EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL

“ARVEJA”

Laboratorio de Biotecnología

INFORME

INTRODUCCIÓN

El primer paso en cualquier protocolo de separación es el rompimiento del material inicial, ya sea
de origen viral, bacteriano, vegetal o animal. El método utilizado para romper la célula debe ser tan
leve como sea posible con el fin de causar el menor daño posible al ADN. La lisis celular se puede
hacer por acción mecánica, pulverizando el tejido con hielo seco o nitrógeno líquido, también se
puede utilizar la degradación enzimática de la pared celular (si está presente) y lisis con detergentes
de las membranas celulares. Seguido al rompimiento celular la mayoría de métodos involucran una
desproteinización, lo cual se lleva a cabo con un solvente orgánico, seguido de una precipitación con
isopropanol o etanol y posterior solubilización con agua o tampón.

Existen diferentes técnicas para la extracción del ADN, aunque todas conservan el uso de los mismos
principios y fundamentos.

Para obtener ADN a partir de leucocitos totales (obtenidos de sangre periférica), células en cultivo,
tejidos animales, vegetales, levaduras y bacterias; se usa generalmente una técnica de cuatro pasos
secuenciales:

• El primer paso consiste en la lisis de las células y los núcleos.

• Luego, la separación del ADN a partir de sangre total involucra la lisis de eritrocitos, seguida por
una lisis de leucocitos y de sus núcleos.
• Las proteínas celulares son entonces removidas por un paso de precipitación salina.
• Finalmente el ADN genómico es concentrado por precipitación con isopropanol.

Existen otras técnicas que permiten la obtención de ADN genómico a partir de muestras sólidas y
líquidas, que permiten la separación simple, rápida, segura y eficiente del ADN. Esta separación se
basa en la utilización del isotiocianato de guanidina, como solución de lisis celular, lo cual permite
una precipitación selectiva del ADN con etanol y solubilización en agua o en 8 mM de NaOH. Este
procedimiento se puede realizar en 30 minutos, recobrando un 70% a un 100% del ADN.
 OBJETIVOS

 General

Utilizar las debidas técnicas para la extracción de ADN de un producto vegetal

 Específicos

 Estudiar la acción de detergentes catiónicos y aniónicos sobre la membrana celular

 Realizar la extracción de ADN vegetal a partir de arvejas
 Observar la estructura fibrilar del ADN

MARCO TEÓRICO

El ácido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN, es un ácido nucleico que

contiene instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos
vivos conocidos y algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria. El papel principal de
la molécula de ADN es el almacenamiento a largo plazo de información. Los segmentos de ADN que
llevan esta información genética son llamados genes, pero las otras secuencias de ADN tienen
propósitos estructurales o toman parte en la regulación del uso de esta información genética. Desde
el punto de vista químico, el ADN es un polímero de nucleótidos, es decir, un poli nucleótido o
polímero. Las unidades de éste polímero se le llaman nucleótidos que están formados a su vez de
un azúcar Desoxirribosa, un grupo fosfato y una base nitrogenada (A, G, C y T). En las células
eucariotas se encuentra en los núcleos y en los procariontes está ubicado en el citoplasma.

Las funciones biológicas del ADN incluyen el almacenamiento de información (genes y genoma), la
codificación de proteínas (transcripción y traducción) y su auto duplicación (replicación del ADN)
para asegurar la transmisión de la información a las células hijas durante la división celular. Para
poder estudiar su estructura y función es primordial extraer esta molécula, por tanto, el laboratorio
que se realizara tiene como objetivo obtener ADN de buena calidad

El ADN que se encuentra en los genes es un componente de todas las células. Una vez rotas las
células, todo el material celular queda libre y, en presencia de detergente, se separan los
componentes en base a su solubilidad. El ADN se precipita con alcohol y se separa del resto de los
componentes

OBSERVACIONES

El proceso de extracción del ADN se realizó haciendo una

previa preparación de la muestra (desgranado, descapuchado).
Ésta se somete a una temperatura de -80 y -85°C por 3 minutos,
luego se procede a macerar la muestra y a ser adicionada a un
eppendorf en combinación con el buffer 1 (Tris HCl, EDTA,
Sorbitol, mercaptoetanol, PEG 6000), centrifugamos por 10
minutos a 5000 RXM. A continuación, se elimina el exceso y se
adiciona el buffer 2 (Tris HCl, EDTA, sorbitol, mercaptoetanol,
sodio surkost, NaCl, CTAB), se somete a calentamiento a 60°C
por 10 minutos. Se adiciono alcohol isoamilico, se centrifuga de
nuevo y se adicionan de 2 – 3 vol de isopropanol a -20°C para precipitar el ADN. Se adicionó 300 µl
de TE para preservar el ADN.

Se realizó una posterior lectura a 260-280 nm obteniendo como resultado 0,823 y 0,547
respectivamente. De esta manera podemos determinar la pureza del ADN obteniendo un valor de
1,504.

CONCLUSIONES

En el gel de PCR no se evidencia ninguna banda (evidenciado en electroforesis) con lo cual se

concluye que no hubo una adecuada replicación de fragmento del ADN.

El valor obtenido de la relación de pureza 1,5 nos indica que en dicha extracción existe compuestos
aromáticos, debido a que el rango de pureza optima es de 1,8 – 2.

BIBLIOGRAFÍA

Jorge Cordero Azabache. Extracción del ADN Animal. Bioquímica. Universidad Continental. 2015.

Extracción de ADN de tejidos vegetales. Experimento.

Manual del laboratorio de biotecnología. Universidad Nacional.