RESUMEN

La presente practica tiene como finalidad e estudio de la acción de enzimas, pues las enzimas

son catalizadores biológicos de naturaleza proteica, que hace posible que las reacciones

biológicas se llevan a cabo a velocidad útil apreciable, por lo cual se pretende hacer una

comparación de la a-amilasa de la saliva y del ácido clorhídrico sobre la reacción de hidrolisis

del almidón y evaluar los resultados obtenidos.

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INTRODUCCIÓN
Enzima
Con excepción de un pequeño grupo de moléculas de RNA catalítico, todos los enzimas son
proteínas. Su actividad catalítica depende de la integridad de su conformación proteica
nativa. Si se desnaturaliza o disocia un enzima en sus subunidades, se suele perder la
actividad catalítica. Si se descompone un enzima en sus aminoácidos constituyentes,
siempre se destruye su actividad catalítica. Así, las estructuras primaria, secundaria,
terciaria y cuaternaria de las proteínas enzimáticas son esenciales para su actividad
catalítica.
Los enzimas al igual que otras proteínas, tienen masas moleculares que van desde unos
12.000 hasta más de 1 millón. Algunos enzimas no requieren para su actividad más grupos
químicos que sus residuos aminoácidos. Otros requieren un componente químico adicional
llamado cofactor. El cofactor puede ser uno o varios iones inorgánicos o una molécula
orgánica metalo-orgánica compleja denominada coenzima, tal y como se muestran en la
siguiente tabla

Algunos elementos inorgánica que actúan como cofactores por enzimáticos

Cu2+ Citocromo oxidasa
Fe2+ o Fe3+ Citocromo oxidasa, catalasa, peroxidasa,
K+ Piruvato quinasa
Mg 2+ Hexoquinasa, glucosa 6-fosfatasa, piruvato quinasa
Mn2+ Arginasa, ribonucleótido reductasa
Mo2+ Dinitrogenasa
Ni 2+ Ureasa
Se Glutatión peroxidasa
Zn2+ Carbónica anhidrasa, alcohol deshidrogenasa,
carboxipeptidasas A y B
Algunos coenzimas que actúan como portadores transitorios de átomos o grupos
funcionales
Coenzima Ejemplos de grupos Precursor en la dieta para los
químicos transferidos mamíferos
Biocitina CO2 Biotina
Coenzima A Grupos acilo Ácido pantoténico y otras
moléculas
5’-Desoxiadenosilcobalamina Átomo de H y grupos Vitamina B12
(coenzima B12) alquilo
Flavina adenina dinucleótico Electrones Riboflavina (Vitamina B2)
(FAD)
Lipoato Electrones y grupos No se requiere en la dieta
acilo
Nicotinamida adenina Ión hidruro (:H-) Ácido nicotínico (niacina)
dinucleótido (NAD)
Piridoxal fosfato Grupos amino Piridoxina (Vitamina B6)
Tatrahidrofolato Grupos Folato
monocarbonados
Tiamina pirofosfato Aldehidos Tiamina (Vitamina B1)

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 Algunos enzimas requieren tanto una coenzima como uno o más iones metálicos para su
actividad. Un coenzima o ión metálico unido covalentemente o de manera muy fuerte a la
proteína enzimática se denomina grupo prostético. Un enzima completo catalíticamente
activo junto con su coenzima y/o iones metálicos se denomina holoenzima. La parte
proteica de tal enzima se denomina apoenzima o apoproteina. Los coenzimas actúan
como transportadores transitorios de grupos funcionales específicos. La mayoría de ellos
son derivados de las vitaminas, nutrientes orgánicos requeridos en pequeñas cantidades en la
dieta. Finalmente, algunos enzimas son modificados covalentemente por fosforilación,
glucosilación y otros procesos. Gran parte de estas alteraciones intervienen en la regulación de
la actividad enzimática.

La característica más sobresaliente de los enzimas es su elevada especificidad. Esta es doble y

explica que no se formen subproductos:

1. Especificidad de sustrato. El sustrato (S) es la molécula sobre la que el enzima ejerce su

acción catalítica.
2. Especificidad de acción. Cada reacción está catalizada por un enzima específico.

La acción enzimática se caracteriza por la formación de un complejo que representa el estado

de transición.

El sustrato se une al enzima a través de numerosas interacciones débiles como son: puentes de
hidrógeno, electrostáticos, hidrófobos, etc., en un lugar específico, el centro activo. Este centro es
una pequeña porción del enzima, constituido por una serie de aminoácidos que interaccionan con
el sustrato.

Algunas enzimas actúan con la ayuda de estructuras no proteicas. En función de su naturaleza se

denominan:

1. Cofactor. Cuando se trata de iones o moléculas inorgánicas.

2. Coenzima. Cuando es una molécula orgánica. Aquí se puede señalar, que
muchas vitaminas funcionan como coenzimas; y realmente las deficiencias producidas por
la falta de vitaminas responde más bien a que no se puede sintetizar un determinado
enzima
en el
que la

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 vitamina es el coenzima.

Hidrólisis de polisacáridos
Los polisacáridos en medio ácidos se descomponen en sus residuos de monosacáridos, los
cuales pueden presentarse en diferentes formas y tamaños. La hidrólisis consiste en la
ruptura de los enlaces glucosídicos.

Prueba de Lugol o de almidón-yodo

La prueba del yodo, es decir, la reacción entre el yodo y el almidón, es la que nos permite
detectar la presencia de almidón en algunos alimentos. Esta reacción es el resultado de la
formación de cadenas de poli yoduro (generalmente triyoduro, I3–) que se enlazan con el
almidón en las hélices del polímero. En concreto, es la amilosa del almidón la que se une
a las moléculas de yodo, formando un color azul oscuro, a veces prácticamente negro.
La amilopectina no reacciona apenas con el yodo.

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REACCION QUIMICA

HIDROLISIS DEL ALMIDON USANDO AMILASA COMO CATALIZADOR

PRUEBA DE FEHLING

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DETALLES EXPERIMENTALES

Se tomó tres tubos de ensayo; al primero agregar 1mL de agua, al segundo – 1mL de ácido
clorhídrico, al tercero -1 mL de saliva diluida. Se añadió a todas las muestras 3mL de almidón, Se
mezcló con bagueta y agua hirviendo. Después se 15 minutos se enfrió los tubos. De cada tubo de
ensayo se toman 5 gotas y se colocan en otros tubos de ensayo, se les añaden 2 gotas de solución
de yodo y se comparan la coloración de las muestras.

Fig. : Se observa las diferentes tonalidades en los

colores obtenidos por la reacción

Para la determinación de la maltosa, se tomó 3 gotas de cada tubo de ensayo, se le agregan 1mL
del reactivo de Fehling y se calentó la capa superior de la mezcla hasta la ebullición.

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Fig. : Se observa el precipitado rojo de óxido de
cobre (I)

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RESULTADOS EXPERIMENTALES.

SUSTRATO DE LA PRODUCTO DE LA
CATALIZADOR RESULTADO
REACCION REACCIÓN

a-Amilasa Almidón Complejo color azul Se observó la

con solución de Iodo coloración azul

Discusión de resultados
En el tubo que se agregó lugol que contenía la alfa-amilasa salió un color azul oscuro que explica
que la hidrolisis del almidón no es tan rápida o debido a que la amilasa desdobla al almidón a alfa
dextrinas y luego hasta maltosa (predominan más las alfa dextrinas), pero también puede ser
debido a que en la saliva no había tanta concentración de esta.

A diferencia del tubo que contenía alfa-amilasa en el tubo que contenía HCl ya no daba coloración
azul del complejo yodo-almidón, debido a que la hidrolisis del almidón se dio en mayor proporción
o casi en su totalidad.

A la hora de usar el reactivo de fehling y calentarlos se notó en los tres tubos una precipitación
oscura media rojiza, debido a la precipitación del óxido de cobre, que se da por la reducción del Cu
+2 por la acción reductora de la maltosa producida por la hidrolisis del almidón.

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CONCLUSIONES

 Las reacciones catalizadas por la enzima α-amilasa es mucho mas

rápido,especifico y efectivo que las correspondientes reacciones catalizada
por el acido clorhidrico.

 la α-amilasa cataliza la hidrólisis rápida y ordenada de enlaces internos α

(1-4) y no hidroliza los enlaces α (1-6).,demostrando así su especificidad

 El producto final de la degradación por hidrólisis del almidónes la maltosa,

el cual fue reconocido por le reactivo de fehling.

 La temperatura efectiva de la α-amilasa es de 37oC,su actividad catalitica

es maxima en esa tenperatura.

Recomendaciones
La solución de fehing que se prepare, las dos soluciones de CuSO4 y tartrato de Na y K y NaOH
deben estar separadas hasta que se realice la prueba.

El almidón que se prepare debe ser colocado en el refrigerador

No es necesario gastar mucho reactivo preparando las cantidades que dice la guía sino que se
puede prepararlas en menor cantidad haciendo una simple proporción.

Al momento de preparar la solución saliva, se debe evitar tener residuos de comida en la boca que
pueden interferir en los resultados.

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BIBLIOGRAFIA

 Lehninger. Principios de Bioquímica, 4ta Edición. David L. Nelson y Michael M. Cox.

Ediciones Omega, S.A. 2006. Páginas 190 – 193
 Enciclopedia de la Ciencia y la Técnica. Editorial Océano. 1982. Página 180.
 Química Orgánica. 5ta Edición.L.G. Wade, Jr. Editorial Pearson Prentice Hall. 2004.
Páginas 1096 y 1097
 Guía para el Análisis de los Compuestos del Carbono. S. Gibaja Oviedo. Editiorial
UNMSM. 1977. Páginas 71 y 72.

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