EL POTENCIAL DE LAS BACTERIAS HALOFILICAS Y HALOTOLERANTES PARA LA PRODUCCION DE ENZIMAS

ANTINEOPLASTICAS: L-ASPARAGINASA Y L-GLUTAMINASA

La L-asparaginasa y la L-glutaminasa pueden usarse eficazmente para el tratamiento de pacientes que padecen leucemia
linfoblástica aguda y células tumorales. Las fuentes microbianas son la mejor fuente para la producción a granel de estas
enzimas. Sin embargo, su administración a largo plazo puede causar respuestas inmunológicas, por lo que se requiere el
cribado de nuevas enzimas con nuevas propiedades. Las bacterias halófilas y halotolerantes con nuevas características
enzimáticas se pueden considerar como una fuente potencial para la producción de enzimas con diferentes propiedades
inmunológicas. En este estudio, se estudió la producción de L-asparaginasa y L-glutaminasa por bacterias halófilas aisladas
del lago salado de Urmia. De las 85 cepas bacterianas halófilas y halotolerantes aisladas, 16 (19%) mostraron actividad L-
asparaginasa y 3 cepas (3,5%) mostraron actividad L-glutaminasa. Las cepas con las actividades más altas se seleccionaron
para estudios posteriores. En base al análisis de secuencia de 16S rDNA, se demostró que los aislados seleccionados para
la producción de L-asparaginasa y L-glutaminasa pertenecen al género Bacillus y Salicola, respectivamente. Ambas enzimas
se produjeron extracelularmente. La cepa con la mayor producción de L-asparaginasa no mostró producción de L-
glutaminasa que es médicamente importante. Los efectos de los parámetros clave que incluyen la temperatura, el pH
inicial de la solución y las concentraciones de glucosa, asparagina o glutamina y cloruro de sodio se evaluaron mediante la
metodología de superficie de respuesta (RSM) para optimizar la producción de enzimas. En las condiciones óptimas
obtenidas, la producción de L-asparaginasa y L-glutaminasa se incrementó hasta 1,5 (61,7 unidades / ml) y 2,6 veces (46,4
unidades / ml), respectivamente.
auxótrofos para la glutamina debido a su conjunto
1. INTRODUCCIÓN enzimático incompleto. Por lo tanto, las enzimas que
Durante muchos años, la terapia contra el cáncer se ha agotan la glutamina pueden ser útiles contra ciertos
basado fundamentalmente en agentes antiproliferativos tumores. Además de la síntesis de proteínas, se requiere
como los productos químicos de bajo peso molecular y la glutamina para la síntesis de ADN (Roberts et al., 2001). La
radioterapia. El primero actúa matando rápidamente a las L-glutaminasa se usa en el tratamiento del cáncer (Roberts
células reproductoras. Sin embargo, la aplicación de et al., 1970, 2001) y VIH (Schmid y Roberts, 1974). El uso
radioterapia se limita al tratamiento de tumores sólidos en médico de las enzimas terapéuticas está limitado debido a
ausencia de metástasis. Por lo tanto, existe una importante las respuestas inmunológicas en su administración a largo
necesidad de tratamientos con mayor especificidad en la plazo; por lo tanto, se requieren nuevas enzimas con
terapia del cáncer (Pasut et al., 2008). nuevas propiedades inmunológicas (Howard y Carpenter,
La alta afinidad, la especificidad y la eficacia catalítica son 1972; Kidd, 1953; Sarquis et al., 2004). Las bacterias
las características importantes de las enzimas que las halofílicas y halotolerantes han demostrado un gran
distinguen de todos los demás tipos de drogas. Las enzimas potencial en la producción de enzimas con características
terapéuticas (tanto digestivas como metabólicas) se novedosas en el detergente (Izotova et al., 1983), cocción
pueden usar médicamente para el tratamiento de diversas (Coronado et al., 2000), lácteos (Müller-Santos et al., 2009),
enfermedades como el cáncer, la fibrosis quística, la y las industrias del cuero (Vidyasagar et al., 2006); sin
inflamación y los trastornos digestivos (Kaur y Sekhon, embargo, hay pocos informes sobre sus enzimas como
2012; Vellard, 2003). Diversas enzimas terapéuticas como agentes terapéuticos.
L-asparaginasa, Larginasa, L-tirosinasa, L-glutaminasa, α- y El objetivo de este trabajo fue estudiar el potencial de este
β-glucosidasa y β-galactosidasa se han usado en grupo de bacterias para la producción de enzimas
tratamientos contra el cáncer (Bar, 1970). Las fuentes de terapéuticas. Se realizó un ensayo cuantitativo con el
estas enzimas incluyen animales, plantas, bacterias y objetivo de seleccionar bacterias con producción eficiente
hongos (Bar, 1970; Sabu et al., 2000). de L-asparaginasa y L-glutaminasa. Las cepas seleccionadas
Ciertas células tumorales y linfoblastos leucémicos se caracterizaron por una descripción fenotípica y un
requieren una fuente externa de L-asparagina para el análisis filogenético basado en las comparaciones de
crecimiento y la multiplicación ya que carecen o tienen un secuencias de ADNr 16S. Después de las pruebas de
nivel muy bajo de asparagina sintetasa, una enzima selección preliminares para mostrar los factores
normalmente expresada en células sanas (Gulati et al., ambientales más efectivos en la producción de enzimas, se
1997; Kidd, 1953; Pasut et al. ., 2008). Por lo tanto, la aplicó la metodología de superficie de respuesta (RSM)
asparaginasa (L-asparagineamidohidrolasa, EC3.5.1.1), la para optimizar las condiciones de rendimiento máximo.
enzima que cataliza la hidrólisis de L-asparagina en ácido
laspártico y amoníaco, puede matar selectivamente las 2. MATERIALES Y MÉTODOS
células tumorales que dependen de la asparagina
suministrada por el suero para la supervivencia (Gulati et 2.1 Productos químicos
al. al., 1997). El potencial de la asparaginasa en el L-asparagina, L-glutamina, rojo de fenol, azul de bromotimol y
tratamiento del cáncer se informó por primera vez en 1953 glucosa se adquirieron en Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EE. UU.). Taq
ADN polimerasa y dNTP se obtuvieron de Fermentas (Burlington,
(Kidd, 1953). En la actualidad, la L-asparaginasa de E. coli y
Canadá) y Stratagene (La Jolla, EE. UU.), Respectivamente. Los kits de
Erwinia sp. se usa como agente antitumoral y biología molecular fueron de Fermentas (Burlington, Canadá). Los
antileucémico (Gulati et al., 1997; Peterson y Ciegler, cebadores fueron suministrados por Alpha DNA (Montreal, Canadá).
1969). Como se encuentra para otros aminoácidos Todos los demás productos químicos se obtuvieron de Merck
comúnmente no esenciales, algunos tumores son
(Darmstadt, Alemania). Todos los productos químicos eran de pureza reactivo de Nessler se preparó añadiendo 45,5 g de HgI2 y
analítica. 35,0 g de KI a 1 litro de agua destilada que contenía 112 g
de KOH. Se añadieron 0,5 ml de reactivo de Nessler al
2.2 Muestreo y condiciones de cultivo sobrenadante y se determinó la absorbancia a 505 nm
Se recogieron muestras de agua en tubos de recolección estériles de
usando un espectrofotómetro Perkin Elmer lambda 25 UV /
diferentes partes del lago salado de Urmia. Las muestras se
cultivaron en medio de agar nutritivo salino que contenía NaCl (81 g / VIS. Una unidad (U) de actividad enzimática se define como
l), MgSO4.7H2O (9.7 g / l), MgCl2.H2O (7.0 g / l), CaCl2 (3.6 g / l) y KCl la cantidad de enzima que cataliza la formación de 1 μmol
(2.0 g / l). El pH se ajustó a 7.0. Los cultivos se incubaron a 37 ° C de amoníaco en 1 minuto en las condiciones del ensayo. Se
durante 72 horas. Las cepas aisladas se purificaron mediante una usaron diferentes concentraciones de sulfato de amonio
técnica de estriado de placa sobre agar nutritivo suplementado con ((NH4) 2SO4) como patrones.
las sales mencionadas.
2.6 Optimización de la producción de enzimas
2.3 Producción de L-asparaginasa y L-glutaminasa
El cribado de la producción de L-asparaginasa y
Método de un Factor a la vez
Lglutaminasa se realizó mediante el método de ensayo de
Se utilizó un conjunto de diferentes condiciones de cultivo
placa rápida (Gulati et al., 1997). Medio M-9 modificado
para determinar los factores con un efecto significativo en
que contiene: Na2HPO4.2H2O, 6.0 g; KH2PO4, 3,0 g; NaCl,
la producción de enzimas. En este conjunto de
20,5 g; L-asparagina o L-glutamina, 5,0 g; MgSO4.7H2O, 0.5
experimentos, el nivel de cada factor se modificó, mientras
g; CaCl2.2H2O, 0.15 g; Se prepararon glucosa, 2,0 gy agar,
que el resto de los factores experimentales permanecieron
15,0 g en 1000 ml de agua destilada (pH 7,0). Se añadieron
constantes. En este caso, se prepararon diferentes medios
2,5 ml de solución madre al 3% (p / v) de azul de fenol o
de producción variando la concentración de carbono,
azul de bromotimol en etanol al medio como indicador de
nitrógeno y fuentes de sal en los medios de cultivo. El
pH. Las muestras se incubaron a 37 ° C durante 48 horas. El
efecto del pH (4,0 a 8,0), la aireación y la temperatura de
cambio de color del indicador apareció alrededor de las
incubación (28 a 42 ° C) también se estudiaron.
colonias bacterianas después de 24 y 48 horas se utilizaron
como un signo de producción de L-asparaginasa o
Metodología de superficie de respuesta (RSM)
Lglutaminasa.
En base a los resultados obtenidos en experimentos
previamente explicados, se aplicó RSM para optimizar la
2.4 Identificación de los aislamientos
condición de producción de enzimas y estimar la influencia
La caracterización morfológica y fisiológica de los aislados
de las variables seleccionadas. Todos los experimentos se
seleccionados se realizó en caldo nutritivo que contenía
realizaron por triplicado y los resultados fueron analizados
NaCl al 5% (p / v) y se analizaron según lo descrito por
por el software Design Expert (versión 7.0, Stat-Ease, Inc.,
Smibert y Krieg (1994). El ADN genómico de las dos cepas
Minneapolis, MN). Las condiciones para la producción de
seleccionadas se extrajo con el kit de extracción de ADN
enzimas se optimizaron utilizando un diseño central
Fermentas, siguiendo el procedimiento recomendado por
compuesto de caras (CCD). Además, la precisión del
el fabricante. Los genes 16S rDNA se amplificaron
modelo se verificó comparando las predicciones del
utilizando cebadores universales 27F (5'-
modelo con los datos experimentales que no se incluyeron
AGAGTTTGATYMTGGCTCAG-3') y 1492R (5'-
en la estimación del modelo. Los valores óptimos de las
AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3'). Las condiciones de la
variables elegidas se obtuvieron calculando la ecuación de
reacción de PCR incluyeron la desnaturalización inicial a 94
regresión, además de analizar los diagramas de contorno
° C durante 5 min, 35 ciclos incluyendo 94 ° C durante 30 s,
de la superficie de respuesta.
57 ° C durante 1 min, 72 ° C durante 100 sy la extensión
final a 72 ° C durante 15 min. Los productos de PCR
3. RESULTADOS
purificados se secuenciaron en ambas direcciones usando
Al ser intrínsecamente estables y activos a altas
un secuenciador automático de Macrogen (Corea). Las
concentraciones de sal, las enzimas halófilas y
búsquedas de similitud de secuencia se realizaron
halotolerantes ofrecen importantes oportunidades en
utilizando el programa BLAST, disponible en el Centro
aplicaciones biotecnológicas, como procesamiento de
Nacional de Información Biotecnológica (NCBI).
alimentos, biorremediación y procesos biosintéticos. Por lo
tanto, el descubrimiento de nuevas enzimas que muestran
2.5 Ensayo enzimático
actividades óptimas en diversos intervalos de
La actividad de la enzima se determinó por nesslerization
concentraciones de sal, temperaturas y valores de pH es de
para ambas enzimas (Gulati et al., 1997, Roberts et al.,
gran importancia. En la presente investigación, hemos
2001). Las cepas aisladas se inocularon en medio de caldo
estudiado el potencial de las bacterias halófilas y
M-9 modificado a 37 ° C durante 24 horas. La enzima cruda
halotolerantes para la producción de l-asparaginasa y l-
sin células se preparó mediante centrifugación a 5000 xg
glutaminasa como enzimas antineoplásicas. Se aislaron un
durante 20 minutos. Se mezclaron 0,5 ml de sobrenadante,
total de 85 cepas bacterianas halotolerantes de muestras
1,0 ml de tampón de acetato de sodio 0,1 M (pH 8,5) y 0,5
ambientales (lago Urmia). Se realizaron pruebas fisiológicas
ml de L-asparagina o Lglutamina 0,05 M y se incubaron a 37
primarias para diferenciar las cepas aisladas (Tabla 1). Se
° C durante 10 min. La reacción se detuvo mediante la
demostró que, entre las cepas aisladas, 71 aislados eran
adición de ácido tricloroacético. Las proteínas precipitadas
Gram-positivos y 14 Gram-negativos. Todas las cepas se
se eliminaron por centrifugación (10000 xg durante 20
cribaron para la producción de L-asparaginasa y L-
min). La cantidad de amoniaco en el sobrenadante se
glutaminasa. Se observó que 16 cepas (19%) tienen
determinó por nesslerization y se expresó como U.mL-1. El
actividad L-asparaginasa y solo 3 cepas (3,5%) tienen
actividad L-glutaminasa. Todos los productores de L-
glutaminasa y 13 de los productores de L-asparaginasa
fueron Gram-positivos. Las mediciones cuantitativas de la
actividad enzimática se realizaron en medios de caldo para
encontrar las bacterias eficientes (Tabla 1). Los resultados
indicaron que las cepas con la mayor actividad de L-
asparaginasa, a saber, gA5, gb2 y MB10 no tienen actividad
Lglutaminasa.
Las cepas gA5 y F14, respectivamente con la mayor
producción de L-asparaginasa y L-glutaminasa, se
seleccionaron para estudios posteriores. La alineación de
los fragmentos del gen 16S rRNA mostró que las cepas gA5
y F14 tienen un 100% y 99.87% de similitud con Bacillus
aryabhattai y Salicola salis, respectivamente (Figura 1). Las
secuencias del gen 16S rRNA se depositaron en la base de
datos NCBI con los números de acceso GenBank EF114313
y DQ129689.
La comparación de la curva de crecimiento y la producción
de enzimas en aislados seleccionados mostró que ambas
enzimas se produjeron junto con el crecimiento bacteriano
(Figura 2). Al examinar los extractos celulares y los
sobrenadantes de cultivo para determinar la actividad L-
asparaginasa o L-glutaminasa, se demostró que ambas
enzimas se secretaban a los medios de cultivo.
Tabla 1: Características de cepas aisladas con actividad L-
asparaginasa o L-glutaminasa
Figura 1: Árbol filogenético de cepas productoras
seleccionadas
Un árbol filogenético que se une al vecino basado en
secuencias del gen 16S rRNA, que muestra la posición de la
cepa a) gA5, b) F14 y los géneros relacionados. Los números
de acceso de GenBank aparecen entre paréntesis. Los valores
de Bootstrap (%) se basan en 1000 repeticiones.
Figura 2: Correlación entre crecimiento bacteriano y
producción de enzimas. Curva de crecimiento y producción de
enzimas de a) cepa gA5, b) cepa F14. ●: actividad enzimática,
▲: crecimiento bacteriano
Para optimizar la producción de enzimas, primero se
controló la influencia de diferentes factores por el método
de un factor por vez. Se demostró que la temperatura, el
pH, las concentraciones de cloruro sódico, glucosa,
asparagina o glutamina (respectivamente para la
producción de L-asparaginasa y L-glutaminasa) tuvieron
efectos significativos sobre la producción de ambas
enzimas. Fueron seleccionados para una mayor
optimización. Se empleó un diseño compuesto central
(CCD) para maximizar la producción de enzimas y examinar
el efecto combinado de las variables. Se llevaron a cabo un
total de 50 carreras experimentales con diferentes
combinaciones de los cinco factores. La ecuación de
regresión se estimó para probar todos los modelos
polinomiales para ajustarse a los datos CCD. El modelo
cuadrático se mostró como el modelo más apropiado.
Los resultados obtenidos del diseño compuesto central se
ajustaron a una ecuación polinomial de segundo orden
para explicar la dependencia de la producción de enzimas
en los componentes del medio. Para L-asparaginasa:
Actividad = +36.67 - 8.79A + 0.53B - 6.50C + 2.41D + 4.91E -
0.031AB - 0.97AC - 1.09AD - 1.22AE - 0.094BC - 0.094BD -
0.094BE - 1.16CD - 1.28CE - 1.16DE + 0.66A2 - 8.84B2 +
4.66C2 - 9.84D2 - 2.34E2, donde la actividad predicha de la
respuesta de la producción de L-asparaginasa, A, B, C, D y E,
son los valores codificados de temperatura, pH,
concentración de sal, concentración de asparagina y
concentración de glucosa Para L-glutaminasa: Actividad =
+33.91 - 6.21A - 3.44B + 2.12C + 0.85D + 6.38E + 1.47AB -
1.53AC + 0.094AD - 0.97AE - 0.97BC - 0.094BD - 0.41BE -
0.094CD + 0.094 CE + 0.094DE - 5.81A2 - 2.81B2 - 8.31C2 -
2.81D2 + 1.19E2.
A, B, C, D y E son los valores codificados de temperatura,
pH, concentración de sal, concentración de glutamina y
concentración de glucosa.
El análisis de varianza (ANOVA) se utilizó para estudiar
cuantitativamente la significación estadística del modelo y
la contribución de cada factor en la producción de enzimas.
El valor F en un ANOVA muestra la variación debida al
factor seleccionado en relación con la variación causada
por el error experimental. Por lo tanto, cuanto mayor es el
valor de F, más significativo es el término correspondiente
(tablas 2 y 3).
Tabla 2: Análisis de varianza (ANOVA) para el modelo
cuadrático de superficie de respuesta para la producción de L-
asparaginasa
Tabla 3: Análisis de varianza (ANOVA) para el modelo
cuadrático de superficie de respuesta para la producción de L-
glutaminasa
El valor de F de 40.3 o 22.6 sugiere un modelo significativo,
lo que significa que hay solo un 0.001% de posibilidades de
que un modelo con un gran valor de F pueda ser causado
por el ruido. La gráfica de las respuestas experimentales
(producción de enzimas) versus los valores predichos se
extrajeron (datos no mostrados). La bondad de ajuste del
modelo también se verificó mediante el coeficiente de
determinación (R2). En el caso de la L-asparginasa, el valor
de R2 fue de 0,96 y en el caso de la L-glutaminasa fue de
0,94. Los valores de R2 más cercanos a 1 denotan una
mejor correlación entre las respuestas observadas y las
predichas.
Bajo las condiciones óptimas obtenidas para la producción
de L-asparaginasa (28 ° C, pH 6.0, NaCl al 3%, L-asparagina
5.8 g / L y glucosa 5 g / L), se logró una actividad de 61.7 U /
mL que estuvo muy cerca hasta el valor predicho, 62 U /
mL. Se pronosticó que la condición óptima para la
producción de L-glutaminasa estaría en 29.6 ° C, pH 4.1,
8.6% NaCl, 5.8 g / L L-glutamina y 5 g / L glucosa con una
actividad enzimática de 46.4 U / mL. La producción de
enzimas predicha se controló experimentalmente y se
alcanzó el valor de 46 U / ml.
Entre los efectos interactuantes, temperatura-glucosa,
NaCl-Asparagina, NaCl-glucosa y asparagina-glucosa fueron
los significativos en los rangos variables investigados por el
modelo de producción de L-asparaginasa (los valores de p
menores a 0.0500 indican que los términos del modelo son
significativos) . En el modelo de producción de L-
glutaminasa, la temperatura-pH y la temperatura-NaCl
fueron significativas. Para comprender estos efectos, se
generaron los diagramas de contorno tridimensional (3D)
de la combinación de pares de factores significativos para
la producción de enzimas que describieron la respuesta
predicha sobre un rango en la superficie de diseño (Figuras
3 y 4). Se demostró que el aumento de la concentración de
glucosa y la disminución simultánea de la temperatura o la
concentración de NaCl conducen a un aumento en la
producción de asparaginasa (Figuras 3a yc). También se
puede concluir que concentraciones elevadas de
asparagina (hasta 5.8%) cuando se combina con un
aumento en la concentración de glucosa (hasta 5%), mejora
la producción de asparaginasa (Figura 3d) pero sus mayores
cantidades tuvieron un efecto negativo. También se
observó una interacción similar entre las concentraciones
de NaCl y asparagina (Figura 3b). En el caso de la
producción de glutaminasa, podría inferirse que la
disminución tanto del pH como de la temperatura conduce
a un aumento en la producción de enzimas (Figura 4a).
También se demostró que el aumento tanto del NaCl (hasta
aproximadamente el 6%) como de la temperatura (hasta 35
° C) da como resultado un aumento en el rendimiento de
producción de glutaminasa (Figura 4b). En valores más
altos, la mejora en la producción de enzimas fue
insignificante.
Figura 3: combinación sabia de pares de factores significativos
Gráfico de superficie de respuesta que muestra el efecto de
las cuatro variables / factores experimentales sobre la
producción de L-asparaginasa; a) efecto de la temperatura y la
glucosa, b) efecto de NaCl y asparagina, c) efecto de NaCl y
glucosa, d) efecto de la asparagina y la glucosa
Figura 4: combinación sabia de pares de factores significativos
Gráfico de superficie de respuesta que muestra el efecto de
las tres variables / factores experimentales en la producción
de L-glutaminasa; a) efecto de la temperatura y pH, b) efecto
de la temperatura y NaCl.
4. DISCUSIÓN
Uno de los principales factores limitantes para la
administración a largo plazo de las enzimas farmacéuticas
es la inducción de respuestas inmunológicas. Por lo tanto,
es necesario seleccionar enzimas con nuevas propiedades.
Los microorganismos halofílicos están adaptados para
sobrevivir en nichos ecológicos con altas concentraciones
de sal. Estos microorganismos producen biocatalizadores
únicos, pero hay pocos informes que evalúen su potencial
para la producción de enzimas farmacéuticas. L-
asparaginasa y L-glutaminasa son dos de las enzimas clave
para el tratamiento de los linfoblastos leucémicos. En este
estudio, se utilizó el ensayo de placa rápida para el cribado
de cepas bacterianas halófilas con el potencial de
producción de L-asparaginasa o Lglutaminasa. El consumo
de asparagina o glutamina libera amoníaco que aumenta el
pH y cambia el color del indicador de amarillo a rojo (en
rojo fenol) (Gulati et al., 1997) o azul (en azul bromotimol)
(Mahajan et al., 2013). Entre las 85 cepas halófilas
seleccionadas, se eligieron dos de los mejores productores
de enzimas basándose en las mediciones de la actividad
enzimática cuantitativa para estudios posteriores. En
contraste con la L-asparaginasa, la producción de L-
glutaminasa fue un fenómeno raro entre los halófilos
estudiados. Curiosamente, el principal productor de
Lasparaginasa no ha mostrado actividad glutaminasa, que
es una característica muy deseable para la terapia del
cáncer (Pasut et al., 2008). La presencia de impurezas de
glutaminasa puede provocar estrés celular y neurotoxicidad
(Nagarajan et al., 2014). Existen pocos informes sobre la
producción de Lasparaginasa libre de glutaminasa por
microorganismos como Pectobacterium carotovorurm
MTCC 1428 (Kumar et al., 2011), Vibrio succinogenes
(Distasio et al., 1982), Pseudomonous stutzeri (Manna et
al., 1995), Pyrococcus furiosus y sus mutantes MTCC 5580-
5582 (Kundu et al., 2013).
Otra ventaja de las cepas aisladas es su producción
extracelular de las enzimas. La secreción de las enzimas a
los medios de cultivo hace que el procesamiento posterior
sea más fácil y más barato al omitir el paso de interrupción
celular en el proceso de purificación. Además, las bacterias
halófilas y halotolerantes moderadas, a diferencia de las
arqueas halófilas y algunas bacterias extremadamente
halófilas, no acumulan iones inorgánicos (K +, Na +, Cl-) en
su citoplasma para equilibrar la presión osmótica del medio
(Brown, 1976; Nieto y Vargas, 2002). ); por lo que sus
proteínas intracelulares no se especifican para ser estables
y activas en presencia de sales en comparación con las
proteínas extracelulares (Essghaier et al., 2014).
La producción de enzimas se optimizó para ambas cepas
productoras por metodología de superficie de respuesta.
Los valores F grandes en ambos casos indicaron la
importancia de los modelos. Se logró un aumento de 1,5 y
2,6 veces en la producción de asparaginasa y glutaminasa
variando diferentes factores ambientales. La producción de
enzimas predicha fue verificada experimentalmente para
ambas enzimas, lo que indica la consistencia del modelo.
Existen algunos informes sobre la producción de L-
asparaginasa y Lglutaminasa por diferentes cepas
bacterianas, en los que se describieron 32,3, 51,54 y 135 U
/ ml de producción de L-asparaginasa para Streptomyces
ginsengisoli (Deshpande et al., 2014), Bacillus cereus
(Thenmozhi). et al., 2011) y Streptomycetes parvulus
(Rajamanicjam et al., 2011), respectivamente. Sin embargo,
ninguna de las bacterias informadas es halófila o
halotolerante. En el estudio de Ebrahiminezhad et al.
(2011), considerando la producción de L-asparaginasa por
bacterias halófilas y halotolerantes aisladas del lago salado
de Maharloo, Bacillus sp. Se encontró que BCCS 034
producía L-asparaginasa extracelularmente (1,64 UI / ml
sobrenadante).
Iyer y Singhal (2009) reportaron 119 U / mL de producción
de L-glutaminasa por una Providencia sp. tensión. En otro
informe de Dilara y Emine (2014), se obtuvieron 13,75 U /
ml de la producción de enzimas extracelulares mediante la
cepa aislada Hypocrea Jecorina. Hasta donde sabemos,
hasta ahora no hay informes sobre la producción de L-
glutaminasa por bacterias halófilas o halotolerantes. Para
concluir, demostramos que los lagos hipersalinos que están
habitados por una gran variedad de comunidades
microbianas tienen nuevas cepas microbianas con posibles
aplicaciones en diferentes campos biotecnológicos. Con
base en los resultados de los exámenes de detección, se
demostró que las bacterias halófilas y halotolerantes
aisladas del lago salado de Urmia tienen el potencial de
producción de L-asparaginasa y L-glutaminasa. Sin
embargo, se necesitan más estudios para explorar su
potencial como enzimas antineoplásicas.