PROYECTO COMFIE

Karol Lancheros Conde

Margarita Mondragón
Cesar Castañeda
Mauricio Moreno

Obtención de Bioetanol a Partir de Cáscaras de Naranja

Tratamiento de las muestras.
1. Se revisa que las cascaras estén en buen estado y se procede a lavarlas con agua
de la llave
2. Se procede a reducir su tamaño con cuchillos y tablas
3. Se secan en un horno y se determina su humedad
4. Se muelen o maceran
5. Se cuantifican los azucares reductores y totales
6. Se degrada la lignina
7. Se realiza hidrólisis ácida
8. Se cuantifican los azucares reductores de los jarabes
9. Se fermentan los jarabes obtenidos
10. Se realiza destilación para obtener el bioetanol y se cuantifica

Determinación de materia seca y humedad en cáscaras de naranja.

1. Materiales:
- Horno de convección forzada
- Cascaras de naranja frescas
- Balanza analítica
- Espátula
- Recipientes de secado

2. Procedimiento
- Las cascaras de naranja se reducen a un tamaño menor utilizando cuchillos
- Pesar entre 20 y 25g de muestra
- Colocar en el horno a una temperatura de 45°C, durante 48 horas
- Dejar en desecador, hasta temperatura ambiente
- Pesar en la balanza analítica

Determinación cuantitativa de azucares reductores y totales en cáscaras de

naranja (método de Lane y Eynon).
1. Reactivos:
- Solución de Fehling A (34,639 g de CuSO4◦5H2O en 500 ml de agua)
- Solución de Fehling B (173 g de tartrato de sodio y potasio, y NaOH en 500 ml
de agua)
- Azul de metileno (1%)
- Solución patrón de glucosa al 1%
 - Solución diluida de glucosa (50 mg/ml), preparada a partir de la solución patrón
de glucosa (1%)
- Solución de acetato básico de plomo al 30%
- Oxalato de sodio o potasio en polvo
- Solución de HCl 1:1
- Solución de NaOH 6 N.
- Solución de Etanol al 80%

2. Materiales:
- Bureta
- Pipetas graduadas de varios volúmenes
- Pipetas aforadas de varios volúmenes
- Erlenmeyers de 250mL
- Balones aforados de 100mL y 250mL
- Beakers de 100mL
- Embudo de vidrio
- Probetas de varios vólumenes
- Papel filtro
- Agitador de vidrio
- Plancha de calentamiento
- Espátula
- Potenciómetro
- Balanza analítica
- Cascaras de naranja secadas y molidas

3. Procedimiento:
Estandarización de la solución de Fehling
- Agregar la solución diluida de glucosa en una bureta.
- Agregar en un Erlenmeyer de 250 mL, 5 ml de solución de Fehling A y 5 ml de
solución de Fehling B.
- Añadir 2 o 3 gotas de solución de azul de metileno.
- Diluir con aproximadamente 20 ml de agua destilada y agregar perlas de vidrio.
- Llevar a ebullición el Erlenmeyer y agregar lentamente la solución de glucosa,
sin dejar de calentar, hasta que desaparezca la coloración azul. En el momento
en que desaparece el color del indicador, en los bordes del fondo del
Erlenmeyer se puede observar cierto tono rojizo (esto indica el punto final de la
titulación.
Preparación de la solución clarificada de azúcares
- Pesar una cantidad de muestra seca, tal que en la solución final clarificada, la
concentración de azúcares reductores sea de 2 a 5 mg/ml (para gastar entre 10
y 25 ml de dicha solución por cada 10 ml de solución de Fehling).
- Homogeneizar la muestra con 50 ml de etanol al 80% (v/v) y traspasar
cuantitativamente a un balón aforado de 250 ml; aforar con etanol (80%),
mezclar bien y filtrar.
 - Tomar una alícuota de 25 ml de la solución filtrada y colocarla en un balón
aforado de 250 ml.
- Diluir con 50 ml de agua destilada y añadir unos pocos mililitros de solución de
acetato de plomo (30%), hasta lograr la precipitación completa, mezclar bien y
filtrar.
- Agregar al filtrado, oxalato en polvo en pequeñas porciones, hasta eliminar el
exceso de acetato de plomo. Mezclar y filtrar descartando los primeros mililitros.
El filtrado debe quedar perfectamente transparente.
Determinación de azúcares reductores (originalmente presentes)
- Tomar una alícuota de 25 ml, colocarla en un balón aforado de 100 ml, llenar
hasta aforo con agua, mezclar bien y colocar la solución en una bureta.
- Agregar en un Erlenmeyer de 250 ml, 5 ml de solución de Fehling A y 5 ml de
solución de Fehling B.
- Añadir 2 o 3 gotas de solución de azul de metileno.
- Diluir con aproximadamente 20 ml de agua destilada y agregar perlas de vidrio.
- Llevar a ebullición la solución de Fehling y proceder igual a como se hizo
durante la estandarización de la solución de Fehling.
Determinación de azúcares totales
- En un vaso de precipitados de 100 ml, agregar una alícuota de 25 ml de
solución clarificada.
- Agregar 5 ml de solución de HCl (1:1) y calentar a 70 °C durante 5 minutos.
- Enfriar a temperatura ambiente y con ayuda de un potenciómetro llevar a pH 8,2
utilizando una solución de NaOH 6N.
- Una vez alcanzado el pH indicado, pasar la solución cuantitativamente a un
balón aforado de 100 ml, aforar con agua, mezclar bien y colocar la solución en
una bureta.
- Colocar en un Erlenmeyer de 250 ml, 5 ml de solución de Fehling A y 5 ml de
solución de Fehling B.
- Añadir 2 o 3 gotas de solución de azul de metileno.
- Diluir con aproximadamente 20 ml de agua destilada y agregar perlas de vidrio.
- Llevar a ebullición la solución de Fehling y proceder igual a como se hizo
durante la estandarización de la solución de Fehling.
- Los azúcares no reductores son calculados restando al contenido de azúcares
totales, el contenido de azúcares reductores.

Deslignificación de las cáscaras de naranja.

1. Reactivos:
- Solución NaOH 0.1N
- Sulfato de calcio

2. Materiales:
- Embudo de vidrio
- Papel filtro
 - Beakers de 100mL

3. Procedimiento
- Se sumergen las cáscaras molidas en una solución de NaOH 0.1N
- Dejar reposar durante 15 minutos
- Agregar CaSO4 (sulfato de calcio)
- Dejar reposar durante 3 horas
- Filtrar la solución obtenida y desechar el líquido

Hidrólisis ácida en las cáscaras de naranja.

1. Reactivos:
- Solución ácido sulfúrico 5%

2. Materiales:
- Autoclave
- Tamiz
- Cascaras molidas
- Centrifuga

3. Procedimiento
- Se agregan 50ml de H2SO4 al 5%, por cada 100g de cascaras molidas
- Se lleva a un autoclave a una temperatura de 100°C y 15 psi durante 15
minutos
- Los jarabes obtenidos se separan por centrifugación

Determinación de Azucares reductores en los jarabes obtenidos en las

cáscaras de naranja (método Miller).
1. Reactivos:
- Acido 3,5 dinitrosalicílico
- Tartrato de sodio y potasio
- Hidróxido de potasio

2. Materiales:
- Balón aforado de 50ml
- Vidrios reloj
- Beakers de 50ml
- Embudo de vidrio
- Papel filtro
- Balones aforados de 10ml
- Espectrofotómetro
- Baño maría

3. Procedimiento
- Pesar 0.5g de ácido 3,5 dinitrosalicílico , 15g de tartrato de sodio y potasio y
0,8g de NaOH
- Disolver el NaOH en 20ml de agua destilada y agregar el tartrato de sodio y
potasio
 - Completar hasta 40ml con agua destilada y agregar el ácido 3,5 dinitrosalicílico,
agitar, aforar a 50ml y filtrar (reactivo DNS)
- Almacenar las solución en un frasco ambar y refrigerar a 4°C
- Preparar soluciones de 200-1000 mg/L, utilizando glucosa como estándar
- Tomar 0,5 ml de las diferentes soluciones y 0,5 ml del reactivo DNS
- Agregar en un balón aforado de 10ml y aforar con agua destilada
- Poner el balón aforado en baño maría a 100°C durante 5 minutos y enfriar
- Leer cada solución en el espectrofotómetro a 540nm y construir curva de
calibración
- Realizar el mismo procedimiento para cuantificar el jarabe obtenido

Fermentación de los azucares obtenidos.

1. Reactivos:
- Solución NaOH 5N
- Fosfato de amonio 25%
- Levadura comercial

2. Materiales:
- Potenciómetro
- Equipo de fermentación anaerobio

3. Procedimiento
- Ajustar el pH del jarabe obtenido entre 4,5 - 5,0 con NaOH 5N
- Como nutriente se utiliza (NH4)3PO4 al 25%
- Inocular con 0,1% de levadura activa seca comercial
- Fermentar anaeróbicamente a 30°c y 20rpm durante 38 horas
- Controlar el pH y la temperatura durante este tiempo

Destilación del Bioetanol obtenido y cuantificación.

1. Materiales:
- Equipo de destilación Flash
- Picnómetro
- Alcoholímetro

2. Procedimiento
- La unidad de destilación opera vaporizando una porción del líquido de forma
instantánea el cual es condensado sin que exista reflujo en la torre de
destilación.
- Toda la operación de destilación se realiza a 2 psi y 102°C para la primera parte
y 1psi y 101°C para la segunda parte.
- La primera parte consiste en destilar la mezcla inicial obtenida después de la
fermentación y la segunda parte consiste en destilar la mezcla resultante de la
primera destilación con el fin de aumentar la concentración de alcohol en la
mezcla
- Medir la densidad del bioetanol por picnometría y alcoholimetría y comparar los
datos.