Cepas

DEPARTAMNENTO SALUD AMBIENTAL
Cepas: Material de referencia,

manejo y aplicaciones en el área de
microbiología
Fabiola Rojas C.
Microbiología Metrológica
Sección Metrología Ambiental y Alimentos
Instituto de Salud Pública de Chile

Algo de historia ……
Microbiología
• Ciencia que estudia los MO, su biología, ecología y relaciones.
• Mucho antes que se descubriera el mundo de los MO , el hombre ya intuía la

existencia de «animales» o «miasmas» y sus efectos beneficiosos o
devastadores.
• Los antiguos hebreos tomaban medidas profilácticas para evitar la propagación

de enfermedades que incluían por ejemplo aislamiento, evitar comer ciertos
alimentos, costumbres higiénico-religiosas .
Instituto de Salud Pública de Chile 2

Microbiología
• Fue sólo hasta 1676 cuando Leeuwanhoek comerciante que dedicaba parte de
su tiempo para pulir lentes, desarrollo un microscopio primitivo con el cual logro
observar y describir unas pequeñas estructuras que llamó animalucos, lo cual en
ese momento creó un conflicto entre los partidarios de la generación espontánea
y los partidarios de el origen de la vida a partir de organismos vivos.
• A fines del siglo XIX tuvo su desarrollo con el avance de conocimientos y

desarrollo de técnicas microscópicas.

Microbiología
• Con el transcurrir del tiempo y con las investigaciones de Redi, Spallauzani,

Lavoisier entre otros, hasta llegar a 1861 en donde Louis Pasteur logró
demostrar que en el aire había estructuras similares a las encontradas en el
material en descomposición.
• La microbiología en la actualidad es una ciencia especializada y exacta que con

el tiempo se ha hecho indispensable para la industria y para la calidad de
nuestra vida.


Historia de la microbiología:
• Era de la Microbiología General y Médica

(1680-1940)
• Era de la Microbiología General y Biología

Molecular (1941-1985)
• Era de la Microbiología Molecular, Genómica y

Proteómica (1986- )

Relación de la Microbiología con otras ciencias
Química Biología Matemáticas
Físico química
Física
Farmacia Medicina
Microbiología
Genética Bioquímica
Biología molecular Ecología
Biotecnología Alimentos

Actualmente
Microbiología:
Los microorganismos han sido los primeros en aparecer en la evolución, y

constituyen seguramente la mayor parte de la biomasa de nuestro
planeta.
Dentro de los organismos de estudio se encuentran las bacterias, virus,

protozoos, hongos microscópicos y también se ha incorporado el estudio de
los priones, que no son microorganismos, sino que proteínas que causan
diversas patologías y que, por lo tanto, son motivo de estudio.

Actualmente
Microbiología:
Actualmente se disponen de herramientas tecnológicas para la investigación y la

búsqueda de información que permita integrar las áreas del conocimiento referidas a la
identificación, autenticación, perfil de comportamiento y estudio de los factores internos
y externos de los MO.
Globalmente es aceptado que materiales de referencia son necesarios

para asegurar la confiabilidad de los resultados
Disponer de procedimientos para la selección, adquisición, recepción, registro,

almacenamiento y utilización de los materiales de referencia, del mismo modo que
para el resto de reactivos y materiales consumibles utilizados en los ensayos y
calibraciones.

Características MO
Patogenicidad
(genera
enfermedad)
Invasión Contagiosidad
(cap. de (capacidad
diseminar ) propagación)
Agente
(cepa)
Virulencia
Infectividad
(cap. de
(proporción de
provocar daño
expuestos)
o muerte)

Aplicaciones

Aplicaciones Moleculares
Estudios
Factores de genotípicos
virulencia
Desarrollo
Genómica Secuenciación
marcadores
Comparativa
moleculares
ADN/Genoma Toxinotipado
Estudio gen Estudio vía Ribotipificación

funcional metabólica
Origen y
evolución de
patógenos

Terminología
MATERIAL DE REFERENCIA:
• Material o substancia, en la cual uno o más valores de sus propiedades

especificadas son suficientemente estables y homogéneas y están
claramente establecidos como para poder ser utilizados en la calibración,
evaluación de un método de medida o la asignación de valores a
materiales.
[Guía ISO 30 Términos y definiciones utilizados en relación con los materiales de referencia

Terminología
MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO:
Caracterizado por un procedimiento metrológicamente válido para una o

más propiedades específicas, acompañado de un certificado que proporciona
el valor de la propiedad especificada, su incertidumbre asociada, y una
declaración de trazabilidad metrológica.
[Guía ISO 30 Términos y definiciones utilizados en relación con los materiales de referencia].

NOTAS
La trazabilidad puede estar relacionada

Cuando esto no se puede lograr, el
con determinadas referencias de
productor material de referencia debe
estándares de medición (generalmente
proporcionar evidencia satisfactoria de la
estándares de medidas nacionales o
correlación de los resultados con otros
internacionales) a través de una cadena
valores indicados, ya sea por la evaluación
ininterrumpida de comparaciones, con
exhaustiva del proceso de medición o por la
todas las incertidumbres declaradas, el
productor de materiales de referencia y correlación con materiales de referencia
sus colaboradores deberán proporcionar certificados nacionales o internacionales
la evidencia documental de la trazabilidad conocidos y aceptados.

de estas las mediciones.

Terminología
Cepa: células descienden de un único aislamiento de un cultivo puro, por lo general a

partir de una sola colonia, aunque no necesariamente de una sola célula (es decir, no
necesariamente un clon).
Caracterización: el proceso de someter

una cepa a una serie pruebas
Autenticación: proceso de comparación
morfológicas, fisiológicas, moleculares y /
de las características de una cepa para la
otras. La datos derivados se pueden
descripción de la especie para determinar o
utilizar para describir la cepa y
verificar la identidad.
objetivamente compararla con otras
cepas.
Cultivo: población de células en un lugar y tiempo establecido.

Terminología
Caracterización
Identificación Fenotípica
Identificación Molecular
Identificación Fenotípica macro-microscópica :

Morfología, fisiología y bioquímica
tamaño, pigmentación, aspecto, comportamiento tinciones,
características desarrollo ( O2, temperatura, tiempo), actividad
frente AB, etc.
Identificación Molecular:
Análisis 16S rRNA ( PCR)
Secuenciación ADN, (técnicas químicas, enzimáticas, masivas)
whole genome, Hierarchical shotgun sequencing, (ambas por
fragmentación aleatoria), next generation sequencing (NGS),

Terminología
Taxonomía (Nomenclatura de clasificación)

- Fenética (fenotipo)
- Numérica (agrupación por semejanza)
- Filogenética ( basado en relaciones evolutivas)
Características utilizadas en Taxonomía

1.- Clásica: Morfología ,Fisiología, Ecología, Análisis genético ( cap.
Transferencia)
2.-Moleculares: Secuencia aa, Movilidad electroforética,
Hibridación AN , Comparación AN, Secuenciación AN
Principales taxones
Dominio, Reino, Filo o división, Clase, Orden, Familia, Género,
Especia, Morfovar, Biovar, Serovar, Fagovar, Patovar (propiedades)

Una nueva organización con nuevas
géneros y especies, han dado lugar a
una reclasificación taxonómica
abarcando la diversidad total a partir
de secuenciación genómica.
La imagen muestra una representación

artística del nuevo árbol filogenético.

Terminología
Cultivo maestro: es el
obtenido directamente
Cultivo puro: cultivo a partir
del cultivo de colección y
de un solo organismo.
sirve para preparar los
cultivos de reservas
usados internamente.
Cepa control de calidad: una

Pasaje: transferencia de organismos
cepa previamente determinada
a partir de un cultivo viable a un
para cumplir el criterio de
medio fresco con crecimiento del MO.
desempeño de una prueba en
(Subcultivo).
particular.
Cultivos en crecimiento activo están
sujetos a cambios genéticos, pérdida
accidental, contaminación, error humano al
transferir y etiquetar, selección de líneas
mutantes.

Terminología
Cepas de referencia: Microorganismos obtenido de una colección

nacional o internacional reconocida.
Cepa de reserva: Cepas Cepas de trabajo:

obtenidas a partir del cultivo Subcultivos de
de una cepa de referencia microorganismos obtenidos a
preparada y conservada por un partir de las cepas de reserva
laboratorio. para ser utilizados en los
ensayos que lo precisen.

Cepa de ESQUEMA DE TRABAJO
referencia
Reconstitución
Pasaje
Cultivo Subcultivo Pureza- Autenticidad

maestro viabilidad
Caracterización
Cepa reserva
Pasaje
Cepa de
trabajo
22
Cepas de Referencia
Adquisición cepas de referencia:
•Obtención directa a partir de una colección nacional o

internacional
NOTA: Los proveedores comerciales certificados por ISO 9001 comercializan

repiques de cepas de referencia adquiridas en una colección reconocida,
generalmente del 3er o 4° repique, las que sólo se pueden utilizar como cepas de
trabajo.
Las cepas de referencia pueden incluir:

• Cepas positivas robustas con características típicas,
• cepas positivas con crecimiento débil,
• cepas bioquímicamente no reactivas (Ej.: aquellas que
muestran diferentes reacciones de fermentación o
fluorescencia) y
• cepas completamente inhibidas.

Cepas de Referencia.
Las cepas de referencia pueden obtenerse de

organismos de colección como por ejemplo:
CAB International Mycological American Type Culture

Institute (CMICC) Collection (ATCC).
(Colección Americana de
cultivos tipo)
National Collection of National Collection of Type

Pathogenic Fungi (NCPF) Cultures (NCTC) .
Colección Nacional de Colección Nacional de
Hongos Patógenos cultivos tipo
National Collection of Food

Colección española de Bacteria (NCFB).Colección
cultivos tipo (CECT) Nacional de Bacterias
alimentarias

Lista de colecciones

Lista de colecciones

World Federation for Culture
Collection - WFCC
Su principal objetivo es la promoción y desarrollo de colecciones de cultivos de microorganismos y líneas
celulares.
Las actividades fundamentales siguen siendo la continuidad y apoyo a las colecciones existentes, así como
la asistencia y asesoramiento para ayudar a establecer nuevas colecciones. Los miembros de WFCC
constituyen una única red global para la preservación ex situ de la diversidad microbiana que sostiene la
vida en la tierra.
WFCC tiene una preocupación constante en todos los aspectos referidos a la actividad de las colecciones de
cultivos, en particular, a la estimulación de nuevas iniciativas y al mejoramiento de los estándares de
calidad de los servicios científicos que se proveen a la comunidad internacional.

La WDCM dispone de una codificación eficiente de las cepas definiendo un acrónimo de la
colección y un número WFCC que le permite dar a cada cultivo de la colección una Identificación
Global Única (Globally Unique Identifiers – GUID), combinando el acrónimo con su propio número
interno.
El trabajo pionero de WDCM permite un registro apropiado y un manejo de la documentación

relacionada con las cepas.
Las colecciones
Instituto deberían
de Salud Pública de Chileusar este sistema para ser parte de la red WDCM y estar conectados con 28
la comunidad científica internacional.
World Data Centre for Microorganisms -WDCM

World Data Centre for Microorganisms -WDCM
El proceso está diseñado de modo que los organismos experimentan el número mínimo de
pasajes posible, para reducir la divergencia genética de la cepa.
Identificación: WFCC tienen la

Preservación: para reducir al mínimo los riegos responsabilidad de proporcionar recursos
de pérdida de la cepa, la preservación la con identidades precisas como materiales
realizan en al menos por dos métodos de crio- de referencia si ofrecen un servicio
preservación (liofilización , nitrógeno líquido)
por lo menos en duplicado para ser
público y deben hacer todo lo posible
almacenadas en lugares diferentes ( para no para asegurar que los organismos que
perder la cepa en catástrofes naturales). suministran son auténticos.
Autenticación: se basa principalmente en una

caracterización polifásica (fenotípica y
genotípica) en base a las propiedades del MO.
Las pruebas bioquímicas fueron y siguen
siendo fundamentales para autenticar
muchas propiedades de los MO.
La caracterización genotípica se basa en
secuenciación rADN (SSU 16S). Métodos
altamente específicos y sensibles
independiente del estado fisiológico o de
desarrollo del MO.

Cepas de Referencia
Un proveedor de material de referencia MR y MRC debe brindar información a

través de un certificado que acompañe al material. Y además deberá demostrar su
competencia en la producción del MR.

Cepas de Referencia
• Características de MR
Homogéneo
Estable
Con valores asignados a algunas

de sus propiedades
Con incertidumbre asignada a

sus valores
32
Pureza: Condición de ser libre y exento de toda mezcla
Homogeneidad: Condición de tener composición y estructura

uniforme respecto de uno o más de sus caracteres dentro de los
límites establecidos.
Estabilidad de cultivos de referencia: Características de un cultivo de

mantener, por un período de tiempo establecido, un valor declarado de sus
propiedades dentro de los limites especificados.
Trazabilidad de cultivos de referencia: se considera que un cultivo de

referencia es trazable si cumple con los requisitos taxonómicos definidos para
esa especie microbiana y con aquellas características propias de esa cepa, de
forma tal que los resultados de estas evaluaciones puedan ser reproducidos en
otros laboratorios.
Qué debe contener un certificado?
Nombre y dirección del organismo de certificación
• Título del documento.
• Condiciones del certificado (provisorio)
• Nombre del material
• Número de muestra (Nº del lote puntual)
• Características del material
• Descripción del material
• Fecha de certificación
• Disponibilidad de otras formas y tamaño del MR
• Fuente del MR
• Proveedor del MR
• Preparador del MR

Qué debe contener un certificado?
Condiciones de Almacenamiento
Instrucciones para el uso correcto del MR
Método de preparación del MR
Determinación de homogeneidad y estabilidad (descripción de los ensayos
realizados)
Valores obtenidos para una determinada propiedad y sus límites de confianza
Valores asignados pueden ser generados por un laboratorios o un grupo de
laboratorio

Incertidumbre

Colección de cepas
Para su selección:
Es necesario tener en cuenta el propósito al cual será

destinado
1. Identificar las especificaciones requeridas con las de los MRC disponibles

en el mercado.
2. Consultar la información disponible: catálogos de fabricantes, bancos de
datos, publicaciones, recomendaciones
3. Asegurar que el MRC seleccionado está certificado para la medida o
propiedad de interés y no es un valor meramente indicativo, y que su
procedimiento de certificación tiene un nivel de confianza apropiado y está
suficientemente documentado.

Colección de cepas
Para su selección:
Es necesario tener en cuenta el propósito al cual será

destinado
Validación/ verificación método

QC
Controles ensayos/ análisis (área ambiental, clínica, farmacéutica)
Pruebas confirmativas
Evaluación desempeño medios de cultivo
Estudio comportamiento a AB
Evaluación de procesos de esterilización.

Colección de cepas
Servicio de colección de cepas
Conservación ex situ del microorganismo
Custodios de los recursos nacionales
Otorgar seguridad , confidencialidad y licencia
Protocolos para una cuidadosa preservación y almacenamiento para

mantener cultivos en forma segura y eficaz.
La utilización de un sistema de reserva de semillas para minimizar

subcultivo
Caracterización completa de cada cepa para establecer la identidad

Normas de Referencia
ISO Guía 30
Definiciones ISO Guía 31 Contenido
certificado y etiquetas
ISO Guía 35
ISO Guía 34 Requerimientos
Principios generales
generales para la competencia ISO Guía 33 Uso
para estadística y
de los productores MR MRC
certificación
ISO 9000 Gestión ISO 17025

y Calidad

Principios de MR
Los materiales de referencia y los materiales de referencia certificados son

utilizados para demostrar:
• la exactitud de los resultados,

• calibrar equipos,
• controlar la calidad del laboratorio,
• validar métodos y
• permitir la comparación de métodos.

Principios de MR
El procedimiento manejo de cepas se fundamenta en:
En la reactivación de los cultivos de referencia certificados (liofilizados

o congelados), a través de la utilización de medios de cultivo
específicos,
Incubación a la temperatura y tiempo establecido para cada

microorganismo,

Principios de MR
Verificación de la viabilidad, pureza, estabilidad y adicionalmente realizando

pruebas para descripción de las características fenotípicas y genotípicas.
Seguido de preservación a través de los diferentes métodos

disponibles en el laboratorio.

42
Cepa de Referencia
Para demostrar la trazabilidad, el laboratorio debe utilizar cepas de referencia de

microorganismos suministrados por una colección nacional o internacional
reconocida.
Las cepas de referencia se reconstituirán y someterán a los controles

de pureza y ensayos bioquímicos que sean necesarios.
Serán subcultivadas una sola vez para obtener las cepas de reserva, de
las que se obtendrán las cepas de trabajo.

Cepas de Reserva
Las cepas de reserva deben conservarse utilizando:

• una técnica que mantenga las características deseadas de las cepas de referencia
( sin cambio genético).
Por ejemplo:
• liofilización,
• ultra congelación (-70ºC),
• conservación en nitrógeno líquido, etc.
Cuando se descongelan las cepas de reserva no se deben volver a

congelar y reutilizar.

Cepa de trabajo
Las cepas de trabajo, se conservarán en refrigeración durante un período de

tiempo que asegure la viabilidad del microorganismo.
Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas y no deben

sustituir las cepas de reserva.

Importante
En la práctica para cumplir con el requisito prevenir mutaciones, deterioro o

alteración de las características típicas de las cepas de el número de repiques a
partir de la cepa de referencia debe ser limitado.
En general es aceptado hasta 5 repiques a partir de la cepa de referencia conforme a las

recomendaciones de la Pharmacopoeia (USP) las cuales han sido estimadas por Amarican Type Culture
Collection (ATCC) y en este contexto ATCC lo hace válido si las cepas son adquiridas directamente a
ATCC.
Por otro lado, Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) recomienda hasta tres subcultivos del
cultivo de reserva y hasta tres subcultivos del cultivo de trabajo, lo que significa obtener hasta 7 pasajes a
partir del cultivo original de la cepa de referencia ATCC.
(Ref. Documento técnico N°6 ATCC)

Pasaje /Subcultivo
P Cultivo Viable
a
s
Cultivo Viable a
j
e
Pasaje Pasaje
Cultivo Fresco

Procedimiento por el laboratorio
– Métodos para preservación cepa de reserva :

• Liofilización
Es un proceso de desecación a partir de un estado congelado.
Dentro de los agentes crioprotectores se incluye la leche descremada de

calidad microbiológica (esterilización por vapor fluente) al 10% o 20% p/v).
El producto liofilizado se puede conservar en refrigeración a temperatura

ambiente por años.
Los envases deben estar debidamente identificados con nombre cepa, tipo y
N° de colección, N° de repique, fecha de elaboración cepa reserva, fecha
vencimiento, N° tubo o crioval.
48
• Congelación a bajas temperaturas
• La congelación es un método de preservación a largo plazo, donde los

microorganismos son resuspendidos en medios con algún agente crioprotector y
son almacenados a temperaturas inferiores a 0°C
• (-20, -40, -70, -80° C ) en congeladores o en tanques de nitrógeno líquido.
Dentro de los agentes crioprotectores se encuentran:
• Glicerol al 20%.
• Caldo cerebro corazón (BHI) con glicerol al 20%.
• Leche descremada al 20%
• Dimetil sulfoxido (DMSO) al 10%.
Puede adicionarse aditivos como el inositol.

49
• Las temperaturas de congelación deseable a -70°C , -80°C o menores.
A temperaturas de -20°C no es lo ideal pero tal vez es la única forma

posible. Es preferible a -40°C.
Los envases pueden ser el uso de crioval o tubo estéril, sistema Cryobank.

Los envases deben estar debidamente identificados con nombre cepa, tipo y
N° de colección, N° de repique, fecha de elaboración cepa reserva, fecha
vencimiento, N° tubo o crioval.
El producto se puede conservar congelado por

años.
Anotar en registro

–Preservación a Temperatura ambiental
Es una forma de mantener el cultivo generalmente para uso diario. Se

utilizan tubos de cultivo tapa rosca, rotulados y con medio sólido. El cultivo
se ha obtenido por incubación en el tiempo y temperatura apropiados para
el microorganismo procesado.
Por un período más largo de almacenamiento, después de incubar añadir

una capa de aceite mineral o parafina estéril que cubra el cultivo hasta 1,0
cm por encima de la superficie del agar. Sellar bien los tubos.
Realizar controles periódicos de pureza y viabilidad.

52
Factores que afectan la viabilidad de la cepa
La viabilidad de las cepas, sometidas a un proceso de

congelación (para su almacenamiento), está determinada por
los siguientes factores:
a) Tipo de cepa: Ejemplo las bacterias Gram positivas resisten

mejor las bajas T° que las Gram negativas.
b) Concentración del MO: determinado por las condiciones del

cultivo.
El cultivo debe estar en las mejores condiciones posibles antes de ser expuesto a
bajas temperaturas.
53
Factores que afectan la viabilidad de la cepa
Condiciones necesarias antes de ser expuesto a bajas
temperaturas:
1.- La EDAD DEL CULTIVO puede afectar la capacidad del

microorganismo de sobrevivir.
• Cultivos demasiados jóvenes o demasiado viejos son menos resistentes al

shock térmico.
• Ideal es al final etapa logarítmica principio fase estacionaria (108 ufc/mL, tiene
mayor probabilidad de recuperación).
2. Las CONDICIONES DE DESARROLLO también juegan un papel

importante .
Ejemplo; Las levaduras que crecen aireadas y agitadas tienen mayor resistencia a
la temperatura que aquellas que desarrollan en un medio sólido.

Recomendaciones
La manipulación y modo de conservación de los cultivos de referencia deben

evitar:

• El deterioro de las cepas
• La contaminación cruzada
• Mutaciones
• Deterioro o alteración de las características típicas de las cepas.
• Su crecimiento característico debe ser documentado sobre cada medio en el
que se utiliza como cepa control.

Problemas asociados selección a MR/MRC
• Dificultad de localizar MRC los disponibles y de comunicarse con fabricantes y

distribuidores.
• Su alto costo, lo que limita su aplicación.
• Escasa información por parte de los fabricantes, lo cual dificulta la evaluación de si

un determinado MRC es adecuado a los objetivos.
• El analito requerido no se encuentra certificado en una matriz idéntica o parecida

a la composición del producto o de la muestra.
• Dificultad en disponer de distintos niveles de concentración para evaluar el

procedimiento en todo su rango de aplicación.
• Una incertidumbre inapropiada para evaluar un procedimiento de medida.
• Su trazabilidad.
• Dificultad en su preparación.

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Cepas: Material de referencia,

Instituto de Salud Pública de Chile

• Ciencia que estudia los MO, su biología, ecología y relaciones.

• Mucho antes que se descubriera el mundo de los MO , el hombre ya intuía la

• Los antiguos hebreos tomaban medidas profilácticas para evitar la propagación

Instituto de Salud Pública de Chile 2

• A fines del siglo XIX tuvo su desarrollo con el avance de conocimientos y

Instituto de Salud Pública de Chile 3

• Con el transcurrir del tiempo y con las investigaciones de Redi, Spallauzani,

• La microbiología en la actualidad es una ciencia especializada y exacta que con

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• Era de la Microbiología General y Médica

• Era de la Microbiología General y Biología

• Era de la Microbiología Molecular, Genómica y

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Biología molecular Ecología

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Los microorganismos han sido los primeros en aparecer en la evolución, y

Dentro de los organismos de estudio se encuentran las bacterias, virus,

Instituto de Salud Pública de Chile 8

Actualmente se disponen de herramientas tecnológicas para la investigación y la

Globalmente es aceptado que materiales de referencia son necesarios

Disponer de procedimientos para la selección, adquisición, recepción, registro,

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Instituto de Salud Pública de Chile 11

Estudio gen Estudio vía Ribotipificación

Instituto de Salud Pública de Chile 12

• Material o substancia, en la cual uno o más valores de sus propiedades

Instituto de Salud Pública de Chile 13

MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO:

Caracterizado por un procedimiento metrológicamente válido para una o

Instituto de Salud Pública de Chile 14

La trazabilidad puede estar relacionada

sus colaboradores deberán proporcionar certificados nacionales o internacionales

la evidencia documental de la trazabilidad conocidos y aceptados.

Instituto de Salud Pública de Chile 15

Cepa: células descienden de un único aislamiento de un cultivo puro, por lo general a

Caracterización: el proceso de someter

Cultivo: población de células en un lugar y tiempo establecido.

Instituto de Salud Pública de Chile 16

Identificación Fenotípica macro-microscópica :

Instituto de Salud Pública de Chile 17

Taxonomía (Nomenclatura de clasificación)

Características utilizadas en Taxonomía

Instituto de Salud Pública de Chile 18

La imagen muestra una representación

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Cepa control de calidad: una

Instituto de Salud Pública de Chile 20

Cepas de referencia: Microorganismos obtenido de una colección

Cepa de reserva: Cepas Cepas de trabajo:

Instituto de Salud Pública de Chile 21

Cultivo Subcultivo Pureza- Autenticidad

•Obtención directa a partir de una colección nacional o

NOTA: Los proveedores comerciales certificados por ISO 9001 comercializan

Las cepas de referencia pueden incluir:

Instituto de Salud Pública de Chile 23

Las cepas de referencia pueden obtenerse de

CAB International Mycological American Type Culture

National Collection of National Collection of Type