Procedimiento Nitrogeno Total

LB-P-001
PROCEDIMIENTO PARA LA Rev. 001.

DETERMINACION DE NITROGENO Fecha:
Ministerio de Educación
TOTAL Página 8 de 11
Universidad Tecnológica Nacional
Facultad Regional del Neuquén
1. Objetivo: Cuantificar el contenido total de nitrógeno contenido en las muestras de purines de

cerdo
2. Alcance: Aplicable a purines de consistencia liquida.
3. Acrónimos, abreviaciones y definiciones: N/A
4. Responsabilidades: Fix Torres, Cinthia Nadia Daiana (grupo porcino)
5. Desarrollo:
a. Introducción: En la actualidad la producción porcina Argentina atraviesa una de las
etapas más favorables por lo que se puede observar un crecimiento sostenido del
sector. Esto hace que el tratamiento de los desechos porcinos reviste cada día de una
mayor importancia debido a la dimensión del problema que representa, no sólo por el
aumento de los volúmenes producidos, generados por una mayor intensificación de
las producciones, sino también por la degradación de los recursos agua, suelo y aire,
la proliferación de plagas sinantrópicas (moscas, roedores, entre otras) y la generación
de olores indeseables producidos cuando no poseen una correcta disposición. Es por
este motivo que el manejo de las excretas es un aspecto fundamental en la
sustentabilidad ambiental de los sistemas de producción animal intensivos.
La producción de cerdos en Argentina comienza a transitar un camino de
oportunidades que la llevarán al desarrollo y a la consolidación, pero esto implica
indefectiblemente enfrentar desafíos y amenazas.
De la observación y comparación de las diferentes fuentes de datos, se puede afirmar
que existe una variabilidad en los valores de las caracterizaciones expuestas. Esto nos
lleva a destacar la importancia de analizar el efluente en cada establecimiento a la
hora de tomar una medida para el uso del efluente, ya que no existe una única
concentración, variando ésta según diversos factores. Los principales parámetros, que
caracterizan al purín desde el punto de vista de sus constituyentes y el volumen
producido son:
 Demanda biológica de oxígeno DBO5 (mg/l).
 Cantidad de Materia seca (mg/l).
 Sólidos volátiles (mg/l).
 Nitrógeno total (mg/l).
 Fósforo (mg/l).
 K soluble, Zinc (mg/l).
 Salinidad
 Flujo medio total diario (m3/día).
b. Fundamentos: Desde 1883 año en el cual John Kjeldahl presentó sus trabajos, su
método ha ganado una gran aceptación y se aplica en una amplia variedad de trabajos
para los análisis de alimentos, bebidas, grano, carnes, aguas residuales, suelos para
cultivos y demás muestras con contenido orgánico. Actualmente el método húmedo
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Nombre Fix Torres Daiana Astorga Marcos
Acción Realizó Revisó Aprobó
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Kjeldahl es el más utilizado para determinar la concentración de nitrógeno en diversos

materiales (Kjeldahl, 1883, Scarf, 1988). Por lo general se denomina como Total
Kjeldahl Nitrogen (TKN) y es una aproximación del contenido de nitrógeno total
En esta técnica se digieren los compuestos orgánicos de los purines en una mezcla
con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores, donde el nitrógeno orgánico total
se convierte en sulfato de amonio. La mezcla resultante se neutraliza con una base y
se destila, el destilado se recoge en una solución de ácido bórico. Por ultimo los
aniones de borato así formado se titulan con HCL estandarizado para determinar el
nitrógeno contenido en la muestra.
En general, el método Kjeldahl tiene la ventaja de poderse ejecutar mediante equipos

no muy sofisticados y puede ser realizado por técnicos poco experimentados.
Como se mencionó anteriormente el método consta de tres etapas:
 DIGESTIÓN: En ella se produce la descomposición del nitrógeno que

contienen las muestras orgánicas utilizando una solución de ácido
concentrado. Esto se obtiene haciendo hervir la muestra en un volumen de
ácido sulfúrico concentrado. El resultado es una solución de sulfato de
amonio.
n C -NH2 + m H2SO4 → CO2 + (NH4)2SO4 + SO2
 DESTILACIÓN: Aquí se libera amoniaco, el cual es retenido en una

solución con una cantidad conocida de ácido bórico. Inicialmente se realiza
una destilación con vapor por el método de arrastre de vapor de agua,
mediante la cual acelera la obtención del destilado.
(NH4)2SO4 + 2 NaOH → 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O

NH3 + H3BO3 (ácido bórico) → NH4 + H2BO3- (ion borato)
 TITULACIÓN: Por último se valora la cantidad de amonio presente en la

muestra destilada utilizado HCl previamente valorado.
H2BO3- + H+ → H3BO3
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c. Interferencias:
 Nitrato: Durante la digestión Kjeldahl, un exceso de nitrato superior a 10
mg/L puede oxidar una porción del amoniaco liberado a partir del Nitrógeno
orgánico digerido, para producir N2O y causar una interferencia negativa.
Cuando está presente suficiente materia orgánica en un bajo estado de
oxidación, el nitrato puede ser reducido a amoniaco, resultando en una
interferencia positiva. Las condiciones bajo las cuales ocurren interferencias
significantes no están bien definidas y no hay una vía probada para eliminar
la interferencia en conjunción con los métodos Kjeldahl.
 Sales y sólidos inorgánicos: El contenido de ácido y sal del reactivo de
digestión Kjeldahl tiene la intención de producir una temperatura de digestión
cercana a 380ºC. Si la muestra contiene una cantidad muy grande de sales o
sólidos inorgánicos que se disuelvan durante la digestión, la temperatura
puede elevarse sobre 400ºC, punto en el cual empieza a ocurrir una pérdida
pirolítica de Nitrógeno. Para prevenir una temperatura de digestión excesiva,
agregar más H2SO4 para mantener el balance ácido-sal. No todas las sales
causan precisamente la misma elevación de temperatura, pero la adición de 1
ml H2SO4/g de sal en la muestra da resultados razonables. Demasiado ácido
puede disminuir la temperatura de digestión por debajo de 380ºC y resultar
en una digestión y recuperación incompleta. Grandes cantidades de sales o
sólidos también pueden causar sacudidas durante la destilación. Si esto
ocurre, agregar más agua de dilución después de la digestión.
 Materia orgánica: Durante la digestión Kjeldahl, el H2SO4 oxida la materia
orgánica a CO2 y H2O. Si está presente una gran cantidad de materia orgánica,
se consumirá una gran cantidad de ácido, se incrementará la relación de sal a
ácido, y se incrementará la temperatura de digestión. Si está presente
suficiente materia orgánica, la temperatura puede ascender sobre 400ºC,
resultando en una pérdida pirolítica de Nitrógeno. Para prevenir esto, diluir la
muestra de manera que sea suficiente el reactivo de digestión adicionado.
d. Materiales y equipos:
 Digestión:
- 1 Manta Calefactora
- 1 Balón de 500 ml
- 1 Tubo de refrigeración de bolas
- 1 Soporte Universal
- 3 Pinza de Nuez
- Mangueras
- 1 Vidrio reloj
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- 1 Espátula
- 2 Pipeta 10 ml y 5 ml
- Peritas
 Destilación:
- 1 Mechero Bunsen
- 1 Trípode
- 1 Tela de Amianto
- 1 Balón 500 ml
- 1 Tubo de refrigeración de bolas
- 1 Erlenmeyer de 250 ml
- 3 Pipeta de 20 ml y 25 ml
- Mangueras
- Perita
- 3 Pinzas de Nuez
 Titulación:
- 1 Bureta
- 1 Soporte Universal
- 1 Pinza Mariposa
- Erlenmeyer de 100 o 50 ml ( según guste)
e. Reactivos:
 Digestión:
- Catalizador Kjeldahl: Pesar 10g de Sulfato de Potasio (K2SO4) y
mezclar con 1 g de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4·5H2O).
Almacenar en un recipiente plástico.
- Ácido Sulfúrico Concentrado (H2SO4)
- Muestra a analizar
 Destilación:
- Agua Destilada
- Granallas de Zinc
- Hidróxido de Sodio (NaOH) 10N: Pesar 40g de NaOH y disolver en
agua destilada, enrazar a 100 ml.
- Ácido Bórico (H3BO3) con Indicador: Pesar 20g de ácido bórico y
disolver en 750 ml de agua destilada. Calentar para completar la
disolución, dejar enfriar y agregar 20 ml de indicador. Verificar que
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el pH de la solución sea igual a 5,0; si es más acido añadir NaOH

0,1N hasta alcanzar el pH indicado.
 Indicador: Mezclar 0.099g de verde de bromo resol y 0,066g
de rojo de metilo. Disolver en 100 ml de alcohol etílico al
96%.
 Titulación:
- Ácido Clorhídrico (HCl) 0,05 N: Tomar 2 ml de HCl concentrado y
diluir en 500 ml de agua destilada. Recordar nunca dar de beber
al acido.
 Para la valoración de este acido pesaremos 0,25g de
carbonato de sodio (Na2CO3), previamente secado en la
estufa a 105°C, lo disolveremos en agua destilada para luego
enrazarlo a 100 ml.
 Tomaremos tres alícuotas de 10 ml de carbonato de sodio, le
adicionaremos 5 gotitas de anaranjado de metilo y
titularemos con el ácido hasta un viraje de anaranjado a rojo
 Se deben promediar el volumen gastado de HCl y sacar el
factor de corrección del acido
F= Volumen teórico /Volumen gastado
Volumen teórico= (CNa2CO3 *10 ml)/ CHCl
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f. Armado de Equipo:
Ilustración 1 Equipo de Digestión
Ilustración 2 Equipo de Destilación
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Ilustración 3 Equipo de Titulación
g. Procedimiento:
 Digestión: Una vez armado el equipo procedemos a:
- Pesar 2g de Catalizador Kjeldahl y colocar en el balón. (Recordar
que una vez prendida la balanza se debe esperarse 30 minutos para
que se estabilice)
- Tomar 2 ml de la muestra de purín de cerdos y añadirla al balón.
- Medir 10 ml de ácido sulfúrico concentrado, añadir lentamente al
balón donde se encuentra la muestra y el catalizador con la finalidad
de reducir las emanaciones del mismo.
- Colocar inmediatamente el balón en el equipo de digestión y prender
la manda calefactora (temperatura baja-media).
- Se deja actuar hasta notar que la muestra se ha aclarado (controlar
que la digestión no sea brusca, variando la temperatura de la manta
calefactora). A partir de este punto se prolonga la digestión por una
hora más.
- Apagar el equipo y dejar enfriar.
 Destilación:
- Retirar el balón del equipo de digestión y añadirle 25 ml de agua
destilada
- Adicionar de 3 a 5 granallas de zinc y ensamblar el balón al equipo
de destilación
- Agregar aproximadamente 40 ml de NaOH 10 N, hasta que la
solución del balón sea básica, lo cual favorece la producción de
hidróxido de amonio.
- Colocar en el extremo del tubo refrigerante un Erlenmeyer de 250
ml con 20 ml de ácido bórico con indicador.
- Comenzar la destilación cuidando que la misma no sea brusca.
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- Destilar hasta obtener aproximadamente 100 ml de destilado o hasta

notar indicios de ebullición violenta.
 Titulación:
- Previo a realizar la titulación del destilado debemos verificar que se
haya realizado la valoración del HCl 0,05 N
- Tomar una alícuota de 10 ml de destilado y titular con HCl 0,05 N
hasta el viraje de verde a rosado fuerte.
Recuerde que siempre se debe realizar un blanco para poder determinar el contenido de
nitrógeno que pueda aportar los reactivos.
h. Cálculos:
N (mg/l) = N x (V – Vbl) x 14 x 1000
Vm
Siendo:
 N = Normalidad del ácido de valoración [meq/ml]
 V = Volumen de ácido consumido [ml]
 14 = Peso equivalente del nitrógeno [mg/meq]
 Vm= Volumen de muestra [ml]
 Vbl= Volumen de ácido consumido en el blanco [ml]
Para expresar el contenido de nitrógeno porcentualmente
% N = Ceq * (V - VBL) * M * 100 %

E
Donde:
 Ceq = Concentración equivalente de HCl [meq/ml]
 V = Consumo de HCl para la muestra [ml]
 VBL = Consumo de HCl para el blanco [ml]
 M = Peso molar nitrógeno [mg/meq]
 E = Peso de la muestra [mg]
i. Criterios de evaluación: Informe los resultados por debajo del 0,01% como por
debajo del límite de detección en base al peso húmedo. Cualquier muestra con <1,0
ml de volumen de titulación para alcanzar el punto final debe volver a realizarse
utilizando un tamaño de muestra más pequeño.
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6. Referencias legales y normativas:
- ASTM D 3590-89: Standard Test Method for Total Kjeldahl Nitrogen in Water,
American Society for Testing and Materials, USA, ASTM Committee on Standards,
Philadelphia PA, Septiembre de 1994.
- EPA 351.3-1974, 1978 Nitrogen, Kjeldahl Total (Colorimetric; Titrimetric;
Potentiometric), U.S. EPA National Exposure Research Laboratory (NERL).
7. Aspectos de la seguridad e higiene:
a. Seguridad Personal:
- Se deben tomar precauciones cuando se usa ácido sulfúrico concentrado frío
o caliente y soluciones alcalinas fuertes. Las reacciones violentas son siempre
posibles. Asegúrese de usar ropa protectora, protección para las manos y
gafas anti-salpicaduras
- El hidróxido de sodio en contacto con los ojos o piel, puede causar severa
irritación o quemaduras. La inhalación de vapores puede causar tos, dolor en
el pecho, dificultad para respirar o estado de inconsciencia.
-
b. Acondicionamiento especial de la zona:
- Las estaciones de lavado de ojos de seguridad y las duchas de seguridad deben
estar cerca y los técnicos deben ser entrenados en su uso. Además, debe estar
disponible en el área de trabajo un kit de derrame completamente almacenado
con neutralizadores y absorbentes
- Debe tenerse un archivo de referencia de las hojas de información de
seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal involucrado en estos
análisis.
- La preparación de todos los reactivos usados en este método debe realizarse
bajo una campana de extracción. Consultar las hojas de seguridad sobre
manipulación y disposición de estos.
8. Aspectos de resguardo ambiental asociados:
a. Identificación de residuos generados: La digestión con ácido sulfúrico se clasifica

como un residuo peligroso, independientemente del catalizador metálico utilizado.
b. Manejo de residuos generados:
- Los desechos ácidos y alcalinos se deben neutralizar para su posterior
desecho.
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c. Disposición final de residuos generados:

- Todas las muestras que cumplan con la norma de descarga a la red cloacal
pueden descargarse en el mismo sistema. Caso contrario se debe recoger los
residuos en un recipiente rotulado adecuadamente.
9. Elementos consumibles y su uso racional:
a. Agua: Antes de conectar las mangueras en el tubo de refrigeración tener la precaución

de descargar adecuadamente el destilador para evitar derrames en la zona de trabajo.
Una vez finalizado el análisis recordar ensamblar las mangueras del destilador a la
red.
b. Electricidad: Cuando se termine de utilizar la balanza analítica, recordar apagarla y
desenchufarla, para luego limpiarla adecuadamente.
c. Gas: Cuando no se esté utilizando el mechero, este deberá permanecerá apagado.
d. Reactivos: Se tomará lo más rápido posible la muestra de purín con el fin de evitar
emanaciones no deseadas.
e. Materiales: Aquellos materiales que hayan tenido contacto con purín deben ser
lavados siguiendo el procedimiento específico de limpieza.
10. Registros:
11. Sistema de modificación:
Metodología de Modificación Responsable Fecha Firma
12. Lista de distribución:
Nombre Cargo
Camacho, Alberto Director
Pojmaevich, Andrea Becario Posgrado
Astorga, Marcos Auxiliar de Laboratorio
Henoch, Glenda Auxiliar de Laboratorio
Fix Torres, Daiana Becario
Panijan, Nicolás Becario
Verdugo, Alejandra Becario
Firma
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13. Ubicación del documento:

- Impreso: Carpeta de Técnicas
- Virtual: https://www.dropbox.com/home/BIODIGESTORES/t%C3%A9c
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1. Objetivo: Cuantificar el contenido total de nitrógeno contenido en las muestras de purines de

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Kjeldahl es el más utilizado para determinar la concentración de nitrógeno en diversos

En general, el método Kjeldahl tiene la ventaja de poderse ejecutar mediante equipos

Como se mencionó anteriormente el método consta de tres etapas:

 DIGESTIÓN: En ella se produce la descomposición del nitrógeno que

n C -NH2 + m H2SO4 → CO2 + (NH4)2SO4 + SO2

 DESTILACIÓN: Aquí se libera amoniaco, el cual es retenido en una

(NH4)2SO4 + 2 NaOH → 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O

 TITULACIÓN: Por último se valora la cantidad de amonio presente en la

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el pH de la solución sea igual a 5,0; si es más acido añadir NaOH

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Ilustración 1 Equipo de Digestión

Ilustración 2 Equipo de Destilación

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Ilustración 3 Equipo de Titulación

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- Destilar hasta obtener aproximadamente 100 ml de destilado o hasta

Para expresar el contenido de nitrógeno porcentualmente

% N = Ceq * (V - VBL) * M * 100 %

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6. Referencias legales y normativas:

7. Aspectos de la seguridad e higiene:

8. Aspectos de resguardo ambiental asociados:

a. Identificación de residuos generados: La digestión con ácido sulfúrico se clasifica

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c. Disposición final de residuos generados:

9. Elementos consumibles y su uso racional:

a. Agua: Antes de conectar las mangueras en el tubo de refrigeración tener la precaución

11. Sistema de modificación:

Metodología de Modificación Responsable Fecha Firma

12. Lista de distribución:

Fecha 15/08/2017 21/09/2017

13. Ubicación del documento:

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