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PROYECTO DE INVESTIGACIÓN
PRESENTADO POR:
PUNO – PERÚ
2017
INDICE
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .............................................................................. 1
2. ANTECEDENTES ................................................................................................................ 2
3. JUSTIFICACION.................................................................................................................. 4
4. OBJETIVOS DE ESTUDIO ................................................................................................. 5
4.1. OBJETIVO GENERAL ................................................................................................ 5
4.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS ........................................................................................ 5
5. MARCO TEÓRICO CONCEPTUAL .................................................................................. 5
5.1. CATALASA ................................................................................................................. 5
5.1.1. Función de la catalasa ........................................................................................... 6
5.1.2. Mecanismo de reacción ......................................................................................... 6
5.2. CEBOLLA (Allium cepa) ............................................................................................. 7
5.2.1. Composición Química: .......................................................................................... 7
6. HIPOTESIS ........................................................................................................................... 8
6.1. HIPOTESIS GENERAL ............................................................................................... 8
6.2. HIPOTESIS ESPECIFICO ........................................................................................... 8
7. UTILIDAD DE LOS RESULTADOS DE ESTUDIO .......................................................... 8
7.1. LA INDUSTRIA ALIMENTICIA ................................................................................ 8
7.2. ESTERILIZACIÓN EN FRÍO ............................................................................................ 9
8. METODOLOGIA ................................................................................................................. 9
8.1. PARÁMETROS A TENER EN CUENTA PARA LA OBTENCIÓN DE ENZIMAS 9
8.1.1. Actividad especifica .............................................................................................. 9
8.1.2. PH optimo ........................................................................................................... 10
8.1.3. Solubilidad .......................................................................................................... 10
8.1.4. Sales .................................................................................................................... 10
8.1.5. Centrifugación ..................................................................................................... 11
8.2. APLICACIÓN DEL MÉTODO DE PRECIPITACIÓN POR SALES ....................... 11
8.2.1. Ecuación de la precipitación con sales: ............................................................... 12
8.2.2. Cálculo de la concentración de la enzima ........................................................... 12
8.3. DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA OBTENCION DE LA CATALAZA POR EL
METODO DE PRECIPITACION POR SAl........................................................................... 13
9. AMBITO DE ESTUDIO ..................................................................................................... 14
10. RECURSOS .................................................................................................................... 14
10.1. PRESUPUESTO ..................................................................................................... 14
11. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES .................................................................................... 16
12. BIBLIOGRAFIA Y FUENTES DE INFORMACION ................................................... 16
13. ANEXOS......................................................................................................................... 17
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
En la actualidad los altos índices de enfermedades por falta de catalasa (acatalasemia
o enfermedad de takuhara) ausencia de catalasa en los peroxisomas lo que ocasiona
una disminución de actividad de síntesis de la enzima catalasa que tiene como función
reducción del agua oxigenada producida por el organismo contra defensa microbiana.
1
2. ANTECEDENTES
2
Cells ( 2015), en su tesis “Extracción de superóxido dismutasa, catalasa y anhidrasa
carbónica del hemolizado de glóbulos rojos sin estroma para la preparación del
complejo nanobiotecnológico de polihemoglobina-superóxido dismutasa catalasa-
anhidrasa carbónica” presento un nuevo método para extraer simultáneamente
superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y anhidrasa carbónica (CA) de la
misma muestra de glóbulos rojos (glóbulos rojos). Esto evita la necesidad de utilizar
enzimas comerciales caras, lo que permite un proceso rentable para la producción a
gran escala de un complejo nano biotecnológico de polyHb-SOD-CAT-CA, con el
aumento de las tres funciones de glóbulos rojos. Una concentración óptima de
tampón de fosfato para el tratamiento con etanol-cloroformo da como resultado una
buena recuperación de CAT, SOD y CA después de la extracción. Pueden usarse
diferentes concentraciones de las enzimas para aumentar la actividad de la poliHb-
SOD-CAT-CA a 2, 4, o 6 veces la de los RBC.
3
crítico de la inactivación inducida es bajo en soluciones diluidas de peróxido de
hidrógeno, pero aumenta hasta un valor de 30.000 calorías en soluciones
concentradas de peróxido.
3. JUSTIFICACION
4
hormonales etc. pero se sabe actualmente que ello este asociado principalmente
al peróxido de hidrogeno es por ello que se hace esta investigación.
4. OBJETIVOS DE ESTUDIO
4.1. OBJETIVO GENERAL
Obtención de la catalasa a partir de la cebolla roja (allium cepa) por el método
de precipitación.
4.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
• Evaluar si el proceso de obtención de catalasa utilizando el método de
precipitación por salado es el adecuado.
• Precisar las condiciones óptimas de operación (T°, pH , solubilidad, actividad,
sales)
• Determinar la cinética de obtención de la catalasa
• Evaluar un método de reducción de malos olores en el producto
5
5.1.1. Función de la catalasa
6
5.2. CEBOLLA (Allium cepa)
7
Riboflavina 0.01 mg
Niacina 0.13 mg
Ácido ascórbico 8.13 mg
Valor energético 34.38 cal
Fuente: Matthews, (2007)
6. HIPOTESIS
8
7.2. ESTERILIZACIÓN EN FRÍO
9
inferiores (0,1-1 unidad por mg). En las preparaciones de baja actividad es muy
importante acercarse lo máximo posible a las condiciones óptimas de trabajo (pH
y temperatura).
8.1.2. PH optimo
Como hemos visto anteriormente, el pH es un factor importante ya que, si éste no
es el óptimo, entonces la actividad enzimática puede ser inferior a la adecuada. El
pH viene especificado por los fabricantes en el propio bote o en la bibliografía
especializada.
8.1.3. Solubilidad
Algunas proteínas son más solubles en agua que otras. Si una proteína tiene
regiones más hidrofílicas ("que aman el agua"), serán más solubles que unas que
sean más hidrofóbicas ("temerosas al agua"). A medida que aumenta la
concentración de sal, las proteínas hidrofóbicas menos solubles y más solubles
precipitarán primero. Las proteínas estrechamente relacionadas no se pueden
separar por precipitación salina, porque van a precipitar a aproximadamente la
misma concentración de sal, pero las que tienen estructuras y características muy
diferentes a menudo se pueden separar de esta manera.
8.1.4. Sales
El sulfato de amonio es la sal más popular para este procedimiento, ya que tiene
muy alta solubilidad en agua, incluso a temperaturas muy bajas. Normalmente,
deseas mantener tu solución fría para inhibir la actividad de las proteasas,
proteínas que cortan a otras proteínas. La concentración de sal se describe
generalmente por el porcentaje de saturación, donde el 25% es el 25% de
saturación (la concentración a la que no se puede disolver más sal).
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8.1.5. Centrifugación
Por lo general, se añade la sal gradualmente a la solución de proteína mientras se
agita con rapidez (un agitador magnético es muy útil para este tipo de
procedimiento). La solución se centrifuga, lo que hace que algunas de las
proteínas se precipiten. A menudo este procedimiento se divide en varios pasos.
Es posible, por ejemplo, comenzar con 25% de saturación (un recorte del 25%), y
luego ir a un corte de 75%. Este proceso permite dividir las proteínas en tres
grupos, las que precipitan a 25%, las que precipitan a 75% y las que se precipitan
en el medio.
La salazón supondrá una pérdida de la proteína que deseas aislar. Cada proteína
tiene su propia curva de solubilidad, la solubilidad de la proteína como una
función de la concentración de soluto ("fuerza iónica"). Por consiguiente, incluso
si el aumento de la concentración de sal es insuficiente para precipitar la totalidad
de la proteína de interés, todavía se puede precipitar algo de ella. Por otra parte,
no se puede utilizar la salazón para aislar una proteína específica, ya que otras
proteínas se precipitan junto con ella. Por lo general, la salazón es sólo el primer
paso de un proceso de purificación de proteínas.
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8.2.1. Ecuación de la precipitación con sales:
log S = A – m[Sal]
Donde:
S = Solubilidad de la proteína a un valor dado de concentración salina.
A = Constante que depende fuertemente del pH y la temperatura. Esta constante
usualmente toma un valor mínimo en el punto isoeléctrico, es característica de
cada proteína e independiente del tipo de sal.
m = Pendiente de la curva de solubilización por salado. Ésta es independiente del
pH y la temperatura, pero varía con el tipo de sal y de proteína. Las sales que
contienen aniones polivalentes tales como sulfatos y fosfatos tienen valores de m
mayores que las sales univalentes. Los cationes polivalentes como el calcio y el
magnesio disminuyen el valor de m.
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8.3. DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA OBTENCION DE LA CATALAZA
POR EL METODO DE PRECIPITACION POR Sal
SEPARACION
MICROPIPETAS
DETERMINACION DE
ACTIVIDAD
ENZIMATICA
5 ml PREPARACION EN
55
metabisulfito de BLANCO POR
sodio 0.1 M MUESTRA
RESUSPENCION DE
LOS PELLETS
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9. AMBITO DE ESTUDIO
10. RECURSOS
10.1. PRESUPUESTO
Presupuesto disponible: S/.500,00
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Adquisición de
materiales y equipos
• centrifugador Unidades -- -- --
• Escobilla de
limpieza Unidades 2,00 03 6,00
• Detergente
industrial Unidades 5,00 01 5,00
• Lentes de
seguridad
• Guantes de
seguridad
• Mandil de
seguridad
Servicios
• Alquiler del Veces 200.00 01 200.00
laboratorio
para trabajar Periodo 50,00 01 50,00
• Transporte
• Viáticos
Viaje 10,00 05 50,00
Persona 50,00 01 50,00
Sub total 436.00
Improvistos
5% del subtotal 21.80
Total 457.80
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11. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
N° de Semanas
Actividades
1 2 3 4 5 6 7 8
Revisión bibliográfica
Ordenamiento de resultados
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13. ANEXOS
FIGURA 01: sulfato de amonio FIGURA03: metabisulfito de sodio
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FIGURA 04: Esquema de obtención de enzimas forma general
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