criopreservación rápida y la vitrificación, dependiendo si
forma o no hielo en la solución durante la criopreservación ( Ochoa,2011).

Cambio de volumen del embrión iniciado el proceso de descongelado

Fuente: (CÓRDOBA, 2010).

Método de criopreservacion ventajas desventajas

Equilibrado Mantiene al embrión en
condiciones adecuadas
procurando causar el menor
estrés y conservando la
viabilidad.
No equilibrado es relativamente rápido pues
se realiza en un solo paso
Corto periodo de
descongelación, y cuidado
para conservar la viabilidad.
Provoca un estrés en el
ovocito

BIBLIOGRAFÍA

Cordoba. 2010. CRIOPRESERVACION DE EMBRIONES BOVINOS.recuperado de.

http://dspace.ucuenca.edu.ec/bitstream/123456789/3055/1/mv179.pdf

Ochoa.2001. TÉCNICAS PARA LA CRIOPRESERVACIÓN DE EMBRIONES BOVINOS.recuperado de:

http://www.iracbiogen.com.ar/admin/biblioteca/documentos/Monografia_criopreservacion_de_
embriones_BELASCOAIN_DIAZ_y_HUTER.pdf