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En
Jitomate (Lycopersicon esculentum Mill)
Resumen
Metodología
En el centro de una placa con PDA, se sembró un empaste de micelio con de Phytophtora
Capsici; posteriormente, alrededor del centro aproximadamente a 25 mm a la redonda, se
sembraron 8 puntos con los distintos tipos de cepas. Con lo anterior, se realizaron 5 tratamientos
con 10 repeticiones cada uno, bajo las siguientes relaciones:
B2 Vs Phytophtora Capsici:
B3 Vs Phytophtora Capsici
B10 Vs Phytophtora Capsici
Pseudomona Syringae Vs Phytophtora Capsici
Solo Phytophtora Capsici (testigo absoluto)
Con dichas pruebas se consiguieron los siguientes resultados con respecto al diámetro de la
colonia y la reducción del crecimiento:
Phytophtora Capsici
Cepa de Bacillus Diámetro de la colonia Reducción del
(mm) crecimiento (%)
B2 43 41
B3 49,1 34
Testigo 74,2 0
Inicialmente se realizó una curva de crecimiento de cada una de las cepas, para determinar las
condiciones óptimas de desarrollo; las cepas se sembraron en un tubo de ensayo con PDA y
se incubaron a 28 °C durante 24 horas, después de las cuales se les agregó a cada uno una
solución de NaCl a 0,15 M; luego se aplicó el procedimiento de conteo en placa cuyo resultado
en todos los tubos fue de 1x108 UFC.
Posteriormente se tomó 1ml de cada tubo y se inoculó en un 1 Litro de Caldo Papa Destroxa,
se incubaron a 28°C con agitación de 170 rpm por 48 Horas; una ez finalizada la incubación se
removieron las células bacterianas por centrifugación a 7000 rpm durante 40 minutos; el
sobrenadante se filtró en papel Wattman No.1, y el filtrado se esterilizó en autoclave a 15 lb de
presión durante 15 minutos, antes de ser utilizado en las pruebas de valoración de la actividad
antagónica. Además se hizo el mismo procedimiento para el cultivo de la Pseudomona Syrigae,
y de Phytophtora Capsici, esta última junto con bioensayos, con el fin de evaluar el
comportamiento del hongo ante el filtrado, lo cual se hizo utilizando el método de difusión en
agar en discos de papel.
Una vez obtenidos estos filtrados, se realizó el mismo procedimiento que en el primer ensayo,
pero en este caso se hicieron 6 tratamientos:
Phytophtora Capsici
Filtrado Diámetro de la colonia Reducción del
(mm) crecimiento (%)
B2 64,6 -7,9
B3 73,5 +5,7
Testigo 69,5 0
B2+B3+B10
Medio de cultivo sin inóculo
Testigo (Agua estéril)
% %y % %y % %y
Inicialmente se procedió a recolectar muestras de suelo de una parcela infectada con P.capsici,
el cual luego de una caracterización en laboratorio, arrojó los siguientes resultados, sobre su
composición física y química:
Posteriormente, el suelo se mezcló y dividió en dos partes iguales, de las cuales una se
pasteurizó con vapor de agua y la otra no; a la primera se le llamó suelo pasteurizado y al otro
suelo no pasteurizado. Luego, en bolsas negras con 6 kg de tierra, se trasplantaron 4 plántulas
de jitomate de 35 días de edad y dos semanas después se inocularon con 30000 zoosporas (de
P.capsici) por planta; además antes de la inoculación y luego 24 horas después de la misma,
las plantas se inundaron con agua.
Con respecto al tratamiento con el cultivo bacteriano, a algunas se les aplicó una dosis semanal,
mientras que a otros solo una dosis después de la inoculación; y además se tuvo como testigo
de esta prueba, el medio de cultivo Papa Dextrosa sin inocular. En total fueron 12 tratamientos:
Cada tratamiento constó de cinco repeticiones con las 4 plantas respectivamente, las cuales se
mantuvieron a una temperatura promedio de 23°C, durante 90 días y se fertilizaron cada 15
días con solución de nitrofoska (4 g/L de agua)
Xx vs Xy Xx vs Xy Xx vs Xy Xx vs Xy
SP+Pc+1B SNP+Pc+1B
SP+Pc+ASB SNP+Pc+ASB
SP+Pc+ASMC SNP+Pc+ASMC
SP+Pc;SP SNP+Pc;SNP
SNP+ASB;SNP+1B
SP+Pc+1B SP+Pc
SP+Pc+ASB
SNP+Pc+1B SNP+Pc
SNP+Pc+ASB
4) SP+Bx V SNP+By 1,1vs0,4 7,4vs 2,3 3,7 vs 10,9 2,8 vs 7,4
s
Tratamientos Tratamientos
SP+Pc+1B SNP+Pc+1B
SP+Pc+ASB SNP+Pc+ASB
SNP+ASB
SNP+1B
Tratamientos Tratamientos
SP+Pc+1B SNP+Pc+1B
SP+Pc+ASB SNP+Pc+ASB
Tratamientos Tratamientos
SP+Pc+1CB SP+Pc+ASB
SNP+Pc+1CB SNP+Pc+ASB
Tratamientos Tratamientos
SP+Pc+1B SP+Pc+ASCB
Tratamientos Tratamientos
SNP+Pc+1B SNP+Pc+ASB
SNP+Pc+ASMC SP+Pc
SP
SNP
Tratamientos Tratamientos
SNP+ASB SNP
x y.
Indican para cada comparación, la media del grupo de tratamientos del lado izquierdo y
derecho, respectivamente
Tinción de Gram + + + +
Crecimiento - - - -
anaerobio
Prueba Voges - - - -
Proskauer
Utilización de:
D-glucosa + + + +
L-arabinosa - - - -
D-xylosa - - - -
D-mannitol + + + +
Hidrólisis de + + + +
almidón
Hidrólisis de + + + +
caseína
Reducción d + + +
hidrato
Crecimiento:
En NaCl al 7% + + + +
A 10°C d + + +
A 50°C - d d d
A 55°C - - - -
Utilización de - - - d
citrato
Crecimiento a Nd + + +
pH 5,7
Hemólisis de Nd - - -
sangre
Motilidad Nd + + +
Peptonización Nd + + +
de leche
tornasolada
Hidrólisis de Nd + + +
gelatina
Análisis de datos
En la mayoría de las pruebas se realizó con análisis de varianza ANOVA para distinguir las
diferencias entre los tratamientos y para comparar medias se usó la prueba de Tukey; además,
la prueba sobre el efecto de Bacillus en el crecimiento en el desarrollo de plantas inoculadas
con P.capsici se analizó con SPSS.
Discusión
El uso de Bacillus firmus para esta prueba se basó en el hecho de que este microorganismo
puede ser considerado como bacteria que se encuentran en el suelo (por lo que es bastante
común de encontrar) y que mediante producción de metabolitos favorece el crecimiento de las
plantas o genera una acción inhibitoria sobre plantas dañinas del entorno.
A partir de los resultados ya mencionados, se pudo afirmar que en gran medida las capacidades
que tienen las cepas de Bacillus para inhibir el crecimiento pueden deberse a producción de
enzimas líticas, antibióticos y/o metabolitos que generan cambios en la membrana
citoplasmatica, aunque también se puede deber a la inhibición de germinación por competencia
de nutrientes.
Además con la prueba de los filtrados se observó que dichos filtrados no tuvieron gran efecto
sobre el crecimiento de P.capsici, quizás porque no se alcanzaron los niveles apropiados para
inhibir el crecimiento del patógeno o que se necesitan células vivas para desarrollar la acción
inhibitoria del patógeno, o posiblemente debido a que algunos antibióticos y toxinas pueden
inactivarse debido a la exposición a altas temperaturas, por lo que el filtrado pudo inactivar su
efecto. Lo anterior también pudo verse influenciado por el medio de cultivo, por lo que otro tipo
de medio pudo ser más o menos efectivo para el crecimiento de estos organismos.
Con la prueba de suelos pasteurizados y no pasteurizados, se observó que con los primeros,
es posible que por el tratamiento se hayan modificado propiedades químicas del suelo, así como
la disminución de la porosidad lo cual no permitió el desarrollo de la raíz, además se pudo haber
eliminado algunos microorganismos presentes en el suelo, que pueden servir en procesos de
control biológico de P.capsici.
Por último, la realización del quinto ensayo, fue importante para para identificar las
oportunidades y las limitaciones del uso de estas en procesos de control biológico.