Proteínas: estructura primaria

Pureza de las proteínas

Se analiza con electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), que determina la presencia del
detergente anionico duodecil sulfato de sodio (SDS) (proporción de 1 cada 2 enlaces).

Electroforesis: separa biomoléculas cargadas

Sager: primero en determinar la secuencia de un polipéptido (insulina) separando enlaces

disulfuro.
Nobel en el 58'.
Uso: tripsina / quimiotripsina / pepsina
Reactivo de sager: 1-floruro, -2,-4 dinitrobenceno.

Edman: marcar de manera selectiva el residuo amino terminal de un peptido

 Reactivo de Edman: fenilisotiocianato --> residuo: feniltiohidantoina (PTH)

 Se usa para secuenciar varios residuos de un peptido
 Gracias a que son demasiados tienen que separarse un poco antes de usar estas
reacciones
 Al final de la division, los peptidos se purifican por medio de HPLC (hig presure liquid
cromatography) de fase reversa y se secuencian
 Dan caracteristicas postraduccionales
Método hibrido

Edman + PCR (reaccion en cadena de polimerasa)

Sirve para secuenciar DNA

Espectrometría de masas

 Mejor que las anteriores para secuenciar

 Similar a las anteriores (modificación postraduccional de proteínas mediante adición o
deleción de grupos funcionales, carbono, etc.) añade y sustrae elementos de masas
específicos, DISTINGUIENDO MOLECULAS CON BASE A SU MASA
 Logra detectar cambios en las proteínas a lo largo de la vida celular

 Método: se evapora al vacío, se protona (se carga positivamente), se envían cationes por
impulso en un campo magnético, desviándolo y enfocándolo en un receptor, y se registra
la fuerza magnética necesaria para desviar la vía de cada ion al detector (para iones de
carga idéntica es proporcional a su masa)

 Las proteínas al ser muy grandes para electrometriometros convencionales se usan otros
métodos para volatizarlos: ionización por electroaerosol y desorción e ionización mediante
laser asistidas con matriz (MALDI)
Espectrometría en tándem

 Son dos espectrómetros

 Para cadenas más complejas y sin purificación previa
 El primero separa péptidos según sus diferencias de masa y ajustando la fuerza de su
campo un péptido puede dirigirse al segundo espectrómetro donde se fragmenta y se
determina su masa
 Permite detectar anormalidades metabólicas en muestras de sangre de recién nacidos
(trastornos genéticos como fenilcetonuria / encefalopatía / acidemia glutarica tipo 1)

Genómica

 Con este es más fácil

 Simple: con la secuencia de DNA y RNA encuentras la codificación de la mayoría de las
proteínas producibles por el organismo